КОМПОЗИЦИЯ GLP-1 ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ОЖИРЕНИЯ И РЕГУЛИРОВАНИЯ ВЕСА Российский патент 2025 года по МПК A61K38/26 C07K14/605 A61P3/04 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

[1] Данное изобретение относится к применению водной парентеральной фармацевтической композиции в разной дозировке, что содержит глюкагоноподобный пептид 1 (GLP-1), для лечения ожирения, регулирования веса и других состояний.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

[2] GLP-1 представляет собой инсулинотропный пептид, который действует на рецепторы GLP-1, распространенные по всему организму, в частности на панкреатические β-клетки, секретирующие инсулин. Этот тип гормонов может стимулировать секрецию инсулина, а также независимо стимулирует сигнальный путь инсулина, что приводит к эффекту глюкозной гипогликемии. Нестабильность GLP-1 проявляется в двух общих аспектах - физическом и химическом. Физическая нестабильность включает, например, денатурацию, поверхностную адсорбцию, агрегацию, осаждение, желатинирование и прочее, в то время, как химическая нестабильность включает, например, гидролиз, дезаминирование, окисление, рацемизацию, изомеризацию, β-элиминацию, обмен дисульфидными связями и т.д. Нестабильность не только сокращает срок годности, но также влияет на эффективность композиций GLP-1. Для решения проблемы нестабильности либо используют наночастицы для доставки GLP-1, либо модифицируют GLP-1 для улучшения стабильности. Однако доставка наночастицами увеличивает стоимость производства и сложность препарата, а модификация GLP-1 часто связана с повышенной токсичностью. Смотреть Lee, Basic Clin. Pharmacol. Toxicol. 118(3): 173-180 (2016).

[3] Соответственно, композиция, содержащая природную не модифицированную форму GLP-1 с повышенной стабильностью и улучшенной эффективностью при низкой дозировке, является весьма желательной. Технология и способы, раскрытые здесь, удовлетворяют эту потребность в данной области техники.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[4] В одном аспекте данное изобретение предоставляет способ лечения ожирения или избыточного веса путем введения субъекту, страдающему ожирением или избыточным весом, терапевтически эффективного количества композиции, содержащей пептид GLP-1 (например, GLP-1 (7-36), GLP-1(7-36)NH₂, GLP-1 (7-35) или GLP-1 (7-37)), терапевтически эффективное количество пептида GLP-1 составляет от около 10 мкг/кг до около 60 мкг/кг массы тела или от около 0,11 мг/сутки до около 0,66 мг/сутки (например, у человека). В некоторых вариантах реализации пептид GLP-1 представляет собой рекомбинантный пептид GLP-1 человека. В некоторых вариантах реализации пептид GLP-1 представляет собой химически синтезированный пептид GLP-1. В некоторых вариантах реализации композицию, содержащую пептид GLP-1 (композицию GLP-1), вводят путем парентеральной инъекции. В некоторых вариантах реализации композицию GLP-1 вводят путем внутривенной инъекции, внутримышечной инъекции или подкожной инъекции. В некоторых вариантах реализации композицию GLP-1 вводят в течение продолжительного периода времени, до 1 года, до 2 лет, до 3 лет, до 4 лет, до 5 лет, до 6 лет, до 7 лет, до 8 лет, до 9 лет, до 10 лет, до 11 лет, до 12 лет, до 13 лет, до 14 лет, до 15 лет, до 16 лет, до 17 лет, до 18 лет, до 19 лет, до 20 лет, до 21 года, до 22 лет, до 23 лет, до 24 лет, до 25 лет, до 26 лет, до 27 лет, до 28 лет, до 29 лет, до 30 лет или до 31 года при непрерывном или периодическом введении.

[5] В некоторых вариантах реализации терапевтически эффективное количество композиции GLP-1 для лечения ожирения или избыточного веса у субъекта женского пола ниже, чем у субъекта мужского пола. В некоторых вариантах реализации терапевтически эффективное количество GLP-1 для лечения ожирения или избыточного веса у субъекта женского пола составляет, по меньшей мере, 10%, по меньшей мере, 20%, по меньшей мере, 30%, по меньшей мере, 40%, по меньшей мере, 50%, по меньшей мере 60%, или, по меньшей мере, 70% ниже, чем при лечении ожирения или избыточной массы тела у субъекта мужского пола для достижения таких же или подобных терапевтических эффектов. В некоторых вариантах реализации терапевтически эффективное количество GLP-1 для лечения ожирения или избыточного веса у субъекта женского пола составляет от около 10 мкг/кг до около 60 мкг/кг массы тела или от около 0,11 мг/сутки до около 0,66 мг/сутки (например, у людей). В некоторых вариантах реализации терапевтически эффективное количество GLP-1 для лечения ожирения или избыточного веса у субъекта мужского пола составляет от около 30 мкг/кг до около 60 мкг/кг массы тела, от около 0,33 мг/сутки до около 0,66 мг/сутки (например, у людей).

[6] В другом аспекте изобретение относится к способу регулирования массы тела путем введения субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества композиции, содержащей GLP-1 (7-36) или GLP-1 (7-36)NH₂, предпочтительно рекомбинантный GLP-1 (7-36) человека или GLP-1 (7-36)NH₂, терапевтически эффективное количество композиции GLP-1 составляет от около 10 мкг/кг до около 60 мкг/кг массы тела, или от около 0,11 мг/сутки до около 0,66 мг/сутки (например, у человека). В некоторых вариантах реализации пептид GLP-1 представляет собой химически синтезированный пептид GLP-1. В некоторых вариантах реализации композицию GLP-1 вводят путем парентеральной инъекции. В некоторых вариантах реализации композицию GLP-1 вводят путем внутривенной инъекции, внутримышечной инъекции или подкожной инъекции. В некоторых вариантах реализации композицию GLP-1 вводят в течение продолжительного периода времени, до 1 года, до 2 лет, до 3 лет, до 4 лет, до 5 лет, до 6 лет, до 7 лет, до 8 лет, до 9 лет, до 10 лет, до 11 лет, до 12 лет, до 13 лет, до 14 лет, до 15 лет, до 16 лет, до 17 лет, до 18 лет, до 19 лет, до 20 лет, до 21 года, до 22 лет, до 23 лет, до 24 лет, до 25 лет, до 26 лет, до 27 лет, до 28 лет, до 29 лет, до 30 лет или до 31 года при непрерывном или периодическом применении. В некоторых вариантах реализации при применении композиции GLP-1 потеря массы тела субъекта составляет менее чем 100%, менее чем 95%, менее чем 90%, менее чем 85%, менее чем 80% или менее чем 75% веса тела у субъекта, получающего композицию GLP-1. В некоторых вариантах реализации терапевтически эффективное количество GLP-1 для регулирования веса у субъекта женского пола составляет от около 10 мкг/кг до около 60 мкг/кг массы тела или от около 0,11 мг/сутки до около 0,66 мг/сутки. В некоторых вариантах реализации терапевтически эффективное количество GLP-1 для регулирования массы тела у субъекта мужского пола составляет от около 30 мкг/кг до около 60 мкг/кг массы тела или от около 0,33 мг/сутки до около 0,66 мг/сутки.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

[7] На Фиг. 1 продемонстрирован показатель остаточного содержимого желудка по углеродному порошку у самцов и самок крыс, получивших различные дозировки Бейнаглутида, по сравнению с контрольными группами, что получили только буфер или лираглутид.

[8] На Фиг. 2 продемонстрирован показатель продвижения углеродного порошка в тонком кишечнике самцов и самок крыс, получивших различные дозировки Бейнаглутида, по сравнению с контрольными группами, что получили только буфер или лираглутид.

[9] На Фиг. 3 продемонстрирована экспериментальная схема лечения ожирения у обезьян Cynomolgus. Четыре обезьяны Cynomolgus с индуцированным диетарным ожирением, были разделены на две лечебные группы, в каждой из которых был один самец обезьяны и одна самка обезьяны. В течение 1-й недели исследования потребление пищи, массу тела, ИМТ и состав тела каждого животного измеряли и регистрировали в качестве исходных показателей. В течение периода лечения (с 2-й по 7-ю неделю) животные Группы 1 получали подкожное введение отрицательного контроля в первые три недели (с 2-й по 4-ю неделю) и Бейнаглутида во вторые три недели (с 5-й по 7-ю неделю) соответственно. Животные Группы 2 получали подкожное введение Бейнаглутида в первые три недели (с 2-й по 4-ю неделю) и отрицательного контроля во вторые три недели (с 5-й по 7-ю неделю) соответственно. Введение Бейнаглутида или отрицательного контроля было остановлено на 8-й неделе для обеих групп. Эффективность и обратимость лечения Бейнаглутидом оценивали на основе потребления пищи, массы тела, ИМТ и состава тела на 4-й, 7-й и 8-й неделях по сравнению с исходными уровнями.

[10] Фиг. 4А-4С демонстрируют, что лечение Бейнаглутидом снижало потребление пищи у обезьян, страдающих ожирением. Фиг. 4А демонстрирует ежедневное потребление калорий каждой обезьяной Cynomolgus в Группе 1. Фиг. 4В демонстрирует ежедневное потребление калорий каждой обезьяной Cynomolgus в Группе 2. На Фиг. 4С продемонстрировано среднее еженедельное потребление пищи для каждого животного до и после лечения Бейнаглутидом. До лечения: Группа 1, с 1-й по 4-ю неделю и Группа 2, 1-я неделя; во время лечения: Группа 1, с 5-й по 7-ю неделю и Группа 2, с 2-й по 4-ю неделю. Во время лечения среднее еженедельное потребление пищи каждым животным было значительно снижено.

[11] Фиг. 5А-5В демонстрируют снижение массы тела обезьян с ожирением. Фиг. 5А демонстрирует процент изменения массы тела каждого животного в течение 8-недельного периода исследования. Лечение Бейнаглутидом показано сплошными линиями, а отрицательный контроль - пунктирными линиями. Фиг. 5В демонстрирует массу тела каждого животного до и после лечения Бейнаглутидом. Все группы животных показали значительную потерю массы тела после лечения Бейнаглутидом (n=4).

[12] Фиг. 6А-6С демонстрируют влияние Бейнаглутида в комбинации с глипизидом или метформином на субъекты исследования. На Фиг. 6А показано изменение индекса массы тела на 12-й неделе для экспериментальной группы 5А. На Фиг. 6В показаны изменения индекса массы тела в течение 2-й по 12-ю недели испытания 5В (четыре группы данных для каждой дозы, показывающие индекс массы тела в течение 2 недель, 4 недель, 8 недель и 12 недель слева направо). Фиг. 6С представляет собой график, показывающий хронологические изменения массы тела во время испытания у пациентов с избыточной массой тела и ожирением в испытании 5С.

[13] На Фиг. 7 продемонстрирован показатель остаточного содержимого желудка по углеродному порошку у самцов и самок крыс, получивших различные дозировки Бейнаглутида от 10 мкг/кг до 60 мкг/кг, по сравнению с контрольной группой, что получила только буфер.

[14] На Фиг. 8 продемонстрирован показатель продвижения углеродного порошка в тонком кишечнике самцов и самок крыс, получивших различные дозировки Бейнаглутида от 10 мкг/кг до 60 мкг/кг, по сравнению с контролем, содержащим только буфер.

[15] На Фиг. 9 показано изменение массы тела мышей на диете с высоким содержанием жира и на диете с низким содержанием жира в течение 15 недель.

[16] На Фиг. 10 показано потребление пищи мышами на диете с высоким содержанием жира и на диете с низким содержанием жира в течение 15 недель.

[17] На Фиг. 11 показаны результаты внутрибрюшинного теста на толерантность к глюкозе (IPGTT) в конце специальной диеты для подтверждения успешной индукции инсулинорезистентности и ожирения.

[18] На Фиг. 12А продемонстрирован показатель остаточного содержимого желудка по углеродному порошку у самцов мышей DIO, получивших различные дозировки Бейнаглутида от 15 мкг/кг до 100 мкг/кг, по сравнению с контролем, содержащим только буфер. На Фиг. 12В продемонстрирован показатель продвижения углеродного порошка в тонком кишечнике самцов мышей DIO, получивших различные дозировки Бейнаглутида от 15 мкг/кг до 100 мкг/кг, по сравнению с контролем, содержащим только буфер. *Р<0,05, **Р<0,1.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[19] Оказалось неожиданным то, что при значительно более низкой дозе композиция GLP-1, описанная здесь, достигает фармакокинетики, которая существенно отличается от композиции лираглутида для лечении избыточного веса и ожирения. Кроме того, терапевтически эффективное количество композиции GLP-1 для субъекта женского пола значительно ниже, чем терапевтически эффективное количество композиции GLP-1 для субъекта мужского пола для достижения таких же или сходных терапевтических эффектов.

[20] Всемирная Организация Здравоохранения (ВОЗ) внесла ожирение в список болезней с 1948 года. С 1980 года показатель распространенности ожирения во всем мире увеличился более чем вдвое. Ng et al., Lancet. 384: 766-781 (2014). Избыточный вес или ожирение описывается как ненормальное или чрезмерное накопление жира в организме из-за длительного потребления энергетических ресурсов, что превышает расход энергии. Избыточный вес и ожирение являются значительными факторами риска для неинфекционных заболеваний, таких как сердечно-сосудистые заболевания, диабет 2-го типа (T2DM), аномалии скелетных мышц и некоторые виды рака. Van Bloemendaal et al., J. Endocrinol. 221: T1-T16 (2014). Эти заболевания и состояния, связанные с избыточным весом или ожирением, ложатся серьезным финансовым бременем на систему государственного здравоохранения.

[21] Нативная форма GLP-1, что секретируется кишечными L-клетками после приема пищи, является сильным пептидным стимулятором секреции инсулина. GLP-1 является потенциальной терапией для лечения диабета 2-го типа. Hoist, Physiol. Rev. 87: 1409-1439 (2007). GLP-1 имеет две активные формы, GLP-1 (7-36)-NH2 и GLP-1 (7-37). При поступлении в кровоток GLP-1 быстро расщепляется дипептидилпептидазой-4 (DPP4), поэтому период полураспада очень короткий и составляет около 2 минуты. Kieffer et al., Endocrinology 136: 3585-3596 (1995). Было обнаружено, что, помимо воздействия на уровень сахара в крови, GLP-1 и его аналоги оказывают влияние на снижение массы тела, замедление опорожнения желудка и повышение чувства сытости. Monami et al., Exp. Diabetes Res. 2012: 672658 (2012). В декабре 2014 года FDA одобрило Saxenda (лираглутид 3 мг), который является первым применением NDA для аналогов GLP-1 при долгосрочном регулировании веса, в дополнение к низкокалорийной диете и повышением физической активности для взрослых страдающих ожирением, что имеют по крайней мере одно заболевание или состояние, связанное с избыточным весом, например, ожирение 2-го типа.

[22] В контексте данного изобретения фраза «терапевтически эффективное количество» или «эффективное количество» фармацевтической композиции, содержащей GLP-1, как используется в данном документе, представляет собой количество фармацевтической композиции, которое обеспечивает желаемый терапевтический эффекту субъекта, как лечения ожирения или избыточного веса, регулирования веса, индукции потери веса и т.д. В некоторых вариантах реализации терапевтически эффективное количество представляет собой количество фармацевтической композиции, которое дает максимальный терапевтический эффект. В других вариантах реализации терапевтически эффективное количество дает терапевтический эффект, который меньше максимального терапевтического эффекта. Например, терапевтически эффективное количество может представлять собой количество, которое оказывает терапевтический эффект, избегая при этом одного или нескольких побочных эффектов, связанных с дозировкой с максимальным терапевтическим эффектом. В некоторых вариантах реализации терапевтически эффективное количество представляет собой минимальное количество, которое оказывает терапевтический эффект. Терапевтически эффективное количество для конкретной композиции будет варьироваться в зависимости от множества факторов, включая, помимо прочего, характеристики терапевтической композиции (например, активность, фармакокинетика, фармакодинамика и биодоступность), физиологическое состояние субъекта (например, возраст, масса тела, пол, тип и стадия заболевания, история болезни, общее физическое состояние, чувствительность к данной дозировке и другим присутствующим лекарствам), природу любых фармацевтически приемлемых носителей, наполнителей и консервантов в композиции, а также метод введения. Специалист в области медицины и фармакологии сможет определить терапевтически эффективное количество путем рутинных экспериментов, а именно, путем мониторинга реакции субъекта на введение фармацевтической композиции и соответствующей корректировки дозировки. Дополнительные рекомендации см., например, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22^nd Edition, опубликовано Pharmaceutical Press, London, 2012, и Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 12^th Edition, опубликовано McGraw-Hill, New York, NY, 2011, содержание которых включено в данный документе полном объеме посредством ссылки.

[23] В некоторых вариантах реализации терапевтически эффективное количество фармацевтической композиции, содержащей GLP-1, раскрытой в данном документе, находится в диапазоне от около 10 мкг/кг до около 60 мкг/кг массы тела активного ингредиента, GLP-1, или составляет от около 0,11 мг/сутки до около 0,66 мг/сутки GLP-1 (например, у человека). В некоторых вариантах реализации терапевтически эффективное количество фармацевтической композиции, содержащей GLP-1, раскрытой в данном документе, дозировка активного ингредиента, GLP-1, составляет для субъекта мужского пола от около 30 мкг/кг до около 60 мкг/кг массы тела или составляет от около 0,33 мг/сутки до около 0,66 мг/сутки GLP-1 (например, у человека). В некоторых вариантах реализации терапевтически эффективное количество фармацевтической композиции, содержащей GLP-1, раскрытой в данном документе, дозировка активного ингредиента, GLP-1, для субъекта женского пола составляет от около 10 мкг/кг до около 60 мкг/кг массы тела или составляет от около 0,11 мг/сутки до около 0,66 мг/сутки GLP-1 (например, у человека).

[24] Используемые в данном документе термины «лечить», «лечение» и «лечение», относятся к частичному или полному облегчению состояния, предотвращению состояния, уменьшению вероятности возникновения или повторения состояния, замедлению прогрессирования или развития состояния, устранение, уменьшение или замедление развития одного или нескольких симптомов, связанных с состоянием.

[25] Используемый здесь термин «субъект» относится к млекопитающему, предпочтительно, человеку. «Субъект, нуждающийся в этом» относится к субъекту, у которого диагностировано ожирение или избыточный вес, кто подвержен риску прибавки в весе или тот, кто желает контролировать прибавку в весе или индуцировать потерю веса. Фразы «субъект» и «пациент» могут взаимозаменяемо использоваться в этом документе.

[26] Используемый здесь термин «содержащий» в отношении композиции или способа означает, что композиция или способ включает, по меньшей мере, перечисленные элементы. Термин «состоящий по существу из» означает, что композиция или способ включает перечисленные элементы и может дополнительно включать один или несколько дополнительных элементов, которые не оказывают существенного влияния на новые и основные характеристики композиции или способа. Например, композиция, состоящая по существу из перечисленных элементов, может включать эти перечисленные элементы плюс один или несколько микроэлементов из метода выделения и очистки, фармацевтически приемлемые носители, такие как забуференный фосфатом физиологический раствор, консерванты и т.д. Термин «состоящий из» означает, что композиция или способ включают только перечисленные элементы. Варианты осуществления, определенные каждым из переходных терминов, находятся в пределах объема этого изобретения.

Фармацевтическая композиция, содержащая GLP-1

[27] В некоторых вариантах реализации композиция GLP-1, раскрытая в данном документе, содержит рекомбинантный пептид GLP-1 (7-36) человека, имеющий последовательность: His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (SEQ ID NO: 1), например, в данном изобретении обозначается как Бейнаглутид. Бейнаглутид имеет молекулярную формулу C₁₄₉H₂₂₅N₃₉O₄₆ и молекулярный вес 3298,7. Этот пептид по существу такой же, как и активная форма циркулирующего GLP-1, за исключением эндогенного амидирования, при котором NH₂ в нативной форме заменяется группой ОН в рекомбинантном пептиде. Бейнаглутид включает С-концевую свободную карбоксильную группу, аналогичную удлиненному глицином GLP-1 (7-37). В других вариантах реализации GLP-1 (7-35) или GLP-1 (7-37) могут быть использованы в раскрытой технологии. Последовательности GLP-1 (7-35) и GLP-1 (7-37) являются следующими:

His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly (SEQ ID NO: 2) и

His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (SEQ ID NO: 3).

[28] В клинических фармакокинетических исследованиях на моделях обезьян Бейнаглутид проявил период полураспада около 15-30 минут при подкожном введении. В III фазе клинических испытаний в Китае для лечения диабета 346 пациентов с диабетом, которые получали Бейнаглутид (0,2 мг, TID) в течение 12 недель, продемонстрировали значительную потерю массы тела, а также снижение уровня гликированного гемоглобина в крови по сравнению с контрольной группой из 113 пациентов. Наиболее распространенными побочными эффектами для этих пациентов были тошнота и рвота, однако эти побочные эффекты были временными и сильнее, чем при других подобных терапиях аналогичных GLP-1.

[29] Бейнаглутид может быть выделен после экспрессии в E.coli и впоследствии превращен в инъекционную форму. В фармацевтической композиции по данному изобретению пептид GLP-1 имеет концентрацию от около 0,1 до около 20 мг/мл, от около 0,2 до около 10 мг/мл, от около 0,05 до около 0,5 мг/мл, от около 0,5 до около 5 мг/мл, от около 1 до около 5 мг/мл или от около 2 до около 4 мг/мл. Если специально не указано иное, «около» относится к разнице от заявленного числового значения в диапазоне ±10%. Например, в препарате, раскрытом в данном документе концентрация GLP-1 составляет до 2 мг/мл и может храниться в темноте в течение около 2 лет при 2-8°C.

[30] Фармацевтическая композиция по данному изобретению имеет значение рН от около 3,5 до около 5,0, от около 3,5 до около 4,5, от около 3,6 до около 4,2, от около 3,6 до около 4,1, от около 3,6 до около 4,0 или от около 3,6 до около 3,9. В этом диапазоне рН стабильность композиции GLP-1 улучшается, и композицию можно хранить в темноте в течение около 2 лет или более при температуре от 2 до 8°C.

[31] Композиция GLP-1, раскрытая в данном документе, может содержать одну или несколько буферных солей для поддержания желаемого диапазона рН композиции, включая ацетат натрия, уксусную кислоту и т.д. Дополнительные ингредиенты для композиции GLP-1 могут включать один или несколько консервантов (например, фенолы и т.д.), изотонический агент (например, маннит, пропиленгликоль и т.д.) и усилитель растворения (например, пропиленгликоль и т.д.).

[32] В некоторых вариантах реализации Бейнаглутид можно вводить пациентам, страдающим избыточным весом или ожирением, путем подкожной инъекции для снижения массы тела. Также могут быть использованы другие подходящие пути введения. Влияние Бейнаглутида на контролирование или снижение массы тела продемонстрированы на рабочих примерах.

Профилактическое и/или терапевтическое использование композиции GLP-1

[33] Данное изобретение обеспечивает использование фармацевтической композиции, содержащей GLP-1, для лечения или профилактики различных состояний, включая ожирение, булимию и/или избыточный вес. Это изобретение также относится к применению фармацевтической композиции, содержащей GLP-1, для регулирования веса, замедления опорожнения желудка и/или улучшения чувства сытости.

[34] Согласно стандарту, опубликованному Центрами по Контролю и Профилактике Заболеваний (CDC) и Всемирной Организацией Здравоохранения (ВОЗ), ИМТ ниже 18,5 указывает на недостаточный вес, ИМТ от 18,5 до 24,9 указывает на нормальный или здоровый вес, ИМТ от 25,0 до 29,9 указывает на избыточный вес, и ИМТ 30,0 или выше указывает на ожирение.

Лечение ожирения

[35] В одном аспекте данного документа предложен способ лечения ожирения, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей GLP-1, терапевтически эффективное количество активного ингредиента, GLP-1, находится в диапазоне от около 10 мкг/кг до около 60 мкг/кг массы тела или составляет от около 0,11 мг/сутки до около 0,66 мг/сутки GLP-1 (например, у человека).

Лечение булимии

[36] В одном аспекте данного документа предложен способ лечения булимии, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей GLP-1, терапевтически эффективное количество активного ингредиента, GLP-1, находится в диапазоне от около 10 мкг/кг до около 60 мкг/кг массы тела или составляет от около 0,11 мг/сутки до около 0,66 мг/сутки GLP-1 (например, у человека).

Регулирование веса тела

[37] В другом аспекте данного документа предложен способ регулирования массы тела у субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей GLP-1, так, чтобы индекс массы тела (ИМТ) уменьшался на, по меньшей мере, 0,5%, по меньшей мере, 1%, по меньшей мере, 2% или, по меньшей мере, 3%, терапевтически эффективное количество активного ингредиента, GLP-1, находится в диапазоне от приблизительно 10 мкг/кг до приблизительно 60 мкг/кг массы тела или составляет от приблизительно 0,11 мг/сутки до приблизительно 0,66 мг/сутки GLP-1 (например, у человека). Альтернативно, в данном документе представлен способ регулирования массы тела у субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей GLP-1, так, чтобы масса тела уменьшалась на, по меньшей мере, 2%, по меньшей мере, 5%, по меньшей мере, 10%, по меньшей мере 15%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 25%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 35%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 45% или по меньшей мере 50%, терапевтически эффективное количество активного ингредиента, GLP-1, составляет в диапазоне от около 10 мкг/кг до около 60 мкг/кг массы тела, или составляет от около 0,11 мг/сутки до около 0,66 мг/сутки GLP-1 (например, у человека).

[38] В некоторых вариантах реализации регулирование веса тела включает в себя индукцию потери веса. В некоторых вариантах реализации масса тела субъекта, получающего композицию GLP-1, составляет менее чем 100%, менее чем 95%, менее чем 90%, менее чем 85%, менее чем 80%, менее чем 75% массы тела субъекта, который не получает композицию GLP-1.

Замедление опорожнения желудка

[39] В другом аспекте данного документа предложен способ замедления опорожнения желудка, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей GLP-1, терапевтически эффективное количество активного ингредиента, GLP-1, находится в диапазоне от около 10 мкг/кг до около 60 мкг/кг массы тела или составляет от около 0,11 мг/сутки до около 0,66 мг/сутки GLP-1 (например, у человека).

Дозировка GLP-1

[40] Для достижения такого же или сходного терапевтического эффекта при различных состояниях, раскрытых в данном документе, дозировка композиции GLP-1 значительно ниже, чем в фармацевтической композиции, что содержит лираглутид. Кроме того, минимальная дозировка GLP-1 для проявления терапевтического эффекта у субъекта женского пола значительно ниже, чем минимальная дозировка GLP-1 для проявления такого же или сходного терапевтического эффекта у субъекта мужского пола. В некоторых вариантах реализации минимальная дозировка GLP-1 для субъекта женского пола составляет около 95%, около 90%, около 85%, около 80%, около 75%, около 70%, около 65%, около 60%, около 55%, около 50%, около 45%, около 40%, около 35%, около 30% или около 25% минимальной дозировки GLP-1 для субъекта мужского пола для достижения таких же или подобных терапевтических эффектов. Как правило, дозировка для человека составляет около 1/12 от дозировки для мышей, около 1/6 от дозировки для крыс или около 1/3 от дозировки для обезьян. В некоторых вариантах реализации в настоящем документе представлен продукт, содержит единичную дневную дозировку 0,1 мг-0,4 мг пептида GLP-1.

[41] Следующие примеры предоставлены для лучшей иллюстрации вариантов реализации и не должны интерпретироваться как ограничение объема любого заявленного варианта реализации. Конкретные материалы упомянуты с иллюстративной целью и не предназначены для ограничения изобретения. Специалист в данной области может разработать эквивалентные средства или реагенты, не используя изобретательский потенциал и не выходя за рамки объема изобретения. Следует понимать, что описанные в данном документе процедуры могут иметь множество вариаций, оставаясь при этом в пределах настоящего изобретения. Авторы изобретения предполагают, что такие вариации включены в объем изобретения.

Пример 1

[42] Этот пример демонстрирует влияние инъекционной формы Бейнаглутида на замедление опорожнения желудка. Инъекционная форма Бейнаглутида содержит Бейнаглутид с SEQ ID NO: 1 в количестве 4,2 мг (42000 ед.) в 2,1 мл.

[43] Пятьдесят 8-недельных крыс Sprague-Dawley (SD) с массой тела от 248 до 308 г (самцы) или от 184 до 218 г (самки) находились на адаптивном вскармливании в течение 7 дней, после взвешивания животные были разделены на 5 групп: контроль, содержащий только буфер, низкая дозировка Бейнаглутида (15 мкг/кг), средняя дозировка Бейнаглутида (30 мкг/кг), высокая дозировка Бейнаглутида (60 мкг/кг) и контроль лираглутидом (270 мкг/кг). В каждой группе было 10 крыс, с равным количеством самцов и самок. Хвосты крыс были помечены следующим образом:

[44] Выбор дозировки рассчитывается на основе дозировки для человека. Клиническая дозировка для человека оценивается около в 0,4 мг/инъекция, одна инъекция в день, что соответствует 36 мкг/кг дозировки для крыс, рассчитанной на основе площади поверхности тела. Соответственно, крыс тестировали при средней дозировке 30 мкг/кг, низкой дозировке при 50% средней дозировке и высокой дозировке при 200% средней дозировке. Клиническая дозировка лираглутида для лечения ожирения у человека составляет 3,0 мг/инъекция, одна инъекция в день, что соответствует 270 мкг/кг дозировке для крыс, рассчитанной на основе площади поверхности тела.

[45] Инъекционная форма Бейнаглутида была предоставлена Shanghai Benemae Pharmaceutical Corporation (Benemae), которая имела вид бесцветной прозрачной жидкости в 2,1 мл, содержащей 4,2 мг (42000 U) Бейнаглутида. Инъекционную форму Бейнаглутида хранили в темноте при 2-8°C. Контрольный буфер представляет собой клиническое плацебо инъекционной формы Бейнаглутида, также поставляемого Benemae в виде бесцветной прозрачной жидкости и хранен при 2-8°C. Положительным контролем служила инъекционная форма лираглутида, которая хранилась в темном закрытом состоянии. Крыс выращивали и содержали в Центре Лабораторных Животных Шанхайского Университета Традиционной Китайской Медицины.

[46] Инъекционные формы были приготовлены и разбавлены во время эксперимента следующим образом:

[47] Крыс не кормили в течение 16 часов, давая им только воду. Перед разделением на группы крыс взвешивали и записывали вес (нумерация клеток и маркировка хвостов). Исходя из массы тела, крысы в случайном порядке были разделены на 5 групп, по 10 в каждой группе, с равным количеством самцов и самок. После группирования крысы были помечены, как показано в Таблице 1.

[48] Крысам вводили подходящее количество Бейнаглутида или лираглутида в зависимости от их массы тела путем подкожной инъекции. В начале были проведены инъекции самцам, а затем самкам крыс в порядке нумерации групп: 101, 201, 301, 401, 501, 102, 202, 302, 402, 502 и так далее. Инъекционные формы вводили крысам, путем натягивания кожи в области спины, помещая иглу шприца подкожно и вводя инъекцию. При извлечении иглы участок инъекции прижимали рукой, чтобы избежать вытекания препарата. Объем инъекции составляет около 0,1 мл/100 г веса тела.

[49] Через пять минут после подкожной инъекции проводили желудочный зонд с использованием 5% суспензии углеродного порошка (в 2% растворе карбоксиметилцеллюлозы) в количестве 1,5 мл/100 г массы тела. Через 15 минут крыс умерщвляли, брюшную полость вскрывали и моментально накладывали лигатуру на кардиальный отдел и привратник желудка. Желудок вытирали насухо фильтровальной бумагой и взвешивали для записи общего веса желудка. Затем содержимое желудка удаляли и желудок взвешивали для записи веса нетто. Было измерено соответствующее расстояние от пилорического сфинктера до передней части суспензии углеродного порошка и до дистального конца толстой кишки.

- расстояние продвижения углеродного порошка в кишечнике (см) = расстояние от привратника до проксимального конца углеродного порошка;

- масса углеродного порошка внесенного через зонд = концентрация суспензии углеродного порошка X объем;

- показатель продвижения углеродного порошка (%) = расстояние продвижения углеродного порошка в кишечнике (см)/полная длина кишечника (см) X 100%;

- показатель остаточного содержимого желудка (%) = (общий вес желудка - вес нетто желудка)/масса углеродного порошка внесенного через зонд X 100%.

[50] Как показано в Таблицах 3 и 4 и на Фиг. 1 и 2, группа самцов крыс, которым вводили высокую дозировку Бейнаглутида, и группы самок крыс, которым вводили низкую дозировку, среднюю дозировку и высокую дозировку Бейнаглутида, демонстрировали более высокий показатель остаточного содержимого желудка, по сравнению с контрольными группами, что получили только буфер, разница между группой Бейнаглутида и контрольной группой была статистически значимой. Группы самцов крыс, которым вводили среднюю дозировку и высокую дозировку Бейнаглутида, и группы самок крыс, которым вводили низкую дозировку, среднюю дозировку и высокую дозировку Бейнаглутида, демонстрировали более низкий показатель продвижения углеродного порошка, по сравнению с контрольными группами, что получили только буфер. Разница между группой Бейнаглутида и контрольной группой была статистически значимой. Хотя лираглутид показал определенный уровень ингибирования опорожнения желудка и показателя продвижения углеродного порошка, разница между группой, получавшей лираглутид, и контрольной группой не была статистически значимой. Соответственно, Бейнаглутид, но не лираглутид, может эффективно замедлять опорожнение желудка у крыс.

Пример 2

[51] Этот пример демонстрирует активационный эффект Бейнаглутида на сигнальный путь рецептора GLP-1.

[52] Рецептор GLP-1 принадлежит к семейству рецепторов, сопряженных с G-белком и имеет семь трансмембранных доменов. Эффекты Бейнаглутида и положительного контроля GLP-1 (7-36)-NH₂ на рецептор GLP-1 анализировали с использованием клеток СНО-K1, стабильно экспрессирующих рецептор GLP-1, посредством флуоресцентного определения внутриклеточных уровней кальция. Бейнаглутид индуцировал внутриклеточный поток кальция в клетках СНО-K1 в зависимости от концентрации. Бейнаглутид и положительный контроль GLP-1(7-36)-NH₂ демонстрировали сходные значения ЕС50 при 118±48 и 141±18 нМ соответственно. И Бейнаглутид, и GLP-1 (7-36)-NH₂ полностью продемонстрировали активационный эффект на сигнальный путь рецептора GLP-1.

Пример 3

[53] Этот пример демонстрирует влияние Бейнаглутида на уровень сахара в крови у животных на моделях нормальных животных и животных с диабетом.

[54] Бейнаглутид был способен снизить индуцированный глюкозой высокий уровень сахара в крови у мышей и кроликов с нормальным гликемическим индексом (GI), а также уменьшить повышение сахара в крови, вызванное аллоксаном и стрептозотоцином у мышей и крыс с нормальным GI, демонстрируя свое влияние на снижение уровня сахара в крови. У животных с повышенным уровнем сахара в крови был нормальный GI, и когда уровень сахара в крови снижался, уровень инсулина значительно повышался и коррелировал со снижением уровня сахара в крови. Однако у животных с нормальным уровнем сахара в крови Бейнаглутид не вызывал снижения уровня сахара в крови и не повышал уровень инсулина в крови, что указывает на то, что Бейнаглутид стимулирует секрецию инсулина в зависимости от концентрации глюкозы.

Пример 4

[55] Этот пример демонстрирует влияние Бейнаглутида на снижение массы тела у обезьян Cynomolgus с индуцированным диетарным ожирением.

[56] Инъекционную форму Бейнаглутида вводили подкожно обезьянам Cynomolgus с индуцированным диетарным ожирением, два или три раза в день в течение трех недель, чтобы оценить влияние на снижение аппетита и потерю массы тела, а также на непрерывность эффектов и обратимость после прекращения лечения.

[57] В этом исследовании использовали двух самцов (10,5-11,5 кг) и двух самок (6,0-6,5 кг) обезьян Cynomolgus в возрасте 14-19 лет с ожирением, имеющих ИМТ более 40 кг/м². Как показано на Фиг. 3, это исследование включало отрицательный контроль (только буфер) и собственный контроль субъекта, несколько возрастающих доз и перекрестное введение. Обезьяны поделены на две группы по возрасту, полу, массе тела и ИМТ, в каждой группе один самец и одна самка.

[58] Исследование включало три периода: исходный период (первая неделя), период лечения (от второй недели по седьмую неделю) и период восстановления (восьмая неделя). После того как обезьяны адаптировались к режиму приема пищи в течение по меньшей мере 30 дней, массу тела, ИМТ и состав тела каждого животного определяли на 7-й день первого исходного периода. Эти показатели были использованы в качестве исходных для оценки эффективности Бейнаглутида.

[59] В течение периода лечения (вторая-седьмая недели) обезьянам Группы 1 подкожно вводили пустой контроль три раза в день, начиная с 2-й по 4-ю недели с введением инъекционной формы Бейнаглутида два раза в день начиная с 5-й по 7 недели. Обезьянам Группы 2 подкожно вводили инъекционную форму Бейнаглутида три раза в день с 2-й по 4-ю неделю, холостой контроль два раза в день с 5-й по 7-ю неделю. Чтобы улучшить переносимость Бейнаглутида и определить максимальную дозировку переносимости Бейнаглутида, дозировку Бейнаглутида постепенно увеличивали в ходе исследования. Животные Группы 2 подвергались инъекции три раза в день в дозировке 10 мкг/кг каждая в течение 2-й недели, три раза в день в дозировке 20 мкг/кг каждая в течение 3-й недели и три раза в день в дозировке 40 мкг/кг каждый раз в течение первых трех дней 4-й недели. Из-за наблюдаемой тяжелой анорексии дозировка уменьшалась до 20 мкг/кг каждый раз в течение оставшихся 4 дней 4-й недели, как показано в Таблице 6.

[60] Дозировку для животных Группы 1 с 5-й по 7-ю неделю определяли на основании дозировки для животных Группы 2 с 2-й по 4-ю неделю. Животные Группы 1 подвергались инъекции два раза в день в дозировке 10 мкг/кг каждая в течение 5-й недели, два раза в день в дозировке 20 мкг/кг каждая в течение 6-й недели и два раза в день в дозировке 20 мкг/кг каждая в течение 7-й недели (та же дозировка, что и для 6-й недели). В течение 6-недельного периода лечения в конце каждой недели измеряли массу тела и длину от темени до крестца у каждого животного. Содержание жира в организме измеряли на 4-й и 7-й неделе. Инъекции не проводились в течение 8-й недели.

[61] В течение восьми недель этого исследования фиксировалось количество потребляемой еды каждым животным во время каждого приема пищи. Влияние Бейнаглутида на потребление пищи, массу тела и ИМТ Группой 1 были оценены путем сравнения с исходными уровнями в течение 4-й и 7-й недели. Влияние Бейнаглутида на потребления пищи, массы тела и ИМТ Группой 2 были оценены путем сравнения с исходными уровнями в течение 1-й и 4-й недели.

[62] Бейнаглутид разводили за 30 минут до инъекции от 2 мг/мл до 0,2, 0,4 или 0,8 мг/мл для инъекции в объеме 0,05 мл/кг. Животным давали трехразовое питание, включая корм для обезьян утром (около 8:30) и днем (около 16:00), а в промежутке - фрукты (около 14:00). Каждому животному давали по 150 г корма для обезьян. Через полчаса, если весь корм для обезьян был съеден, животному давали дополнительные 50 г корма для обезьян. Животным давали около один час для завершения каждого приема пищи, а остаток взвешивали и регистрировали для расчета потребления пищи. Каждое животное обеспечивалось фруктами с одинаковой калорийностью на основании Таблицы 7.

[63] Вес тела измеряли один раз в неделю, а длину от темени до крестца измеряли в конце 1-й, 4-й и 7-й недели, после сканирования с использованием двухэнергетической рентгеновской абсорбциометрии (DEXA). Животных анестезировали путем внутримышечного введения 0,02 мл/кг Shumianning. Пока животные пребывали на одной стороне тела, их измеряли от макушки до основания хвоста, как показатель длины от темени до крестца. ИМТ рассчитывали по формуле: ИМТ = масса тела (кг)/длина от темени до крестца (м)^2. После анестезии животных проводилось сканирование DEXA и на основе этого анализировали состав тела.

[64] Во время исследования животных наблюдали не менее трех раз в день до и во время кормления на предмет какого-либо аномального поведения, признаков боли или напряжения. После введения Бейнаглутида или холостого контроля у животных наблюдали любой из следующих симптомов, включая потерю аппетита, сонливость, диарею, запор, безразличие, рвоту, воспаление или любые другие состояния в области инъекции. Если наблюдались симптомы низкого уровня сахара в крови, такие как дрожь или кома, животным проводили тест на глюкозу в крови, чтобы подтвердить низкий уровень сахара в крови, и проводили консервативное лечение животных.

Потребление Пищи

[65] Ежедневное потребление пищи для каждого животного контролировали в течение всего периода исследования. Как показано на Фиг. 4А, животные Группы 1 имели то же потребление пищи с 2-й по 4-ю неделю, когда им вводили холостой контроль, как потребление пищи в течение 1-й недели, и имели значительно сниженное потребление пищи с 5-й по 7-ю неделю, когда вводили Бейнаглутид. Потребление пищи было восстановлено в течение 8-й недели, по сравнению с 1-й неделей. Как показано на Фиг. 4В, животные Группы 2 имели значительно более низкое потребление пищи с 2-й по 4-ю неделю при введении Бейнаглутида по сравнению с потреблением пищи в течение 1-й недели. Аппетит начал восстанавливаться в течение 5-й недели и восстановился до исходного уровня после 7-й недели, после завершения инъекций.

[66] Потребление калорий для каждого животного рассчитывали на основе потребления пищи и сравнивали значения до, во время и после лечения Бейнаглутидом, как показано на Фиг. 4С. Еженедельное потребление пищи/калорий для каждого животного в период лечения Бейнаглутидом было значительно снижено по сравнению с потреблением до лечения (р<0,05).

[67] Соответственно, две или три подкожных инъекции Бейнаглутида в день значительно снижали потребление пищи как самцами, так и самками обезьян с ожирением. Фактически, у животных Группы 2 наблюдались тяжелые признаки анорексии при введении дозировки 40 мкг/кг Бейнаглутида в первые три дня 4-й недели, и, следовательно, дозировка должна была снизиться до 20 мкг/кг в течение оставшихся дней 4-й недели. Было подсчитано, что максимальная переносимая дозировка Бейнаглутида для яванских макак с индуцированным диетарным ожирением, составляла три раза в день, по 20-40 мкг/кг каждая.

Вес тела и ИМТ

[68] В течение всего периода исследования каждую обезьяну взвешивали еженедельно, и вся информация о весе тела записывалась в Таблице 8.

[69] Самцы и самки в Группе 1 не продемонстрировали каких-либо существенных изменений массы тела в течение 2-4 недель, пока вводился холостой контроль; напротив, у обезьян в Группе 2 наблюдалась постоянная потеря веса после введения Бейнаглутида, как показано на Фиг. 5А. Кроме того, животные Группы 1 демонстрировали потерю массы тела с 5-й по 7-ю неделю, когда вводили Бейнаглутид. Самка обезьяны в Группе 2 продемонстрировала постепенное увеличение веса при переходе на холостой контроль на 5-й неделе; однако самец обезьяны в Группе 2 не имел существенного прибавления в весе после окончания инъекций Бейнаглутида. Как показано на Фиг. 5В, массу тела каждого животного сравнивали до и после лечения Бейнаглутидом. Животные продемонстрировали значительную потерю веса после трехнедельного лечения Бейнаглутидом по сравнению с массой тела исходного периода (р<0,05).

[70] Длину от темени до крестца у каждого животного измеряли к концу 1-й, 4-й и 7-й недели, и ИМТ рассчитывали на основе массы тела и длины от темени до крестца. ИМТ снизился в двух группах животных после трех недель лечения Бейнаглутидом.

Анализ состава тела

[71] DEXA-сканирование выполняли для каждого животного на 1-й неделе, 4-й неделе и в конце 7-й недели, и информация о составе тела показана в Таблице 9.

[72] В конце 4-й недели животные Группы 1, которым вводили холостой контроль, имели небольшое увеличение содержания жира в организме по сравнению с исходным уровнем; однако животные Группы 2, которым вводили Бейнаглутид, демонстрировали значительное снижение содержания жира в организме. В конце 7-й недели животные Группы 1, которым вводили Бейнаглутид, также демонстрировали снижение содержания жира в организме по сравнению с исходным уровнем. Процентное содержание жира в организме рассчитывали на основе процентного содержания жира в организме в общей массе тела.

Пример 5

[73] В испытании 5А, Бейнаглутид (четыре дозовые группы по 0 мг, 0,1 мг, 0,15 мг и 0,2 мг три раза в день, 0 мг, 0,1 мг, 0,15 мг или 0,2 мг каждый раз) и/или глипизид (глипизид с контролируемым высвобождением в таблетках (Rui Yining) по 5 мг один раз в день перорально) вводили пациентам с диабетом 2-го типа (96 пациентов) с плохим гликемическим контролем сульфонилмочевины (например, глипизид). Наблюдались изменения массы тела и ИМТ, а также побочные реакции, такие как реакции желудочно-кишечного тракта у субъектов, получавших Бейнаглутид и глипизид отдельно или в комбинации в различных дозировках.

[74] Метформин был выбран как препарат для лечения диабета. В испытании 5В, Бейнаглутид (0 мг, 0,1 мг, 0,15 мг и 0,2 мг в четырех дозовых группах, три раза в день, 0 мг, 0,1 мг, 0,15 мг или 0,2 мг каждый раз) и метформин (пероральная монотерапия, терапевтическая дозировка ≥1,000 мг/сутки, дозировка была стабилизирована в течение по крайней мере 3 месяцев) для пациентов с сахарным диабетом 2-го типа (240 пациентов) только с плохим контролем метформина. Соответственно, проводилось систематическое наблюдение за эффектами Бейнаглутида и метформина, вводимых отдельно или в комбинации.

[75] Результаты испытаний 5А и 5В показали, что эффект Бейнаглутида проявлялся вскоре после инъекции, и время достижения пика составляло 20 минут после введения. Несмотря на короткую продолжительность действия (период полураспада около 15 минут), в сочетании с глипизидом или метформином Бейнаглутид показал лучший терапевтический эффект, по сравнению с эфектом только глипизида или метформина. Побочными эфектами в клинических испытаниях Бейнаглутида были в основном легкая или умеренная тошнота и рвота, большинство из которых терпимо воспринимаются субъектами и облегчаются во время лечения.

[76] Испытание 5С было основано на испытании 5В, увеличивая количество пациентов с диабетом 2-го типа, разрабатывая расширенный протокол многоцентрового клинического испытания для дальнейшей оценки эффективности и безопасности комбинации Бейнаглутида (дозировка 0,2 мг три раза в день по 0,2 мг каждый раз) и пероральные гипогликемические средства (метформин).

[77] В Таблице 10 (Испытание 5А в сочетании с глипизидом), в Таблице 11 (Испытание 5В в сочетании с метформином) и в Таблице 12 (Испытание 5С в сочетании с метформином) показаны 12-недельные изменения ИМТ у пациентов с диабетом 2-го типа.

[80] Индекс массы тела трех групп Бейнаглутида (0,1 мг, 0,15 мг и 0,2 мг) показал статистически значимое (Р<0,05) снижение массы тела на 8-й и 12-й неделе лечения. В группе 0,2 мг индекс массы тела (кг/м2) на 12-й неделе лечения снизился на 0,79±0,79 (Р<0,001), и это снижение значительно отличалось от группы с дозировкой 0 мг (Р<0,05) (Фиг. 6А).

[83] Изменения индекса массы тела трех групп в испытании 5В в основном соответствовали изменениям массы тела. 12-недельное сравнение между группами показало, что индекс массы тела в группе 0,2 мг снижался наиболее значительно с существенными различиями по сравнению с группами 0 мг и 0,1 мг (Р=0,0000 и Р=0,0020). Не было значительной разницы между группами 0 мг и 0,1 мг (Р=0,2317) (Фиг. 6В).

[84] Как показано в Таблицах 10-11, когда Бейнаглутид был использован в комбинации с глипизидом или метформином, ИМТ субъекта значительно снижался в зависимости от дозировки.

[85] Данные испытания 5С были проанализированы в соответствии с критериями ИМТ для пациентов с избыточным весом (27,9≥ИМТ≥24,0 кг/м²) и пациентов с ожирением (ИМТ≥28,0 кг/м²) (12 недель лечения (84 дня)). В Таблицах 12А, 12В и 13 показано влияние Бейнаглутида на людей с избыточным весом и ожирением, соответственно (Фиг. 6С).

[89] Изменение массы тела от исходного уровня = после лечения - исходный уровень. Данные взяты из испытания 5С.

[90] Как показано в Таблицах 12 и 13, после 12 недель лечения доля субъектов в группе Бейнаглутид + метформин с потерей веса ≥3% от исходного уровня составила 40,32%, а доля субъектов с потерей веса ≥5% была 20,97. %, показатель снижения в контрольной группе (группа, принимавшая только метформин) составила 27,27% и 10,39% соответственно. Парный Т-тест и ковариационный анализ между группами были выполнены для изменений от исходного уровня после лечения. Все значения р были <0,05, а различия были статистически значимыми. Статистический анализ показал, что группа лечения Бейнаглутид + метформин превосходит контрольную группу по показателю снижения веса.

Пример 6

[91] Этот пример демонстрирует влияние различных доз инъекционной формы Бейнаглутида на замедление опорожнения желудка у самцов и самок крыс. Инъекционная форма Бейнаглутида содержит Бейнаглутид SEQ ID NO: 1 в количестве 4,2 мг (42000 U) в 2,1 мл.

[92] Сто двенадцать 8-недельных крыс Sprague-Dawley (SD) с массой тела от 240 до 287 г (самцы) или от 194 до 227 г (самки) были разделены на 7 групп: Группа 1 (контроль буфером), группа 2 (Бейнаглутид 10 мкг/кг), Группа 3 (Бейнаглутид 12,5 мкг/кг), Группа 4 (Бейнаглутид 15 мкг/кг), Группа 5 (Бейнаглутид 30 мкг/кг), Группа 6 (Бейнаглутид 45 мкг/кг) и Группа 7 (Бейнаглутид 60 мкг/кг). Различные дозировки растворов Бейнаглутида готовили из инъекционной формы Бейнаглутида, которую хранили при комнатной температуре в течение по меньшей мере 3 часов перед инъекцией животным. Животных не кормили за 29-33 часа до инъекции, и не давали воду за 5-7 часов до инъекции. Инъекции делали путем подкожного введения в шею в количестве 0,1 мл/100 г массы тела. Эксперимент проводили, как описано в Примере 1.

[93] Как показано в Таблицах 14 и 15 и на Фиг. 7 и 8, как самцы, так и самки крыс, получившие 30 мкг/кг, 45 мкг/кг или 60 мкг/кг Бейнаглутида, продемонстрировали уровень остаточного содержимого желудка выше, чем в группе с холостым контролем. Самцы крыс, получившие 30 мкг/кг, 45 мкг/кг или 60 мкг/кг Бейнаглутида, и самки крыс, получившие 10 мкг/кг, 12,5 мкг/кг, 15 мкг/кг, 30 мкг/кг, 45 мкг/кг или 60 мкг/кг Бейнаглутида продемонстрировали показатель продвижения углеродного порошка ниже, чем в группе с отрицательным контролем. Соответственно, данные продемонстрировали, что при дозировке, которая соответствует клинической дозировке для человека, инъекция Бейнаглутида значительно ингибировала опорожнение желудка. Минимальная эффективная дозировка для самцов и самок крыс составляет 30 мкг/кг и 10 мкг/кг соответственно, что аналогично дозировками для человека 0,33 мг/сутки и 0,11 мг/сутки соответственно.

Пример 7

[94] Этот пример демонстрирует влияние различных доз инъекционной формы Бейнаглутида на замедление опорожнения желудка у мышей с индуцированным диетарным ожирением (DIO). За исключением того, что использовалась другая животная модель, эксперимент проводили таким же образом, как описано в Примере 6.

[95] Пятьдесят шесть мышей C57BL/6J в возрасте от 4 до 6 недель были на диете с высоким содержанием жира (60% жира в калориях) и на диете с низким содержанием жира (10% жира в калориях), соответственно, в течение 15 недель до тех пор, пока вес тела мышей на диете с высоким содержанием жира, значительно возрос до 39,2-47,9 г. На Фиг. 9 и Фиг. 10 показано изменение массы тела и потребления пищи мышами на диете с высоким содержанием жира и диете с низким содержанием жира в течение 15 недель. В конце периода специальной диеты успешная индукция инсулинорезистентности и ожирения была подтверждена внутрибрюшинным тестом на толерантность к глюкозе (IPGTT), показанным на Фиг. 11.

[96] Как показано в Таблице 16 и на Фиг. 12А и 12В, мыши мужского пола DIO, получившие 50 мкг/кг или более Бейнаглутида, продемонстрировали значительно более высокий показатель остаточного содержимого желудка, чем контрольная группа, что получила только буфер. Самцы мышей DIO, получившие 15 мкг/кг или более Бейнаглутида, демонстрировали значительно более низкий показатель продвижения углеродного порошка, чем контрольная группа, что получила только буфер. Соответственно, данные продемонстрировали, что при дозировке, что соответствует клинической дозировке для человека, инъекция Бейнаглутида значительно ингибировала опорожнение желудка у мышей DIO. Эффективная дозировка может составлять всего 15 мкг/кг, что соответствует дозировке для человека 0,12 мг/сутки.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> ШАНХАЙ БЕНЕМАЕ ФАРМАСЬЮТИКАЛ КОРПОРЭЙШН

<120> КОМПОЗИЦИЯ GLP-1 ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ОЖИРЕНИЯ И РЕГУЛИРОВАНИЯ ВЕСА

<130> 057783-8014.WO00

<160> 3

<170> PatentIn версия 3.5

<210> 1

<211> 30

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 1

His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly

1 5 10 15

Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg

20 25 30

<210> 2

<211> 29

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 2

His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly

1 5 10 15

Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly

20 25

<210> 3

<211> 31

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 3

His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly

1 5 10 15

Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly

20 25 30

<---

Изобретения относится к применениям композиции, содержащей пептид GLP-1, в терапевтически эффективном количестве для лечения ожирения или избыточного веса или для снижения массы тела у субъекта, нуждающегося в этом. Пептид GLP-1 представляет собой GLP-1 (7-36), а терапевтически эффективное количество пептида GLP-1 составляет от 0,11 мг/сутки до 0,66 мг/сутки, причем композицию применяют двумя или тремя инъекциями в сутки. При значительно более низкой дозе применение композиция GLP-1 обеспечивает эффективное лечение ожирения или избыточного веса и снижения массы тела у субъекта, нуждающегося в этом. 2 н. и 12 з.п. ф-лы, 12 ил., 16 табл., 7 пр.

1. Применение композиции, содержащей пептид GLP-1, в терапевтически эффективном количестве для лечения ожирения или избыточного веса у субъекта-человека, страдающего ожирением или избыточным весом, причем пептид GLP-1 представляет собой GLP-1 (7-36), причем терапевтически эффективное количество пептида GLP-1 составляет от 0,11 мг/сутки до 0,66 мг/сутки и причем композицию применяют двумя или тремя инъекциями в сутки.

2. Применение по п.1, отличающееся тем, что субъект является субъектом мужского пола.

3. Применение по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что терапевтически эффективное количество пептида GLP-1 составляет от 0,33 мг/сутки до 0,66 мг/сутки.

4. Применение по п.1, отличающееся тем, что субъект является субъектом женского пола.

5. Применение по любому из предыдущих пунктов, отличающееся тем, что композицию применяют путем парентеральной инъекции.

6. Применение по любому из пп.1-4, отличающееся тем, что композицию применяют путем внутривенной инъекции или подкожной инъекции.

7. Применение по любому из предыдущих пунктов, отличающееся тем, что композицию применяют к субъекту в течение периода до 30 лет.

8. Применение композиции, содержащей пептид GLP-1, в терапевтически эффективном количестве для снижения массы тела у субъекта-человека, нуждающегося в этом, причем пептид GLP-1 представляет собой GLP-1 (7-36), причем терапевтически эффективное количество пептида GLP-1 составляет от 0,11 мг/сутки до 0,66 мг/сутки и причем композицию применяют двумя или тремя инъекциями в сутки.

9. Применение по п.8, отличающееся тем, что субъект является субъектом мужского пола.

10. Применение по любому из пп.8, 9, отличающееся тем, что терапевтически эффективное количество GLP-1 (7-36) соответствует от 0,33 мг/сутки до 0,66 мг/сутки.

11. Применение по п.8, отличающееся тем, что субъект является субъектом женского пола.

12. Применение по любому из пп.8-11, отличающееся тем, что композицию применяют путем парентеральной инъекции.

13. Применение по любому из пп.8-11, отличающееся тем, что композицию применяют путем внутривенной инъекции или подкожной инъекции.

14. Применение по любому из пп.8-13, отличающееся тем, что композицию применяют субъекту в течение периода до 30 лет.