Способ повышения количественных и качественных показателей ооцит-кумулюсных комплексов у коров-доноров при помощи фитодобавки Origanum vulgare Российский патент 2025 года по МПК A61D7/00 

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к средствам для повышения воспроизводительной функции коров. На сегодняшний день традиционные методы селекции и воспроизводства являются дополнением к научно-обоснованным методам разведения и совершенствования пород крупного рогатого скота. В этих условиях особую актуальность придают мероприятиям, направленным на улучшение организации воспроизводства на основе современных биотехнологических методов.

Применение технологии in vitro для получения ооцит-кумулюсных комплексов (ОКК) при использовании в качестве постоянных доноров высокопродуктивных коров с нормально функционирующей половой системой может принести значительный вклад в селекционный процесс.

Вынос питательных веществ с молоком и высокая активность метаболических процессов в организме повышают требования к качеству рациона, содержанию в нем минеральных компонентов, белка и энергии.

На качество ОКК, созревание эмбрионов и приживаемость эмбрионов влияют факторы кормления. Уровень питания (содержание энергии), получаемый животным, может прямо и косвенно влиять на развитие ооцитов и последующую жизнеспособность эмбриона.

ОКК полученные in vitro, часто имеют эпигенетические модификации. Однако прием фолиевой кислоты (витамин В9) коровой-донором может улучшить созревание яйцеклеток и развитие эмбриона, предотвращая эпигенетические ошибки у потомства.

Использование травы Origanum vulgare (орегано) в животноводстве может улучшить общее состояние здоровья животных, что в свою очередь положительно скажется на качестве и количестве молока, а также на воспроизводительной функции коров. Origanum vulgare (орегано) содержит витамин В9, который является важным витамином для животных. Кроме того, добавление Origanum vulgare (орегано) в корм животных может стимулировать аппетит и улучшить пищеварение. Витамин В9 играет важную роль в синтезе ДНК и РНК, а также в процессах кроветворения. Недостаток фолиевой кислоты приводит к анемии, снижению продуктивности и воспроизводительной функции у животных. В связи с этим добавление травы орегано в рацион животных может помочь в восполнении недостатка фолиевой кислоты.

Популярна кормовая добавка для повышения резистентности и продуктивности сельскохозяйственных животных и птицы (Патент RU 2294 648 С1, 10.03.2007). Добавка является комплексной и включает в себя: эфирное масло орегано (душицы) и бентонит при следующем соотношении компонентов, мас. %: эфирное масло орегано 3,0-7,0; бентонит - остальное. Кормовая добавка имеет высокую эффективность, позволяет повысить резистентность и продуктивность сельскохозяйственных животных и птицы.

К недостаткам данной кормовой добавки можно отнести: минимальное содержание микроэлементов, невозможность учета особенностей минерального обмена у животных и птицы.

Предложен способ кормления сельскохозяйственных птиц при введении в корм добавки с фитобиотической активностью (Патент RU 2762 198 С1, 16.12.21). При данном способе к корму добавляют добавку, которая содержит лимонную и молочную кислоты, а также соли муравьиной кислоты: формиат кальция и формиат натрия, при этом компоненты берут в определенном соотношении, сюда же входит два натуральных эфирных масла: «лемонграсс» и «орегано» в соотношении 1:1.

Известна кормовая добавка с фитобиотической активностью на минеральной основе, используемая в составе корма для сельскохозяйственных животных и птицы и содержащая смесь эфирных масел эвкалипта, чабреца, чеснока и лимона в виде сухого порошка, нанесенную на диатомит (RU №2569018 C1, A23K 1/16, A23K 1/175, 20.11.2015).

Известен кормовой продукт для сельскохозяйственных животных и птиц, содержащий в своем составе молочную кислоту, янтарную кислоту, лимонную кислоту, сорбционный материал в виде смеси вермикулита и бентонитовой глины в соотношении (40:60) - (20:80), RU №2552872 C1, A23K 1/16, 10.06.2015.

Известна композиция кормовой добавки, содержащая препарат с фитобиотической активностью и органические кислоты, при этом препарат с фитобиотической активностью включает эфирное масло, а среди прочих органических кислот содержит лимонную кислоту, RU №2484641 С2, A23K 1/16, 20.06.2013.

Прототипом изобретения является кормовая добавка для сельскохозяйственной птицы и животных (Патент RU С1 2392 825 27.06.2010), включающая сорбент и растительный стимулятор организма, отличающаяся тем, что в качестве растительного стимулятора организма при вирусных заболеваниях она содержит: душицу, зверобой, подорожник, чистотел и ромашку аптечную при следующем соотношении компонентов, кг на тонну корма: орегано (душица) 0,25-0,35 зверобой 0,2-0,38 подорожник 0,25-0,4 чистотел 0,1-0,15 ромашка аптечная 0,15-0,25.

В известных способах кормления сельскохозяйственных птиц и животных и в известных кормовых добавках, используемых при кормлении, признаков, сходных с заявляемым изобретением, не обнаружено.

Исследований влияния кормовой добавки, включающей растительный стимулятор организма Origanum vulgare (орегано) на качество ооцит-кумулюсных комплексов у коров не проводилось.

Технический результат настоящего изобретения заключается в повышении количественных и качественных показателей ооцит-кумулюсных комплексов у коров-доноров в технологии in vitro.

Технический результат достигается введением сухой измельченной травы Origanum vulgare (орегано) в комбикорм коровам-донорам в количестве 0,050 кг (50 г) в сутки в течение 10 дней. Origanum vulgare (орегано) содержит эфирное масло (0,1-1%), в состав которого входят фенолы (тимол 15% и корвалол 85% - это дезинфекторы, действующие на патогенную микрофлору), би- и трициклические сесквитерпены (12,5%), свободные спирты, геранилацетат, дубильные и красящие вещества, аскорбиновую кислоту, флавоноиды. Применяют как успокаивающее, обезболивающее и дезодорирующее, усиливающее секрецию пищеварительных и бронхиальных желез, антимикробное, возбуждающее аппетит средство (ГОСТ 21908-93 Трава душицы). Доля от суточной нормы витамина B9 на 100 г орегано - 59,3%. Впервые было проведено исследование влияния фитодобавки, приготовленной из высушенной травы орегано для повышения качества ОКК у коров-доноров в технологии in vitro.

Для подтверждения эффективности предлагаемого способа были проведены опыты по изучению действия фитодобавки, на организм коров.

Экспериментальные исследования ОКК в условиях in vitro проводили в научно-исследовательской лаборатории «Биохимических, молекулярно-генетических исследований и селекции сельскохозяйственных животных» ФГБОУ ВО Кузбасского ГАУ. Для проведения экспериментальных исследований были сформированы 2 группы коров-доноров по 6 голов в каждой. Животных отбирали по методу аналогов с учетом живой массы, породы, возраста в отелах, удоя, жирности молока, физиологического состояния. Для обеих групп было организовано одинаковое кормление. Содержание коров соответствовало общепринятым зоотехническим нормам, а также правилам содержания крупного рогатого скота в целях его воспроизводства, выращивания и реализации (Об утверждении Ветеринарных правил содержания крупного рогатого скота в целях его воспроизводства, выращивания и реализации. Приказ МСХ РФ N 622 от 21 октября 2020 https://base.garant.ru/74832099/). Коровы находились в светлых, сухих животноводческих помещениях, в которых соблюдали необходимые параметры микроклимата: температура воздуха в пределах - 18°С, влажность - 85% (оптимальная 70%), скорость движения воздуха - 0,2 м/с, концентрация углекислого газа - 0,15%, аммиака - 10 мг/м³, сероводорода - 5,0 мг/м³.

Опытная группа - основной рацион + фитодобавка из сухой измельченной травы Origanum vulgare (орегано) с комбикормом коровам-донорам в количестве 0,050 кг в сутки в течение 10 дней. Данная дозировка фитодобавки была выбрана нами согласно полученным результатам исследований, проведенных ранее.

Контрольная группа - основной рацион.

До введения в рацион фитодобавки из сухой измельченной травы Origanum vulgare (орегано) в комбикорм коровам-донорам и после окончания введения, проводили клиническое обследование животных.

Измерение температуры, количество дыхательных движений в минуту и частота сердечных сокращений показали, что назначение фитодобавки из сухой измельченной травы Origanum vulgare (орегано) в данной дозе не оказывает отрицательного влияния на основные физиологические параметры.

Гинекологическое обследование коров проводили в соответствии с Методическими указаниями по комплексной диспансеризации крупного рогатого скота. Одним из методов, используемых для получения эмбрионов крупного рогатого скота, является трансвагинальная аспирация ооцитов. Этот метод позволяет получить эмбрионы без необходимости хирургического вмешательства и минимизирует риск для животного.

Для проведения эксперимента были аспирированы ооцит-кумулюсные комплексы (ОКК) у доноров крупного рогатого скота. Доноры прошли этап стимуляция с помощью гормональных препаратов.

После определения локализации фолликулов, проводили процедуру на основе технологии ovum pick-up (OPU). Она заключается в аспирации ооцитов из яичников. Для этого использовали специальную иглу, которую вводили в яичник под контролем ультразвукового сканера LOGIQ V2, с помощью микроконвексного широкополосного зонда 8С-RS 6.0-10.0 MHg.

Ооцит-кумулюсные комплекса, находящиеся в фолликулах, извлекали в пробирку и доставляли в лабораторию при температуре 37,7°С. Транспортировка материала длилась 20-25 минут в специализированном транспортировочном инкубаторе с поддержанием постоянной температуры в среде OPU, которая состоит из раствора Дюльбекко (450мл) с добавлением BSA (4 мг), гепарина (2,5 мл) и гентамицин (200 мкл).

Таблица 1 - Выход ооцит-кумулюсных комплексов при аспирации

Группа Кол-во коров-доноров Выделено ОКК (ооцит-кумулюсных комплексов) Пригодных для оплодотворения ОКК (%) Всего Пригодных для оплодотворения ОКК Контрольная 10 76 42 55,2 Опытная 10 84 54 64,2

Выделено ооцит-кумулюсных комплексов у коров контрольной группы 76, у коров опытной группы 84, т.е. на 10,5% больше. Пригодных для оплодотворения ооцит - кумулюсных комплексов (соответственно 42 и 54), т.е. в опытной группе у коров-доноров на 16% больше в контрольной группе.

Таблица 2 - Количество ооцит-кумулюсных комплексов на один яичник

Группа Кол-во коров-доноров Выделено ОКК на один яичник Всего Пригодных для оплодотворения Контрольная 10 7,6±0,12 4,2±0,58 Опытная 10 8,4±0,55 5,0±0,55

По результатам данных таблицы 2, нами установлено, что количество ОКК, полученных в среднем на один яичник у коров-доноров контрольной группы составило (7,6±0,12), у коров-доноров опытной группы (8,4±0,55) (p > 0,05), т.е. разница 10%. Пригодных для оплодотворения ОКК на один яичник в опытной группе было на 19% больше, чем в контрольной (5,0±0,55 против 4,2±0,58) (p > 0,05).

Вывод. При введении в основной рацион фитодобавки из сухой измельченной травы Origanum vulgare (орегано) в комбикорм коровам донорам в количестве 0,050 кг в сутки в течение 10 дней не оказывает отрицательного влияния на основные физиологические параметры. При аспирации фолликулов у коров-доноров опытной группы количество ооцит-кумулюсных комплексов на 10,5% больше, чем в контрольной группе. Из них пригодных для оплодотворения ооцит-кумулюсных комплексов было больше на 16%.

Установлено, что пригодных для оплодотворения ооцит-кумулюсных комплексов на один яичник в опытной группе было на 19% больше, чем в контрольной (5,0±0,55 против 4,2±0,58) (p > 0,05), поэтому экономически целесообразно вводить в основной рацион коров-доноров фитодобавку из сухой измельченной травы Origanum vulgare (орегано) в количестве 0,050 кг на голову в сутки в течение 10 дней.

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к средству, влияющему на количество и качество ооцит-кумулюсных комплексов у коров-доноров. При введении в основной рацион фитодобавки из сухой измельченной травы Origanum vulgare – орегано в комбикорм коровам донорам в количестве 0,050 кг в сутки в течение 10 дней выделено ооцит-кумулюсных комплексов у коров-доноров опытной группы на 10,5% больше, чем в контрольной группе. Из них пригодных для оплодотворения ооцит-кумулюсных комплексов было больше на 16%. Установлено, что пригодных для оплодотворения ооцит-кумулюсных комплексов на один яичник в опытной группе было на 19% больше, чем в контрольной (5,0±0,55 против 4,2±0,58) (p > 0,05). Использование изобретения позволит повысить количественные и качественные показатели ооцит-кумулюсных комплексов у коров-доноров в технологии in vitro. 2 табл.

Способ повышения количественных и качественных показателей ооцит-кумулюсных комплексов у коров-доноров путем введения в комбикорм фитодобавки из сухой измельченной травы Origanum vulgare – орегано в количестве 0,050 кг на голову в сутки в течение 10 дней.