Способ ранней диагностики устойчивости сортов мягкой яровой пшеницы к совместному действию возбудителя корневой гнили злаков Bipolaris sorokiniana Shoem. и хлоридного засоления Российский патент 2024 года по МПК A01H1/04 

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к биофизическим способам диагностики стрессоустойчивости растений в селекции и биотехнологии, и может быть применено для оценки новых генотипов мягкой яровой пшеницы на стадии проростков в лабораторных условиях на устойчивость к совместному действию возбудителя обыкновенной корневой гнили злаков Bipolaris sorokiniana Shoem. (далее - В. sorokiniana) и хлоридного засоления для последующего использования в качестве исходного селекционного материала при создании новых устойчивых сортов и применения их в агротехнологиях.

В природных условиях растительные организмы, в том числе мягкая яровая пшеница, подвержены, как правило, влиянию совместного действия стрессовых факторов среды: биотического, в частности, возбудителя обыкновенной корневой гнили злаков В. sorokiniana, и абиотического - хлоридного засоления, в различных сочетаниях и дозах с последовательным или одновременным их проявлением. Комплексное воздействие повреждающих факторов, таких как обыкновенная корневая гниль злаков В. Sorokiniana - одного из самых распространенных и вредоносных заболеваний мягкой яровой пшеницы, засоление почв, в том числе хлоридное, снижают продуктивность и ухудшают качество зерна пшеницы, что ограничивает сельскохозяйственное производство культуры во всем мире [1, 2]. Стрессовые взаимодействия между абиотическими и биотическими факторами, станут более распространенными в связи с наблюдаемыми и прогнозируемыми изменениями климата [3, 4].

Наиболее практичным и экономичным подходом для повышения урожайности мягкой яровой пшеницы является создание и возделывание сортов, устойчивых к совместному действию стрессоров, в том числе к возбудителю обыкновенной корневой гнили злаков В. sorokiniana и хлоридному засолению. Диагностика стрессоустойчивости сортов, особенно ранняя, - важное звено в отборе селекционного материала при создании новых сортов и применении их в агротехнологиях.

В полевых условиях диагностика стрессоустойчивости растений по депрессии урожая является довольно трудоемким и продолжительным по времени процессом в связи с невозможностью моделирования ежегодной одинаковой нагрузки стрессовых воздействий [5]. Поэтому часто диагностику стрессоустойчивости проводят в лабораторных условиях косвенными методами по изменению ряда физиологических, биохимических и биофизических параметров растений.

Известен ряд методов лабораторной диагностики устойчивости сортов пшеницы к возбудителю обыкновенной корневой гнили злаков и солеустойчивости растений зерновых культур: косвенные биофизические методы по оптическим и электрофизическим параметрам [6-10], а также прямые методы диагностики по морфофизиологическим и фитопатологическим показателям проростков [11-15].

Всеми перечисленными методами можно оценивать коллекционный и селекционный материал мягкой яровой пшеницы с целью выделения устойчивых сортов, линий и гибридов только к одному виду стрессора - либо к возбудителю обыкновенной корневой гнили злаков В. sorokiniana, либо к хлоридному засолению.

Известны способы оценки устойчивости сортов мягкой яровой пшеницы по изменению электропроводности водных вытяжек листьев: патент РФ №2446671 Способ определения относительной устойчивости сортов мягкой яровой пшеницы к хлоридному засолению, 2012 [16] и патент РФ №2625027 Способ определения относительной устойчивости сортов мягкой яровой пшеницы к возбудителю обыкновенной корневой гнили злаков, 2017 [17]. Экспериментально нами была установлена невозможность применения данных способов для диагностики устойчивости сортов мягкой яровой пшеницы к совместному действию возбудителя обыкновенной корневой гнили злаков В. sorokiniana и хлоридного засоления.

Наиболее близким способом по своей сущности к заявленному изобретению является способ определения относительной устойчивости сортов мягкой яровой пшеницы к возбудителю обыкновенной корневой гнили злаков (патент РФ №2625027, 2017) [17]. При реализации способа проростки выращивают в рулонной культуре на водопроводной воде в условиях постоянной освещенности до фазы 2-3 листьев, контрольные растения помещают в дистиллированную воду, опытные растения помещают в культуральный фильтрат возбудителя, содержащий его токсины, на 24 ч. Затем готовят нарезки из вторых листьев контрольных и опытных образцов растений, помещают нарезки в дистиллированную воду в соотношении 1:4 на 1,5 ч в условия освещения, фильтруют вытяжки, измеряют их электропроводность при частоте 1 КГц и дифференцируют сорта по устойчивости - чем меньше относительное изменение электропроводности, тем устойчивее сорт.

Недостатком указанного способа является то, что он не позволяет дифференцировать сорта мягкой яровой пшеницы по устойчивости к совместному действию возбудителя обыкновенной корневой гнили злаков В. sorokiniana и хлоридного засоления.

Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа ранней диагностики устойчивости сортов мягкой яровой пшеницы к совместному действию возбудителя обыкновенной корневой гнили злаков В. sorokiniana и хлоридного засоления.

Технический результат - высокая дифференцирующая способность способа, то есть повышение достоверности и объективности диагностики устойчивости к совместному действию стрессоров, а, следовательно, и ускорение отбора селекционного материала для создания новых устойчивых сортов и использования их в агротехнологиях за счет снижения временных и трудозатрат.

В основу предлагаемого способа положено экспериментально установленное и теоретически обоснованное явление увеличения проницаемости клеточных мембран растительных тканей при совместном действии возбудителя обыкновенной корневой гнили злаков В. sorokiniana и хлоридного засоления, а также выявленные зависимости изменения проницаемости клеточных мембран проростков от устойчивости сортов мягкой яровой пшеницы. В результате токсического действия метаболитов патогена и хлоридного засоления происходит увеличение выхода электролитов из растительных клеток и, соответственно, повышение электропроводности водных вытяжек тканей. Эти изменения электропроводности могут быть зарегистрированы измерительными приборами - кондуктометрами. Дополнительно были проведены исследования по разработке методических приемов, обеспечивающих максимальные межсортовые различия мягкой яровой пшеницы при совместном действии возбудителя обыкновенной корневой гнили злаков В. sorokiniana и хлоридного засоления. В результате установлена патогенная структура возбудителя - конидиальная суспензия, способ и время ее действия, концентрация хлорида натрия, возраст проростков и методические приемы кондуктометрических измерений: размер нарезки, соотношение листовой ткани и воды и время экспозиции образцов.

Поставленная задача и технический результат достигаются тем, что в известный способ оценки устойчивости сортов мягкой яровой пшеницы к возбудителю обыкновенной корневой гнили злаков В. sorokiniana вводят следующие операции: подготовка конидиальной суспензии возбудителя обыкновенной корневой гнили злаков В. sorokiniana и раствора хлорида натрия; инфицирование конидиальной суспензией возбудителя проросших трехсуточных семян пшеницы с титром 5000 конидий на одну зерновку; выращивание в рулонной культуре опытных образцов проростков из искусственно инфицированных возбудителем семян в течение 1,0-1,5 суток на водопроводной воде до появления ростков длиной 15-20 мм, затем на 1,3%-ном растворе хлорида натрия до фазы первого листа в течение 10 суток; в аналогичных условиях на водопроводной воде выращивают контрольные образцы проростков без действия стрессоров до фазы первого листа в течение 10 суток; подготовка нарезок из средней части первых листьев проростков опытных и контрольных образцов, помещение их в дистиллированную воду в соотношении 1:40 не менее, чем на 1,5 часа, фильтрация вытяжек, определение их удельной электропроводности (УЭП) кондуктометром; диагностика стрессоустойчивости сортов по относительному изменению удельной электропроводности контрольных и опытных образцов проростков и дифференциация сортов по устойчивости -чем меньше относительное изменение удельной электропроводности, тем устойчивее сорт к совокупному воздействию стрессоров.

Способ ранней диагностики устойчивости сортов мягкой яровой пшеницы к совместному действию возбудителя обыкновенной корневой гнили злаков Bipolaris sorokiniana Shoem. и хлоридного засоления реализуется следующим образом.

Для подготовки инфекционного материала изоляты возбудителя обыкновенной корневой гнили злаков В. sorokiniana культивируют на твердой питательной среде Чапека в течение 14-15 суток. К этому времени на колониях гриба образуется наибольшее количество жизнеспособных конидий [18]. Затем в пробирку с культурой гриба наливают 0,1%-ный водный агар, встряхивают и готовят конидиальную суспензию для инфицирования семян пшеницы. Инфицирование семян конидиальной суспензией обеспечивает непосредственный контакт возбудителя с растением-хозяином, что приближает условия эксперимента к естественным и дает возможность возбудителю проявлять свои патогенные свойства, т.е. вызывать симптомы болезни.

Раствор хлорида натрия 1,3%-ной концентрации готовят на дистиллированной воде, используя химреактив NaCI (хлорид натрия) квалификации ЧДА.

Отбирают хорошо выполненные без видимых признаков поражения болезнями, вредителями и без механических повреждений семена мягкой яровой пшеницы. Для устранения поверхностной сапрофитной и патогенной микрофлоры семена стерилизуют этанолом в течение 1 минуты, после чего трижды ополаскивают стерильной дистиллированной водой. Подготовленные семена проращивают в термостате в чашках Петри на фильтровальной бумаге, смоченной водой. На третьи сутки культивирования, проросшие семена раскладывают на лентах фильтровальной бумаги и инфицируют конидиальной суспензией смеси среднепатогенных изолятов В. sorokiniana, приготовленной на 0,1%-ном водном агаре. Инфекционная нагрузка - титр конидий возбудителя в одной капле суспензии, составляет 5000 конидий на одну зерновку пшеницы, ее определяют в камере Тома-Горяева. Далее инфицированные растения выращивают в рулонной культуре сначала в течение 1,0-1,5 суток на водопроводной воде до появления ростков длиной 15-20 мм над поверхностью рулона, а затем на 1,3% - ном растворе хлорида натрия в условиях постоянной температуры t=22°С, освещенности Е=20000 лк и влажности 60%, до фазы 1-го листа в течение 10 суток. Контрольные растения выращивают в рулонной культуре в тех же условиях на водопроводной воде до фазы 1-го листа в течение 10 суток.

Затем из контрольных и опытных растений готовят образцы для измерений удельной электропроводности. Первые листья 10-суточных контрольных и опытных образцов проростков промывают водопроводной водой и обсушивают фильтровальной бумагой. В каждом варианте готовят средний образец. Для этого из средней части листьев лезвием нарезают растительный материал на кусочки длиной 1,5 мм. Такой способ подготовки образцов позволяет получить однородный экспериментальный материал и уменьшить вариацию измеряемых параметров (таблица 1). Нарезанный растительный материал помещают в капроновый мешочек и промывают под струей водопроводной воды, затем ополаскивают дистиллированной водой. Нарезанную ткань осторожно промокают фильтровальной бумагой и готовят навески по 200 мг, которые помещают в стеклянный стаканчик с 5 мл дистиллированной воды в условия освещения Е=20000 лк при t=22°С. Экспериментально установлено, что соотношение дистиллированной воды, которая добавляется для получения вытяжек, и массы листовой ткани должно составлять не менее 1:40 (таблица 2). При меньших соотношениях получаемые вытяжки представляют собой сильно разбавленные растворы электролитов, особенно в контрольных вариантах, вследствие чего значительно возрастает вариабельность показателей. Ввиду ограниченного количества экспериментального материала, особенно при испытании новых сортов или селекционных образцов более высокая массовая доля листовой ткани не всегда достижима. Указанное массовое соотношение, как было нами установлено, является вполне достаточным для выявления межсортовых различий по показателю удельной электропроводности. Время световой экспозиции, как установлено нами экспериментально, должно составлять не менее 1,5 часов (таблица 3). За это время происходит выход электролитов из свободного пространства и цитоплазмы клеток растительной ткани в дистиллированную воду. При меньшем периоде экспозиции происходит выход электролитов только из свободного пространства клетки апопласта.

Спустя не менее, чем 1,5 часа настой фильтруют через капроновую ткань, отфильтрованные вытяжки помещают в измерительную ячейку кондуктометра и измеряют удельную электропроводность контрольных и опытных вариантов на кондуктометре лабораторном.

Об устойчивости сорта судят по относительному изменению удельной электропроводности (К) водных вытяжек листовой ткани проростков после действия стрессоров:

где G_к - удельная электропроводность водных вытяжек листьев контрольных образцов;

G_о - удельная электропроводность водных вытяжек листьев опытных образцов.

Полученные результаты обрабатывают статистически с использованием стандартных статистических программ.

Пример реализации способа

Способ диагностики устойчивости сортов мягкой яровой пшеницы к совместному действию возбудителя обыкновенной корневой гнили злаков В. sorokiniana и хлоридного засоления по удельной электропроводности водных вытяжек из листовой ткани проростков продемонстрируем на примере сортов мягкой яровой пшеницы сибирской селекции: Новосибирская 44, Новосибирская 18, Сибирская 21, Омская 18.

Для получения конидиальной суспензии изоляты возбудителя обыкновенной корневой гнили злаков В. sorokiniana выращивают на твердой питательной среде Чапека в чашках Петри в термостате при температуре t=22°С в течение 14 суток. Затем в стерильных условиях готовят разведение конидий на 0,1%-ном водном агаре с титром 5000 конидий в 1 капле для инфицирования семян мягкой яровой пшеницы. Титр конидий определяют с помощью камеры Тома-Горяева.

Предварительно отобранные хорошо выполненные без видимых признаков поражения болезнями, вредителями и без механических повреждений семена мягкой яровой пшеницы для устранения поверхностной сапрофитной и патогенной микрофлоры стерилизуют этанолом в течение 1 минуты, после чего трижды ополаскивают стерильной дистиллированной водой. Подготовленные семена раскладывают в чашки Петри на фильтровальную бумагу, смоченную водой, и помещают в термостат для проращивания при температуре t=23°С в течение 3 суток.

Часть проросших семян раскладывают на лентах фильтровальной бумаги и инфицируют конидиальной суспензией смеси среднепатогенных изолятов В. sorokiniana, титр конидий возбудителя в одной капле суспензии составляет 5000 конидий на одну зерновку пшеницы, ленты с разложенными семенами скручивают в рулоны. Рулоны опытного варианта с инфицированными семенами помещают в отдельные кюветы с водопроводной водой на 1,0-1,5 суток до появления ростков длиной 15-20 мм над поверхностью рулона, а затем переносят в кюветы с 1,3%-ным раствором хлорида натрия. Рулоны с другой частью пророщенных семян для контрольного варианта с неинфицированными семенами помещают в кюветы с водопроводной водой. Развитие растений происходит в шкафу с регулируемым климатом «БИОТРОН-7» [19] в условиях постоянной температуры t=22°С, освещенности Е=20000 лк и влажности 60%. до фазы первого листа в течение 10 суток.

Затем из контрольных и опытных растений готовят образцы для измерений удельной электропроводности. Первые листья 10-суточных контрольных и опытных образцов проростков промывают водопроводной водой и обсушивают фильтровальной бумагой. В каждом варианте готовят средний образец. Для этого из средней части листьев лезвием нарезают растительный материал на кусочки длиной 1,5 мм. Нарезанный растительный материал помещают в капроновый мешочек и промывают под струей водопроводной воды, затем ополаскивают дистиллированной водой. Нарезанную ткань осторожно промокают фильтровальной бумагой и готовят навески по 200 мг, которые помещают в стеклянный стаканчик с 5 мл дистиллированной воды в условия освещения Е=20000 лк и t=22°С не менее чем на 1,5 часа. После фильтрования водные вытяжки помещают в измерительную ячейку и измеряют удельную электропроводность на кондуктометре лабораторном edge ЕС, HANNA Instruments, Германия. Диагностику устойчивости сортов к совместному действию В. sorokiniana и хлоридного засолению проводят по формуле (1). Чем меньше вычисленное отношение, тем устойчивее сорт среди группы оцениваемых сортов мягкой яровой пшеницы.

Результаты диагностики устойчивости сортов мягкой яровой пшеницы к совместному действию возбудителя обыкновенной корневой гнили злаков В. sorokiniana и хлоридного засоления предлагаемым способом и по ростовым параметрам и биомассе представлены в таблице 4. Как следует из приведенных данных, у сорта пшеницы Новосибирская 18 подавление ростовых процессов и снижение накопления биомассы выражено значительнее, чем у сортов Омская 18, Сибирская 21 и Новосибирская 44. Это означает, что сорт Новосибирская 18 является менее устойчивым к совместному действию возбудителя обыкновенной корневой гнили злаков и хлоридного засоления, чем сорта Омская 18, Сибирская 21 и Новосибирская 44. При этом выборочные средние относительных изменений показателей длины и биомассы ростков и корней у данных сортов различаются в 1,2…2,3 раза, тогда как выборочные средние для относительных изменений показателя удельной электропроводности водных вытяжек листовой ткани различаются в 2,6…7,3 раза. Таким образом, предлагаемый способ обладает большей дифференцирующей способностью и устанавливает наибольшие межсортовые различия при ранней диагностике устойчивости сортов мягкой яровой пшеницы к совместному действию возбудителя обыкновенной корневой гнили злаков В. sorokiniana и хлоридного засоления. Представленные данные убедительно показывают, что результаты диагностики устойчивости к совместному действию возбудителя обыкновенной корневой гнили злаков и хлоридного засоления исследованных сортов пшеницы по ростовым процессам и по удельной электропроводности водных вытяжек листовой ткани совпали. Коэффициент корреляции рангов Спирмена между показателями устойчивости по ростовым процессам и по удельной электропроводности водных вытяжек листовой ткани проростков составляет r_s=0,88 на уровне значимости по критерию Стьюдента р≤0,01.

Использованные источники информации

1. Гольтяпин В.Я., Мишуров Н.П., Федоренко В.Ф., Голубев И.Г., Балабанов В.И., Петухов Д.А. Цифровые технологии для обследования состояния земель сельскохозяйственного назначения беспилотными летательными аппаратами: аналитический обзор. М.: ФГБУ «Росинформагротех», 2020. 88 с.

2. Rios J.A., Aucique-Pérez С.Е., Debona D., Cruz Neto L.B.M., Rios V.S., Rodrigues F.A. Changes in leaf gas exchange, chlorophyll a fluorescence and antioxidant metabolism within wheat leaves infected by Bipolaris sorokiniana. // Annals of Applied Biology. 2017. Vol.170, Iss. 2. P. 189-203. DOI: 10.1111 /aab.1232816.

3. Atkinson N.J, Lilley C.J, Urwin P.E. Identification of genes involved in the response of Arabidopsis to simultaneous biotic and abiotic stresses // Plant Physiology. 2013. Vol. 162. P. 2028-2041. DOI: https://doi.org/10.1104/pp.113.222372

4. Kissoudis C., Chowdhury R., Van Heusden S., Van de Wiel C., Finkers R., Visser R.G., Bai Y., Van der Linden G. Combined biotic and abiotic stress resistance in tomato // Euphytica. 2015. Vol.202. N2. P. 317-332. DOI: 10.1007/s10681-015-1363-x.

5. Гончарова Э.А., Еремин Г.В., Гасанова T.A. Экспресс-методы оценки стрессоустойчивости сельскохозяйственных культур и стратегия их диагностики для селекции // Доклады Российской академии сельскохозяйственных наук. 2015. №5. С. 21-24.

6. А.с. СССР №1488976. Способ определения относительной устойчивости зерновых культур к токсинам Bipolaris sorokiniana (Sacc.) Shoemaker. / Березина В.Ю., Гурова Т.А., Павлов Е.И., Рябцев А.Ф., Бухтияров И.Д. - Заявл. 22.06.85, зарег. 22.02.89.

7. Патент РФ №216624. Способ определения относительной устойчивости сортов ячменя и пшеницы к обыкновенной корневой гнили злаков. / Гурова Т.А., Березина В.Ю. - Заявл. 20.07.1999, опубл. 10.05.2001. Бюл. №13.

8. Патент РФ №2188538. Способ определения относительной устойчивости сортов пшеницы к обыкновенной корневой гнили злаков. / Гурова Т.А., Березина В.Ю. - Заявл. 27.05.1999, опубл. 10.09.2002.Бюл. №25.

9. А.с.599766 СССР. Способ определения солеустойчивости растений. / Алешин Е.П., Третьяков Г.И., Федулов Ю.П., Зима П.И., Кошелев В.И. - Заявл. 06.10.75. Опубл. 30.03.78. Бюл. №12.

10. Патент РФ №2017408. Способ оценки солеустойчивости растений - Заявл. 26.06.91. Опубл. 15.08.94.

11. Гешеле Э.Э. Методическое руководство по фитопатологической оценке зерновых культур. Одесса, 1971. 180 с.

12. Бенкен А.А., Хрустовская В.Н. Лабораторная оценка болезнеустойчивости растений и паразитических свойств возбудителей обыкновенной корневой гнили злаков / Труды ВНИИЗР. Л., 1977. Вып. 56. С. 9-13.

13. Рогинская В.А. Влияние условий культивирования на токсинообразование у возбудителя корневой гнили пшеницы гриба Helmintosporium sativum Pam, King et Bakke // Микробные ассоциации и их функционирование в почвах Западной Сибири. Новосибирск, изд-во «Наука», 1979. С. 243-250.

14. Удовенко Г.В., Гончарова Э.А. Эффективные экспресс-методы оценки сортовой и индивидуальной устойчивости растений к экстремальным условиям // Докл. ВАСХНИЛ. 1982, №7. С. 13-19.

15. Диагностика устойчивости растений к стрессовым воздействиям: Методическое руководство / Под ред. Г.В. Удовенко. Ленинград, 1988. С. 85-97.

16. Патент РФ №2446671. Способ определения относительной устойчивости сортов мягкой яровой пшеницы к хлоридному засолению / Гурова Т.А., Березина В.Ю., Куцерубова Н.С. Опубл. 10.04.2012.

17. Патент РФ №2625027. Способ определения относительной устойчивости сортов мягкой яровой пшеницы к возбудителю обыкновенной корневой гнили злаков / Гурова Т.А., Альт В.В., Луговская О.С. Опубл. 11.07.2017.

18. Березина В.Ю., Гурова Т.А., Беребердин Н.А., Лангольф Э.И. Оценка биологической активности возбудителя обыкновенной корневой гнили злаков: методические рекомендации. СО РАСХН. Новосибирск, 1994. 24 с.

19. Патент РФ №2603910. Шкаф с регулируемым климатом / Минеев В.В., Золотарев В.А., Альт В.В., Фурзиков В.М., Рожанская С.В. - Заявл. 19.06.2015. Опубл. 09.11.2016.

Изобретение относится к области биотехнологии. Заявляемый способ заключается в том, что, используя в качестве растительного объекта листья 10-суточных проростков, выращенных из искусственно инфицированных семян возбудителем обыкновенной корневой гнили злаков на растворе хлорида натрия и проростков, не подвергнутых действию стрессоров, готовят водные вытяжки высечек листьев и по изменению показателя удельной электропроводности дифференцируют сорта по устойчивости к совместному действию возбудителя обыкновенной корневой гнили злаков и хлоридного засоления. Способ позволяет проводить раннюю инструментальную с высокой дифференцирующей способностью диагностику стрессоустойчивости сортов, принадлежащих к близкородственным группам на стадии проростков, что значительно ускорит отбор перспективных форм в селекционном процессе и выбор сортов в агротехнологиях. 5 табл.

Способ ранней диагностики устойчивости сортов мягкой яровой пшеницы к совместному действию возбудителя обыкновенной корневой гнили злаков Bipolaris sorokiniana Shoem. и хлоридного засоления, предусматривающий инфицирование опытных проросших трехсуточных семян мягкой яровой пшеницы конидиальной суспензией возбудителя обыкновенной корневой гнили злаков Bipolaris sorokiniana Shoem. с титром 5000 конидий на одну зерновку, выращивание проростков в рулонной культуре из инфицированных семян на водопроводной воде до момента появления ростков над поверхностью рулона на 15-20 мм в течение 1,0-1,5 суток, с последующим выращиванием на 1,3%-ном растворе хлорида натрия до фазы первого листа в течение 10 суток при температуре t=22°С, освещенности Е=20000 лк и влажности 60%, одновременно в аналогичных условиях на водопроводной воде выращивают контрольные образцы проростков без действия стрессоров до фазы первого листа в течение 10 суток, готовят нарезки из средней части первых листьев проростков опытных и контрольных образцов, помещают их в дистиллированную воду в соотношении 1:40 не менее чем на 1,5 часа, в условия, аналогичные выращиванию проростков, фильтруют вытяжки, измеряют кондуктометром удельную электропроводность водных вытяжек листьев проростков пшеницы и вычисляют отношения по формуле где G_k - электропроводность водных вытяжек листьев контрольных образцов; G₀ - электропроводность водных вытяжек листьев опытных образцов, диагностируют устойчивость сорта по отношению, вычисленному по формуле (1), при этом, чем меньше вычисленное отношение, тем устойчивее сорт среди группы оцениваемых сортов мягкой яровой пшеницы к совместному действию возбудителя обыкновенной корневой гнили злаков Bipolaris sorokiniana Shoem. и хлоридного засоления.