Настоящее изобретение относится к применению L-аскорбиновой кислоты, или аскорбата, или смеси, содержащей их, для профилактики или уменьшения кальцификации сосудов, вызванной статинами.
Статины также известны как ингибиторы гидроксиметилглутарил-кофермент А-редуктазы (ГМГ-КоА-редуктазы) и представляют собой класс липид-понижающих соединений.
Липопротеины низкой плотности (ЛПНП, англ. LDL), переносчики холестерина, играют важную роль в развитии атеросклероза и ишемической болезни сердца посредством механизмов, описанных липидной гипотезой. Статины являются эффективными для снижения уровня холестерина ЛПНП и поэтому широко используются для первичной профилактики у людей, имеющих высокий риск сердечно-сосудистых заболеваний, а также для вторичной профилактики у тех, у кого развились сердечно-сосудистые заболевания.
При лечении статинами у пациентов проявляются побочные эффекты, включающие мышечную боль, повышенный риск развития сахарного диабета и аномальные уровни ферментов печени в крови.
У некоторых пациентов, например, ловастатин приводит к миопатии и бессимптомному, но выраженному и стойкому повышению уровня печеночных трансаминаз. Повышение уровня трансаминаз, вызванное ловастатином и другими ингибиторами ГМГ-КоА-редуктазы, является прямым следствием подавления синтеза мевалоната. Для противодействия повышенным уровням трансаминаз, наблюдаемым у небольшого числа пациентов, в патенте США US 4,929,437 описывается дополняющее введение эффективного количества ингибитора ГМГ-КоА-редуктазы и эффективного количества кофермента Q10 для противодействия повреждению печени, связанному с ингибитором ГМГ-КоА-редуктазы.
Кроме того, известно, что статины увеличивают кальцификацию сосудов, что является признанным фактором риска сердечно-сосудистых заболеваний (Ikegami Y, Inoue I, Inoue K, Shinoda Y3, lida S1, Goto S4, Nakano T5, Shimada A1, Noda M1. The annual rate of coronary artery calcification with combination therapy with a PCSK9 inhibitor and a statin is lower than that with statin monotherapy. NPJ Aging Mech Dis 2018; 4:7).
В недавнем анализе из 8 проспективных рандомизированных исследований с использованием серийного внутрисосудистого ультразвукового исследования коронарных артерий Puri с соавт.(Puri R, Nicholls SJ, Shao M, Kataoka Y, Uno K, Kapadia SR, Tuzcu EM, Nissen SE. Impact of statins on serial coronary calcification during atheroma progression and regression. J Am Coll Cardiol 2015; 65:1273-1282) пришли к выводу, что независимо от их эффекта снижения образования бляшек, статины способствуют кальцификации атеромы коронарных сосудов.
Тем не менее, существует противоречивая ситуация между кальцификацией артерий, являющейся хорошо зарекомендовавшим себя маркером и индексом прогноза развития сердечно-сосудистых заболеваний, стимулирующим действием статинов на кальцификацию артерий и очевидным благоприятным влиянием добавок статинов на клинические события у пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями. Некоторые исследователи предлагают правдоподобное объяснение этих противоречивых данных, заключающееся в «особом» механизме кальцификации артерий при лечении статинами, который приводит к большей стабильности участка поражения, определяемой как меньшее количество фиброатером с тонкой покрышкой по данным ВГ и разрывов бляшек и большее количество кальцифицированных фиброатером с толстой покрышкой. (Kadohira Т1, Mintz GS, Souza CF, Witzenbichler B, Metzger DC, Rinaldi MJ, Mazzaferri EL Jr, Duffy PL, Weisz G, Stuckey TD, Brodie BR, Crowley A, Kirtane AJ, Stone GW, Maehara A. Impact of chronic statin therapy on clinical presentation and underlying lesion morphology in patients undergoing percutaneous intervention: an ADAPT-DES IVUS substudy. Coron Artery Dis 2017; 28:218-224).
Кальцификация сосудов является важным патофизиологическим процессом, ассоциированным с атеросклерозом коронарных сосудов, и является прогностическим маркером сердечно-сосудистой заболеваемости и смертности.
Гладкомышечные клетки сосудов (ГМК, англ. SMC) обладают необычайной способностью подвергаться фенотипической дифференцировке остеобластов. Кальцификация интимального и/или медиального слоя сосудистых клеток приводит к дифференцировке остеобластов из гладкомышечных клеток, мезенхимальных клеток или сосудистых перицитов, характеризующихся, среди прочего, повышенной активностью щелочной фосфатазы, продукцией остеокальцина и секрецией костного матрикса. Биохимические механизмы, связанные с превращением ГМК в остеобластные клетки, были разработаны, однако решающие механизмы того, что запускает и/или регулирует этот процесс, остаются в значительной степени неясными.
Недавние исследования показали, что кальцификация бляшек является динамическим процессом и зависит от степени сосудистого воспаления. Некоторые воспалительные факторы, образующиеся на разных фазах атеросклероза, могут индуцировать экспрессию и активацию остеобластных клеток, расположенных внутри артериальной стенки, что, в свою очередь, способствует отложению кальция.
Было продемонстрировано, что присутствие регуляторных белков наряду с дедифференцированными остеобластоподобными клетками происходит из гладкомышечных клеток сосудов (ГМКС, англ. VSMC), которые были обозначены кальцифицирующими сосудистыми клетками. Эти клетки участвуют в синтезе/реабсорбции кости в атеросклеротических бляшках, особенно вокруг очагов кальцификации. Таким образом, предположили, что функция костных клеток в сосудистой стенке в некоторых аспектах аналогична таковой в костях. Однако исследования in vitro предоставили доказательство того, что регуляция костного синтеза в сосудистой стенке и в костной системе различна. При стимуляции оксидативным стрессом или окисленными ЛПНП остеобласты костной системы и CVC (популяции сосудистых клеток с остеобластными характеристиками) демонстрировали противоположную реакцию, уменьшение и увеличение образования кости соответственно.
Патент США US 2004/0023919 А1 раскрывает композицию, улучшающую липидный состав крови. Эта фармацевтическая композиция объединяет аторвастатин и производное аскорбиновой кислоты, которым может быть аскорбат натрия, аскорбат кальция или аскорбиновая кислота. Эффекты совместного введения аторвастатина и аскорбиновой кислоты показаны в таблице 8. Уровни содержания свободных жирных кислот (СЖК) в крови снижались при введении аторвастатина и аскорбиновой кислоты, смотрите последнюю запись. Композиции, содержащие аторвастатин и аскорбиновую кислоту, показаны в таблицах с 1 по 4. В абзаце [0008] указано, что совместное введение аторвастатина с определенным витамином (аскорбиновой кислотой) снижает уровни общего холестерина в крови.
Патент США US 2004/0014712 А1 раскрывает комбинацию симвастатина и аскорбиновой кислоты. Уровни содержания в крови липидных пероксидов, уровни содержания СЖК в крови и уровни содержания креатинфосфокиназы (КФК) снижались при комбинации симвастатина и аскорбиновой кислоты. Соответствующие фармацевтические композиции перечислены в таблицах с 1 по 4. В абзаце [0006] указано, что с помощью этой комбинации улучшаются уровни содержания липидов в крови.
Патент США US 2004/0009986 А1 раскрывает комбинацию правастатина и производных аскорбиновой кислоты. Утверждается, что уровни содержания триглицеридов в крови могут быть снижены с помощью комбинации правастатина с аскорбиновой кислотой (и дополнительно токоферола или токоферола и бутирата рибофлавина). В абзаце [0007] указано, что эта лекарственная композиция снижает уровни содержания триглицеридов в крови.
Международная заявка WO 03/072013 А2 раскрывает комбинацию статина с аскорбиновой кислотой для лечения псориаза.
Y. Arad et al., Journal of the American College of Cardiology, vol. 46, no. 1, 2005, 166-172, в заключении на первой странице сообщают, что лечение альфа-токоферолом, витамином С и низкими дозами аторвастатина не влияет на развитие кальцификации коронарных сосудов.
A. Trion et al., Molecular and Cellular Biochemistry, vol. 308, no. 1-2, 2007, 25-33, в реферате описывают влияние антагонистов кальция и статинов на кальцификацию ГМКС in vitro. Среда для выращивания содержала аскорбиновую кислоту, однако, в низких концентрациях, составляющих 50 мкг/мл. Утверждается, что комбинированное лечение стимулировало кальцификацию в такой же степени, как и при применении только одного аторвастатина.
N. Skafi et al., Journal of Cellular Physiology, vol. 234, no. 4, 2018, 4825-4839, на странице 4827 в разделе 2.2 описывают, что для стимуляции кальцификации клетки культивировали с 50 мкг/мл аскорбиновой кислоты и GP.
Целью, лежащей в основе настоящего изобретения, является лечение или профилактика кальцификации сосудов, вызванной у пациентов в результате приема статинов.
Эта цель достигается в соответствии с настоящим изобретением с помощью одного или нескольких из следующих вариантов осуществления.
Первая серия вариантов осуществления:
1. L-аскорбиновая кислота или аскорбат для применения при одновременном лечении пациентов, получающих лечение статинами.
2. L-аскорбиновая кислота или аскорбат для применения при лечении, уменьшении или профилактике кальцификации сосудов у пациентов.
3. L-аскорбиновая кислота или аскорбат согласно варианту осуществления 2 для применения при лечении или профилактике кальцификации сосудов, вызванной у пациентов в результате приема статинов.
4. Применение L-аскорбиновой кислоты или аскорбата для уменьшения кальцификации сосудов, вызванной статинами.
5. Фармацевтическая композиция, содержащая по меньшей мере один статин и L-аскорбиновую кислоту или аскорбат в дозированной лекарственной форме, которая позволяет одновременное введение пациенту по меньшей мере одного статина и L-аскорбиновой кислоты или аскорбата.
6. Фармацевтическая композиция согласно варианту осуществления 5, в которой по меньшей мере один статин и L-аскорбиновая кислота или аскорбат присутствуют в виде физической смеси или в виде отдельных фармацевтических композиций, предназначенных для одновременного введения пациенту.
7. Фармацевтическая композиция согласно варианту осуществления 6 для профилактики или лечения сердечно-сосудистого заболевания.
8. Фармацевтическая композиция согласно одному из вариантов осуществления 5-7, где сердечно-сосудистое заболевание представляет собой коронарную болезнь сердца, цереброваскулярное заболевание или заболевание периферических сосудов.
9. Фармацевтическая композиция согласно одному из вариантов осуществления 5-8, где статин выбирают из группы, состоящей из аторвастатина, церивастатина, флувастатина, ловастатина, мевастатина, питавастатина, правастатина, розувастатина, симвастатина или их смесей, или любого другого типа или формы статина, или из комбинации статина с ниацином.
10. Фармацевтическая композиция согласно одному из вариантов осуществления 6-9, где аскорбат выбирают из водорастворимых или жирорастворимых аскорбатов или их смесей, предпочтительно, из аскорбата кальция, аскорбата магния, аскорбата натрия, аскорбилфосфата, аскорбилпальмитата или их смесей.
11. Фармацевтическая композиция согласно одному из вариантов осуществления 6-10, дополнительно содержащая кофермент Q10 в дозированной лекарственной форме, которая позволяет одновременное введение пациенту по меньшей мере одного статина, L-аскорбиновой кислоты или аскорбата и кофермента Q-m.
12. Фармацевтическая композиция согласно одному из вариантов осуществления 5-11, содержащая суточную дозу L-аскорбиновой кислоты или аскорбата от 10 до 100 г, предпочтительно, от 100 до 10 г, и от самой низкой до самой высокой коммерчески доступной или клинически применимой дозы по меньшей мере одного статина, предпочтительно, от 5 до 100 мг.
13. Фармацевтическая композиция согласно одному из вариантов осуществления 5-12, дополнительно содержащая один или несколько дополнительных питательных микроэлементов помимо L-аскорбиновой кислоты или аскорбата, предпочтительно выбранных из микроэлементов, витаминов и их смесей.
14. Фармацевтическая композиция согласно варианту осуществления 13, где один или несколько дополнительных питательных микроэлементов содержат ниацин, предпочтительно, в смеси со статином.
Вторая серия вариантов осуществления:
1. Способ лечения или профилактики кальцификации сосудов у пациента, который предпочтительно получает лечение статинами, с помощью введения пациенту L-аскорбиновой кислоты или аскорбата.
2. Способ лечения пациента L-аскорбиновой кислотой или аскорбатом, где этот пациент одновременно получает лечение по меньшей мере одним статином.
3. Способ одновременного введения пациенту по меньшей мере одного статина и L-аскорбиновой кислоты или аскорбата для лечения, уменьшения или профилактики сердечно-сосудистого заболеваний.
4. Способ применения L-аскорбиновой кислоты или аскорбата для уменьшения кальцификации сосудов, вызванной статинами.
5. Фармацевтическая композиция, содержащая по меньшей мере один статин и L-аскорбиновую кислоту или аскорбат в лекарственной форме, которая позволяет одновременное введение пациенту по меньшей мере одного статина и L-аскорбиновой кислоты или аскорбата.
6. Фармацевтическая композиция согласно варианту осуществления 5, в которой по меньшей мере один статин и L-аскорбиновая кислота или аскорбат присутствуют в виде физической смеси или в виде отдельных фармацевтических композиций, предназначенных для одновременного введения пациенту.
7. Фармацевтическая композиция согласно варианту осуществления 5 для профилактики или лечения сердечно-сосудистого заболевания.
8. Фармацевтическая композиция согласно одному из вариантов осуществления 5-7, где сердечно-сосудистое заболевание представляет собой коронарную болезнь сердца, цереброваскулярное заболевание или заболевание периферических сосудов.
9. Фармацевтическая композиция согласно одному из вариантов осуществления 5-8, где статин выбирают из группы, состоящей из аторвастатина, церивастатина, флувастатина, ловастатина, мевастатина, питавастатина, правастатина, розувастатина, симвастатина или их смесей, или любого другого типа или формы статина, или из комбинации статина с ниацином.
10. Фармацевтическая композиция согласно одному из вариантов осуществления 5-9, где аскорбат выбирают из водорастворимых или жирорастворимых аскорбатов или их смесей, предпочтительно, из аскорбата кальция, аскорбата магния, аскорбата натрия, аскорбилфосфата, аскорбилпальмитата или их смесей.
11. Фармацевтическая композиция согласно одному из вариантов осуществления 5-10, дополнительно содержащая кофермент Q10 в дозированной лекарственной форме, которая позволяет одновременное введение пациенту по меньшей мере одного статина, L-аскорбиновой кислоты или аскорбата и кофермента Q10.
12. Фармацевтическая композиция согласно одному из вариантов осуществления 5-11, содержащая суточную дозу L-аскорбиновой кислоты или аскорбата от 10 до 100 г, предпочтительно, от 100 до 10 г, и от самой низкой до самой высокой коммерчески доступной или клинически применимой дозы по меньшей мере одного статина, предпочтительно, от 5 до 100 мг.
13. Фармацевтическая композиция согласно одному из вариантов осуществления 5-12, дополнительно содержащая один или несколько дополнительных питательных микроэлементов помимо L-аскорбиновой кислоты или аскорбата.
14. Фармацевтическая композиция согласно варианту осуществления 13, где один или несколько дополнительных питательных микроэлементов выбираются из микроэлементов, витаминов и их смесей и предпочтительно содержат ниацин, который может присутствовать в смеси со статином.
15. Способ противодействия связанной со статинами повышенной кальцификации сосудов у субъекта, нуждающегося в таком лечении, который включает одновременное введение эффективного количества по меньшей мере одного статина и эффективного количества L-аскорбиновой кислоты или аскорбата.
16. Способ лечения или профилактики кальцификации сосудов у пациента, который включает введение пациенту эффективного количества L-аскорбиновой кислоты или аскорбата.
Третья серия вариантов осуществления:
1. Смесь, предпочтительно фармацевтической, композиции 1, содержащая или состоящая из витамина С, витамина Е, витамина В1, витамина В2, витамина В3, витамина В5, витамина В6, витамина В12, фолиевой кислоты, биотина, L-карнитина и бетаина, предпочтительно, дополнительно содержащая или состоящая из статина, или, предпочтительно, в дозированной лекарственной форме, которая позволяет вводить пациенту одну дозу статина.
2. Смесь (фармацевтической) композиции 1, содержащая по меньшей мере один статин, предпочтительно, в дозированной лекарственной форме с питательными веществами в смеси, которая позволяет введение в виде суточной дозы пациенту, страдающему сердечнососудистым заболеванием.
3. (Фармацевтическая) композиция, в которой по меньшей мере один статин и смесь 1 или L-аскорбиновая кислота или аскорбат присутствуют в виде физической смеси или в виде отдельных (фармацевтических) композиций, предназначенных для одновременного введения пациенту.
4. Смесь (фармацевтической) композиции 1 для профилактики или лечения сердечно-сосудистого заболевания.
5. Смесь (фармацевтической) композиции 1, где сердечно-сосудистое заболевание представляет собой коронарную болезнь сердца, цереброваскулярное заболевание или заболевание периферических сосудов.
6. Смесь (фармацевтической) композиции 1, где статин выбирают из группы, состоящей из аторвастатина, церивастатина, флувастатина, ловастатина, мевастатина, питавастатина, правастатина, розувастатина, симвастатина или их смесей, или любого другого типа или формы статина или из комбинации статина с ниацином.
7. Смесь (фармацевтической) композиции 1, где витамин С находится в форме аскорбата, который предпочтительно выбирают из водорастворимых или жирорастворимых аскорбатов или их смесей, предпочтительно, из аскорбата кальция, аскорбата магния, аскорбата натрия, аскорбилфосфата, аскорбилпальмитата или их смеси.
8. Смесь (фармацевтической) композиции 1, дополнительно содержащая кофермент Q10 в дозированной лекарственной форме, которая позволяет одновременное введение пациенту по меньшей мере одного статина, L-аскорбиновой кислоты или аскорбата и кофермента Q10.
9. Смесь (фармацевтической) композиции 1, содержащая суточную дозу L-аскорбиновой кислоты или аскорбата от 10 до 100 г, предпочтительно, от 100 до 10 г, и от самой низкой до самой высокой коммерчески доступной или клинически применимой дозы по меньшей мере одного статина, предпочтительно, от 5 до 100 мг.
10. Смесь (фармацевтической) композиции 1, дополнительно содержащая один или несколько дополнительных питательных микроэлементов помимо L-аскорбиновой кислоты или аскорбата, предпочтительно, выбранных из микроэлементов, витаминов и их смесей.
11. (Фармацевтическая) композиция, в которой один или несколько дополнительных питательных микроэлементов содержат ниацин, предпочтительно, в смеси со статином.
12. Смесь (фармацевтической) композиции 1 предпочтительно содержит следующие питательные вещества в виде разовой дозы или суточной дозы: витамин С (аскорбат кальция, аскорбат магния): от 300 до 1000,2 мг, витамин Е: от 27,5 до 82,5 мг, витамин В1: от 3,3 до 9,9 мг, витамин В2: от 3,3 до 9,9 мг, витамин В3: от 115 до 350,1 мг, витамин В5: от 16,7 до 50,1 мг, витамин В6: от 3,3 до 9,9 мг, витамин В12: от 10 до 30 мкг, фолиевая кислота: от 133,3 до 399,9 мкг, биотин: от 33,3 до 9,9 мкг, L-карнитин: от 33,3 до 99,9 мг, бетаин: от 23,3 до 69,9 мг.
Смесь (фармацевтической) композиции 1 можно применять вместо L-аскорбиновой кислоты или аскорбата.
В соответствии с настоящим изобретением было обнаружено, что L-аскорбиновая кислота или аскорбат, или питательная или фармацевтическая смесь, содержащая витамин С, является эффективной при лечении или профилактике кальцификации сосудов в организме человека, особенно при совместном введении со статином.
Витамин С является важным питательным веществом для некоторых животных, включая человека. Клинические испытания показали значительное положительное влияние витамина С на функцию эндотелия при приеме в дозах более 500 мг в сутки. Обсуждается его возможное влияние на лечение или профилактику сердечно-сосудистых заболеваний.
Витамин С является очень мощным антиоксидантом и необходим для образования коллагена и оптимального внеклеточного матрикса (ЕСМ). Он может предотвратить отложение липопротеинов и развитие атеросклероза путем защиты целостности и прочности сосудистой стенки.
Наши предыдущие исследования показали, что аскорбат может ингибировать чрезмерную пролиферацию и миграцию ГМК in vitro (Ivanov V, Ivanova S, Roomi MW, Kalinovsky T, Niedzwiecki A, Rath M. Extracellular matrix-mediated control of aortic smooth muscle cell growth and migration by a combination of ascorbic acid, lysine, proline, and catechins. J Cardiovasc Pharmacol 2007; 50:541-547). Кроме того, пищевой витамин С является жизненно важным для профилактики отложения липопротеинов в сосудистой стенке и атеросклероза у генетически модифицированных мышей, имитирующих человеческий метаболизм в отношении их неспособности производить витамин С и экспрессирующих человеческий липопротеин (а) (Cha J, Niedzwiecki A, Rath М. Hypoascorbemia induces atherosclerosis and vascular deposition of lipoprotein(a) in transgenic mice. Am J Cardiovasc Dis 2015; 5:53-62). В клиническом исследовании ежедневный прием питательных микроэлементов, включая примерно 4 грамма витамина С, смог остановить прогрессирование коронарной кальцификации у пациентов с диагнозом ранней ишемической болезни сердца (Rath М, Niedzwiecki А. (1996) Nutritional supplement program halts progression of early coronary atherosclerosis documented by ultrafast computed tomography. J Appl Nutr 1996; 48:67-78).
Таким образом, можно предположить, что витамин С играет решающую роль в регуляции клеточной и внеклеточной архитектуры и функции внутри сосудистой стенки. При оптимальной доступности аскорбата целостность и стабильность сосудистой стенки обеспечивались бы, прежде всего, оптимальным синтезом коллагена и других молекул внеклеточного матрикса (ЕСМ). При хроническом дефиците аскорбиновой кислоты или начинающейся цинге может возникнуть потребность в компенсаторных механизмах для придания компенсаторной устойчивости структурно нарушенной сосудистой стенке, в том числе за счет кальцификации.
Мы исследовали влияние витамина С на ГМК сосудов, дермальные фибробласты человека (DF), а также на иммортализованные фетальные остеобласты человека (FOB) и способность этих клеток способствовать кальцификации сосудов. Более того, мы оценили роль статинов в связи с этим регулирующим процессом в свете того факта, что эти препараты в настоящее время принимают миллионы пациентов в надежде, что они обуздают сосудистую кальцификацию. Таким образом мы пришли к раскрытому в данном документе изобретению.
Согласно настоящему изобретению используется витамин С, также известный как аскорбиновая кислота или L-аскорбиновая кислота. В качестве альтернативы можно использовать аскорбат, при этом аскорбат, соль аскорбиновой кислоты с основаниями или кислотами, более сильными, чем аскорбиновая кислота, предпочтительно, выбирают из водорастворимых или жирорастворимых аскорбатов или их смесей, и более предпочтительно, выбирают из группы, состоящей из аскорбата кальция, аскорбата магния, аскорбата натрия, аскорбилфосфата, аскорбилпальмитата или их смесей.
Пациентам, которые получают лечение статинами, (предпочтительно) вводят L-аскорбиновую кислоту или аскорбат или смесь композиции 1, содержащую или состоящую из витаминов С, Е, В1, В2, В3, В5, В6, В12, фолиевой кислоты, биотина, L-карнитина и бетаина.
В контексте настоящего изобретения статины также могут быть описаны как ингибиторы ГМГ-КоА-редуктазы. Таким образом, статины ингибируют фермент ГМГ-КоА-редуктазу, который необходим для выработки холестерина. Таким образом, статины относятся к классу липид-понижающих препаратов, которые снижают заболеваемость и смертность у лиц с высоким риском сердечно-сосудистых заболеваний. Все подходящие статины могут быть использованы в контексте настоящего изобретения. Предпочтительно, статин выбирают из группы, состоящей из аторвастатина, церивастатина, флувастатина, ловастатина, мевастатина, питавастатина, правастатина, розувастатина, симвастатина или их смесей, или любого другого типа или формы статина, или из комбинации статина с ниацином.
Согласно одному аспекту изобретения L-аскорбиновую кислоту или аскорбат и статин или смесь 1 можно вводить вместе с одним или несколькими дополнительными питательными микроэлементами помимо L-аскорбиновой кислоты или аскорбата. Например, для этой цели может быть предоставлена фармацевтическая композиция, содержащая статин, L-аскорбиновую кислоту или аскорбат или смесь 1 и один или несколько дополнительных питательных микроэлементов.
Предпочтительно, один или несколько дополнительных питательных микроэлементов вводят вместе со смесью 1 или L-аскорбиновой кислотой или аскорбатом и со статином. Один или несколько питательных микроэлементов предпочтительно выбирают из микроэлементов, витаминов, отличных от аскорбата/витамина С, и их смесей. Микроэлементы необходимы людям лишь в небольших количествах (следовых).
Микроэлементы предпочтительно выбирают из бора, кобальта (предпочтительно в виде компонента витамина В12), хрома, меди, йода, железа, марганца, молибдена, селена, цинка и их смесей.
Витамины, отличные от витамина С, предпочтительно выбирают из комплекса витаминов В, витамина В1 (тиамина), витамина В2 (рибофлавина), витамина В3 (ниацина), витамина В5 (пантотеновой кислоты), группы витаминов В6, включающей пиридоксин, пиридоксаль-5-фосфат и пиридоксамин, витамина В7 (биотина), витамина В9 (фолата или фолиевой кислоты), витамина В12 (кобаламина), холина, витамина А (например, ретинола или каротиноидов провитамина А), витамина D, включая эргокальциферол и холекальциферол, витамина Е (токоферолов и токотриенолов), витамина K, включая витамин K1 (филлохинон) и витамин K2 (менахинон), каротиноидов, включая альфа-каротин, бета-каротин, криптоксантина, лютеина, ликопина и зеаксантина. Питательные микроэлементы могут включать, например, фолиевую кислоту, биотин, L-карнитин и бетаин.
Аминокислоты и их производные включают бетаин и L-карнитин. Другие питательные микроэлементы предпочтительно включают витамины В6 и В12, фолиевую кислоту и бетаин. Предпочтительная комбинация питательных микроэлементов содержится в смеси 1, как указано ниже.
Когда пациент получает лечение статинами, суточная дозировка может быть от самой низкой до самой высокой коммерчески доступной или клинически применимой дозы. Эта дозировка предпочтительно находится в диапазоне от 5 до 100 мг, предпочтительно, от 10 до 80 мг, более предпочтительно, от 10 до 40 мг, наиболее предпочтительно, от 10 до 20 мг.
Количество L-аскорбиновой кислоты или аскорбата, вводимое пациенту, получающему лечение статинами, предпочтительно, составляет от 10 мг до 100 г, более предпочтительно, от 100 мг до 10 г, наиболее предпочтительно, от 200 мг до 5 г в суточной дозе.
Возможно вводить L-аскорбиновую кислоту или аскорбат (а при необходимости один или несколько дополнительных питательных микроэлементов) или смесь 1, как описано ниже, одновременно со статином, например, в таблетке, содержащей и то, и другое, L-аскорбиновую кислоту или аскорбат (а при необходимости один или несколько дополнительных питательных микроэлементов) или смесь 1, как описано ниже, и статин. Кроме того, возможно вводить L-аскорбиновую кислоту или аскорбат (а при необходимости один или несколько дополнительных питательных микроэлементов) или смесь 1, как описано ниже, и статин в отдельных фармацевтических композициях, но одновременно. Термин «одновременно» означает, что введение обоих активных ингредиентов происходит во временном интервале от 0 до 5 часов, предпочтительно, от 0 до 3 часов, более предпочтительно, от 0 до 1 часа, если исходить из одного приема в день.
Поскольку как статины, так и L-аскорбиновая кислота или аскорбат (а также другие/дополнительные питательные микроэлементы, отличные от витамина С) хорошо зарекомендовали себя для индивидуального и раздельного введения нуждающимся в этом пациентам, то известные фармацевтические или питательные композиции или смесь 1, как описано ниже, можно применять согласно настоящему изобретению, обеспечивая при этом одновременное применение обоих активных ингредиентов или смеси 1 и статина.
Например, композиция питательных микроэлементов, которая содержит аскорбат и может успешно применяться в сочетании со статинами, представляет собой смесь 1. Смесь 1 содержит витамины, L-карнитин и бетаин, а более конкретно, содержит или состоит из витаминов С, Е, В1, В2, В3, В5, В6, В12, фолиевой кислоты, биотина, L-карнитина и бетаина и может быть использована для приема в качестве ежедневной пищевой добавки. Обычно принимают три таблетки в день (по одной таблетке три раза в день во время еды с большим количеством жидкости (воды, сока, чая)).
Смесь 1 предпочтительно содержит каждое питательное вещество в диапазоне для от одной до трех таблеток следующим образом:
Витамин С (аскорбат кальция, аскорбат магния): от 300 до 1000,2 мг,
Витамин Е: от 27,5 до 82,5 мг,
Витамин В1: от 3,3 до 9,9 мг,
Витамин В2: от 3,3 до 9,9 мг,
Витамин В3: от 115 до 350,1 мг,
Витамин В5: от 16,7 до 50,1 мг,
Витамин В6: от 3,3 до 9,9 мг,
Витамин В12: от 10 до 30 мкг,
Фолиевая кислота: от 133,3 до 399,9 мкг,
Биотин: от 33,3 до 99,9 мкг,
L-карнитин: от 33,3 до 99,9 мг,
Бетаин: от 23,3 до 69,9 мг.
Смесь 1 содержит выбранные питательные микроэлементы в синергической комбинации. Эту реконструктивную формулу можно комбинировать с другими базовыми формулами, например, Vitacor Plus™.
Она дополняет спектр определенных витаминов и других питательных микроэлементов важными факторами, способствующими нормальному метаболизму гомоцистеина и холестерина. Таблетка обычно содержит следующие ингредиенты: витамин С, целлюлозный наполнитель, витамин В3, тартрат L-карнитина 5,26%, разделительный агент стеариновую кислоту, гидрохлорид бетаина 3,24%, витамин Е, витамин В5, кроскармеллозу натрия, глазирующий агент карбонат кальция, мальтодекстрин, разделительный агент диоксид кремния, глазирующий агент шеллак, витамин В1, витамин В6, биотин, краситель рибофлавин (витамин В2), экстракт кокосового масла, фолиевую кислоту, витамин В2, масло лимона, витамин В12, натуральный ароматизатор лимона.
Витамины В6 и В12, фолиевая кислота и бетаин являются важными факторами, способствующими нормальному метаболизму гомоцистеина. Следовательно, оптимальное поступление этих питательных микроэлементов необходимо для поддержания нормальных уровней гомоцистеина.
Ингредиенты в смеси фармацевтической композиции 1 поддерживают клеточный метаболизм одновременно различными путями, например:
a) с помощью бетаина, витамина В6, витамина В12 и фолиевой кислоты для поддержания нормального метаболизма гомоцистеина;
b) с помощью биотина и витаминов В в качестве вклада в поддержание нормального энергетического обмена;
c) с помощью витамина С и витамина Е в качестве вклада в защиту клеток от окислительного стресса.
Рекомендуемая суточная доза может быть такой, как указано выше, или может составлять от нее от 10 до 300%, предпочтительно, от 20 до 200%, более предпочтительно, от 50 до 150%. Используемый аскорбат предпочтительно получают из одинаковых количеств аскорбата кальция и аскорбата магния.
При необходимости один или оба ингредиента или смесь 1 и/или статин могут быть объединены с коферментом Q10 в комбинированной фармацевтической композиции или в отдельных фармацевтических композициях, как описано в патенте США US 4,929,437.
В соответствии с настоящим изобретением L-аскорбиновую кислоту или аскорбат или смесь 1 применяют для лечения или профилактики кальцификации сосудов, в частности, кальцификации сосудов, вызванной у пациентов введением статинов.
Термин «лечение» в данном контексте означает «уменьшение» или «обращение вспять».
Термины «смесь 1», «смесь фармацевтической композиции 1», « смесь (фармацевтической) композиции 1» или «фармацевтическая композиция» используются на протяжении всей этой заявки для обозначения смеси 1 или L-аскорбиновой кислоты или аскорбата.
В частности, следует предотвращать или уменьшать кальцификацию гладкомышечных клеток сосудов (ГМК), более конкретно, гладкомышечных клеток аорты человека (AoSMC). Настоящее изобретение, в частности, основано на положительном влиянии витамина С на сосудистые ГМК, дермальные фибробласты человека (DF), а также иммортализованные фетальные остеобласты человека (FOB). Процесс кальцификации сосудов требует фенотипической трансформации гладкомышечных клеток сосудов (ГМКС) в остеогенные клетки.
Одновременное введение по меньшей мере одного статина и L-аскорбиновой кислоты или аскорбата или смеси 1 пациенту полезно для лечения или профилактики сердечно-сосудистого заболевания, например, коронарной болезни сердца, цереброваскулярного заболевания или заболевания периферических сосудов.
В результате применения настоящего изобретения повышенную кальцификацию, наблюдаемую при длительном лечении статинами, можно уменьшить, обратить вспять или предотвратить. Таким образом, нет необходимости в гипотетической интерпретации того, что кальцификация, вызванная статинами, может быть полезной или что может иметь место благоприятная макрокальцификация, а не вредная микрокальцификация.
Материалы и методы
Реагенты
Смесь 1 пищевой добавки растворяли в соответствии со стандартной процедурой Фармакопеи США (USP 2040 Disintegration and Dissolution of Dietary Supplements) следующим образом: три рекомендуемые суточные дозы (девять таблеток) измельчали и суспендировали в 900 мл 0,1 N HCl. После инкубации в течение одного часа в инкубаторе с водяной баней при 37°С на орбитальном шейкере при 75 об/мин суспензию добавки фильтровали через стерильный фильтр 0,2 мкм, аликвоты по 1 мл замораживали и хранили при 20°С до использования. Полученный раствор смеси 1 содержал 19 мМ аскорбиновой кислоты согласно спецификации производителя.
Все реагенты были получены от Sigma-Aldrich (St. Louis, МО, США), если не указано иное.
Клеточные культуры
Нормальные дермальные фибробласты человека (DF) и иммортализованные фетальные остеобласты человека (hFOB) были предоставлены АТСС (Manassas, VA, США). Гладкомыщечные клетки аорты человека (AoSMC) были приобретены у Cambrix (East Rutherford, NJ) и использованы в экспериментах при 5-7 пассажах. Клеточные культуры поддерживали в среде DMEM (АТСС), содержащей антибиотики и 5% эмбриональной телячьей сыворотки (FBS, АТСС). В некоторых экспериментах клетки инкубировали в проостеогенной среде, определяемой как 5% FBS/DMEM, обогащенной 5 мМ бета-глицерофосфата с 25 мкМ форсколина или без него. Все клеточные культуры поддерживали при 37°С и в атмосфере 5% CO2. Жизнеспособность клеток контролировали с помощью анализа МТТ.
Анализ активности щелочной фосфатазы в AoSMC
AoSMC помещали в 96-луночные планшеты и выращивали до непрерывного слоя. Клетки инкубировали с аскорбиновой кислотой в питательной среде в течение трех дней. Клетки промывали забуференным фосфатом физиологическим раствором (PBS) и добавляли 50 мкл/лунку 25 мкг/мл 4-MUP (флуоресцентный субстрат ALP, Sigma) в щелочном буфере (Sigma)/1% Triton Х100, в течение 1 ч, при комнатной температуре. Флуоресценцию измеряли при 360/450 нм.
Накопление кальция во внеклеточном матриксе
AoSMC высевали на покрытые фибронектином пластиковые чашки с плотностью 25000 на квадратный см и выращивали до непрерывности в течение 5-7 дней. Аскорбиновую кислоту или смесь 1 добавляли к клеткам в указанных концентрациях на 72 часа в среде DMEM с добавлением 2% FBS, и внеклеточный матрикс, продуцируемый клетками, подвергали последовательной обработке 0,5% Triton Х100 и 20 мМ сульфата аммония в забуференном фосфатом физиологическом растворе (PBS, Life Technologies) в течение 3 минут для каждого, при комнатной температуре, как описано в публикации Ivanov V, Ivanova S, Kalinovsky Т, Niedzwiecki A, Rath M. Plant-derived micronutrients suppress monocyte adhesion to cultured human aortic endothelial cell layer by modulating its extracellular matrix composition. J Cardiovasc Pharmacol 2008; 52:55-65. После четырех промывок PBS слои внеклеточного матрикса (ЕСМ) солюбилизировали путем инкубации в 0,6N HCl в течение 48 часов при 37°С. Содержание кальция в солюбилизированных образцах измеряли с помощью анализа Са ТЕСО в соответствии с протоколом производителя.
Экспрессия маркеров остеобластов в культивируемых клетках человека Для экспериментов клетки AoSMC, DF и hFOB высевали в отдельные 96-луночные пластиковые планшеты с плотностью 25000 на квадратный см и выращивали до непрерывности в течение 5-7 дней. Тестируемые соединения добавляли к клеткам в указанных концентрациях на 72 часа в среде DMEM с добавлением 2% FBS. Слои клеток трижды промывали PBS и фиксировали с помощью 3% формальдегида в PBS, при 4°С, в течение одного часа. Слои фиксированных клеток четыре раза промывали PBS и обрабатывали 1% BSA/PBS в течение одного часа при комнатной температуре. Иммуноанализ на остеогенные маркеры проводили путем последовательной инкубации с первичными моноклональными антителами (R&D Systems) в 1% BSA/PBS в течение 2 часов с последующей инкубацией в течение 1 часа со вторичными антителами козы к антимышиному IgG, мечеными пероксидазой хрена (HRP). Сохраненную активность пероксидазы измеряли после последнего цикла промывки (три раза с 0,1% BSA/PBS) с использованием реагента субстрата для пероксидазы ТМВ (Rockland). Оптическую плотность определяли с помощью планшет-ридера (Molecular Devices) при 450 нм и выражали как процентное содержание контрольных образцов клеток, инкубированных в 2% FBS/DMEM без добавок. Чтобы обеспечить прямое сравнение экспрессии остеогенных маркеров на различных типах клеток, все планшеты, покрытые клетками, во время иммуноанализа обрабатывали одинаково и одновременно.
Статистический анализ
Результаты на фигурах представляют собой средние значения ± стандартное отклонение SD для трех или более повторений из наиболее репрезентативного из по меньшей мере двух независимых экспериментов. Различия между образцами оценивали с помощью двустороннего t-критерия Стьюдента с использованием программного обеспечения Excel (Microsoft) и принимали как значимые при уровнях р менее 0,05.
Результаты на Фигурах 4А, 4В, 5А и 5В выражены в процентном содержании от контрольных образцов с добавками и представлены как средние значения±стандартное отклонение SD из шести или более повторений из наиболее репрезентативного из по меньшей мере двух независимых экспериментов.
Результаты
Примеры вариантов осуществления, в качестве примера, а не ограничения, проиллюстрированы на фигурах сопроводительных чертежей, на которых одинаковые ссылки указывают на аналогичные элементы и на которых:
Фигура 1 показывает влияние обработки аскорбиновой кислотой на кальцификацию внеклеточного матрикса в культивируемых гладкомышечных клетках аорты человека.
Фигура 2А показывает влияние симвастатина на накопление Са в культуре AoSMC без форсколина.
Фигура 2В показывает влияние мевастатина на накопление Са в культуре AoSMC с 25 мкМ форсколина.
Фигура 3А показывает влияние 200 мкМ аскорбата на экспрессию маркеров остеобластов в ГМК аорты человека, инкубированных в течение 4 недель в остеогенной среде с добавлением 5 мМ бета-глицерофосфата и 25 мкМ форсколина.
Фигура 3В показывает влияние 200 мкМ аскорбата на экспрессию маркеров остеобластов в дермальных фибробластах человека, инкубированных в течение 4 недель в остеогенной среде с добавлением 5 мМ бета-глицерофосфата и 25 мкМ форсколина.
Фигура 4А показывает влияние 1 мкМ статинов и Смеси 1 (со 100 мкМ аскорбата) на активность щелочной фосфатазы в AoSMC с добавлением 5% FBS/DMEM без добавок в течение четырех дней. Инкубация 90 мин с субстратом MSU.
Фигура 4В показывает влияние 1 мкМ статинов и Смеси 1 (и 100 мкМ аскорбата) на активность щелочной фосфатазы в AoSMC с добавлением 5 мМ бета-глицерофосфата (b-GP) и 25 мкМ форсколина в течение четырех дней. Инкубация 95 мин с субстратом MSU.
Фигура 5А показывает влияние 1 мкМ статинов и 300 мкМ аскорбата на активность щелочной фосфатазы в AoSMC с добавлением 5% FBS/DMEM без добавок в течение пяти дней.
Фигура 5В показывает влияние 1 мкМ статинов и 300 мкМ аскорбата на активность щелочной фосфатазы в AoSMC с добавлением 5% FBS/DMEM/5 мМ b-GP, 25 мкМ форсколина в течение пяти дней.
Процесс клеточной кальцификации исследовали на клетках AoSMC человека, культивируемых в обычной среде для роста клеток (5% FBS/DMEM) в отсутствие и в присутствии различных количеств аскорбиновой кислоты. Процесс кальцификации для AoSMC оценивали по активности клеточной щелочной фосфатазы и накоплению кальция в продуцируемом клетками внеклеточном матриксе (Фигура 1).
Результаты показывают, что добавление в среду AoSMC аскорбиновой кислоты вплоть до 300 мкМ приводило к значительному снижению уровня внеклеточного кальция и более низкой активности клеточной щелочной фосфатазы дозозависимым образом. В присутствии 300 мкМ аскорбата накопление внеклеточного кальция AoSMC снижалось на 20%, а активность щелочной фосфатазы на 80%.
Результаты, представленные на Фигуре 2А, показывают, что накопление кальция в слоях AoSMC увеличивалось в присутствии симвастатина на 23%. Однако одновременное присутствие 100 мкМ аскорбата кальция приводило к снижению накопленного кальция на 54% до значения 0,2 мкг/лунку, что коррелировало со значениями, наблюдаемыми в клетках, не подвергшихся воздействию симвастатина.
Влияние аскорбата на накопление кальция в AoSMC в условиях повышенной прокальцификации (с форсколином) и в присутствии статина (мевастатина) представлено на Фигуре 2В. Результаты показывают, что в присутствии 1 мМ мевастатина накопление кальция увеличивалось с 1,35 мкг/лунку в контрольном образце до 1,8 мкг/лунку с мевастатином. Однако при добавлении 100 мкМ аскорбата накопление кальция снизилось на 19% до значений ниже контрольных (без добавок).
В дополнение к ГМК мы изучали влияние аскорбата на процесс клеточной кальцификации в дермальных фибробластах человека (DF) и иммортализованных фетальных остеобластах человека (FOB), оценивая изменения в экспрессии различных проостеогенных маркеров в этих клетках. Влияния аскорбата в различных типах клеток проверялись с помощью проостеогенных условий, таких как их выращивание в среде с добавлением 5 мМ бета-глицерофосфата и 25 мкМ форсколина. Результаты показывают, что экспрессия всех протестированных остеогенных маркеров была значительно снижена при добавлении 100 мкМ аскорбиновой кислоты как в культурах AoSMC, так и в культурах DF (Фигура 3). Добавление аскорбиновой кислоты к остеобластам hFOS в проостеогенной среде в течение четырехнедельного периода было цитотоксичным. Соответствующие данные были исключены из презентации.
Мы сравнили уровни экспрессии остеогенных маркеров в тестируемых типах клеток человека, представленные в Таблице 1. Результаты показывают, что в обычной питательной среде экспрессия остеокальцина, остеоадгерина, белка матрикса дентина 1 (DMP-1) и склеростина (SOST) были наиболее заметны в клетках остеобластов (FOB), за которыми следовали фибробласты (DF), за исключением DMP-1, экспрессия которого в фибробластах немного превышала таковую в культурах FOB. Клеточная экспрессия этих четырех остеогенных маркеров в AoSMC, культивируемых в обычной питательной среде, была значительно (в 2-4) раза менее заметной, чем в культурах FOB и DF.
В настоящих тестах мы продемонстрировали, что протестированная аскорбиновая кислота в концентрациях до 300 мкМ может уменьшать накопление кальция во внеклеточном матриксе, продуцируемом AoSMC. Этот эффект сопровождался блокированием остеогенной трансформации ГМК, на что указывали изменения специфических метаболических параметров, таких как снижение активности клеточной щелочной фосфатазы и клеточная экспрессия белков-маркеров остеобластов. Высокий уровень сывороточной щелочной фосфатазы (ALP) связан с повышенным риском смертности и инфаркта миокарда. ALP гидролизует неорганический пирофосфат, который является сильным ингибитором отложения фосфата кальция.
В физиологических условиях (клетки инкубировали в обычной культуральной среде) экспрессия остеокальцина, остеоадгерина и SOST/склеростина была самой высокой в культурах hFOS и самой низкой в культурах hAoSMC. Экспрессия этих маркеров была промежуточной в культурах hDF. В физиологических условиях (клетки инкубировали в обычной культуральной среде) экспрессия DMP-1 была самой высокой в культурах hDF и самой низкой в культурах hAoSMC. Экспрессия DMP-1 была промежуточной в культурах hFOS. Добавление к клеткам проостеогенной среды по сравнению с обычной средой вызывало стимуляцию всех протестированных остеомаркеров в культурах AoSMC. Напротив, добавление проостеогенной среды вызывало ингибирование всех протестированных остеогенных маркеров в культурах hDF и hFOS.
Описание результатов, представленных на Фигурах 4 (А и В) и Фигурах 5 (А и В), показывает, что процесс клеточной кальцификации был исследован в гладкомышечных клетках аорты человека (AoSMC), культивируемых в среде для культивирования клеток в отсутствие и в присутствии различных статинов: симвастатина, мевастатина и правастатина, каждый из которых использовали в концентрации 1 мкМ. Процесс кальцификации для AoSMC оценивали по активности клеточной щелочной фосфатазы (ALP). В исследовании оценивали воздействие смеси 1 (комбинация питательных микроэлементов, содержащая аскорбат) и аскорбата по отдельности в стандартных условиях (5% FBS/DMEM) и в условиях прокальцификации (5% FBS/DMEM с добавлением 5 мМ бета-глицерофосфата (b-GP) и 25 мкМ форсколина - Фигура 4 В).
Результаты, представленные на Фигуре 4А, показывают, что активность ALP для AoSMC в нормальных условиях клеточной культуры не подвергалась влиянию симвастатина, но повышалась в присутствии мевастатина на 25% и правастатина на 39% по сравнению с контролем. Добавление смеси 1 в концентрации, эквивалентной 100 мкМ аскорбата, приводило к снижению активности ALP. Таким образом, ALP была ниже на 33% в контроле и на 29%, 25%, 27% в присутствии симвастатина, мевастатина и правастатина соответственно. Комбинация правастатина и смеси 1 приводила к снижению процесса кальцификации до уровня, наблюдаемого в контроле (без добавок). Смесь 1 в присутствии симвастатина и мевастатина снижала активность ALP ниже контрольных значений. Наиболее эффективной в снижении активности ALP была комбинация смеси 1 с симвастатином - на 33% ниже значения для контроля и почти аналогично эффекту смеси 1, применяемой отдельно.
Результаты, представленные на Фигуре 4В, показывают, что в условиях прокальцификации (5 мМ b-GP и 25 мкМ форсколина) присутствие симвастатина приводило к увеличению активности ALP на 22%, мевастатина на 39% и правастатина на 25% по сравнению с контролем. При добавлении смеси 1 в присутствии и в отсутствие статинов активность ALP снижалась на 52% в контроле, а в присутствии симвастатина, мевастатина и правастатина на 52%, 45%, 44% соответственно, по сравнению со значениями без смеси 1. Подобно нормальным условиям для клеточной культуры, эффективность смеси 1 в снижении активности ALP была самой высокой при сочетании с симвастатином (40% по сравнению с контролем). Смесь 1 в сочетании со всеми испытуемыми статинами значительно снижала активность APL до уровней ниже контрольного. Значительный эффект снижения ALP смесью 1 сравнивали с аскорбиновой кислотой, используемой индивидуально в концентрации 300 мкМ, что в три раза выше, чем ее эквивалентное количество, содержащееся в составе смеси 1.
Результаты на Фигуре 5А показывают, что добавление в среду AoSMC 300 мкМ аскорбиновой кислоты в присутствии и в отсутствие тестируемых статинов приводило к значительному снижению активности клеточной щелочной фосфатазы (ALP). В условиях нормальной питательной среды аскорбиновая кислота снижала активность щелочной фосфатазы примерно на 43%. В присутствии симвастатина активность ALP была выше на 57% и снижалась до уровня контроля после добавления 300 мкМ аскорбата. Аналогичным образом, мевастатин и правастатин повышали активность ALP на 61 и 60% соответственно. Эти стимулирующие эффекты снижались на 29 и 30% соответственно в присутствии аскорбиновой кислоты.
Результаты на Фигуре 5В показывают, что в условиях прокальцификации статины вызывали увеличение стимуляции активности ALP для симвастатина, мевастатина и правастатина на 30%, 41% и 25% соответственно. Одновременное добавление аскорбата привело к снижению активности ALP на 36%, 37% и 24% для образцов, содержащих симвастатин, мевастатин и правастатин, соответственно. В тех же экспериментальных условиях добавление аскорбиновой кислоты к AoSMC в отсутствие статинов снижало активность ALP на 29%.
Таким образом, в этом исследовании мы доказываем, что смесь 1 и/или витамин С играет решающую роль в регуляции клеточной и внеклеточной архитектуры и функции внутри сосудистой стенки. При оптимальной доступности аскорбата или смеси 1 целостность и стабильность сосудистой стенки будут обеспечиваться, прежде всего, оптимальным синтезом коллагена и других молекул внеклеточного матрикса.
Группа изобретений относится к области фармацевтической промышленности, а именно к композиции, содержащей L-аскорбиновую кислоту, или аскорбат, или к смеси, содержащей их, а также к применению указанной композиции или смеси. Применение смеси композиции, содержащей L-аскорбиновую кислоту или аскорбат, витамин Е, витамин В1, витамин В2, витамин В3, витамин В5, витамин В6, витамин В12, фолиевую кислоту, биотин, L-карнитин и бетаин, в следующих количествах: L-аскорбиновая кислота или аскорбат: от 300 до 1000,2 мг, витамин Е: от 27,5 до 82,5 мг, витамин B1: от 3,3 до 9,9 мг, витамин B2: от 3,3 до 9,9 мг, витамин B3: от 115 до 350,1 мг, витамин B5: от 16,7 до 50,1 мг, витамин B6: от 3,3 до 9,9 мг, витамин B12: от 10 до 30 мкг, фолиевая кислота: от 133,3 до 399,9 мкг, биотин: от 33,3 до 99,9 мкг, L-карнитин: от 33,3 до 99,9 мг, бетаин: от 23,3 до 69,9 мг, для лечения или профилактики кальцификации сосудов, вызванной у пациентов приемом статинов. Смесь композиции 1 для лечения или профилактики кальцификации сосудов, вызванной у пациентов приемом статинов, содержащая или состоящая из витамина С, витамина Е, витамина В1, витамина В2, витамина В3, витамина В5, витамина В6, витамина В12, фолиевой кислоты, биотина, L-карнитина и бетаина, содержащая или состоящая из следующих количеств в этой смеси композиции: витамин C: от 300 до 1000,2 мг, витамин Е: от 27,5 до 82,5 мг, витамин B1: от 3,3 до 9,9 мг, витамин B2: от 3,3 до 9,9 мг, витамин B3: от 115 до 350,1 мг, витамин B5: от 16,7 до 50,1 мг, витамин B6: от 3,3 до 9,9 мг, витамин B12: от 10 до 30 мкг, фолиевая кислота: от 133,3 до 399,9 мкг, биотин: от 33,3 до 99,9 мкг, L-карнитин: от 33,3 до 99,9 мг, бетаин: от 23,3 до 69,9 мг. Фармацевтическая композиция для лечения или профилактики кальцификации сосудов, вызванной у пациентов приемом статинов, содержащая по меньшей мере один статин и одну из вышеуказанных композиций. Использование группы изобретений обеспечивает лечение или профилактику кальцификации сосудов, вызванной у пациентов в результате приема статинов. 3 н. и 14 з.п. ф-лы, 5 ил., 1 табл., 1 пр.
1. Применение смеси композиции, содержащей L-аскорбиновую кислоту или аскорбат, витамин Е, витамин В1, витамин В2, витамин В3, витамин В5, витамин В6, витамин В12, фолиевую кислоту, биотин, L-карнитин и бетаин, в следующих количествах:
L-аскорбиновая кислота или аскорбат: от 300 до 1000,2 мг,
витамин Е: от 27,5 до 82,5 мг,
витамин В1: от 3,3 до 9,9 мг,
витамин В2: от 3,3 до 9,9 мг,
витамин В3: от 115 до 350,1 мг,
витамин В5: от 16,7 до 50,1 мг,
витамин В6: от 3,3 до 9,9 мг,
витамин В12: от 10 до 30 мкг,
фолиевая кислота: от 133,3 до 399,9 мкг,
биотин: от 33,3 до 99,9 мкг,
L-карнитин: от 33,3 до 99,9 мг,
бетаин: от 23,3 до 69,9 мг,
для лечения или профилактики кальцификации сосудов, вызванной у пациентов приемом статинов.
2. Применение по п. 1, где лечение представляет собой лечение пациентов, одновременно получающих лечение статинами.
3. Применение по п. 1 или 2, где аскорбат выбирают из водорастворимых или жирорастворимых аскорбатов или их смесей, предпочтительно из аскорбата кальция, аскорбата магния, аскорбата натрия, аскорбилфосфата, аскорбилпальмитата или их смесей.
4. Смесь композиции 1 для лечения или профилактики кальцификации сосудов, вызванной у пациентов приемом статинов, содержащая или состоящая из витамина С, витамина Е, витамина В1, витамина В2, витамина В3, витамина В5, витамина В6, витамина В12, фолиевой кислоты, биотина, L-карнитина и бетаина, содержащая или состоящая из следующих количеств в этой смеси композиции:
витамин С: от 300 до 1000,2 мг,
витамин Е: от 27,5 до 82,5 мг,
витамин В1: от 3,3 до 9,9 мг,
витамин В2: от 3,3 до 9,9 мг,
витамин В3: от 115 до 350,1 мг,
витамин В5: от 16,7 до 50,1 мг,
витамин В6: от 3,3 до 9,9 мг,
витамин В12: от 10 до 30 мкг,
фолиевая кислота: от 133,3 до 399,9 мкг,
биотин: от 33,3 до 99,9 мкг,
L-карнитин: от 33,3 до 99,9 мг,
бетаин: от 23,3 до 69,9 мг.
5. Смесь композиции 1 по п. 4, где витамин С находится в форме аскорбата, где аскорбат, предпочтительно, выбирают из водорастворимых или жирорастворимых аскорбатов или их смесей, более предпочтительно, где аскорбат выбирают из аскорбата кальция, аскорбата магния, аскорбата натрия, аскорбилфосфата, аскорбилпальмитата или их смесей.
6. Смесь композиции 1 по одному из пп. 4 или 5, дополнительно содержащая кофермент Q10.
7. Фармацевтическая композиция для лечения или профилактики кальцификации сосудов, вызванной у пациентов приемом статинов, содержащая по меньшей мере один статин и смесь композиции, содержащую L-аскорбиновую кислоту или аскорбат, витамин Е, витамин В1, витамин В2, витамин В3, витамин В5, витамин В6, витамин В12, фолиевую кислоту, биотин, L-карнитин и бетаин, в следующих количествах:
L-аскорбиновая кислота или аскорбат: от 300 до 1000,2 мг,
витамин Е: от 27,5 до 82,5 мг,
витамин В1: от 3,3 до 9,9 мг,
витамин В2: от 3,3 до 9,9 мг,
витамин В3: от 115 до 350,1 мг,
витамин В5: от 16,7 до 50,1 мг,
витамин В6: от 3,3 до 9,9 мг,
витамин В12: от 10 до 30 мкг,
фолиевая кислота: от 133,3 до 399,9 мкг,
биотин: от 33,3 до 99,9 мкг,
L-карнитин: от 33,3 до 99,9 мг,
бетаин: от 23,3 до 69,9 мг,
или
смесь композиции 1, содержащую или состоящую из витамина С, витамина Е, витамина В1, витамина В2, витамина В3, витамина В5, витамина В6, витамина В12, фолиевой кислоты, биотина, L-карнитина и бетаина, содержащую или состоящую из следующих количеств в этой смеси композиции:
витамин С: от 300 до 1000,2 мг,
витамин Е: от 27,5 до 82,5 мг,
витамин В1: от 3,3 до 9,9 мг,
витамин В2: от 3,3 до 9,9 мг,
витамин В3: от 115 до 350,1 мг,
витамин В5: от 16,7 до 50,1 мг,
витамин В6: от 3,3 до 9,9 мг,
витамин В12: от 10 до 30 мкг,
фолиевая кислота: от 133,3 до 399,9 мкг,
биотин: от 33,3 до 99,9 мкг,
L-карнитин: от 33,3 до 99,9 мг,
бетаин: от 23,3 до 69,9 мг.
8. Фармацевтическая композиция по п. 7, где аскорбат выбирают из водорастворимых или жирорастворимых аскорбатов или их смесей, предпочтительно из аскорбата кальция, аскорбата магния, аскорбата натрия, аскорбилфосфата, аскорбилпальмитата или их смесей.
9. Фармацевтическая композиция по п. 7, где витамин С находится в форме аскорбата, где аскорбат предпочтительно выбирают из водорастворимых или жирорастворимых аскорбатов или их смесей, более предпочтительно, где аскорбат выбирают из аскорбата кальция, аскорбата магния, аскорбата натрия, аскорбилфосфата, аскорбилпальмитата или их смесей.
10. Фармацевтическая композиция по п. 9, где смесь композиции 1 дополнительно содержит кофермент Q10.
11. Фармацевтическая композиция по п. 7, где смесь композиции 1 дополнительно содержит кофермент Q10.
12. Фармацевтическая композиция по п. 7, где по меньшей мере один статин и смесь композиции или смесь композиции 1 присутствуют в виде физической смеси или в виде отдельных фармацевтических композиций, предназначенных для одновременного введения пациенту.
13. Фармацевтическая композиция по п. 7 для профилактики или лечения сердечно-сосудистого заболевания.
14. Фармацевтическая композиция по п. 13, где сердечно-сосудистое заболевание представляет собой коронарную болезнь сердца, цереброваскулярное заболевание или заболевание периферических сосудов.
15. Фармацевтическая композиция по одному из пп. 7-14, где статин выбирают из группы, состоящей из аторвастатина, церивастатина, флувастатина, ловастатина, мевастатина, питавастатина, правастатина, розувастатина, симвастатина или их смесей, или из комбинации статина с ниацином.
16. Фармацевтическая композиция по одному из пп. 7-14, содержащая кофермент Q10 в дозированной лекарственной форме, которая позволяет одновременное введение пациенту по меньшей мере одного статина, L-аскорбиновой кислоты или аскорбата и кофермента Q10.
17. Фармацевтическая композиция по одному из пп. 7-14, содержащая суточную дозу L-аскорбиновой кислоты или аскорбата от 10 мг до 100 г и по меньшей мере одного статина от 5 мг до 100 мг.
| US 2010021573 A1, 28.01.2010 | |||
| Сборно-монолитный предварительно напряженный железобетонный пояс зданий и сооружений,возводимых на просадочных грунтах,подрабатываемых территориях или в сейсмических районах | 1980 |
|
SU1214893A1 |
| US 2004009986 A1, 15.01.2004 | |||
| US 2004014712 A1, 22.01.2004 | |||
| US 2009074883 A1, 19.03.2009. | |||
