Способ лечения гнойно-катарального мастита у коров Российский патент 2022 года по МПК A61K31/381 A61K31/424 A61K35/66 A61P15/14 

Изобретение относится к области ветеринарии и может быть использовано для лечения мастита у коров.

Мастит у молочных коров является одной из наиболее распространенных болезней не только в России, но за рубежом. Производители молока несут серьезные потери из-за. снижения продуктивности животных и качества молока, затрат на лечение, выбраковки коров, а также роста заболеваемости и падежа телят.

В настоящее время из секрета молочной железы изолировано более 100 микроорганизмов, способных вызывать мастит. Наиболее часто встречающимися бактериями являются Staph., aureus, Str. agalactiae, Str. pyogenes, Str. uberis, Е. coli, K. pneumoniae, K. oxytoca, Enterobacter spp., Pasteurella spp. и др.

Подавляющая часть лекарственных средств, предназначенных для борьбы с маститом, в качестве действующего компонента. содержит антимикробные субстанции. Однако широкое применение химиотерапевтических препаратов не решило проблемы, а их длительное и бесконтрольное применение способствовало появлению лекарственно устойчивых штаммов микроорганизмов. Имеются данные об одновременном появлении полирезистентных микроорганизмов, выделенных от больных маститом животных, что снижает эффективность этиотропной терапии. В связи с этим, актуален вопрос о необходимости разработки способов лечения мастита у коров с повышенной терапевтической эффективностью.

Установлено, что протеолитические энзимы (папаин, бромелаин, трипсин, химотрипсин) повышают эффективность антибиотиков, одновременно снижая нежелательные эффекты антибиотикотерапии. Они оказывают плейотропное (множественное) действие на патофизиологические и биохимические процессы: обладают противовоспалительным, противоотечным, вторично-анальгезирующим, фибринолитическим, антиагрегантным, иммуномодулирующим эффектами, облегчают утилизацию продуктов воспаления, улучшают микроциркуляцию и реологические свойства крови, а также снабжение тканей кислородом и питательными веществами. Протеолитические энзимы оказывают регуляторное воздействие на синхронизацию процессов образования базальной мембраны (ламинина), модуляцию раневого процесса и экспрессию факторов ангиогенеза (васкулоэндотелиального фактора роста, фактора роста фибробластов и ряда других факторов) [Рахимов К.Д., Ногаева М.Г. Эффективность и безопасность действия комбинированного ферментного препарата бромелаин, трипсин в сравнении с диклофенаком // Медицина (Алматы). 2019. №3 (201). С. 66-70].

Терапевтическое действие ферментов осуществляется через влияние на воспалительный процесс, сосудисто-тромбоцитарный гемостаз и иммунитет.При воспалительном процессе комплексы энзимов уменьшают инфильтрацию интерстиция плазматическими белками и увеличивают выведение белкового детрита и депозитов фибрина из зоны воспаления, т.е. способствуют утилизации продуктов воспаления, повышают снабжение тканей питательными веществами и кислородом за счет снижения агрегации тромбоцитов и улучшения пластических свойств эритроцитов. Ферменты препятствуют переходу хронического воспалительного процесса в рецидивирующую стадию, улучшают метаболические процессы в очаге воспаления и расщепляют медиаторы воспаления. Так как энзимы являются природными, высокоактивными модуляторами воспаления, они тем самым ускоряют процесс выздоровления [Zanoelo F.F., Giannesi G.C., Cabral Н. Proteolytic enzymes: biochemical properties, production and biotechnological application // Fungal enzymes / Edited by Maria de Lourdes Т.M. Polizeli, Mahendra Rai. CRC Press, 2013. P. 94-112].

Как правило, протеиназы обладают низкой специфичностью и ограниченной способностью к гидролизу нерастворимых белков. Фибрин, коллаген, эластин, кератин и другие фибриллярные белки считаются субстратами трудно гидролизующимися и для их расщепления необходимы протеолитические ферменты со специфической активностью. Наиболее эффективными являются ферменты, образуемые микроорганизмами, в том числе, микромицетами [Nirmal N.P., Shankar S., Laxman R.S. Fungal proteases: An overview // Int. J. Biotech. Biosc. 2011. Vol. 1. №1. P. 1-40]. Среди представителей разных групп мицелиальных грибов наибольший интерес представляют микромицеты рода Aspergillus, которые способны образовывать несколько типов протеиназ направленного действия [Осмоловский А.А., Крайер В.Г., Баранова Н.А., Егоров Н.С. Свойства внеклеточных плазминоподобных протеиназ микромицета Aspergillus ochraceus // Прикладная биохимия и микробиология. 2017. Том 53. №4. С. 373-379].

Известен способ лечения мастита у коров с использованием препарата «Масти Вейксим®» («Veyx Pharma®», Германия; регистрационное удостоверение 276-3-8.15-2838 № ПВИ-3-5.0/03198), который представляет собой суспензию для интрацистернального введения (10,0 г) и содержит в составе в качестве действующих компонентов ферменты трипсин, химотрипсин, папаин и витамины А и Е. При мастите препарат вводят в течение 2-3 дней с интервалом 12 часов.

Недостатком данного способа лечения является то, что Масти Вейксим® содержит только ферменты и витамины, в результате чего при гнойном и гнойно-катаральном мастите необходимо дополнительно применять антибактериальные препараты широкого спектра действия. При этом Масти Вейксим® вводят интрацистернально в дозе 10,0 г 4-5 раз с интервалом 12 часов, а после применяют химиотерапевтические средства, что за счет большого объема и частоты введений препаратов этиотропной и симптоматической терапии вызывает раздражение вымени.

Известен способ лечения мастита у коров с использованием препарата Синулокс RTU («Zoetis Inc», США; регистрационное удостоверение 840-3-2.13-4120№ПВИ-3-0,2/01102), который представляет собой суспензию для инъекций и содержит в составе в качестве действующих компонентов амоксициллин, клавулановую кислоту и преднизолон. Препарат вводят внутримышечно в дозе 1 мл/20 кг живой массы 1 раз в сутки в течение 3-5 дней.

Недостатком данного способа лечения является то, что Синулокс RTU предназначен для этиотропной терапии и содержит только антимикробные компоненты, что снижает эффективность лечения. Кроме того, недостатком суспензии, как лекарственной формы, является физическая неустойчивость, что нарушает принцип однородности дозирования. Молоко можно использовать для пищевых целей не ранее, чем через 108 часов после последнего применения препарата, а убой крупного рогатого скота на мясо разрешается не ранее, чем через 42 дня.

Известен способ лечения мастита у коров с использованием препарата Мамикур («Laboratorios SYVA», Испания; регистрационное удостоверение 724-3-3.16-3055№ПВИ-3-7.0/03262), который представляет собой суспензию для интрацистернального введения (8,15 г) и содержит в составе клоксациллин, неомицин, дексаметазон и трипсин. Препарат вводят трехкратно с интервалом 12 часов.

Недостатком данного способа лечения является то, что Мамикур запрещается применять во время беременности, что ограничивает его использование во время лактации.

Наиболее близким техническим решением, принятым за прототип, является способ лечения мастита у коров с использованием препарата Нороклав IMM LC («Norbrook Laboratories Limited», Великобритания; регистрационное удостоверение 826-3-2.16-3054№ПВИ-3-7.0/03306), который представляет собой суспензию для интрацистернального введения и содержит в составе амоксициллин, клавулановую кислоту, преднизолон и вспомогательные вещества. Препарат вводят трехкратно в дозе 3,0 г с интервалом 12 часов.

Недостатком данного способа лечения является то, что Нороклав IMM LC предназначен для этиотропной терапии и не содержит субстанций, облегчающих проникновение антибактериальных компонентов в очаг поражения за счет расщепления некротизированных тканей вымени и фибринозных образований, что снижает эффективность лечения.

Технический результат изобретения - повышение эффективности антимикробной терапии больных маститом коров.

Для достижения технического результата в способе лечения гнойно-катарального мастита у коров, включающем интрацистернальное введение комплексного антимикробного препарата Нороклав IMM LC в дозе 3 г трехкратно с интервалом 12 часов, согласно изобретению, дополнительно за 12 часов до и через 12 часов после применения Нороклава IMM LC интрацистернально вводят препарат с протеиназами микромицета Aspergillus ochraceus BKM F-4104D в дозе 5 мл.

Препарат с рабочим названием ПАО-1, разработанный во ФГБНУ «ВНИВИПФиТ», в качестве действующего вещества содержит фермент протеиназу, выделенную из культуральной жидкости микромицета Aspergillus ochraceus BKM F-4104D, представляющую собой негликозилированный белок сериновую протеиназу с изоэлектрической точкой 6,0, молекулярной массой около 33 кДа и оптимумом активности при рН 8,0-9,0 и 37°С, обладающую казеинолитической, фибринолитической, фибриногенолитической и активаторной к протеину С активностью [Осмоловский, А.А., Звонарева Е.С., Крейер В.Г., Баранова Н.А., Егоров Н.С.// Биоорганическая химия. 2014. Т. 40, №6, С. 688-694]. Препарат ПАО-1 по внешнему виду представляет собой суспензию, расфасованную в шприц-тюбики для интрацистернального введения.

Терапевтическая эффективность способа подтверждена для гнойно-катаральной формы мастита примерами.

Пример 1. Изучение эффективности лечения гнойно-катарального мастита у коров.

Исследования выполнены на 21 корове черно-пестрой породы с гнойно-катаральным маститом. Всем животным интрацистернально вводили противомаститный препарат Нороклав IMM LC трехкратно с интервалом 12 часов. Животным второй группы дополнительно за 12 часов до применения Нороклава IMM LC и через 12 часов после интрацистернально вводили препарат с протеиназами микромицета Aspergillus ochraceus BKM F-4104D (рабочее название ПАО-1).

Состояние молочной железы оценивали до лечения, после окончания введения препаратов и через 7 дней после лечения. Секрет вымени исследовали с помощью диагностического реактива Масттест согласно инструкции. Бактериологические исследования секрета вымени, изучение культурально-морфологических и биохимических свойств выделенных микроорганизмов проводили в соответствии с Методическими рекомендациями по бактериологическому исследованию молока и секрета вымени коров для диагностики мастита (М., 1994). Количество соматических клеток определяли с помощью анализатора соматических клеток в молоке DCC «DeLaval» в соответствии с инструкцией к прибору.

Из представленных в таблице 1 данных следует, что при применении только антимикробного препарата Нороклав IMM LC выздоровело 80,0% животных, при этом излечено 83,3% долей вымени. Наилучший терапевтический эффект получен при совместном применении антимикробного препарата и ПАО-1 - 93,8%, при этом излечено 94,7% долей вымени. Проведенные клинические испытания экспериментального препарата с протеиназами микромицета Aspergillus ochraceus в комплексной терапии мастита у коров показали его высокую лечебную эффективность. Дополнительное применение ПАО-1 повысило терапевтический эффект на 13,8%.

Пример 2. Изучение влияния комплексного применения Нороклава IMM LC и ПАО-1 на цитологический состав клеток молока.

Исследования выполнены на 10 коровах черно-пестрой породы, больных гнойно-катаральным маститом. Всем животным интрацистернально вводили противомаститный препарат Нороклав IMM LC трехкратно с интервалом 12 часов. Животным второй группы (n=5) дополнительно за 12 часов до применения Нороклава IMM LC и через 12 часов после интрацистернально вводили препарат с протеиназами микромицета Aspergillus ochraceus BKM F-4104D (рабочее название ПАО-1). Секрет вымени для определения цитологического состава отбирали до и после лечения.

Цитологический состав молока до и после лечения представлен в таблице 2.

Комплексное применение Нороклава IMM LC и ПАО-1 благоприятно сказалось на цитологическом составе клеток молока. Содержание соматических клеток в секрете молочной железы у животных первой группы в конце опыта снизилось в 12,1 раза, во второй группе - в 22,9 раза. В молоке коров, подвергнутых лечению только Нороклавом IMM LC, отмечено повышенное содержание нейтрофилов (40,2%) и пониженное количество макрофагов (34,6%), содержание лимфоцитов приближалось к оптимальному значению (25,2%). Содержание ЦИК было выше, чем у животных второй группы, в 1,4 раза, что может привести к выбросу лизосомальных ферментов, нарушению сосудистой проницаемости и супрессии Т-лимфоцитов. По окончании лечения в молоке коров второй группы содержание лимфоцитов было близко к норме (25,4%), приближалось к оптимальному показателю содержание нейтрофилов (19,6%) и макрофагов (55,0%).

Пример 3. Изучение комплексного применения Нороклава IMM LC и ПАО-1 на состав микрофлоры молока.

Исследования выполнены на 10 коровах черно-пестрой породы, больных гнойно-катаральным маститом. Всем животным интрацистернально вводили противомаститный препарат Нороклав IMM LC трехкратно с интервалом 12 часов. Животным второй группы (n=5) дополнительно за 12 часов до применения Нороклава IMM LC и через 12 часов после интрацистернально вводили препарат с протеиназами микромицета Aspergillus ochraceus BKM F-4104D (рабочее название ПАО-1). Секрет вымени для определения видового состава микрофлоры отбирали до и после лечения.

Состав микрофлоры молока до и после лечения мастита у коров с применением антимикробного препарата и препарата ПАО-1 представлен в таблице 3.

Из секрета молочной железы больных маститом коров первой группы до лечения изолировали в 60,0% случаев Staph. aureus и в 40,0% - Str. agalactiae. Staph. aureus выделяли в ассоциации с Е. coli (40,6%) и Ent. faecium (20,0%), а Str. agalactiae - в ассоциации с Е. coli (40,0%). Из секрета вымени коров второй группы в 80,0% изолировали Staph. aureus в ассоциации с Ent. faecium (40,0%) и Е. coli (40,0%), в 20,0% случаев выделяли <Str. agalactiae в ассоциации с Е. coli.

По окончании лечения Нороклавом IMM LC в 60,0% случаев микрофлору не выделяли, Staph. aureus и Е. coli были выделены в 20,0% случаев. В пробах молока коров второй группы, подвергнутых комплексному лечению, роста микрофлоры не выявлено. Следовательно, в комплексе с этиотропным лечением дополнительное применение ПАО-1 способствует полному освобождению молочной железы от возбудителей мастита.

Таким образом, заявленный способ лечения мастита у коров, включающий интрацистернальное введение антимикробного препарата и препарата с протеиназами микромицета Aspergillus ochraceus BKM F-4104D, обладает высокой терапевтической эффективностью. Протеиназы способствуют повышению эффективности этиотропной терапии за счет способности растворять гной, тромбы, фибрин, некротизированные ткани и т.д., разжижать вязкие секреты и экссудаты, что улучшает микроциркуляцию в области воспаления, молочные ходы освобождаются от продуктов распада поврежденных тканей и микроорганизмов. Полное клиническое выздоровление коров после окончания терапевтического курса подтверждается нормализацией числа соматических клеток, клеточного состава молока и отсутствием в нем патогенной микрофлоры. Данный способ может быть широко использован в производственных условиях животноводческих хозяйств при лечении мастита у коров.

Изобретение относится к области ветеринарии и может быть использовано для лечения мастита у коров. Выполняют интрацистернальное введение комплексного антимикробного препарата Нороклав IMM LC в дозе 3 г трехкратно с интервалом 12 часов. При этом дополнительно за 12 часов до и через 12 часов после применения Нороклава IMM LC интрацистернально вводят препарат с протеиназами микромицета Aspergillus ochraceus BKM F-4104D в дозе 5 мл. Изобретение обеспечивает повышение эффективности антимикробной терапии больных маститом коров. 3 пр., 3 табл.

Способ лечения гнойно-катарального мастита у коров, включающий интрацистернальное введение комплексного антимикробного препарата Нороклав IMM LC в дозе 3 г трехкратно с интервалом 12 часов, отличающийся тем, что дополнительно за 12 часов до и через 12 часов после применения Нороклава IMM LC интрацистернально вводят препарат с протеиназами микромицета Aspergillus ochraceus BKM F-4104D в дозе 5 мл.