КОМПОЗИЦИИ АНТИТЕЛ К CD6 И СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ И СНИЖЕНИЯ НЕГАТИВНЫХ ПОСЛЕДСТВИЙ КОРОНАВИРУСА, ВКЛЮЧАЯ COVID-19 Российский патент 2024 года по МПК A61K39/395 C07K16/28 A61P31/04 A61P31/14 

ПЕРЕКРЕСТНЫЕ ССЫЛКИ НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

[001] Данная заявка испрашивает приоритет Индийской предварительной заявки No 202041014994, поданной 4 апреля 2020 г.; и Кубинской предварительной заявки No 2020-0027, поданной 17 апреля 2020 г., которые включены в данный документ посредством ссылки в полном объеме.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

[002] Настоящее изобретение направлено на антитела к CD6, включая неистощающие антитела к CD6, способы применения и композиции для лечения и снижения негативных последствий, вызванных инфекционными агентами, такими как бактерии и вирусы, в особенности коронавирусы, при этом указанные негативные последствия включают запуск цитокинового шторма или синдрома высвобождения цитокинов.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

[003] Спустя более 100 лет после последней пандемии (1918 год) мир сегодня находится в разгаре другой пандемии, вызванной РНК-вирусом, который Международный комитет по таксономии вирусов (ICTV) назвал «коронавирусом тяжелого острого респираторного синдрома- 2» (SARS-CoV-2), а вызываемое им заболевание называется COVID-19. Вирус принадлежит семейству коронавирусов и на сегодняшний день он распространился на все континенты и поэтому, как ожидается, останется надолго.

[004] На сегодняшний день 115 миллионов человек во всем мире инфицированы данным вирусом. В то время как многие выздоровели, около 15% подтвержденных случаев прогрессируют до тяжелой фазы, при этом более высокая вероятность перехода в тяжелую фазу существует у пациентов старше 65 лет. Летальность составляет около 3% согласно всемирным данным.

[005] Вирус в основном передается воздушно-капельным путем от инфицированного пациента при попадании через носовой, ротовой путь или глаза другого человека. Для развития симптомов у инфицированного пациента требуется от 2 до 14 суток, в среднем 5 суток. Три типа коронавируса, коронавирус тяжелого острого респираторного синдрома (SARS-CoV), коронавирус ближневосточного респираторного синдрома (MERS-CoV) и SARS-CoV-2, передаются воздушно-капельным путем и могут реплицироваться в нижних дыхательных путях и вызывать пневмонию.

[006] Согласно сообщениям Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), в почти 80% случаев имеется инфекция легкой-умеренной степени легкая-умеренная степень инфекции (классифицируется по кашлю и лихорадке, но не требуют госпитализации), в 13,8% случаев имеется тяжелая степень и в 6,1% случаев имеется критическая степень заболевания. Средний инкубационный период инфекции составляет около 4-5 суток до появления симптомов, причем у 97,5% симптоматических пациентов симптомы развиваются в течение 11,5 суток. При госпитализации у пациентов с COVID-19 наблюдается лихорадка, сухой кашель и иногда одышка. В течение 5-6 суток после появления симптомов вирусная нагрузка SARS-CoV-2 достигает своего пика, а в тяжелых случаях инфекция прогрессирует до острого респираторного дистресс-синдрома (ОРДС), примерно через 8-9 суток после появления симптомов.

[007] Последние данные свидетельствуют о том, что патогенные коронавирусы человека (коронавирус тяжелого острого респираторного синдрома [SARS-CoV] и SARSCoV-2 (COVID-19) связываются со своими клетками-мишенями через ангиотензинпревращающий фермент 2 (АСЕ2), который экспрессируется эпителиальными клетками легких (тип II, альвеолярные клетки), кишечника, почек и кровеносных сосудов. Экспрессия АПФ 2 в значительной степени повышена у пациентов с диабетом 1 или 2 типа и гипертонией, которых лечат ингибиторами АПФ и блокаторами рецепторов ангиотензина II типа 1 (БРА). Это, вероятно, объясняет, почему пациенты старше 65 лет, которые обычно ассоциированы с этими сопутствующими заболеваниями, более подвержены данному заболеванию. У этих пациентов проявляются симптомы, похожие с симптомами вспышки SARS (тяжелый острый респираторный симптом) в 2002-2003 годах, в частности, легкие, похожие на простуду симптомы, включая лихорадку, кашель, усталость, одышку, мышечные боли и потерю вкуса и/или обоняния. Инфекция SARS-CoV-2 запускает провоспалительную реакцию у некоторых пациентов, которая включает высокие уровни цитокинов, включая IL-6, фактор роста фибробластов (FGF), гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующий фактор (GM-CSF), фактор некроза опухоли и фактор роста сосудистого эндотелия. Было обнаружено, что уровни IL-6 напрямую коррелируют с повышенной смертностью и обратно коррелируют с количеством лимфоцитов, что свидетельствует о том, что синдром высвобождения цитокинов может препятствовать адаптивному иммунному ответу (Li, et al. "Coronavirus infections and immune responses" J 322 Med Virol. 2020 Apr; 92(4):42 4 -32).

[008] Как только легкое инфицировано, вирус использует РНК-полимеразу для репликации в альвеолярных клетках и использует клеточный механизм для трансляции РНК в белки. В конечном счете образуется и высвобождается множество вирусных частиц. Это вызывает повторное инфицирование, и вирусы могут передаваться другим людям.

[009] Не существует стандартных вариантов лечения инфекций COVID19, вызвываемых этим новым вирусом. Тем не менее, проводятся испытания множества лекарственных средств в комбинации, в зависимости от пути вирусной инфекции. Другие лекарственные средства, находящиеся в разработке или на стадии испытаний, пренадлежат нескольким компаниям, специализирующимся на вакцинах и терапии моноклональными антителами. Актемра от Roche (анти-1L6) проходит клинические испытания для лечения COVID, данный препарат был перепрофилирован для этого показания с аутоиммунных заболеваний. Кевзара от Sanofi также представляет собой антитело, блокирующее IL6, и проходит клинические испытания. Regeneron разрабатывает антитела к шиповидным белкам вирусов, надеясь предотвратить их взаимодействие с рецептором АСЕ2. Takeda разрабатывает гипериммунные иммуноглобулины от пациентов, которые дали ответ, для пассивного иммунитета. Терапия CytoSorb основана на процедуре экстракорпоральной очистки крови, которая может эффективно снизить избыточный уровень медиаторов воспаления у пациентов, находящихся в критическом состоянии.

[0010] Потребность в новых и более эффективных терапевтических средствах для лечения негативного воздействия COVID19 продолжает расти, особенно в тех, которые нацелены на вновь возникающие инфекционные заболевания и патогены. Таким образом, существует необходимость в предоставлении нового и эффективного лечения для снижения негативных последствий COVID-19 и его вариантов.

КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0011] В соответствии с настоящим изобретением предложено применение антитела к CD6, включая неистощающее антитело к CD6, которое специфически связывается с доменом 1 CD6, для лечения и снижения последствий коронавируса и, в частности, нового коронавируса (COVID-19) и его вариантов. В частности, антитело к CD6 по настоящему изобретению проявляет терапевтическую активность за счет снижения гиперактивного иммунного ответа, такого как высокие уровни экспрессии цитокинов.

[0012] В соответствии с настоящим изобретением предложено применение антитела к CD6, включая неистощающее антитело к CD6, которое специфически связывается с доменом 1 CD6, для лечения и снижения последствий бактериального инфекционного агента и, в частности, стрептококков группы А и пневмококков. В частности, антитело к CD6 по настоящему изобретению проявляет терапевтическую активность за счет снижения гиперактивного иммунного ответа, такого как высокие уровни экспрессии цитокинов.

[0013] Накопленные данные свидетельствуют о том, что некоторые пациенты с тяжелой формой COVID-19 подвергаются действию синдрома цитокинового шторма. Цитокины представляют собой воспалительные белки иммунной системы, которые предназначены для борьбы с инфекциями и предотвращения рака, однако слишком большое их количество может привести к тому, что иммунная система «сойдет с ума». Собственные иммунные клетки-киллеры в организме в таком повышенном количестве могут привести к функциональной недостаточности органов и смерти. В настоящее время дыхательная недостаточность как следствие острого респираторного дистресс-синдрома (ОРДС) является ведущей причиной смертности среди пациентов с COVID-19. Таким образом, настоящее изобретение обеспечивает новый подход для снижения количества воспалительных цитокиновых белков, которые могут включать интерлейкины IL-1, IL-6 и IL-2 и интерферон-гамма, а также для лечения больных с осложнениями в виде гипервоспаления, вызванными COVID-19 и его вариантами.

[0014] В одном из аспектов настоящего изобретения также предложен способ лечения инфицированных коронавирусом клетки или организма, включающий лечение терапевтически эффективным количеством антитела к CD6, содержащего вариабельные области тяжелой и легкой цепей, содержащие аминокислотные последовательности, изложенные в SEQ ID NO: 1 (вариабельная область тяжелой цепи) и 2 (вариабельная область легкой цепи) или аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере, 98%-ную идентичности с ними, содержащую SEQ ID NO: 1 (вариабельная область тяжелой цепи) и 3 (вариабельная область легкой цепи) согласно настоящему изобретению.

[0015] В другом аспекте настоящего изобретения также предложен способ лечения инфицированных коронавирусом клетки или организма, включающий лечение терапевтически эффективным количеством антитела к CD6, имеющего области тяжелой и легкой цепей, содержащие или состоящие из аминокислотных последовательностей, изложенных в SEQ ID NO: 4 (тяжелая цепь) и 5 (легкая цепь) или аминокислотных последовательностей, имеющих по меньшей мере 98%-ную идентичность с ними согласно настоящему изобретению. Антитело к CD6, содержащее или состоящее из SEQ ID NO: 4 и 6, включено в настоящее изобретение.

[0016] Антитело вводят пациентам внутривенно, в диапазоне доз от примерно 0,5 мг/кг массы тела до примерно 8 мг/кг массы тела. Предпочтительными являются дозы от 1 мг/кг до 6 мг/кг. Антитело предпочтительно вводят пациенту по меньшей мере дважды максимум до 5 доз. Время, прошедшее между двумя последовательными введениями, составит от 24 до 96 часов. Предпочтительный график введения состоит из двух-трех доз с интервалом 72 часа.

[0017] В другом аспекте настоящего изобретения предложен способ облегчения цитопатических деструктивных последствий инфекции COVID-19 и ее вариантов у пациента-человека, включающий введение указанному пациенту терапевтического количества антитела к CD6, содержащего SEQ ID NO: 1 (вариабельная область тяжелой цепи) и SEQ ID NO: 2 (вариабельная область легкой цепи) или 3 (вариабельная область легкой цепи) согласно настоящему изобретению.

[0018] В еще одном аспекте настоящего изобретения предложены терапевтические композиции, содержащие терапевтическое количество антитела к CD6, содержащего аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 4 (тяжелая цепь) и 5 или 6 (легкая цепь) согласно настоящему изобретению в фармацевтически приемлемом носителе. [0019] Кроме того, поскольку использование более одного активного агента может дать улучшенную терапевтическую композицию, и это в особенности верно для случая, когда различные агенты действуют по разным механизмам, настоящее изобретение также включает терапевтические композиции, включающие антитело к CD6, содержащее аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 4 (тяжелая цепь) и SEQ ID NO: 5 или 6 (легкая цепь) согласно настоящему изобретению вместе с одним или более другими противовирусными агентами, такими как ингибиторы обратной транскриптазы (ОТ), которые препятствуют прохождению критически важной стадии в жизненном цикле вируса и препятствуют созданию вирусом своих копий; Нуклеозидные аналоги - аналог нуклеозида для ингибирования репликации коронавируса вследствие летального мутагенеза; Ингибиторы протеазы - мешают белку, который вирусы используют для создания инфекционных вирусных частиц; Ингибиторы слияния - блокируют проникновение вируса в клетки организма; Ингибиторы интегразы - могут блокировать фермент, необходимый для создания собственных копий; Комбинации множества лекарственных средств- объединяют два или более разных типов лекарств в один, и/или фармакокинетические усилители, а также модификаторы биологического ответа, включая, например, интерферон (α, β или γ), интерлейкин-2 и гранулоцитарно-моноцитарный колониестимулирующий фактор ("GM-CSF") и т.п.

[0020] Комбинированные композиции по настоящему изобретению могут содержать пониженные дозы активного противовирусного средства при сохранении уровня противовирусной активности, характерного для более высокой дозы. В результате цитотоксичность, обычно связанная с введением противовирусного средства, сводится к минимуму за счет введения комбинированных композиций по настоящему изобретению. Таким образом, комбинированные композиции могут содержать пониженную дозу противовирусного агента в комбинации с антителом к CD6 по настоящему изобретению для достижения уровня противовирусной активности, который превышает обычно требуемый, с сохранением приемлемого уровня цитотоксичности.

[0021] В еще одном аспекте настоящего изобретения предложены терапевтические способы лечения субъектов (например, позвоночных, таких как люди) путем модуляции иммунного ответа, вызванного повышением экспрессии интерлейкинов, при этом способ включает введение субъекту терапевтически эффективного количества антитела к CD6, содержащего SEQ ID NO: 4 и 5 или последовательность, имеющую 98%-ную идентичность с ними, включая антитело, содержащее SEQ ID NO: 4 и 6 согласно настоящему изобретению.

[0022] В еще одном аспекте настоящего изобретения предложен набор для лечения субъекта от COVID-19 и его вариантов, где указанный набор содержит терапевтически эффективное количество антитела к CD6, содержащего или состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 4 (тяжелая цепь) и 5 (легкая цепь) или аминокислотной последовательности, имеющей 98%-ную идентичность с ними, содержащей или состоящей из SEQ ID No: 4 (тяжелая цепь) и 6 (легкая цепь) согласно настоящему изобретению.

[0023] В дополнительном аспекте настоящего изобретения предложено изготовление лекарственного средства, содержащего антитело к CD6, где вариабельные области тяжелой и легкой цепей содержат аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 1 и 2, или аминокислотную последовательность вариабельных областей, имеющую 98%-ную идентичность с ними, содержащую SEQ ID NO: 1 и 3 по настоящему изобретению..

[0024] В другом аспекте настоящего изобретения предложено применение антитела к CD6, содержащего или состоящего из последовательности SEQ ID NO: 4 (тяжелая цепь) и SEQ ID NO: 5 или SEQ ID NO: 6 (легкая цепь) согласно настоящему изобретению для лечения коронавируса, SARS и MERS-CoV, более конкретно, для лечения инфекции коронавируса COVID-19 у субъекта, млекопитающего или человека.

[0025] В еще одном аспекте настоящего изобретения предложен способ лечения, предназначенный для использования у субъекта, нуждающегося в этом, который включает внутривенное введение моноклонального антитела к CD6 в диапазоне доз от примерно 0,5 мг/кг массы тела до 8 мг/кг массы тела, по меньшей мере два раза в двух индивидуальных дозах до максимум 5 доз с интервалом от 24 до 96 часов.

[0026] Эти и другие преимущества и особенности настоящего изобретения будут более полно описаны в подробном описании предпочтительных вариантов осуществления, которые приведены ниже.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

[0027] На фиг. 1 представлены разные стадии заболевания COVID-19 (SARS-Co V-2), первая - бессимптомная стадия с обнаруживаемым вирусом или без него, стадия 2: нетяжелый бессимптомный период с присутствием вируса и, наконец, стадия 3: которая представляет собой тяжелую симптоматическую стадию с большой вирусной нагрузкой и отеком легких.

[0028] На фиг. 2 а) Ремдесирвир; b) Галидесивир; с) Камостат; d) Финголимод; е) Фавипиравир; f) Дарунавир/Кобицистат и фиг. 2 Продолжение: g) Хлорохин; h) Барицитиниб; i) Талидомид; j) Гидроксихлорохин; k) Русолитиниб; (I) Умифеновир представлены лекарственные средства предшествующего уровня техники в различных клинических испытаниях с их прогнозируемым механизмом действия.

[0029] На фиг. 3 показано среднее исходное значение IL-6, сопоставимое в обеих группах, на фиг. 3А показана группа А, а на фиг 3В показана группа В. После первой инфузии значительное снижение средних уровней IL-6 наблюдалось в группе А.

[0030] На фиг. 4 показано среднее исходное значение TNFα, сопоставимое в обеих группах, на фиг. 4А показана группа А, а на фиг 4В показана группа В. После первой инфузии значительное снижение средних уровней IL-6 наблюдалось в группе А.

[0031] На фиг 5 показана концентрация IL-6 в сыворотке крови пациентов с COVID-19 до лечения Итолизумабом.

[0032] На фиг. 6 представлено рентгенологическое изображение пациента с пневмонией, вызванной бактериальной инфекцией. Фиг. 6А) До лечения итолизумабом и Фиг. 6В) После лечения.

[0033] На фиг. 7 показано снижение средней концентрации С-реактивного белка (СРБ) после первой дозы итолизумаба. Высокие уровни СРБ у пациентов с COVID связаны с более тяжелой стадией заболевания (см., например, Liu et al. J Clin Virol. 2020 Jun; 127:104370).

[0034] На фиг. 8 представлено снижение средней концентрации ферритина после первой дозы Итолизумаба. Ферритин является ключевым фактором иммунной дисрегуляции; он способствует цитокиновому шторму и представляет собой потенциальный фактор, влияющий на тяжесть COVID-19 (см., например, Vargas-Vargas М and Cortes-Rojo С.Ferritin levels and COVID-19. Rev Panam Salud Publica. 2020;44:e72).

[0035] На фиг. 9 показан процент выздоровевших пациентов, которых лечили Итолизумабом.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0036] Известно, что COVID-19 и его варианты могут стимулировать цитокиновый шторм в легких, такой как повышение уровней IL-2, IL-6, IL-7, GSCF, IP10, МСР1, макрофагального воспалительного белка 1α (MIP1A) и TNFα, с последующими отеками, дисфункцией воздухообмена, острым респираторным дистресс-синдромом, острым поражением миокарда и вторичной инфекцией, что может привести к смерти.

[0037] Термины «цитокиновый шторм» и «синдром высвобождения цитокинов» используются для обозначения обострения иммунной реакции, при которой происходит избыточное и неконтролируемое высвобождение провоспалительных цитокинов. Цитокины представляют собой группу низкомолекулярных белков, которые действуют, опосредуя комплексные взаимодействия между лимфоидными клетками, воспалительными клетками и гемопоэтическими клетками. Они имеют чрезвычайно разнообразные функции, которые, тем не менее, можно классифицировать на несколько отдельных категорий: дифференцировка и созревание клеток иммунной системы, сообщение между клетками иммунной системы и функции прямых эффекторов. Цитокины продуцируются при врожденном или адаптивном иммунном ответе. Они связываются со специфическими рецепторами на клеточной мембране, где они выполняют свою функцию, инициируя каскад передачи внутриклеточных сигналов, который изменяет профиль экспрессии генов таким образом, что клетки-мишени вырабатывают специфический биологический ответ.

[0038] Цитокины продуцируются многими типами клеток, в основном клетками иммунной системы. Одними из наиболее цитокин-продуцирующих клеток во врожденной иммунной системе являются макрофаги, тогда как хелперные Т-клетки или T-CD4+ клетки представляют собой клетки, которые главным образом продуцируют их в адаптивной или специфической иммунной системе. Продукция цитокинов, как правило, носит временный характер, она ограничена продолжительностью стимула (то есть чужеродного агента, который индуцирует иммунный ответ).

[0039] Иммунная система пациента работает с удвоенной силой, чтобы справиться с вирусом. Клетки Th1 активируются и высвобождают цитокин IL6 и GM-CSF, как показано на фиг. 1, которые макрофаги и нейтрофилы затем переносят в альвеолы легких. Данные макрофаги высвобождают большее количество IL6, TNF-альфа и IL1 среди других провоспалительных цитокинов. Эти цитокины вызывают лихорадку, воздействуя на гипоталамус, а также альвеолярный отек, забивающий легкие. На этом этапе пациент испытывает трудности с дыханием. Кровеносные сосуды вокруг альвеол становятся неплотными, и наблюдается повышенная сосудистая проницаемость. Потеря жидкости вызывает циркуляторный стресс и низкое кровяное давление, что затем приводит к почечной недостаточности и, в конечном счете, к полиорганной недостаточности.

[0040] В настоящее время нет стандартных вариантов лечения COVID-инфекции, так как это совсем новый вирус.Тем не менее, несколько лекарственных средств проходят испытания, исходя из пути вирусной инфекции, как упомянуто выше. На фиг. 2 показаны лекарственные средства в различных клинических испытаниях с их прогнозируемым механизмом действия.

[0041] Настоящее изобретение относится к способу снижения заболеваемости у пациента, инфицированного SARS-CoV-2, включающему введение указанному пациенту терапевтического количества антитела к CD6. В конкретных вариантах осуществления антитело к CD6 представляет собой моноклональное антитело. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 представляет собой гуманизированное моноклональное антитело итолизумаб. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 представляет собой Fab или фрагмент. В некоторых вариантах осуществления пациент имеет бактериальную инфекцию. В некоторых вариантах осуществления пациент, инфицированный SARS-CoV-2, имеет сопутствующее заболевание. В других вариантах осуществления пациент, инфицированный SARS-CoV-2, имеет более одного сопутствующего заболевания. В некоторых вариантах осуществления пациент, инфицированный SARS-CoV-2, имеет более двух сопутствующих заболеваний. В некоторых вариантах осуществления у пациента, инфицированного SARS-CoV-2, не проявляются какие-либо легкие или менее умеренные симптомы. В некоторых вариантах осуществления у пациента, инфицированного SARS-CoV-2, проявляются умеренные симптомы. В некоторых вариантах осуществления у пациента, инфицированного SARS-CoV-2, проявляются тяжелые симптомы. В некоторых вариантах осуществления у пациента, инфицированного SARS-CoV-2, проявляется один или более симптомов синдрома высвобождения цитокинов (CRS). В некоторых вариантах настоящего изобретения итолизумаб вводят пациенту с положительным результатом теста на COVID-19 и до проявления одного или более заболеваний. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения Итолизумаб вводят пациенту в дополнение к одному или нескольким другим терапевтическим агентам.

[0042] Антитело по настоящему изобретению связывается с лейкоцитарным дифференцировочным антигеном CD6, который представляет собой гликопротеин, который преимущественно экспрессируется в зрелых лимфоцитах периферической крови и в меньшей степени - в зрелых В-клетках. Он играет чрезвычайно важную роль в клеточной адгезии, активации, дифференцировке и выживаемости лимфоцитов (Alonso, R et al. (2008) Hybridoma 27(4):291-301). Молекула CD6 содержит три домена в своей внеклеточной части (Sarrias MR et al. (2004) Crit Rev Immunol. 24:1-37), а сайт связывания с ее лигандом, молекулой ALCAM (молекула клеточной адгезии активированных лейкоцитов), расположен на домене 3 (Bodian DL et al. (1997) Biochemistry 36: 2637-2641). [0043] Гуманизированное mAb итолизумаб по настоящему изобретению распознает и связывается с богатым цистеином доменом 1 (D1) фагоцитарного рецептора (SRCR) CD6 и не мешает связыванию CD6 с его лигандом ALCAM, следовательно, оно не приводит к иммуносупрессивным последствиям, о которых сообщается в контексте других моноклональных антител, используемых против той же мишени.

[0044] Применение антител к CD6 , включая неистощающие антитела к CD6 , как описано в настоящем изобретении, быстро облегчает симптомы и признаки, связанные с цитокиновым штормом или синдромом высвобождения цитокинов, у пациентов, получавших лечение. Уменьшение этих симптомов приводит к существенному клиническому улучшению пациентов, находящихся в критическом состоянии, и обеспечивает возможность улучшенного обращения с пациентом командой отделения интенсивной терапии (ICU). Особым преимуществом предлагаемого лечения является то, что оно не вызывает иммунодефицит у пациента, в отличие от других общепринятых способов лечения на основе стероидов или других иммунодепрессантов. Сохранение определенной степени иммунокомпетентности у пациентов, получающих лечение, снижает возможность возникновения чрезвычайных ситуаций как вследствия других оппортунистических инфекций, очень распространенных в отделениях интенсивной терапии.

[0045] Термин «неистощающее» антитело к CD6, используемый в настоящем документе, означает моноклональное антитело, специфически направленное на CD6, которое при связывании не индуцирует антителозависимую клеточную цитотоксичность (ADCC), комплемент-зависимую клеточную цитотоксичность (CDC) или не способствует иным образом лизису и гибели клетки, экспрессирующей CD6.

[0046] На сегодняшний день в предшествующем уровне техники отсутствуют сообщения о применении mAb против CD6, в частности, о способности этих антител ингибировать активацию иммунной системы и неконтролируемую продукцию цитокинов, не вызывая иммунодефицита. Применение итолизумаба имеет большое значение в борьбе с токсичностью, вызванной цитокиновым штормом, что позволяет организму продолжать борьбу с вирусной инфекцией, вызванной коронавирусом.

[0047] Если не указано иное, все другие научные и технические термины, используемые в описании, фигурах и пунктах формулы изобретения, имеют свое обычное значение, обычно понятное специалисту в области техники, к которой относится изобретение. Хотя любые способы и материалы, подобные или эквивалентные описанным здесь, могут быть использованы на практике для тестирования настоящего изобретения, в данном документе описаны предпочтительные материалы и способы. В описании и формуле настоящего изобретения будет использоваться следующая терминология.

[0048] Следует также понимать, что терминология, используемая в настоящем документе, предназначена только для целей описания частных вариантов осуществления и не предназначена для ограничения. Используемые в настоящем описании и прилагаемой формуле изобретения формы единственного числа ("a", "an" и "the") включают множество референтов, за исключением случаев, когда содержание явно диктует иное. Так, например, ссылка на «клетку» включает в себя комбинацию двух или более клеток и тому подобное.

[0049] Слово «примерно», используемое в данном документе, относится к значению, находящемуся в диапазоне допустимой погрешности для конкретного значения, как определено специалистом в данной области техники, что будет частично зависеть от того, как данное значение измеряют или определяют, т.е. ограничения измерительной системы. Например, «примерно» может означать нахождение в пределах одного или более чем одного стандартного отклонения в соответствии с практикой в данной области техники. Термин «примерно» также используется для указания того, что рассматриваемое количество или значение может представлять собой установленное значение или какое-либо другое значение, которое является приблизительно таким же. Данная формулировка предназначена для того, чтобы показать, что аналогичные значения обеспечивают эквивалентные результаты или эффекты, раскрытые в настоящем документе. В данном контексте «примерно» может относиться к диапазону выше и/или ниже, составляющему до 10%. Слово «примерно» в некоторых вариантах осуществления относится к диапазону выше и ниже определенного значения, который составляет до 5%, например, до 2%, до 1% или до 0,5% выше или ниже такого значения.

[0050] Термин «активность», «биологическая активность», «терапевтическая активность» или «функциональная активность», используемый в настоящем документе, относится к активности, проявляемой итолизумабом, определяемой in vivo или in vitro, в соответствии со стандартными методиками.

[0051] Термин «эффективное противовирусное количество», используемый в данном документе, означает количество соединения итолизумаб согласно изобретению, которое приводит к лечению, профилактике, замедлению распространения коронавируса, включая COVID-19, или проявлений коронавируса, предотвращению инфицирования других лиц и/или улучшению состояния пациента.

[0052] Термин «цитокин», используемый в настоящем документе, подразумевает включение любого из группы гормоноподобных медиаторов, продуцируемых Т- и В-лимфоцитами. Типичные цитокины включают, без ограничения, интерлейкин-1 (IL-1), IL2, IL3, IL4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, IL-18, интерферон гамма (IFN-гамма), фактор некроза опухоли альфа (TNF-альфа) и трансформирующий фактор роста-бета (TGF-бета).

[0053] Термин «лимфоцит», используемый в настоящем документе, имеет обычное значение в данной области техники и обозначает любой из мононуклеарных, нефагоцитарных лейкоцитов, обнаруживаемых в крови, лимфе и лимфоидных тканях, например В- и Т-лимфоциты.

[0054] Варианты вируса COVID-19 могут включать замены аминокислот, обнаруживаемые в спайковом белке вируса, а также в области белка ORF. Например, вариант В.1.1.7 имеет характерную мутацию N501Y. Было обнаружено, что другие мутации, включая A222V, Е484К, S477N и K417N/T, являются более заразными. Поскольку вирус распространяется, и заражается все больше людей, дополнительные варианты неизбежны.

[0055] Термины «пациент» и «субъект», используемые в настоящем документе, используются взаимозаменяемо и относятся к пациентам-людям.

[0056] Термины «осуществление лечения» или «лечение», используемые в настоящем документе, включают введение композиций антител, соединений или агентов по настоящему изобретению для предотвращения или отсрочивания появления симптомов, осложнений или биохимических индикаторов заболевания, облегчения симптомов или остановки или ингибирования дальнейшего развития заболевания, состояния или нарушения (например, рака, метастатического рака или метастатического рака молочной железы). Лечение может быть профилактическим (для предотвращения или отсрочивания начала заболевания, либо для предотвращения проявления его клинических или субклинических симптомов) или терапевтическим подавлением или облегчением симптомов после проявления заболевания.

[0057] Термин «хорошо переносимый», используемый в настоящем документе, относится к отсутствию неблагоприятных изменений в состоянии здоровья, которые происходят из-за лечения и могут повлиять на принятие решений при лечении.

[0058] Фраза «осуществление модуляции иммунного ответа» или «модуляция иммунного ответа», используемая в настоящем описании, включает в себя понижающую регуляцию, ингибирование или снижение иммунного ответа, как определено в настоящем документе. [0059] Термин «антитело к CD6», используемый в настоящем документе, представляет собой антитело, которое специфически связывается с SRCR доменом 1 (D1) человеческого CD6 (hCD6) и которое не препятствует молекуле клеточной адгезии активированных лейкоцитов (ALCAM), связывающейся с CD6.

[0060] mAb к CD6 (моноклональные антитела), используемые в настоящем документе, можно вводить как часть фармацевтических композиций, содержащих mAb в качестве активного агента и в качестве подходящего вспомогательного вещества физиологический буфер, аналогичный тому, который используется для приготовления mAb, предназначенных для введения внутривенным путем. В частности, последовательности итолизумаба описаны в патентах США No 6572857 и 8524233, содержание которых включено в настоящий документ посредством ссылки в таблице 1 ниже.

[0061] Таблица 1: Последовательность белка итолизумаба

[0062] Примечательно, что CD6 постоянно экспрессируется главным образом на эффекторных Т-клетках (Teff-клетках) и редко экспрессируется на регуляторных Т-клетках (Treg). CD6 стимулирует иммунный ответ и сверхэкспрессируется после активации лимфоцитов. CD6 наводит воспалительные клетки на очаг поражения, а его лиганд ALCAM подвергается повышающей регуляции после активации и в воспаленных тканях.

[0063] CD6 и вирусы: CD6 сверхэкспрессируется на Т-клетках при хронической инфекции вирусом иммунодефицита обезьян (SIV) с нарушением противовирусного ответа и связан с прогрессированием заболевания SIV. Т-лимфотропный вирус человека типа 1 (HTLV-1) индуцирует сверхэкспрессию ALCAM, способствуя проникновению инфицированных лимфоцитов через гематоэнцефалический барьер. ALCAM повышены на ВИЧ+ моноцитах, и антитела к ALCAM, а также двойной ингибитор CCR2/CCR5 снижают их трансмиграцию.

[0064] Итолизумаб представляет собой гуманизированное mAb lgG1 к CD6. Итолизумаб представляет собой иммуномодулирующую молекулу, которая не истощает клетки-мишени (без цитопении). Итолизумаб накапливается в очаге воспаления. Итолизумаб оказывает сильное противовоспалительное действие, снижая выработку провоспалительных цитокинов IL-6, TNF, IFNγ, IL-17 и IL-1.

[0065] В данном документе показано, что итолизумаб у пациентов с COVID-19 обладает способностью контролировать провоспалительный синдром цитокинового шторма путем иммуномодуляции функции T_eff (клетки Th1/Th2/Th17) и предотвращать транспортировку лимфоцитов к месту воспаления (нарушая взаимодействие ALCAM-CD6), не затрагивая Tregs и сохраняя противовирусный ответ. Ожидается, что это снизит заболеваемость и смертность пациентов с положительным анализом на COVID-19, связанные с синдромом высвобождения цитокинов.

[0066] Примечательно, что более высокое процентное содержание воспалительных моноцитов CD14+ CD16+ присутствует в периферической крови пациентов с COVID-19. Процентное содержание моноцитов CD14+ CD16+ намного выше у пациентов с проявлением ОРДС. Кроме того, значительно более высокая экспрессия IL-6 секретируется из данных воспалительных моноцитов, особенно у пациентов с ОРДС. Предполагается, что это повышение IL-6+ моноцитов связано с цитокиновым штормом, вызываемым моноцитами, которые могут мигрировать в область легких. Таким образом, у пациентов с COVID-19 эти активированные иммунные клетки могут в больших количествах проникать в легочный кровоток и повреждать иммунную систему при ОРДС. Таким образом, настоящее изобретение предусматривает новый подход к снижению воспалительных цитокиновых белков, которые могут включать интерлейкины IL-1, IL-6 и IL-2 и интерферон-гамма, и к лечению больных с осложнениями в виде гипервоспаления, вызванного COVID-19 и его вариантами.

[0067] В некоторых вариантах осуществления способы по настоящему изобретению включают предотвращение острого респираторного дистресс-синдрома (ОРДС) у пациента с COVID-19, при этом способ состоит из лечения пациента терапевтическим количеством антитела к CD6. В некоторых вариантах осуществления способы по настоящему изобретению снижают смертность от ОРДС у пациентов с COVID-19. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предусматривает способы снижения продолжительности пребывания пациента, инфицированного SARS-CoV-2, в стационаре, причем указанный способ включает введение пациенту терапевтического количества антитела к CD6. В некоторых вариантах осуществления способы по настоящему изобретению предотвращают миокардит у пациента с COVID-19. В некоторых вариантах осуществления способы по настоящему изобретению используют для снижения показателей смертности в отделении интенсивной терапии у пациентов с COVID-19.

[0068] В некоторых вариантах осуществления способы по настоящему изобретению включают предотвращение инфекционных заболеваний, вызываемых бактериальными агентами, у пациентов, при этом способ включает лечение пациента терапевтическим количеством антитела к CD6. Эти бактериальные агенты включают, но не ограничиваются ими, стрептококки группы А и пневмококки.

[0069] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения итолизумаб вводят пациенту в дополнение к одному или нескольким другим терапевтическим агентам. В некоторых вариантах осуществления дополнительный терапевтический агент выбирают из группы, состоящей из вакцин, противовирусных средств, антител, иммунотерапевтических средств, иммуно модуляторов, ингибиторов цитокинов, антикоагулянтов, ингибиторов комплемента, регуляторов микробиома и противомалярийных средств. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения дополнительным агентом является вакцина. В некоторых вариантах осуществления вакцину выбирают из списка, состоящего из BNT-162b2, ChAdOx1 nCoV-19 или мРНК-1273. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения дополнительным агентом является противовирусное средство. В некоторых вариантах осуществления противовирусное средство выбирают из списка, состоящего из ингибитора вирусной нейраминидазы (например, осельтамивира или занамивира), ингибитора вирусной полимеразы (например, рибавирина) или блокатора ионных каналов М2 (например, амантадина или римантадина), ремдесивира, биомедивира, фавипиравира или наномедивира. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения дополнительным терапевтическим агентом являются ингибиторы фазы II, такие как Т-705 Toyama Chemical Со. (пероральный ингибитор полимеразы), Перамивир™, BioCryst (iv/IM ингибитор нейраминидазы) или ингибиторы фазы I, такие как CS-8958, Biota/Daiichi Sankyo (ингаляционный ингибитор нейраминидазы). В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения дополнительным агентом является антитело. В некоторых вариантах осуществления дополнительный агент представляет собой нейтрализующее антитело. В некоторых вариантах осуществления нейтрализующим антителом является LY-CoV555 или REGN-COV2. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения дополнительный агент представляет собой иммунотерапевтический агент. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения дополнительным агентом является реконвалесцентная плазма. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения дополнительный агент представляет собой иммуномодулятор. В некоторых вариантах осуществления и ммуно модулятор представляет собой глюкокортикоид. В некоторых вариантах осуществления иммуномодулятор представляет собой ингибитор киназы. В некоторых вариантах осуществления дополнительным агентом является циклесонид. В некоторых вариантах осуществления дополнительным агентом является барицитиниб. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения дополнительным агентом является руксолитиниб. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения дополнительным агентом является ингибитор цитокинов. В некоторых вариантах осуществления ингибитор цитокинов выбирают из списка, состоящего из тоцилизумаба, сарилумаба, канакинумаба, лензилумаба. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения дополнительным агентом является терапия стволовыми клетками. В некоторых вариантах осуществления терапия стволовыми клетками представляет собой реместемцел-L или эмиплацел. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения дополнительный агент представляет собой антикоагулянт. В некоторых вариантах осуществления дополнительный агент представляет собой антитромботическое средство. В некоторых вариантах осуществления способы по настоящему изобретению используют с дополнительным агентом, выбранным из списка, включающего ривароксабан, сулодексид, апиксабан, гепарин и аспирин. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения дополнительный агент представляет собой ингибитор комплемента. В некоторых вариантах осуществления ингибитор комплемента выбирают из экулизумаба или равулизумаба. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения дополнительный агент представляет собой регулятор микробиома. В некоторых вариантах осуществления дополнительный агент представляет собой EDP-1815. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения дополнительный агент представляет собой противомалярийное средство. В некоторых вариантах осуществления противомалярийное средство выбирают из хлорохина и гидроксихлорохина. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение также включает противовирусные композиции, содержащие антитело к CD6 согласно настоящему изобретению, вводимое с одним или несколькими другими противовирусными агентами, такими как ингибиторы обратной транскриптазы (RT), аналоги нуклеозидов, ингибиторы слияния и/или ингибиторы интегразы. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения ингибиторы обратной транскриптазы включают, но не ограничиваются ими, кпевудин, телбивудин, тенофовир, диповоксил, ганцикловир, лобукавир, фамцикловир и пенцикловир. В некоторых вариантах осуществления аналоги нуклеозидов включают, но не ограничиваются ими, абакавир (ABC), адефовир (bis-POM РМЕА), амдоксовир, априцитабин (AVX754), ценсавудин, диданозин (DDI), элвуцитабин, эмтрицитабин (FTC), энтекавир (ETV), ламивудин (ЗТС), рацивир, стапудин, ставудин (d4T), тенофовир дизопроксил (TDF), тенофовир алафенамид (GS-7340), залцитабин (ddC), зидовудин (70У)/азидотимидин (AZT), их производные, необязательно алкилированные производные, также необязательно триметокси-ЗТС, его фармацевтически приемлемые соли и их комбинации. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения ингибиторы слияния включают, но не ограничиваются ими, энфувиртид («Фузеон»), Т-20, PRO 140, викривирок и маравирок. В других вариантах осуществления настоящего изобретения ингибиторы интегразы включают, но не ограничиваются ими, глобоиднан A, L-000870812, S/GSK1349572, S/GSK1265744, Ралтегравир и Элвитегравир.

[0070] Терапевтические варианты применения итолизумаба для пациентов, инфицированных COVID-19, включая субъектов с симптоматическими или бессимптомными инфекциями COVID-19, приведены в таблице 2.

[0071] Таблица 2: Все варианты могут также включать азитромицин и антиретровирусные препараты (анти-РНК-полимераза).

[0072] В объем настоящего изобретения входит профилактическое введение итолизумаба. Введение итолизумаба по настоящему изобретению можно осуществлять до проявления симптомов вируса COVID-19, так что вирус предотвращают или, альтернативном варианте, задерживают его прогрессирование. Профилактические способы по настоящему изобретению можно осуществлять по аналогии с терапевтическими способами, описанным в данном документе, хотя схемы дозирования и лечения могут отличаться. Таким образом, считается, что профилактическое введение итолизумаба в качестве превентивного способа субъектам, у которых нет признаков вируса, обеспечивает преимущество.

[0073] Настоящее изобретение включает лечение или терапию пациентов, инфицированных COVID-19, включая субъектов с симптоматическими или бессимптомными инфекциями COVID-19.

[0074] Моноклональное антитело итолизумаб по настоящему изобретению вводят способом, совместимым с дозированной лекарственной формой, и в таком количестве, которое будет терапевтически эффективным. Вводимое количество зависит от субъекта, подлежащего лечению, способности иммунной системы субъекта генерировать клеточный иммунный ответ и желаемой степени защиты. Точное количество вводимого активного ингредиента зависит от решения лечащего врача и индивидуально для каждого человека. Однако итолизумаб можно доставлять в эффективном количестве от примерно 0,1 до 25 мг/кг массы тела в неделю, более предпочтительно от примерно 0,5 мг/кг до примерно 10 мг/кг массы тела и наиболее предпочтительно от примерно 1 до 3 мг/кг массы тела в неделю, доставляемых путем внутривенного (в/в) введения. [0075] В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения пациентов обследуют на сопутствующие заболевания и лечат однократной дозой итолизумаба. В одном из вариантов осуществления COVID-19 пациентов с сопутствующими заболеваниями лечат 200 мг итолизумаба в дозе 3,2 мг/кг. В одном из вариантов осуществления лечение повторяют через 1-14 суток.

[0076] Комбинированные композиции по настоящему изобретению могут содержать пониженные дозы активного противовирусного средства при сохранении уровня противовирусной активности, характерной для более высокой дозы. В результате цитотоксичность, обычно связанная с введением противовирусного средства, сводится к минимуму за счет введения комбинированных композиций по настоящему изобретению. Комбинированные композиции могут содержать уменьшенную дозу противовирусного средства в комбинации с итолизумабом по настоящему изобретению для достижения уровня противовирусной активности, который превышает обычно требуемый, при сохранении приемлемого уровня цитотоксичности.

[0077] Некоторые способы по настоящему изобретению включают первое тестирование пациента на COVID-19, и для пациентов с положительным результатом на COVID-19 - введение терапевтической дозы антитела к CD6. Некоторые способы по настоящему изобретению предусматривают критерии отбора для определения того, какие пациенты с COVID-19 подлежат лечению терапевтической дозой итолизумаба. Некоторые способы по настоящему изобретению включают проведение тестирования на COVID-19 и оценку состояния пациента на предмет прогрессирования поражения легких и введение антитела к CD6 пациентам, которые дали положительный результат теста на COVID-19 и имеют прогрессирование поражения легких. В некоторых способах по настоящему изобретению определение того, прогрессирует ли поражение легких, включает оценку состояния пациента с обнаружением по меньшей мере одного ил следующего: а) ухудшение насыщения кислородом; b) снижение PaO₂; с)необходимость повышения FiO₂; d) нестабильный SO₂; е) возросшая потребность в дыхательной поддержке аппаратом ИВЛ; е) возникшая потребность в поддержке аппаратами ИВЛ; f) увеличение числа областей консолидации и/или степени консолидации легких. В некоторых способах насыщение кислородом ухудшается более чем на 1 процентный пункт. В некоторых способах по настоящему изобретению насыщение пациента кислородом ухудшается на >3 процентных пункта. В некоторых вариантах осуществления снижение PaO₂ составляет >10%.

[0078] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения способы включают отбор пациентов с COVID-19 и подозрением на синдром активации макрофагов и введение терапевтической дозы итолизумаба. В некоторых вариантах осуществления пациенту, который имеет положительный результат теста на COVID-19 и нуждается в кислородной терапии, вводят терапевтическую дозу итолизумаба. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение состоит из введения пациенту с COVID-19 с подтвержденной многоочаговой интерстициальной пневмонией терапевтической дозы итолизумаба. В некоторых вариантах осуществления пациенту с положительным результатом теста на COVID-19, который также нуждается в кислородной терапии для поддержания насыщения 0₂>93%, вводят терапевтическую дозу антитела к CD6. В некоторых вариантах осуществления способы по настоящему изобретению используются для лечения пациента с положительным результатом теста на COVID-19, который имеет одно или более из следующего: а) хрипы или нарушенная речь; b) частота дыхания более 22 вдохов в минуту; с) PO₂: парциальное артериальное давление кислорода <65 мм рт.ст.; d) ухудшение радиологического изображения; е) лихорадка >=38°С; f) снижение исходных значений гемоглобина, тромбоцитов или нейтрофилов; g) Hb<90 г/л; h) тромбоциты <100 ×109/л; i) нейтрофилы <1×109/л; j) лейкоциты <4 ×109/л; к) пониженная скорость оседания эритроцитов не соответствует PCR (низкая скорость оседания эритроцитов и PCR увеличивается или не изменяется); I) повышенное начальное значение триглицеридов или триглицериды более 3 ммоль/л; m) повышенное начальное значение ферритина от 500 нг/мл или абсолютное значение ферритина >=2000 нг/мл; n) трансаминаза аспартат-аминотрансфераза >=30 МЕ/л;) повышение димера D; р) фибриноген <2,5 г/л; q) возникновение неврологических проявлений. В некоторых вариантах осуществления способы настоящего изобретения включают использование критериев исключения для отбора пациентов для лечения антителом к CD6. В некоторых вариантах осуществления критерии исключения включают одно или более из следующего: беременность, кормление грудью и одно или более неблагоприятных событий.

[0079] Некоторые варианты осуществления настоящего изобретения включают определение того, как долго лечить пациента и в какой дозе, путем измерения одного или более первичных критериев эффективности, выбранных из списка, состоящего из следующего: снижение или ухудшение функции легких, частота пациентов, у которых отсутствует необходимость увеличения FiO₂ для поддержания стабильности SO₂ и без необходимости интубации; частота пациентов со снижающимися значениями положительного давления в конце выдоха (PPFE)). В некоторых вариантах осуществления время измерения этих критериев составляет от 1 до 7 суток. Некоторые варианты осуществления настоящего изобретения включают определение того, как долго лечить пациента и в какой дозе, путем измерения одного или более вторичных критериев эффективности, выбранных из списка, состоящего из следующего: 1. необходимость эндотрахеальной интубации; 2) увеличение частоты неинвазивной или инвазивной ИВЛ при возникновении дыхательной недостаточности; 3) неблагоприятный исход неинвазивной ИВЛ; 4) продолжительность ИВЛ или время до окончания ИВЛ; 5) уровень смертности больных; 6) концентрация IL-1, IL-6 и TNF-альфа в сыворотке крови пациента; 7) Диагностические параметры HSH (температура, висцеромегалия, цитопения, триглицериды, фибриноген, ферритин, ААТ (GOT)); 8) С-реактивный белок и абсолютное количество лимфоцитов (положительное или отрицательное).

[0080] Некоторые способы по настоящему изобретению включают введение пациенту с COVID-19 средней степени тяжести терапевтической дозы антитела к CD6. Некоторые способы по настоящему изобретению включают введение пациенту пожилого возраста с COVID-19 терапевтической дозы антитела к CD6. В некоторых вариантах осуществления пациенту 64 года или больше. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 представляет собой итолизумаб. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения госпитализированных пациентов с положительным результатом теста на COVID-19 лечат итолизумабом в комбинации с противовирусными средствами и сравнивают с контрольной группой, получавшей стандартную противовирусную терапию без итолизумаба. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения пациентов оценивают на наличие COVID-19 путем полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией в реальном времени (RT-PCR).

[0081] Статистическая значимость лечения определяется через среднее и стандартное отклонение или медианный и межквартильный диапазоны (в зависимости от распределения каждой переменной). Критерий суммы рангов Уилкоксона применяется к непрерывным переменным, а критерий хи-квадрат или точный критерий Фишера используются для категориальных переменных. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предусматривает отбор контрольной группы из той же группы госпитализированных пациентов с COVID-19, которые не получали иммуномодулирующую терапию. Контрольную группу лечат лопинавиром/ритонавиром, хлорохином, интерфероном α2В и низкомолекулярным гепарином (НМГ). Субъекты контрольной группы сопоставимы по возрасту, сопутствующим заболеваниям и тяжести заболевания. Отношение рисков прогрессирования заболевания и смертности оценивают для итолизумаба по сравнению с контролем. Сопутствующие заболевания включают гипертонию, деменцию, недоедание, болезни сердца, сахарный диабет, хроническую обструктивную болезнь легких.

[0082] Каждый флакон объемом 5 мл содержит 25 мг итолизумаба (р-ДНК происхождения), который представляет собой бесцветный и прозрачный раствор для вв инфузий. Итолизумаб упакован во флакон из прозрачного стекла 6R (тип 1 USP), закрытый пробкой из хлорбутилкаучука и герметизированный колпачком с отрывной накладкой. Итолизумаб для инъекций представляет собой раствор без консервантов, поставляемый в одноразовых флаконах для внутривенных инфузий. Перед применением раствор во флаконе проверяют визуально на наличие твердых частиц и изменение цвета. Если наблюдаются видимые непрозрачные частицы, обесцвечивание или другие посторонние частицы, флакон следует выбросить, а раствор не вводить пациенту. Соответствующий объем инъекционного итолизумаба добавляли к 250 мл физиологического раствора и осторожно перемешивали. Данный инфузионный мешок с разбавленным итолизумабом можно хранить при комнатной температуре или в холодильнике при температуре от 2°С до 8°С в защищенном от света месте, при этом он сохраняет стабильность до 10 часов при комнатной температуре. Инфузионному раствору давали достичь комнатной температуры перед введением пациентам. Инфузию итолизумабом проводили в течение периода времени, составляющего не менее 120 минут, с использованием инфузионного набора со встроенным стерильным апирогенным фильтром с низкой способностью связывать белки (размер пор 1,2 мкм или менее). Приблизительно 50 мл инфузионного раствора вводили в течение первого часа, а затем оставшийся раствор (приблизительно 200 мл) в течение следующего часа. Период инфузии может быть продлен до 8 часов по медицинским показаниям. Итолизумаб нельзя вводить одновременно в одном и том же катетере с любыми другими средствами. Любая неиспользованная часть инфузионного раствора не должна храниться для повторного использования.

[0083] Схемы дозирования корректируют для обеспечения оптимального желаемого ответа (например, терапевтического ответа). Например, можно вводить один болюс, можно вводить несколько разделенных доз в течение времени или доза может быть пропорционально уменьшена или увеличена в соответствии с требованиями терапевтической ситуации. Эффективные дозы и схемы дозирования монокпональных антител к CD6, используемых в настоящем изобретении, зависят от тяжести заболевания COVID-19 и его вариантов и могут определяться практикующими врачами. В одном варианте осуществления моноклональное антитело к CD6 вводят путем инфузии в еженедельной дозе. Такое введение можно повторять, например, от 1 до 8 раз, например, от 2 до 4 раз или от 3 до 5 раз. В альтернативном варианте введение можно осуществлять путем непрерывной инфузии в течение периода времени от 2 до 24 часов, например, от 2 до 12 часов.

[0084] Иллюстративный неограничивающий диапазон терапевтически эффективного количества моноклонального антитела к CD6, используемого в настоящем изобретении, составляет примерно 0,01-100 мг/кг массы тела субъекта, например, примерно 0,01-50 мг/кг, например, примерно 0,01-25 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления для определения дозы используется идеальное соотношение роста и веса пациента. В некоторых вариантах осуществления субъекту вводят более одной дозы. В некоторых вариантах осуществления пациенту вводят большую начальную дозу. В некоторых вариантах осуществления вторую дозу вводят через одну неделю. В некоторых вариантах осуществления вторую дозу вводят через две недели. В некоторых вариантах осуществления вторая доза имеет ту же активность, что и первая доза. В некоторых вариантах осуществления вторая доза составляет три четверти или меньше начальной дозы. В некоторых вариантах осуществления вторая доза составляет половину начальной дозы. В некоторых вариантах осуществления проводят третье лечение. В некоторых вариантах осуществления терапевтически эффективные количества моноклонального антитела к CD6 вводят каждые две недели до тех пор, пока не будет установлено, что пациент выздоравливает или выписывается из больницы. В некоторых вариантах осуществления дозы составляют либо 0,8 мг/кг, либо 1,6 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления вводимые дозы составляют 1,6 мг/кг и 0,8 мг/кг. Типичные неограничивающие дозы терапевтически эффективного количества моноклонального антитела к CD6, используемого в настоящем изобретении, составляют 0,8 мг/кг и 1,6 мг/кг. Медицинский работник, обладающий обычными знаниями в данной области, может без труда определить и назначить необходимое эффективное количество фармацевтической композиции. Например, врач может начать с более низких доз моноклонального антитела к CD6, чем те, которые необходимы для достижения желаемого терапевтического эффекта, и постепенно увеличивать дозу до тех пор, пока не будет достигнут желаемый эффект.

[0085] В одном из вариантов осуществления моноклональное антитело к CD6 вводят путем инфузии в еженедельной дозе от 0,1 до 50 мг/кг массы тела субъекта, например, от 0,5 до 3 мг/кг. Такое введение можно повторять, например, от 1 до 8 раз, например, от 2 до 4 раз или от 3 до 5 раз. В альтернативном варианте введение можно осуществлять путем непрерывной инфузии в течение периода времени от 2 до 24 часов, например, от 2 до 12 часов. В одном из вариантов осуществления моноклональное антитело к CD6 вводят каждую неделю. В некоторых из этих вариантов осуществления дозу от 50 мг до 350 мг итолизумаба вводят до 7 раз, например от 2 до 4 раз. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 вводят раз в две недели. Введение можно осуществлять путем непрерывной инфузии в течение периода времени от 2 до 24 часов, например, от 2 до 12 часов. Такой режим можно повторять один или более раз по мере необходимости, например, через одну неделю или через две недели.

[0086] Большинство оценок и методик исследования проводились в соответствии со стандартными протоколами лечения, установленными участвующими исследовательскими центрами, и руководствами по ведению заболевания COVID-19 от ICMR. Нежелательные явления, возникшие в ходе лечения (ТЕАЕ), классифицировались в соответствии с общими терминологическими критериями оценки нежелательных явлений (СТСАЕ) (v5.0) в процессе лечения и в течение 30 суток после первой лечебной дозы.

[0087] Примеры, которые последуют, изложены, чтобы помочь в понимании изобретения, но не предназначены и не должны толковаться как ограничивающие его объем каким-либо образом. Примеры не включают подробное описание обычных способов, используемых в методиках анализа. Такие способы хорошо известны специалистам в данной области и описаны в многочисленных публикациях, в том числе в виде примеров.

[0088] Пример 1

[0089] Пациенты с положительным вирусологическим диагнозом инфекции SARS-CoV2 (RT-PCR) были рандомизированы для регистрации из различных центров в Индии. [0090] Основными критериями включения для пациентов были:

Подтвержденный вирусологический диагноз инфекции SARS-CoV2 (RT-PCR).

Госпитализация из-за клинического ухудшения инфекции COVID-19.

Насыщение кислородом в состоянии покоя в атмосферном воздухе ≤94%.

Пациенты с острым респираторным дистресс-синдромом от умеренной до тяжелой степени, определяемой по соотношению PaO₂/FiO₂ (парциальное давление кислорода/фракция вдыхаемого кислорода) <200 или ухудшением более чем на 25% по сравнению с непосредственным предыдущим значением.

Исходный уровень ферритина в сыворотке ≥400 нг/мл или уровни IL-6 более чем в 4 раза выше верхней границы нормы, если известны.

[0091] Основными критериями исключения для пациентов были:

Наличие тяжелых аллергических реакций на моноклональные антитела.

Инфекция активного туберкулеза (ТБ); Неправильное лечение туберкулеза или латентный туберкулез в анамнезе.

Пациент находится на инвазивной искусственной вентиляции легких.

Пациент получал пероральные препараты против отторжения или иммунодепрессанты в течение последних 6 месяцев.

Участие в других клинических испытаниях лекарственных средств, таких как использование терапии против IL-6, такой как тоцилизумаб (участие в испытаниях противовирусных средств против COVID-19 может быть разрешено, если это одобрено Спонсором).

Пациент получает лечение анти-IL-6 или терапию плазмой в рамках поддерживающей терапии.

Беременность или кормление грудью, или положительный тест на беременность при обследовании перед введением дозы.

Пациенты с гепатитом В, гепатитом С или ВИЧ в анамнезе.

Абсолютное количество нейтрофилов (ANC) <1000/мм³; Количество тромбоцитов <50 000/мм³; Абсолютное количество лимфоцитов (ALK): <500/мм³.

[0092] 6-недельное исследование лечения было проведено в двух группах приблизительно на 36 пациентах.

[0093] Группа лечения А: оптимальная поддерживающая терапия+итолизумаб (SEQ ID No: 4 и 5); в которой в соответствии с протоколом учреждения была проведена оптимальная поддерживающая терапия (например, противовирусные средства/антибиотики/гидроксихлорохин; оксигенотерапия и т.д.) вместе с итолизумабом. Пациентам группы А перед инфузией проводили премедикацию около 30±10 минут гидрокортизоном, 100 мг внутривенно (или эквивалентным глюкокортикоидом короткого действия), и фенирамином, 30 мг внутривенно.

[0094] Группа лечения В: оптимальная поддерживающая терапия, где: оптимальная поддерживающая терапия, которая должна быть проведена в соответствии с протоколом учреждения, проводилась (например, противовирусные средства/антибиотики/гидроксихлорохин, оксигенотерапия и т.д.) без итолизумаба.

[0095] Все подходящие пациенты, включенные в исследование, были рандомизированы в соотношении 2:1 для получения лечения А (оптимальная поддерживающая терапия+итолизумаб) или лечения В (оптимальная поддерживающая терапия) соответственно. Компьютерный график рандомизации был создан с использованием подходящей системы, например, программного обеспечения SAS для распределения пациентов по группам лечения. Рандомизация была централизованной, а удаленные телефонные и компьютерные системы электронной почты использовались для размещения графика рандомизации на месте. Если пациент был рандомизирован в группу А, и не был начат прием итолизумаба, или ему не была введена одна полная инфузия, пациент не считался рандомизированным. Тот же самый код рандомизации использовался для последующего пациента в этом конкретном месте.

[0096] Поддерживающая терапия, включая оксигенотерапию, гепарин, противовирусные средства, антибиотики, стероиды кратковременного действия и витамины, была разрешена. Предшествующее и сопутствующее лечение пероральными препаратами против отторжения или иммунодепрессантами (постоянно/регулярно в течение последних 6 месяцев), терапия анти-IL-6, таким как тоцилизумаб, реконвалесцентная плазма, не были разрешены.

[0097] Итолизумаб для инъекций представляет собой раствор, не содержащий консервантов, поставляемый в одноразовых флаконах для внутривенных инфузий. Перед применением раствор во флаконе проверяли визуально на наличие твердых частиц и изменение цвета. Если наблюдались видимые непрозрачные частицы, обесцвечивание или другие посторонние частицы, флакон выбрасывали, и раствор не вводили пациенту. Соответствующий объем инъекционного итолизумаба добавляли к 250 мл физиологического раствора и осторожно перемешивали. Данный инфузионный мешок с разбавленным итолизумабом можно хранить при комнатной температуре или в холодильнике при температуре от 2°С до 8°С в защищенном от света месте, при этом он сохраняет стабильность до 10 часов при комнатной температуре. Инфузионному раствору давали достичь комнатной температуры перед введением пациентам.

[0098] Инфузию итолизумабом проводили в течение периода времени, составляющего не менее 120 минут, с использованием инфузионного набора со встроенным стерильным апирогенным фильтром с низким связыванием белков (размер пор 1,2 мкм или менее). Приблизительно 50 мл инфузионного раствора вводили в течение первого часа, а затем оставшийся раствор (приблизительно 200 мл) вводили в течение следующего часа. Период инфузии может быть продлен до 8 часов по медицинским показаниям. Итолизумаб нельзя было вводить одновременно в одном и том же катетере с любыми другими средствами. Любая неиспользованная часть инфузионного раствора не хранилась для повторного использования.

[0099] Большинство оценок и методик исследования были поведены в соответствии со стандартными протоколами лечения, установленными участвующими исследовательскими центрами, и руководствами по ведению заболевания COVID-19 от ICMR. Нежелательные явления, возникшие в ходе лечения (ТЕАЕ), классифицировались в соответствии с общими терминологическими критериями оценки нежелательных явлений (СТСАЕ) (v5.0) в процессе лечения и вплоть до 30 суток после первой лечебной дозы.

[00100] Как указывалось выше, в общей сложности было обследовано 36 пациентов, из которых 4 пациента не прошли скрининг. Из 32 пациентов, которые соответствовали критериям включения или не соответствовали критериям исключения, 2 пациента, которых нужно было лечить итолизумабом, прекратили лечение до завершения введения первой дозы и были заменены в соответствии с протоколом. Средний возраст пациентов в группе А составлял 50,5 лет и 49,5 лет в группе В. Большинство из них были мужчинами в обеих группах лечения, и все пациенты были азиатами. Все пациенты в группе А и большинство пациентов в группе В (все выжившие пациенты) прошли исследование; оно включало 16 (80%) и 6 (60%) пациентов в группах А и В, соответственно, которые досрочно завершили участие в клиническом испытании. Наиболее частой причиной прекращения исследования в группе В была смерть (n=3). В группе А летальных исходов не было. Пациенты группы А получали оптимальную поддерживающую терапию вместе с итолизумабом в дозе 1,6 мг/кг в течение двух недель; при этом пациенты из группы В получали только оптимальную поддерживающую терапию.

[00101] Лечение итолизумабом заметно улучшило выживаемость пациентов за счет снижения показателя смертности в течение 1 месяца. Статистически значимая разница (р=0,0098) в уровне 1-месячной смертности наблюдалась между группами лечения А и В. Все пациенты, получавшие дозу итолизумаба, последовательно демонстрировали улучшение параметров легочной функции:

• Значительно стабильное/улучшенное насыщение кислородом (SpO₂) и PaO₂ без увеличения FiO₂.

• Потребность в O₂ снизилась после введения дозы.

• Соотношение PaO₂/FiO₂ постоянно улучшалось у всех пациентов.

В целом, более высокая доля пациентов в группе А имела стабильное/улучшенное значение SpO₂ без повышения FiO₂. В целом, более высокая доля пациентов в группе А имела стабильное значение PaO₂ без повышения FiO₂ во всех визитах для проведения оценки после исходного уровня. Статистически значимое различие, начиная с 21-х суток, наблюдалось между обеими группами лечения по обоим параметрам.

• PFR (соотношение PaO₂/FiO₂) постепенно увеличивалось с течением времени в группах А и В. Среднее значение PFR составило 350,25 в группе А и 398,33 в группе В за 21 сутки.

• Биомаркеры, такие как IL-6, IL-17A и TNF-α, продемонстрировали снижение после лечения итолизумабом. Пациенты продемонстрировали более значительное снижение среднего изменения относительно исходных уровней по сравнению с контрольной группой.

IL-6 является провоспалительным цитокином. Как можно увидеть на фиг. 3, среднее исходное значение IL-6 было сопоставимо в обеих группах; 159,1 пг/мл в группе А и 162,2 пг/мл в группе В. Значительное снижение (р=0,0269) средних уровней IL-6 после первой инфузии наблюдалось в группе А (43 пг/мл) по сравнению с группой В (212 пг/мл). р-значение оценивали с использованием критерия знаковых рангов Уилкоксона для согласованных пар. TNF-α является провоспалительным цитокином. Как видно фиг. 4, среднее исходное значение TNF-α было выше в группе А (44 пг/мл), чем в группе В (11 пг/мл). Значительное снижение (р=0,0253) средних уровней TNF-α после первой инфузии наблюдалось в группе А (9 пг/мл) по сравнению с повышением в группе В (39 пг/мл). Уровни TNF-α перед второй дозой составляли 68 пг/мл и 108 пг/мл в группах А и В соответственно. После второй дозы также наблюдалось снижение уровней TNF-α в группе А (50 пг/мл) по сравнению с повышением в группе В (185 пг/мл). р-значение было оценено с использованием теста знаковых рангов Уилкоксона для согласованных пар.

IL-17A является провоспалительным цитокином. Среднее исходное значение IL-17А было сопоставимо в обеих группах; 10,36 пг/мл в группе А и 9,83 пг/мл в группе В. Заметное снижение средних уровней IL-17A после первой инфузии наблюдалось в группе А (6,75 пг/мл), в отличие от группы В, где наблюдалось повышение (14,75 пг/мл). Небольшое снижение уровней IL-17A также наблюдалось после второй дозы в группе А по сравнению с повышением в группе В.

• Другие важные маркеры дисфункции органов и коагулопатии, такие как ЛДГ (лактатдегидрогеназа) и D-димер, также продемонстрировали более значимое среднее снижение в группе А по сравнению с контрольной группой.

[00102] Первичная конечная точка смертности была статистически высокозначимой в пользу группы, получавшей итолизумаб; р-значение=0,0098. Итолизумаб последовательно демонстрировал улучшение параметров легочной функции и снижение уровней воспалительных биомаркеров. Итолизумаб был безопасен для пациентов с COVID-19. Реакции на инфузию контролировали посредством снижения скорости инфузии. Итолизумаб эффективным образом контролировал гиперактивацию иммунной системы в ответ на вирус COVID-19 и снижал заболеваемость и смертность, связанные с цитокиновым штормом.

[00103] В целом, лечение итолизумабом хорошо переносилось пациентами с COVID-19 вместе с BSC (оптимальная поддерживающая терапия), без каких-либо новых опасений по безопасности, возникающих из-за терапии.

[00104] Пример 2. Применение итолизумаба (SEQ ID No: 4 и 6) снизило уровень смертности у тяжелобольных пациентов и у пациентов, находящихся в критическом состоянии.

[00105] 48 пациентам с диагнозом SARS-CoV-2 или с высоким клиническим подозрением на пневмонию, вызванную COVID-19 и клиническими, рентгенологическими или лабораторными признаками синдрома высвобождения цитокинов, вводили внутривенно 200 мг дозу моноклонального антитела итолизумаб. Из них 22 пациента (14 в критическом состоянии и 8 в тяжелом состоянии) получили вторую дозу антитела через 72 часа, а 3 пациента в критическом состоянии получили третью дозу, поскольку у них сохранялись признаки дыхательной недостаточности или синдрома активации макрофагов. Чтобы оценить влияние применения данного продукта в исследованиях, каждый COVID-19-положительный пациент, по которому имелась информация о выздоровлении или смерти, зарегистрированная в Министерстве здравоохранения, с хотя бы одним сопутствующим заболеванием в анамнезе, считающимся фактором риска для тяжелого/смертельного исхода COVID-19 (гипертония, ишемическая болезнь сердца, сахарный диабет, рак, хроническая болезнь почек, ожирение, недоедание или ХОБЛ) или который был госпитализирован в отделение интенсивной терапии в стране и который не был включен ни в одно из проводящихся клинических испытаний по COVID-19, был выбран в качестве контроля. Для статистической обработки данных использовали критерий χ².

[00106] Как видно из таблицы 3, уровень смертности пациентов, получавших итолизумаб, был на 15% ниже, чем в контрольной группе. Кроме того, уровень смертности тяжелобольных, получавших итолизумаб, был значительно ниже по сравнению с тяжелобольными пациентами контрольной группы.

[00107] Таблица 3: Смертность тяжелобольных или больных в критическом состоянии

[00108] Пример 3. Применение итолизумаба снизило уровень смертности у пациентов с заболеванием средней степени тяжести с высоким риском перехода в тяжелое или критическое состояние.

[00109] Выборке из 14 пациентов со средней степенью тяжести заболевания, с 2 или более сопутствующими заболеваниями, прогнозирующими смертность, внутривенно вводили 200 мг [в дозе 3,2 мг/кг массы тела] моноклонального антитела итолизумаб (SEQ ID No: 4 и 6). В качестве контрольной группы, не получавшей лечения, были отобраны пациенты, у которых диагноз не был поставлен во время пребывания в отделении интенсивной терапии и у которых было 2 или более сопутствующих заболевания. Для статистической обработки данных использовали критерий χ².

[00110] Как можно увидеть в таблице 4, уровень смертности пациентов с высоким риском перехода заболевания в тяжелую или критическую степень, снизился на 27%.

[00111] Таблица 4: Уровень смертности пациентов с заболеванием средней степени тяжести

[00112] Пример 4. Лечение итолизумабом снизило концентрации IL-6 в сыворотке крови у критически и тяжелобольных пациентов с COVID-19 и стабилизировало такие уровни у пациентов с заболеванием средней степени тяжести.

[00113] У 21 COVID-19-положительного пациента, получавшего лечение моноклональным антителом итолизумаб (SEQ ID No: 4 и 6), уровни концентрации IL-6 в сыворотке крови определяли с помощью ELISA (Quantikine) до начала лечения и через 48 часов после введения. Пациенты были классифицированы как: больные с заболеванием средней степени тяжести: n=12; тяжело больные: n=4 и больные в критическом состоянии: n=5.

[00114] Как видно на фиг. 5, перед началом лечения итолизумабом уровни IL-6 у пациентов повышались с прогрессированием заболевания. Сывороточные концентрации у пациентов, находящихся в критическом состоянии, были значительно выше, чем у пациентов с заболеванием умеренной степени тяжести (тест Крускала-Уоллиса; р=0,0015). Исходные уровни IL-6 были связаны с тяжестью заболевания за счет применения ROC-кривой, выбранное пороговое значение сывороточной концентрации IL-6 составляло 27,4 пг/мл.

[00115] В группе из 16 пациентов, получавших итолизумаб, оценивали сывороточные концентрации IL-6 перед первым введением и через 48 часов после него. В таблице 5 показано изменение значений IL-6 через 48 часов в зависимости от установленного порогового значения.

[00116] У всех пациентов с циркулирующими уровнями IL-6 выше 27,4 пг/мл значения снижались посредством одной дозы итолизумаба, с измерениями через 24-48 часов после введения. Величина изменения концентрации IL-6 среди пациентов с концентрациями выше порогового значения имела среднее снижение 50,9 пг/мл. Однако среднее изменение концентрации IL-6 среди пациентов с исходными уровнями ниже 27,4 пг/мл составило 1,5 пг/мл.

[00117] Таблица 5: Изменение значений IL-6 через 48 часов как функция порогового значения, которое различает тяжесть заболевания

[00118] Пример 5. Клиническое улучшение состояния тяжелобольного пациента с цитокиновым штормом, вызванным респираторной инфекцией бактериального происхождения, получавшего итолизумаб.

[00119] Пациентка с диагнозом внебольничной бронхопневмонии (Фигура 6А) с осторожным прогнозом и являющаяся заядлым курильщиком, страдающим бронхиальной астмой, получила внутривенную дозу mAb итолизумаба примерно 200 мг (SEQ ID No: 4 и 6). Ее жизненно важные параметры на момент поступления: температура 38,2°С, частота дыхания 120 и частота пульса 89, АД 90/60, насыщение 0₂ 98, Р0₂ 116, РС0₂ 88,6, креатинин 50, гематокрит 0,32, лейкограмма 16,5 × 10⁹, лимфоциты 0,24 и моноциты 0,02, тромбоциты 350×10⁹, параметры, которые свидетельствовали о наличии у пациентки цитокинового шторма. Помимо mAb она получала сопутствующее лечение меропенемом и ванкомицином, гентамицином, осельтамивиром, омепразолом, флаксигепарином, морфином, мидазоламом, витаминотерапией, хлоргексидин 0,1% для полоскания ротовой полости.

[00120] Наблюдалась положительная динамика по рентгенологическим исследованиям через 48 часов, а также значительное улучшение жизненно важных параметров (фиг. 6В). Исследование, проведенное методом аксиальной компьютерной томографии, выполненное через десять суток после введения антитела, не показало никаких признаков интерстициальной пневмонии, лишь кальцинированные узлы в основании легких, которые обычно встречаются у заядлых курильщиков, таких как эта пациентка. Кроме того, не сообщалось о побочных эффектах, связанных с введением антитела. Последующих инфекций не было. Через четырнадцать суток после поступления пациентка была выписана по медицинским показаниям.

[00121] Пример 6. Лечение итолизумабом продемонстрировало высокую скорость выздоровления у пациентов с подозрением на COVID-19, не подтвержденный ПЦР.

[00122] В общей сложности 22 пациента, поступивших в больницу Роберто Родригеса (Moron, Ciego de Avila) из-за клинического подозрения на пневмонию, вызванную COVID-19 (не подтвержденную ПЦР), получили внутривенно 200 мг дозу итолизумаба (SEQ ID No: 4 и 6) и две дозы этого антитела в одном из случаев. Пациенты при поступлении в больницу находились в критическом, тяжелом или состоянии средней степени тяжести с высоким риском обострения. Концентрацию воспалительных параметров определяли до введения антитела и через 48 часов после введения. Средние значения концентрации С-реактивного белка (фиг. 7) и концентрации ферритина (фиг. 8) снизились через 48 часов после лечения, что свидетельствует о том, что терапия итолизумабом вызывала снижение маркеров, ассоциированных с тяжелой степенью заболевания COVID и/или цитокиновым штормом. На фиг. 9 показано, что, несмотря на высокие уровни воспаления, которые наблюдались до введения антитела, выздоровление происходило у всех тяжелобольных пациентов и пациентов с заболеванием средней степени тяжести и у 86% всех пациентов, получавших лечение.

[00123] Пример 7. Лечение пациентов с COVID-19, которым требуется госпитализация

[00124] Исследование включало взрослых мужчин или женщин старше 18 лет с подтвержденным вирусологическим диагнозом инфекции SARS-CoV-2 с помощью RT-PCR и необходимостью госпитализации в связи с клиническим ухудшением инфекции COVID-19 с насыщением кислородом в состоянии покоя в окружающем воздухе<94%. Были включены пациенты с умеренной и тяжелой формой ОРДС, определяемой соотношением PaO₂/FiO₂ <200, или ухудшением более чем на 25% по сравнению с непосредственным предыдущим значением, и пациенты с исходным уровнем ферритина в сыворотке крови ≥400 нг/мл или уровнями IL-6, превышающими в 4 раза верхнюю границу нормы (ВГН).

[00125] Вводили первую дозу итолизумаба (SEQ ID NO: 4 и 6), составляющую 1,6 мг/кг. Была проведена оценка занятости рецептора CD6 in vitro, и доза 1,6 мг/кг продемонстрировала 99% занятость рецепторов. Некоторым пациентам при необходимости вводили дополнительную дозу 0,8 мг/кг через 1 неделю. Поскольку у пациентов наблюдалась разная степень воспалительной реакции хозяина, введение последующих еженедельных доз требовалось не всем пациентам. Решение было оставлено на усмотрение исследователя, основывающегося на клиническом состоянии и маркерах воспаления. В исследовании было разрешено вводить до четырех доз в неделю.

[00126] Пример 8. Лечение пациентов с COVID-19 до появления симптомов цитокинового шторма

[00127] Вводили первую дозу итолизумаба (SEQ ID NO. 4 и 6), составляющую 1,6 мг/кг. Эта нагрузочная доза 1,6 мг/кг была выбрана, поскольку она является одобренной дозой для пациентов с хроническим бляшечным псориазом, и дозы до 1,6 мг/кг вводили в форме в/в инфузии в нескольких фазах 2 и 3 клинических испытаний без каких-либо сведений по дозолимитирующей токсичности. Поскольку итолизумаб представляет собой антитело к CD6, оценивали занятость рецептора CD6 in vitro, и поскольку доза 1,6 мг/кг продемонстрировала 99% занятость рецептора, она была выбрана в качестве первой дозы. Некоторым пациентам при необходимости вводили дополнительную дозу 0,8 мг/кг через 1 неделю. Поскольку у пациентов наблюдалась различная степень воспалительной реакции хозяина, введение последующих еженедельных доз требовалось не всем пациентам. Решение принимал исследователь, исходя из клинического состояния и маркеров воспаления. В исследовании разрешалось вводить до четырех доз в неделю.

[00128] Пример 9. Лечение госпитализированных пациентов с COVID-19 итолизумабом

Двадцати субъектам с COVID-19, получающим стандартную терапию, вводили внутривенную инфузию итолизумаба (SEQ ID NO: 4 и 6) в начальной дозе 1,6 мг/кг. Субъектам без или с легкими побочными эффектами от начальной дозы, которые продолжали испытывать симптомы COVID-19, дополнительно вводили 1,6 мг/кг каждые две недели. Шесть субъектов получили одну дозу итолизумаба, составляющую 1,6 мг/кг; семь субъектов получили две дозы по 1,6 мг/кг с интервалом две недели между введениями; три субъекта получили одну дозу итолизумаба, оставляющую 1,6 мг/кг и через неделю они получили дозу 0,8 мг/кг, и через еще одну неделю они получили лечение последней дозой итолизумаба, составляющей 0,8 мг/кг; четыре субъекта получили одну дозу итолизумаба 1,6 мг/кг, и в течение последующих трех недель они получили три дополнительные дозы по 0,8 мг/кг с недельным интервалом между каждой дозой, в общей сложности четыре лечащих дозы.

[00129] Пример 10. Лечение пациентов с COVID-19 итолизумабом или плацебо в дополнение к стандартной терапии

Пациенты с COVID-19 разделены на две группы, одна из которых получает стандартную терапию плюс плацебо, а другая получает внутривенную инфузию итолизумаба в начальной дозе 1,6 мг/кг (из расчета идеальной массы тела) в дополнение к стандартной. На 8-е сутки пациенты в группе лечения получают дополнительно 0,8 мг/кг, если они: - а) не были выписаны из стационара; b) не выздоровели в стационаре; с) у них не было анафилаксии при введении первой дозы; d) не имеют ALC 0,5; и d) у них не диагностирована активная форма туберкулеза.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> Biocon Limited

<120> ANTI-CD6 ANTIBODY COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING AND

REDUCING NEGATIVE EFFECTS OF A CORONVIRUS INCLUDING COVID-19

<130> 650-1009

<150> 202041014994

<151> 2020-04-04

<150> 2020-0027

<151> 2020-04-17

<160> 6

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 119

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 1

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Arg Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Ile Tyr Tyr Pro Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Val Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Asp Tyr Asp Leu Asp Tyr Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 2

<211> 107

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 2

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Arg Asp Ile Arg Ser Tyr

20 25 30

Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile

35 40 45

Tyr Tyr Ala Thr Ser Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser

65 70 75 80

Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Gly Glu Ser Pro Phe

85 90 95

Thr Leu Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 3

<211> 109

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 3

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Arg Asp Ile Arg Ser Tyr

20 25 30

Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile

35 40 45

Tyr Tyr Ala Thr Ser Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser

65 70 75 80

Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Gly Glu Ser Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala

100 105

<210> 4

<211> 449

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 4

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Arg Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Ile Tyr Tyr Pro Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Val Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Asp Tyr Asp Leu Asp Tyr Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

355 360 365

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

370 375 380

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

405 410 415

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445

Lys

<210> 5

<211> 214

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 5

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Arg Asp Ile Arg Ser Tyr

20 25 30

Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile

35 40 45

Tyr Tyr Ala Thr Ser Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser

65 70 75 80

Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Gly Glu Ser Pro Phe

85 90 95

Thr Leu Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 6

<211> 216

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 6

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Arg Asp Ile Arg Ser Tyr

20 25 30

Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile

35 40 45

Tyr Tyr Ala Thr Ser Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser

65 70 75 80

Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Gly Glu Ser Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala Arg Thr Val

100 105 110

Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys

115 120 125

Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg

130 135 140

Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn

145 150 155 160

Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser

165 170 175

Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys

180 185 190

Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr

195 200 205

Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<---

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложены применения неистощающего антитела к CD6, которое специфически связывается с доменом 1 CD6, для лечения инфекционного заболевания, которое приводит к цитокиновому шторму или синдрому высвобождения цитокинов, для лечения инфекционного заболевания, вызванного коронавирусом, которое приводит к цитокиновому шторму или синдрому высвобождения цитокинов, и для лечения COVID-19. Также предложен набор для лечения субъекта от COVID-19. Изобретения расширяют арсенал средств для лечения и снижения негативных последствий, вызванных инфекционными агентами, в особенности коронавирусами, при этом указанные негативные последствия включают запуск цитокинового шторма или синдрома высвобождения цитокинов. 7 н. и 10 з.п. ф-лы, 9 ил., 5 табл., 10 пр.

1. Применение неистощающего антитела к CD6, которое специфически связывается с доменом 1 CD6, для лечения инфекционного заболевания, которое приводит к цитокиновому шторму или синдрому высвобождения цитокинов, при этом указанное неистощающее антитело к CD6 содержит аминокислотные последовательности, изложенные в SEQ ID NO: 1 и 2, или неистощающее антитело к CD6, которое специфически связывается с доменом 1 CD6, имеет 98%-ную идентичность с SEQ ID NO: 1 и 2.

2. Применение неистощающего антитела к CD6 по п. 1, где инфекционные заболевания вызваны патогенами, выбранными из группы, включающей: коронавирус, стрептококки группы А и пневмококки.

3. Применение неистощающего антитела к CD6, которое специфически связывается с доменом 1 CD6, для лечения инфекционного заболевания, вызванного коронавирусом, которое приводит к цитокиновому шторму или синдрому высвобождения цитокинов, где указанное неистощающее антитело к CD6 содержит аминокислотные последовательности, изложенные в SEQ ID NO: 1 и 2, или неистощающее антитело к CD6, которое специфически связывается с доменом 1 CD6, имеет 98%-ную идентичность с SEQ ID NO: 1 и 2.

4. Применение по п. 3, где коронавирус представляет собой коронавирус SARS, MERS-CoV или SARS-CoV-2 и их варианты.

5. Применение по п. 1, где указанное неистощающее антитело к CD6, которое специфически связывается с доменом 1 CD6 и имеет 98%-ную идентичность с SEQ ID NO: 1 и 2, содержит SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 3.

6. Применение антитела к CD6, которое специфически связывается с доменом 1 CD6, для лечения COVID-19, при этом указанное антитело к CD6 снижает экспрессию цитокинов и содержит аминокислотные последовательности, изложенные в SEQ ID NO: 4 и 5, или антитело к CD6, которое специфически связывается с доменом 1 CD6, имеет 98%-ную идентичность с SEQ ID NO: 4 и 5.

7. Применение по п. 6, где указанное антитело к CD6, которое специфически связывается с доменом 1 CD6 и имеет 98%-ную идентичность с SEQ ID NO: 4 и 5, содержит SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 6.

8. Применение по любому из предшествующих пунктов, где указанное антитело к CD6 находится в эффективном количестве, составляющем от 0,5 мг/кг массы тела до 10 мг/кг массы тела.

9. Способ лечения субъекта, инфицированного коронавирусом, включающий лечение терапевтически эффективным количеством антитела к CD6, содержащего аминокислотные последовательности, изложенные в SEQ ID NO: 4 и 5, или аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 98%-ную идентичность с ними, содержащую SEQ ID NO: 4 и 6, при этом указанное антитело к CD6 снижает высокие уровни экспрессии цитокинов, образующихся во время цитокинового шторма.

10. Способ по п. 9, где коронавирус представляет собой коронавирус SARS, MERS-CoV или SARS-CoV-2.

11. Способ лечения субъекта, инфицированного бактериями, включающий лечение терапевтически эффективным количеством антитела к CD6, содержащего аминокислотные последовательности, изложенные в SEQ ID NO: 4 и 5, или аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 98%-ную идентичность с ними, содержащую SEQ ID NO: 4 и 6, при этом указанное антитело к CD6 снижает высокие уровни экспрессии цитокинов, образующихся во время цитокинового шторма, где указанные бактерии выбраны из группы, включающей: стрептококки группы А и пневмококки.

12. Способ по любому из пп. 9-11, где терапевтически эффективное количество антитела к CD6 составляет от 0,5 мг/кг массы тела до 10 мг/кг массы тела.

13. Способ по п. 12, где антитело к CD6 вводят субъекту по меньшей мере два раза, при этом время между двумя последовательными введениями составляет от 24 до 96 часов.

14. Набор для лечения субъекта от COVID-19, где указанный набор содержит терапевтически эффективное количество антитела к CD6, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 4 и 5 или аминокислотной последовательности, имеющей 98%-ную идентичность с ними, состоящей из SEQ ID NO: 4 и 6.

15. Способ лечения субъекта, инфицированного коронавирусом, включающий лечение терапевтически эффективным количеством антитела к CD6, содержащего аминокислотные последовательности, изложенные в SEQ ID NO: 4 и 6, при этом концентрации С-реактивного белка и ферритина снижаются в течение 48 часов после начала лечения.

16. Применение по любому из пп. 1-8 или способ по любому из пп. 9-13, 15, где антитело к CD6 представляет собой гуманизированное моноклональное антитело IgG1.

17. Применение или способ по п. 16, где указанное антитело к CD6 представляет собой итолизумаб.