Способ интраоперационной цитологической оценки статуса сигнального лимфатического узла у больных раком эндометрия 1 клинической стадии Российский патент 2024 года по МПК A61B5/00 G01N33/53 G01N1/30 

Изобретение относится к онкологии, патологической анатомии, клинико-лабораторной диагностике, и может быть использовано для интраоперационной цитологической оценки статуса сигнального лимфатического узла у больных раком эндометрия 1 клинической стадии.

Интраоперационная оценка статуса сигнального лимфатического узла у больных раком эндометрия 1 клинической стадии позволяет определить тактику хирурга во время операции, тем самым избежать повторных операций или излишне обширных хирургических вмешательств и персонализировать назначение адъювантной терапии. Рак эндометрия (РЭ) является наиболее распространенным гинекологическим раком в развитых странах и занимает 1-е место в структуре онкогинекологической патологии в России. Ежегодно регистрируется более 24 тысяч новых случаев заболевания с приростом заболеваемости в 29% за последние 10 лет. Прогноз больных тесно связан со стадией заболевания. При метастатическом поражении лимфатических узлов устанавливается IIIC стадия рака эндометрия, которая относится к категории поздних стадий и имеет неблагоприятный прогноз. Таким образом, оценка статуса лимфатических узлов не только дает представление о стадии опухолевого процесса, но и позволяет определить объем лимфодиссекции, что обеспечивает разработку индивидуальных планов лечения.

Наиболее актуально это является при проведении первичного хирургического лечения, вариантом выбора в такой ситуации является использование метода определения сигнальных лимфатических узлов (СЛУ), то есть лимфатических узлов, которые первыми оказываются на пути оттока лимфы из пораженной опухолью органа и первыми поражаются мигрирующими с током лимфы опухолевыми клетками. Согласно существующей концепции, если сигнальный лимфатический узел не поражен метастазом, то все остальные регионарные лимфоузлы считают интактными.

При исследовании макроскопически неизмененных лимфатических узлов в 30-40% случаев обнаруживаются метастазы, однако при микроскопическом исследовании макроскопически измененных лимфатических узлов в 25-30% случаев метастазы не определяются.

Методика определения СЛУ входит в клинические рекомендации ведущих профессиональных сообществ по лечению онкологических заболеваний, в том числеРоссийского общества клинической онкологии и позволяет персонализировать подход к проведению лечения в данной группе пациентов.

Стандартная морфологическая оценка поражения лимфатических узлов включает один разрез вдоль продольной оси и окрашивание его гематоксилином и эозином (Н&Е), чтобы определить, содержит ли он метастатические опухолевые клетки. Однако оптимальным для оценки статуса СЛУ является проведение процедуры ультрастадирования, основанной использовании множественных срезов, окрашенных гематоксилином/эозином, и иммуногистохимическом морфологическом исследовании. Такой подход позволяет точно идентифицировать метастазы, что особенно полезно для выявления метастазов малого объема, которые составляют примерно половину метастазов в СЛУ.

К сожалению, ультрастадирование требует много времени для фиксации формалином, заливки парафином, обработки тканей и иммуногистохимического окрашивания, что не позволяет интраоперационно судить о статусе сигнального лимфатического узла. Интраоперационная морфологическая диагностика может быть осуществлена посредством гистологического (замороженных срезов) и цитологического исследования. Каждый из предложенных методов имеет свои сильные и слабые стороны. С одной стороны, одни авторы указывают на более высокую чувствительность метода замороженным срезов по сравнению с цитологическим исследованием, другие указывают на приемлемую точность обоих методов интраоперационной диагностики. Однако все эксперты отмечают, что метод интраоперационной оценки замороженных срезов является недостаточно надежным. В замороженных срезах образуются кристаллы льда, вследствие чего происходит деформация материала и искажается архитектоника ткани. Также гистологические препараты имеют более низкое качество,чем при плановом гистологическом исследовании после приготовления парафиновых блоков, что влияет на точность морфологического диагноза. В то время как хирургические аспекты методики хорошо изучены, морфологическая оценка статуса сигнального лимфатического узла с точки зрения макроскопической, интраоперационной оценки и ультрастадирования все еще остается предметом дискуссий. Однако, все авторы сходятся во мнении, что исследование должно иметь высокую воспроизводимость, время исследования не должно превышать 20 минут, количество направленных лимфатических узлов не менее 2-х, но не более 5.

Известен способ оценки метастатического поражения сигнального лимфатического узла при ранних формах плоскоклеточного рака полости рта. Суть способа заключается в том, что срезы толщиной 5 микрометров окрашивают с использованием гематоксилина иэозина, проводят иммуногистохимическое исследование с применением антител к белкам Ki-67 и CD49, полученные окрашенные микропрепараты сканируют в цифровое изображение высокого разрешения, проводят цифровой анализ изображений с использованием программного обеспечения с открытым исходным кодом, оценивают индекс Ki-67 как количество позитивно-окрашенных ядер на 1 квадратный миллиметр ткани лимфатического узла, индекс CD49 - количество позитивно-окрашенных мембран опухолевых клеток на 1 квадратный миллиметр ткани лимфатического узла, клеточную плотность опухолевой ткани - количество опухолевых клеток на 1 квадратный миллиметр ткани лимфатического узла и одновременное сочетание количественных показателей индекса Ki-67, индекса CD49 и клеточной плотности опухолевой ткани больше нуля оценивают как наличие метастатического поражения сигнального лимфатического узла. Недостатком способа является отсутствие возможности использовать способ для срочной интраоперационной оценки сигнального лимфатического узла Известен способ диагностики сигнальных лимфоузлов рака желудка, который заключается в исследовании лимфатического узла на проточном цитометре методом подсчета клеток в камере Горяева при реакции прямой иммунофлуоресценции. Существенным недостатком метода является интраоперационное исследование только половины сигнального лимфатического узла, выбранного произвольно и потеря биологического материала в связи с измельчением другой половины сигнального лимфатического узла. Для реализации метода необходима материально-техническая база, что делает невозможным его использование в большинстве лечебных учреждений. Также недостатком способа является продолжительная длительность количества времени для проведения исследования, а само исследование материала являются очень трудоемкими и тяжело воспроизводимым.

Наиболее близким к предлагаемому является способ интраоперационной диагностики метастазов в лимфатические узлы у больных при помощи окрашивания гематоксилин-эозином, которая является стандартной методикой при изучении гистологического материала. В ходе, которого фрагменты тканей замораживаются в микротоме-криостате, далее делают тонкие срезы с последующим окрашивание и исследуют методом световой микроскопии. Недостатком известного способа с использованием криостатных срезов является низкое качество гистологических препаратов, по сравнению с рутинным гистологическим исследованием. Более существенным недостатком данного способа является полная потеря биологического материала, представленного на интраоперационное исследование, что резко ограничивает использование данного метода, особенно при проведении оценки статуса лимфатическогоколлектора в виду невозможности обнаружения микрометастазов или единичных опухолевых клеток.

Новый технический результат - повышение доступности для лечебных учреждений со стандартным оборудованием, информативности, оперативности интраоперационной оценки статуса сигнальных лимфатических узлов без потери биологического материала и с возможностью его дальнейшего гистологического и иммуногистохимического исследования, воспроизводимость способа при низких экономических затратах.

Для достижения нового технического результата в способе интраоперационной цитологической оценки статуса сигнального лимфатического узла у больных раком эндометрия 1 клинической стадии, включающем выполнение серийно-ступенчатых срезов лимфатического узла с последующим окрашиванием и исследованием методом световой микроскопии, лимфоузлы исследуют макроскопически, далее при выполнении серийно-ступенчатых срезов биологический материал разделяют на параллельные пластины толщиной 2 мм, при этом срезы лимфатического узла проводят в зависимости от его конфигурации: при «продольной» конфигурации лимфатического узла - срез проводят перпендикулярно самой длинной оси лимфатического узла; при «овальной» или «корональной» конфигурации, когда оси лимфатического узла не отличаются по длине - срез проводят вдоль экваториальной плоскости лимфатического узла, с каждой стороны поверхности срезов делают 2-4 мазка-отпечатка, цитологические препараты окрашивают с помощью реагентов «Набора для быстрого окрашивания мазков крови Лейкодиф 200» в течение 15 секунд, препараты просматриваются с помощью микроскопа Zeiss Axio Scope. А1 с консультированием не менее 2-х специалистов и при выявлении в цитологических препаратах скоплений опухолевых клеток числом от одного и более комплексов, а также в случаях обнаружения дискретных опухолевых клеток от двух до пяти, СЛУсчитают метастатически измененным, также при наличии в структуре СЛУ плотных участков, дополнительно проводят соскоб с поверхности узла.

Способ осуществляют следующим образом.

Выполняют макроскопическое исследование лимфоузлов, далее выполняют серийно-ступенчатых срезы лимфатического узла, проводят окрашивание и исследуют методом световой микроскопии. Проводят интраоперационное срочное цитологическое исследование, лимфоузлы исследуют макроскопически, при выполнении серийно-ступенчатых срезов биологический материал разделяют на параллельные пластины толщиной 2 мм, при этом срезы лимфатического узла проводят в зависимости от его конфигурации: при «продольной» конфигурации лимфатического узла - срез проводят перпендикулярно самой длинной оси лимфатического узла; при «овальной» или «корональной» конфигурации, когда оси лимфатического узла не отличаются по длине - срез проводят вдоль экваториальной плоскости лимфатического узла, с каждой стороны поверхности срезов делают 2-4 мазка-отпечатка, в зависимости от размера лимфоузла, цитологические препараты окрашиваются с помощью реагентов «Набора для быстрого окрашивания мазков крови Лейкодиф 200» в течение 15 секунд, препараты просматриваются с помощью микроскопа Zeiss Axio Scope. А1 с консультированием не менее 2-х специалистов и при выявлении в цитологических препаратах скоплений опухолевых клеток от одного и более комплексов, а также в случаях обнаружения дискретных опухолевых клеток от двух до пяти. СЛУ считают метастатически измененным, также при наличии в структуре СЛУ плотных участков, дополнительно проводят соскоб с поверхности узла.

После завершения интраоперационного цитологического анализа препаратов, ткань сигнальных лимфатических узлов фиксируют в 10% нейтральном формалине с последующей заливкой в парафин для проведения послеоперационного стандартного гистологического и иммуногистохимического исследования.

Способ основан на анализе данных обследования 136 сигнальных лимфатических узлов у 70 больных раком эндометрия 1 клинической стадии с использованием предлагаемого способа, с последующим гистологическим исследованием всех сигнальных лимфатических узлов стандартным способом с помощью процедуры ультрастадирование, основанной на множественных срезах, окрашенных гематоксилином/эозином, и иммуногистохимическом морфологическом исследовании. По данным срочной интраоперационной цитологической оценки выявлено 7 случаем метастатического поражения СЛУ (5,2%), гистологическое подтверждение метастаза выявлено в 6 из 7 случаев (истинно положительный случай), 1 ложноположительный результат. Таким образом, чувствительность метода составила 100%, специфичность 99,23%) (не было ни одного ложноотрицательного случая).

Предлагаемый способ поясняем Фиг 1-4.

Фиг. 1. Схема технологии приготовления срезов для интраоперационного цитологического ультрастадирования сигнальных лимфатических узлов (СЛУ) у больных раком эндометрия 1 клинической стадии.

Фиг. 2. Сигнальный лимфоузел, цитологические мазки-отпечатки. Метастаз рака эндометрия. Комплексы опухолевых клеток. Окраска: Лейкодиф 200, увеличение ×1000.

Фиг. 3. Сигнальный лимфоузел, цитологические мазки-отпечатки. Лимфоузел без метастаза. Лимфоидные элементы. Окраска: Лейкодиф 200, увеличение ×200.

Фиг. 4. Сигнальный лимфоузел, цитологические мазки-отпечатки. На фоне лимфоидных элементов разной степени зрелости одно скопление клеток с признаками полиморфизма, дискретные опухолевые клетки. Окраска: Лейкодиф 200, увеличение ×1000.

Примеры выполнения способа

Пример 1. Больная Г., 54 года, с диагнозом рак эндометрия IIIc1 стадии (Т1а N1 МО). Гистология №2236-37к/23 от 30.03.2023- Эндометриоидная аденокарцинома low-grade, Gl по FIGO (ICD-O code 8380/3). Гистология №9018-9064/23 от 11.04.2023: Эндометриоидная аденокарцинома Low-grade, Gl по FIGO. Максимальная глубина инвазии опухоли в миометрий - менее 1\2 толщины мышечного слоя. Признаков сосудистой и невральной инвазии, а также инвазии в параметрий достоверно не обнаружено. Флакон №1: СЛУ с микрометастазом в краевые синусы лимфатического узла. СЛУ слева: 1 лимфатический узел с микрометастазом опухоли в краевые синусы, гистиоцитозом синусов, со светлыми центрами, липоматозом. СЛУ справа: 1 лимфатический узел с микрометастазом опухоли в краевые синусы, гистиоцитозом синусов, со светлыми центрами, липоматозом, мелкоочаговым фиброзом и гиалинозом. ЛУ слева: 10 лимфатических узлов без опухолевых элементов. ЛУ справа: 13 лимфатических узлов без опухолевых элементов. ICD-O code 8380/3. 29.03.2023 пациентке проведено оперативное лечение в объеме: Лапаротомии по Черни, тотальная гистерэктомия с билатеральной сальпингоовариоэктомия, определение сигнальных лимфатических узлов, тазовая лимфодиссекция и интраоперационная лучевая терапия. Накануне операции пациентке был введен РФП меченный гамма-оксидом алюминия в шейку матки в двух точках на 3 и 9 часах условного циферблата. Через 3 часа после введения РФП проведена однофотонная эмиссионная компьютерная томография, совмещенная с компьютерной томографией: выявлено 2 сигнальных ЛУ (справа и слева). Интраоперационный поиск СЛУ осуществлялся с помощью гамма-сканера и расположение СЛУ полностью совпало с данными ОФЭКТ/КТ.

Выявленные СЛУ в количестве двух, по одному справа и слева, были отправлены на экспресс цитологическое исследование согласно предлагаемому способу. Цитология №812cito (фиг. 2) от 29.03.2023 - в удаленных СЛУ отмечается комплексы опухолевых клеток (от 5 и более скоплений опухолевых клеток в цитологическом препарате). По результатам плановой гистологической проводки удалено 25 тазово-парааортальных лимфоузлов, имелись микрометастазы только в СЛУ. Остальные ЛУ были интактны.

На фиг. 2. Сигнальный лимфоузел, цитологические мазки-отпечатки. Метастаз рака эндометрия. Комплексы опухолевых клеток. Окраска: Лейкодиф 200, увеличение ×1000.

Пример 2. Больная О., 70 лет, с диагнозом рак эндометрия IB стадии (pT1b N0 М0). Гистология 36160-98/22 от 08.12.2022: Low-grade эндометриоидная аденокарцинома тела матки с участками плоско клеточной дифференцировки (FIGO grade 1), с инвазией в миометрий на глубину до 1/2 толщины миометрия с признаками васкулярной инвазии. Достоверных признаков невральной инвазии не обнаружено. По линии внутреннего зева, в ткани шейки матки, параметрии, придатках, серозной оболочке опухолевого роста не обнаружено. В лимфатических узлах метастазов опухоли не обнаружено ICD-O code 8380/3. 30.11.2022 пациентке проведено оперативное лечение в объеме: лапароскопия, тотальная гистерэктомия с билатеральной сальпингоовариоэктомия, тазовая лимфодиссекция, Биопсия сигнальных лимфатических узлов с использованием радиунуклидного и флуоресцентного метода (ISG). Накануне операции пациентке был введен РФП меченный гамма-оксидом алюминия в шейку матки в двух точках на 3 и 9 часах условного циферблата. Через 18 часов после введения РФП проведена однофотонная эмиссионная компьютерная томография, совмещенная с компьютерной томографией: выявлено 2 сигнальных ЛУ (слева), неявное накопление РФП в ЛУ справа. Интраоперационный поиск СЛУ осуществлялся с помощью гамма-сканера, выявлено накопление РФП в области левой наружной подвздошной вены выявлена область накопления РФП (до 1600 имп/сек) в сигнальном лимфатическом узле, аналогичный ЛУ с накоплением РФП до 120 имп/сек в запирательной ямке справа. Перед установкой маточного манипулятора произведена фруоресцентная диагностики СЛУ: инъекция ISG в шейку матки в 2-х точках на 3 и 9 часах условного циферблата в общем объеме 4 мл (подслизисто и в строму шейки матки). При близкофокусном свете произведена детекция СЛУ с использованием ISG. Выявлено свечение в ЛУ: слева в области средней 1/3 наружной подвздошной артерии; справа СЛУ в области запирательной ямки над запирательным нервом. Сопоставлены данные двух методов определения СЛУ - полноесовпадение. Выявленные СЛУ в количестве двух, один слева и один справа были отправлены на экспресс цитологическое исследование. Цитология №2159cito (фиг. 3) от 30.11.2022 - в СЛУ с обеих сторон лимфоидные элементы. По результатам плановой гистологической проводки выявлены 24 ЛУ, все ЛУ включая СЛУ были интактны.

На фиг. 3. Сигнальный лимфоузел, цитологические мазки-отпечатки. Лимфоузел без метастаза. Лимфоидные элементы. Окраска: Лейкодиф 200, увеличение ×200.

Пример 3. Больная С, 51 лет, с диагнозом рак эндометрия IA стадии (pT1a N0 М0). Гистология №39372-409/22от 27.12.2017 - Эндометриоидная аденокарцинома low grade с инвазией менее 1/2 слоя миометрия с наличием структур железисто-фиброзного полипа. Сосудистой и невральной инвазии нет. СЛУ слева - гистиоцитоз синусов. СЛУ справа -гистиоцитоз синусов. В клетчатке слева (6 л/у, в т.ч. и мелких) - микрокальцинаты и гистиоцитоз синусов, липоматоз. В клетчатке справа (8 л/у, в т.ч. и мелких) - микрокальцинаты и гистиоцитоз синусов, липоматоз. В препаратах шейки матки, цервикального канала и внутреннего зева - опухолевой ткани не обнаружено. Параметрий слева и справа - без особенностей. Лейомиомы матки. ICD-o code 8380/3. 21.12.2022 пациентке проведено оперативное лечение в объеме: Лапароскопия, экстирпация матки с придатками, тазовая лимфодиссекция, БСЛУ с использованием радиунуклидного и визуально-контрастного метода (ISG). Накануне операции пациентке был введен РФП меченный гамма-оксидом алюминия в шейку матки в двух точках на 3 и 9 часах условного циферблата. Через 2 часа после введения РФП проведена однофотонная эмиссионная компьютерная томография, совмещенная с компьютерной томографией обнаружены СЛУ в левом забрюшинном пространстве: в области в области внутренней подвздошной артерии, прилежит к облитерированной пупочной артерии слева, аналогичный ЛУ обнаружен справа. Интраоперационный поиск СЛУ осуществлялся с помощью гамма-сканера, в области левой внутренней подвздошной артерии выявлена область накопления РФП (до 1300 имп/сек) в сигнальном лимфатическом узле, аналогичный ЛУ с накоплением РФП до 120 имп/сек в контрлатеральной области справа. Перед установкой маточного манипулятора произведена фруоресцентная диагностики СЛУ: инъекция ISG в шейку матки в 2-х точках на 3 и 9 часах условного циферблата в общем объеме 4 мл (подслизисто и в строму шейки матки). При близкофокусном свете произведена детекция СЛУ с использованием ISG. Выявлено свечение в ЛУ: области внутренней подвздошной артерии, прилежит к облитерированной пупочной артерии слева, аналогичный ЛУ обнаружен справа. Сопоставлены данные двух методов определения СЛУ - полное совпадение. С использованием гармонического скальпеля произведено их удаление. Отправлены на экспресс-цитологическое исследование согласно предлагаемому способу. Интраоперационная цитология №2392cito (фиг. 4) от 20.12.2022: в СЛУ слева отмечаются отдельные комплексы опухолевых клеток (5-7 опухолевых клеток в одном скоплении в цитологическом препарате не более 5 таких комплексов), справа в СЛУ опухолевых элементов нет. Произведена тазовая лимфаденэктомия с двух сторон. По результатам послеоперационной гистологии во всех исследованных 16-ти ЛУ, в том числе и СЛУ опухолевой ткани не обнаружено, ложноположительный результат.

На фиг. 4. Сигнальный лимфоузел, цитологические мазки-отпечатки. На фоне лимфоидных элементов разной степени зрелости одно скопление клеток с признаками полиморфизма, дискретные опухолевые клетки. Окраска: Лейкодиф 200, увеличение ×1000.

Таким образом, предлагаемый способ не требует больших материальных и временных затрат, имеет большую воспроизводимость и эффективность, а также позволяет по окончанию интраоперационного цитологического исследования СЛУ полностью сохранить его ткань для последующего планового гистологического и иммуногистохимического исследования. Предложенный способ может быть реализован в лечебных учреждениях со стандартным оборудованием в рамках рутинной клинической практики.

Источники информации, принятые во внимание при составлении описания:

1. Каприн А.Д., Старинский В.В., Шахзадова А.О., ред. Состояние онкологической помощи населению России в 2021 году. М.: МНИОИ им. П.А. Герцена - филиал ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России, 2022;

2. Kim С.Н., Soslow R.A., Park K.J., Barber E.L., Khoury-Collado F., Barlin J.N., Sonoda Y., Hensley M.L., Barakat R.R., Abu-Rustum N.R. (2013) Pathologic ultrastaging improves micrometastasis detection in sentinel lymph nodes during endometrial cancer staging. Int J Gynecol Cancer 23:964-970. https://doi.org/l 0.1097/IGC.0b01 ЗеЗ 182954da8;

3. Ferraioli, D., Chopin, N., Beurrier, F., Carrabin, N., Buenerd, A., & Mathevet, P. (2015). The incidence and clinical significance of the micrometastases in the sentinel lymph nodes during surgical staging for early endometrial cancer. International journal of gynecological cancer: official journal of the International Gynecological Cancer Society, 25(4), 673-680. https://doi.org/10.1097/IGC.0000000000000408;

4. Altin, D., Taskin, S., Tokgozoglu, N., Vatansever, D., Guler, A. H., Gungor, M., Tasci, Т., Turan, H., Kahramanoglu, I., Yalcin, I., Celik, C, Kose, F., Ortac, F., Arvas, M., Ayhan, A., & Taskiran, C. (2021). Can risk groups accurately predict non-sentinel lymph node metastasis in sentinel lymph node-positive endometrial cancer patients? A Turkish Gynecologic Oncology Group Study (TRSGO-SLN-004). Journal of surgical oncology, 123(2), 638-645. https://doi.org/l 0.1002/iso.26310;

5. Ballester, M., Dubernard, G., Lecuru, F., Heitz, D., Mathevet, P., Marret, H., Querleu, D., Golfier, F., Leblanc, E., Rouzier, R., & Darai, E. (2011). Detection rate and diagnostic accuracy of sentinel-node biopsy in early stage endometrial cancer: a prospective multicentre study (SENTI-ENDO). The Lancet. Oncology, 12(5), 469^∧176. https://doi.Org/l 0.1016/S1470-2045(11)70070-5;

6. Волченко H.H., Борисова O.B., Мельникова В.Ю., Ермолаева А.Г., Глухова Ю.К., Славнова Е.Н. Срочная морфологическая диагностика в онкологии. Онкология. Журнал им. П.А. Герцена. 2020;9(1):5-13. https://doi.org/10.17116/onkolog202090115;

7. Практические рекомендации по лекарственному лечению рака тела матки и сарком матки / В.М. Нечушкина, Л.А. Коломиец, О.А. Кравец [и др.] // Злокачественные опухоли. -2022. - Т. 12, №3S2-1. - С.260-275. - DOI 10.18027/2224-5057-2022-12-3s2-260-275. - EDN RVBJHF;

8. Kost'un, J., Pesta, M., Slama, J., Slunecko, R., Vlasak, P., Bouda, J., Novotny, Z., Topolcan, O., Kucera, R., Kulda, V., Houfkova, K., Berezovskiy, D., Bartakova, A., & Presl, J. (2019). One-step nucleic acid amplification vs ultrastaging in the detection of sentinel lymph node metastasis in endometrial cancer patients. Journal of surgical oncology, 119(3), 361-369. https://doi.org/10.1002/iso.25322;

9. Taskin, S., Varh, В., Altin, D., Takmaz, O., Vatansever, D., Ersoz, С.C, Turan, H., Bulutay, P., Zeren, H., Havare, S. В., Karabuk, E., Naki, M., Gtingor, M., Kose, F., Orta9, F., Arvas, M., Ayhan, A., & Taskiran, C. (2021). Comparison of two intraoperative examination methods for the diagnosis of sentinel lymph node metastasis in clinically early stage endometrial cancer: A Turkish Gynecologic Oncology Group Study (TRSGO-SLN-003). European journal of obstetrics, gynecology, and reproductive biology, 261, 72-77. https://doi.org/! 0.1016/i.ejogrb.2021.04.009;

10. Tanaka, Т., Miyamoto, S., Terada, S., Kogata, Y., Fujiwara, S., Tanaka, Y., Taniguchi, K., Komura, K., Yamamoto, K., Yamada, Т., & Ohmichi, M. (2020). The Diagnostic Accuracy of an Intraoperative Frozen Section Analysis and Imprint Cytology of Sentinel Node Biopsy Specimens from Patients with Uterine Cervical and Endometrial Cancer: a Retrospective Observational Study. Pathology oncology research: POR, 26(4), 2273-2279. https://doi.org/10.1007/sl2253-020-00822-2;

11. Slama, J., Dundr, P., Dusek, L., & Cibula, D. (2013). High false negative rate of frozen section examination of sentinel lymph nodes in patients with cervical cancer. Gynecologic oncology, 129(2), 384-388. https://doi.org/10.1016/i.vgyiio.2013.02.001;

12. Rau, T.T., Deppeler, M.V., Christe, L. et al. Pathological processing of sentinel lymph nodes in endometrial carcinoma - routine aspects of grossing, ultra-staging, and surgico-pathological parameters in a series of 833 lymph nodes. Virchows Arch 481, 421-432 (2022). https://doi.org/10.1007/s00428-022-03377-6);

13. Burg, L.C, Hengeveld, E.M., In't Hout, J., Bulten, J., Bult, P., & Zusterzeel, P.L.M. (2021). Ultrastaging methods of sentinel lymph nodes in endometrial cancer - a systematic review. International journal of gynecological cancer: official journal of the International Gynecological Cancer Society, 31(5), 744-753. https://doi.org/10.1136/iigc-2020-001964;

14. Интраоперационная срочная цитологическая диагностика в онкологии / Н.Н. Волченко, О.В. Борисова, В.Ю. Мельникова [и др.] // Новости клинической цитологии России. -2019. - Т. 23, №2. - С.5-11. - EDN AESEER;

15. Саевец В.В., Шаманова А.Ю., Семенов Ю.А., Чижовская А.В. Диагностические возможности и ограничения метода срочных интраоперационных патологоанатомических исследований в онкогинекологии. Уральский медицинский журнал. 2021; 20(2): 5-11. https://doi.org/10.52420/2071-5943-2021-20-2-5-ll;

16. Гамаюнов С.В., Кудрявцев Д.Д., Гривцова Л.Ю., Евдокимов Л.В., Куприянова Е.И., Жаворонкова Е.С., Иванов С.А., Каприн А.Д.; ФГБУ «НИМЦ радиологии» Минздрава России. Способ диагностики сторожевых лимфоузлов при раке желудка. Патент №2727251 РФ, СПК А61 В 5/418. №2020104452; Заявл. 31.01.2020; Опубл. 21.07.2020, Бюл. №21;

17. Котов М.А., Раджабова З.А., Кушнарев В.А., Артемьева А.С.; ФГБУ «НИМЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» МЗ РФ. Способ оценки метастатического поражения сигнального лимфатического узла при ранних формах плоскоклеточного рака полости рта. Патент №2732700 РФ, СПК G01N 33/48 (2020.05). №2019137153; Заявл. 19.11.2019; Опубл. 21.09.2020 Бюл. №27.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии и патологической анатомии, и может быть использовано при интраоперационной цитологической оценке статуса сигнального лимфатического узла (СЛУ) у больных раком эндометрия 1 клинической стадии. Для этого выполняют макроскопическое исследование лимфоузлов. Далее выполняют серийно-ступенчатые срезы лимфатического узла. Биологический материал разделяют на параллельные пластины толщиной 2 мм, при этом срезы лимфатического узла проводят в зависимости от его конфигурации: при «продольной» конфигурации лимфатического узла срез проводят перпендикулярно самой длинной оси лимфатического узла; при «овальной» или «корональной» конфигурации, когда оси лимфатического узла не отличаются по длине, срез проводят вдоль экваториальной плоскости лимфатического узла. С каждой стороны поверхности срезов делают 2-4 мазка-отпечатка в зависимости от размера лимфоузла. При наличии в структуре СЛУ плотных участков, дополнительно проводят соскоб с поверхности узла. Цитологические препараты окрашивают с помощью реагентов «Набора для быстрого окрашивания мазков крови Лейкодиф 200» в течение 15 сек. Препараты просматривают с помощью микроскопа Zeiss Axio Scope. А1 с консультированием не менее 2-х специалистов. При выявлении в цитологических препаратах скоплений опухолевых клеток числом от одного и более комплексов, а также в случаях обнаружения дискретных опухолевых клеток от двух до пяти СЛУ считают метастатически измененным. Изобретение позволяет оперативно интраоперационно оценить статус сигнальных лимфатических узлов без потери биологического материала и с возможностью его дальнейшего гистологического и иммуногистохимического исследования. 1 з.п. ф-лы, 4 ил.

1. Способ интраоперационной цитологической оценки статуса сигнального лимфатического узла (СЛУ) у больных раком эндометрия 1 клинической стадии, включающий выполнение серийно-ступенчатых срезов лимфатического узла с последующим окрашиванием и исследованием методом световой микроскопии, отличающийся тем, что вначале лимфоузлы исследуют макроскопически, далее при выполнении серийноступенчатых срезов биологический материал разделяют на параллельные пластины толщиной 2 мм, при этом срезы лимфатического узла проводят в зависимости от его конфигурации: при «продольной» конфигурации лимфатического узла срез проводят перпендикулярно самой длинной оси лимфатического узла; при «овальной» или «корональной» конфигурации, когда оси лимфатического узла не отличаются по длине, срез проводят вдоль экваториальной плоскости лимфатического узла, с каждой стороны поверхности срезов делают 2-4 мазка-отпечатка в зависимости от размера лимфоузла, цитологические препараты окрашивают с помощью реагентов «Набора для быстрого окрашивания мазков крови Лейкодиф 200» в течение 15 сек, препараты просматриваются с помощью микроскопа Zeiss Axio Scope. А1 с консультированием не менее 2-х специалистов, и при выявлении в цитологических препаратах скоплений опухолевых клеток числом от одного и более комплексов, а также в случаях обнаружения дискретных опухолевых клеток от двух до пяти СЛУ считают метастатически измененным.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что при наличии в структуре СЛУ плотных участков дополнительно проводят соскоб с поверхности узла.