Способ подготовки аллогенной амниотической мембраны для реконструктивной медицины Российский патент 2025 года по МПК G01N33/48 A61K35/50 A61L27/38 C12N5/73 

Изобретение относится к медицине, к биотехнологии, в частности к способам изготовления биоимплантатов из соединительной ткани. В настоящее время при проведении реконструктивных операций в области хирургии, стоматологии, офтальмологии в качестве средств регенеративной медицины широко используются биоимплантаты, изготовленные из соединительных тканей, таких как амниотическая мембрана.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому эффекту является способ консервации амниотической мембраны, основанный на обработке в 0,02% растворе хлоргексидина, в растворе, содержащем 40 мг/мл гентамицина и 2,5 мг/мл амфотерицина, с последующим погружением в глицерол, и высушиванием в стерильных условиях над силикагелем в течение 18 - 24 часов и упаковкой (Патент на изобретение RU 2214091 C1, опубл. 20.10.2003, МПК A01N 1/02).

При всех достоинствах известного способа, принятого за прототип предварительная обработка антибиотиками может привести к аллергической реакции у пациента при использовании консервированного биоматериала. А также силиковысушивание позволяет сохранить без повреждения эпителиальный слой и другие клеточные структуры амниотической мембраны, которые усложняют возможность применения силиковысушенной амниотической мембраны в качестве подложки для культивированных клеток.

Техническим результатом, на достижение которого направлено создание данного изобретения, является изготовление биоматериала из амниотической мембраны с сохранением эластичности и децеллюляризации.

Поставленный технический результат достигается тем, что амниотическая мембрана отмывается в проточной воде от сгустков крови, далее биоматериал обрабатывается в ультразвуковой ванне частотой 20-45 кГц, после чего биоимплантаты помещаются в камеру, в которой создают вакуум с остаточным давлением 1-2 Па, и после промывания в физиологическом растворе 0,9% NaCl, замораживания при температуре до -60°С, лиофилизируют, герметично упаковывают и стерилизуют радиационным методом (гамма-лучами или быстрыми электронами).

Способ осуществляют следующим образом. Амниотическую мембрану механически отделяют от хориона и в течение не менее чем 30 минут отмывают в проточной воде от сгустков крови. Биоматериал помещают в ультразвуковую камеру, заполненную дегазированной дистиллированной водой с температурой +23°С и в течение не менее 3 минут обрабатывают ультразвуком с частотой 20-45 кГц и интенсивностью 3 Вт/см², после чего биоимплантаты помещаются на 15 минут в камеру, в которой создают вакуум с остаточным давлением 1-2 Па и осуществляют промывку в дегазированной дистиллированной воде. После извлечения из камеры биоматериал промывают в растворе 0,9% NaCl, замораживают при температуре (-20°С) - (-60°С), лиофилизируют, герметично упаковывают и стерилизуют радиационным методом (гамма-лучами или быстрыми электронами).

Таким образом, при отмывке биоматериала не используются антибиотики и антисептики. Отмывка производится водой. Выбранная интенсивность ультразвукового воздействия позволяет избежать разрушения клеточных мембран и частичной деградации биомакромолекул. Промывка в камере с остаточным давлением 1-2 Па также осуществляется в дистиллированной воде, что исключает дополнительное разрушение клеточных мембран вследствие нарушения осмотического давления в клетках биоматериала.

Представленная методика способствует

1. Полной децеллюляризации

2. Удалению разрушенных фрагментов клеточных структур

3. Дезинфекции биоматериала.

Пример 1. Амниотическую мембрану, механически отделенную от хориона, в течение 30 минут отмывают в проточной воде от сгустков крови. Биоматериал помещают в ультразвуковую камеру, заполненную дегазированной дистиллированной водой с температурой +23°С и в течение 3 минут обрабатывают ультразвуком с частотой 45 кГц и интенсивностью 3 Вт/см², после чего биоимплантаты помещаются на 15 минут в камеру, в которой создают вакуум с остаточным давлением 1 Па и осуществляют промывку в дегазированной дистиллированной воде. После извлечения из камеры биоматериал промывают в растворе 0,9% NaCl, замораживают при температуре (-60°С), лиофилизируют, герметично упаковывают и стерилизуют гамма-лучами.

Пример 2. Амниотическую мембрану, механически отделенную от хориона, в течение 30 минут отмывают в проточной воде от сгустков крови. Биоматериал помещают в ультразвуковую камеру, заполненную дегазированной дистиллированной водой с температурой +23°С и в течение 3 минут обрабатывают ультразвуком с частотой 20 кГц и интенсивностью 3 Вт/см², после чего биоимплантаты помещаются на 15 минут в камеру, в которой создают вакуум с остаточным давлением 2 Па и осуществляют промывку в дегазированной дистиллированной воде. После извлечения из камеры биоматериал промывают в растворе 0,9% NaCl, замораживают при температуре (-20°С), лиофилизируют, герметично упаковывают и стерилизуют быстрыми электронами.

Морфологическое изучение биоматериала подтверждает полное удаление клеточных структур и эпителиального слоя по сравнению с биоматериалом без предварительной обработки ультразвуком и вакуумом (Фиг. 1 - Амниотическая мембрана, лиофилизированная после обработки ультразвуком и вакуумом с последующей лиофилизацией. Амниотическая мембрана полностью лишена клеток эпителиального слоя. Сканирующая электронная микроскопия, Ув.х400. Фиг. 2 - Биоматериал, изготовленный путем силиковысушивания без предварительной обработки ультразвуком и вакуумом. Эпителиальный слой полностью сохранен. Сканирующая электронная микроскопия, Ув.х400).

Проведенный заявителем анализ уровня техники, включающий поиск по патентным и научно-техническим источниками информации, и выявление источников, содержащих сведения об аналогах заявляемого изобретения, позволили установить, что заявителем не обнаружен аналог, характеризующийся признаками, тождественными (идентичными) всем существенным признакам заявляемого изобретения. Определение из перечня выявленных аналогов прототипа позволило выявить совокупность существенных по отношению к усматриваемому техническому результату отличительных признаков в заявляемом «Способе подготовки и лиофилизации аллогенной амниотической мембраны для реконструктивной медицины» изложенных в формуле изобретения. Следовательно, заявляемое изобретение соответствует критерию «новизна».

Для проверки соответствия заявляемого условию «изобретательский уровень» заявители провели дополнительный поиск известных решений, чтобы выявить признаки, совпадающие с отличительными от прототипа признаками заявляемого изобретения. Результаты поиска показали, что заявляемое техническое решение не вытекает для специалиста явным образом из известного уровня техники, определенного заявителем, и не выявлено влияние предусматриваемых существенными признаками заявляемого «Способа подготовки и лиофилизации аллогенной амниотической мембраны для реконструктивной медицины» на достижение технического результата. Следовательно, заявляемое изобретение соответствует критерию «изобретательский уровень».

Критерий изобретения «промышленная применимость» подтверждается тем, что предлагаемый способ изготовления биоимплантатов из соединительных тканей может быть использован в отделениях по заготовке биоимплантатов, предназначенных для использования в реконструктивных операциях в комбустиологии, офтальмологии, стоматологии.

Изобретение относится к медицине, к биотехнологии, в частности к способам изготовления биоимплантатов из соединительной ткани, и может быть использовано при подготовке аллогенной амниотической мембраны для реконструктивной медицины. Амниотическую мембрану механически отделяют от хориона и в течение не менее чем 30 мин отмывают в проточной воде от сгустков крови. Затем помещают в ультразвуковую камеру, заполненную дегазированной дистиллированной водой с температурой +23°С, и в течение не менее 3 мин обрабатывают ультразвуком с частотой 20-45 кГц и интенсивностью 3 Вт/см², после чего помещают на 15 мин в камеру, в которой создают вакуум с остаточным давлением 1-2 Па. Осуществляют промывку в дегазированной дистиллированной воде, после извлечения из камеры биоматериал промывают в растворе 0,9% NaCl, замораживают при температуре -20 – -60°С, лиофилизируют, герметично упаковывают и стерилизуют радиационным методом. Изобретение позволяет изготовить биоматериал из амниотической мембраны с сохранением эластичности и децеллюляризации. 2 ил., 2 пр.

Способ подготовки аллогенной амниотической мембраны для реконструктивной медицины, заключающийся в том, что амниотическую мембрану механически отделяют от хориона и в течение не менее чем 30 мин отмывают в проточной воде от сгустков крови, затем помещают в ультразвуковую камеру, заполненную дегазированной дистиллированной водой с температурой +23°С, и в течение не менее 3 мин обрабатывают ультразвуком с частотой 20-45 кГц и интенсивностью 3 Вт/см², после чего помещают на 15 мин в камеру, в которой создают вакуум с остаточным давлением 1-2 Па и осуществляют промывку в дегазированной дистиллированной воде, после извлечения из камеры биоматериал промывают в растворе 0,9% NaCl, замораживают при температуре -20 – -60°С, лиофилизируют, герметично упаковывают и стерилизуют радиационным методом.