Способ получения препарата для лечения животных при радиационно-кадмиевом поражении Российский патент 2025 года по МПК A61K33/06 A61K38/02 A61P39/06 

Изобретение относится к радиационной биологии и токсикологии, в частности к получению и применению противорадиационных и антидотных препаратов при радиационно-химическом поражении.

Известен способ лечения радиационно-кадмиевого поражения организма ионизирующим излучением (γ-лучами) и кадмием путем подкожного трехкратного введения противолучевого гамма-глобулина в дозе 50 мг/кг и введения в рацион бентонита из расчета 2% от его массы (см. Автореферат диссертации Л.Р. Фаттерахманова «Комбинированное поражение животных гамма-радиацией и кадмием, и применение средств терапии». - Казань, 2008. - 23 с.).

Недостатком способа является раздельное (подкожное) применение противолучевого гамма-глобулина и бентонита в составе рациона. При этом установлено, что способ эффективен только при облучении животных в полулетальной дозе (ЛД₅₀, 7 Гр), а при облучении их в летальной дозе (9 Гр) желаемый лечебный эффект не достигается. Другим существенным недостатком способа является плохая всасываемость бентонита через слизистую оболочку кишечника, поскольку основную массу бентонита составляют частицы размерами от 0,1 до 0,01 мм, представленными солями и кварцем, которые, не участвуя в процессе адсорбции токсикантов (радионуклидов, тяжелых металлов), проходят транзитом через желудочно-кишечный тракт (ЖКТ), создавая таким образом только дополнительную нагрузку на ЖКТ, что отрицательно сказывается на здоровье животных. При этом тяжелый металл (кадмий) при всасывании в кровь через слизистую ЖКТ депонируется в критических органах организма (печень, почки, костный мозг), и поэтому используемый адсорбент (бентонит) при пероральном применении не достигает цели (клетку-мишень), в которой депонирует тяжелый металл, поэтому эффективность терапии комбинированного радиационно-кадмиевого поражения не превышает 60% даже при полулетальном (ЛД₅₀, 7 Гр) и сублетальном (5 ПДК) поражении организма ионизирующим излучением (γ-лучами) и кадмием соответственно.

Наиболее близким по технической сущности является способ лечения радиационно-кадмиевого поражения организма ионизирующим излучением (γ-лучами) и тяжелым металлом (кадмием) путем однократного подкожного введения противолучевого гамма-глобулина и суспензиообразующей фракции бентонита в дозах 20-25 мг/кг живой массы и трехкратно через 24, 48, 96 часов при хроническом поступлении кадмия в организм. Лечебный препарат получают путем диспергирования суспензиообразующей фракции бентонита в противолучевом гамм-глобулине в соотношении 0,3:99,7 соответственно (Патент RU №2484830, МПК А61К 33/06. Опубл. 20.06.2013. Бюл. №17).

Недостатком способа является сложная технология получения суспензиообразующей фракции бентонита путем специальной обработки его концентрированными кислотами с последующим многоступенчатым селективным фракционированием и изолированием микрочастиц размерами 0,0006-0,0009 мм. Другим недостатком способа является использование в качестве адсорбента низкокачественного бентонитового сырья Татарстанского месторождения (Биклянский бентонит, Бехтеровское, Курчатовское, Чистопольское, Лаишевское), в котором содержание монтмориллонита - коллоидных (дисперсных) частиц (меньше 0,0001 мм) составляет не более 20%. Кроме того, для термо-химической активации низкокачественных бентонитов используют концентрированные кислоты (HCl, H₂SO₄). Поскольку естественная среда бентонита слабощелочная, то нейтрализация минерала (добавлением концентрированной кислоты к системе) может привести к разрушению его монтмориллонитовой основы. Известно, что Татарстанские бентонитовые глины относятся к Са²⁺ - Mg²⁺ монтмориллонитам, т.е. они не содержат достаточное количество обменных ионов N⁺ и K⁺ (низкое значение легкости катионного обмена - ЕКО, которое не превышает 35-45 мг/экв/100 г против 100-150 мг/экв/100 г у высокодисперсных бентонитов).

С этой точки зрения лучшими в России являются бентониты Сахалинского, Краснодарского и Красноярского месторождения, наиболее доступными из которых являются бентониты месторождения «Десятый Хутор», расположенного в Республике Хакасия.

Между тем, из области нанотехнологии известно, что переход материи в наноразмерное состояние сопровождается изменением фундаментальных свойств веществ, поэтому применение терминов с приставкой «нано-» указывает на новую сферу деятельности, изучающую объекты наномира с очень специфическими свойствами и обладающую вследствие этого гигантским научно-технологическим и социально-экономическим потенциалом (см. статью А.С. Радилова, В.Р. Ремовского «Нанотехнологии и нанотоксикология - взгляд на проблему» // Токсикологический вестник, 2007. - №6. - С. 4-8).

Поэтому одним из перспективных направлений использования природных минералов является создание на их основе наноразмерных лекарственных и диагностических препаратов с более выраженными положительными свойствами и, в связи с этим, возникает постоянная необходимость биологического тестирования наноразмерных частиц, полученных из минеральных сырьевых ресурсов.

Известно, что использование нанотехнологии в медицине и ветеринарии имеет широкую перспективу, поскольку уже созданы высокоэффективные лечебно-диагностические нанолекарства и нанодиагностикумы, обеспечивающие адресную доставку лечебного средства к пораженным клеткам-мишеням пораженного организма и экспрессное выявление этих клеток с помощью нанопрепаратов. При этом отмечено, что лечебно-диагностический эффект препаратов проявляется при меньших дозах лечебных препаратов, а диагностический эффект повышается в разы по сравнению с традиционными препаратами.

При этом наноконструкция (нанокомпозиция) включает терапевтическую (в нашем случае противолучевой гамма-глобулин) часть и нацеливающую (несущую) часть - наночастицы бентонита, которые при этом выполняют не только транспортирующую, но и адсорбирующую функцию, адресно доставляют глобулин к пораженным тяжелым металлом - кадмием клеткам, производят активный ионообмен между Na², Mg² и Cd², адсорбируют индуцированные ионизирующей радиацией радиотоксины с последующим удалением (декорпорацией) их из пораженного организма. В свою очередь, терапевтический компонент наноконструкции - противолучевой гамма-глобулин оказывает антикадмиевое (антитоксическое) действие путем нейтрализации радиотоксинов, вступает в биохимическое взаимодействие с токсикантом, образуя высокоэффективное антикадмиевое соединение - металлотионеины, выполняющие основную защитную роль при реализации антикадмиевого лечебного эффекта.

Технический результат, на достижение которого направлено изобретение, заключается в лечении комбинированного радиационно-химического поражения при объединении в монопрепарате лечебного и декорпорирующего свойства, при одновременном уменьшении лечебной дозы иммуноглоблина, а также расхода бентонита.

Для достижения названного технического результата в предлагаемом способе получения для лечения радиационно-кадмиевого поражения, предусматривающем суспендирование высокодисперсной фракции бентонита с размерами частиц 78-80 нм в 10%-м растворе противолучевого гамма-глобулина в соотношении 0,19-0,21:1 соответственно, при постоянном перемешивании путем шуттелирования, затем стерилизуют путем облучения на гамма-установке при поглощенной дозе 25 кГр, проводят стерильную фасовку, разливают в стеклянные флаконы емкостью 250-300 см³, герметично закрывают и хранят при температуре 4-6°С. А высокодисперсную наноразмерную фракцию бентонита получают путем диспергирования бентонитового порошка на ультразвуковой установке при частоте колебаний 18,5 кГц, мощности установки 80 Вт и амплитуде колебаний волновода 5 мкм.

Высокодисперсную наноразмерную фракцию бентонита получают путем диспергирования бентонитового порошка Хакасского происхождения на ультразвуковой установке «УЗУ-0,25» при частоте 18,5 кГц, мощности установки 80 Вт и амплитуде колебаний волновода 5 мкм. Размеры бентонита определяют на электронном микроскопе и устанавливают, что ультразвуковая обработка бентонитового порошка обеспечивает получение частиц размером менее 100 нм (75-80 нм).

Существенным отличием способа получения и применения препарата для лечения радиационно-химического поражения организма животных является то, что в качестве лечебно-декорпорирующего средства используют полифункциональный препарат - глобулин-минеральный комплекс на основе противолучевого гамма-глобулина, нагруженного наночастицами бентонита, обеспечивающий экстренную терапию комбинированного радиационно-кадмиевого поражения за счет экстренной адресной доставки специфического лечебного агента (противолучевого гамма-глобулина) с помощью нацеливающей части наноконструктора - частиц бентонита (монтмориллонита) к пораженным тяжелым металлом - кадмия хлорида клеткам-мишеням (гепатоцитам, моноцитам, лимфоцитам, стволовым клеткам костного мозга - СККМ), являющимися детерминантами выживаемости при радиационном поражении организма. Высокий лечебно-декорпорирующий эффект применения заявляемого препарата, содержащего противолучевой гамма-глобулин (лечебный компонент наноконструкции) и высокодисперсная фракция сорбента - наночастицы бентонита, достигается не только за счет физико-химического связывания (адсорбции) тяжелого металла (кадмия), депонированного, в основном, в печени (гепатоцитах), а за счет сложного биофизического и биохимического метаболизма кадмия в организме, при котором происходит ионообмен: ионы цинка, содержащиеся в наночастицах бентонита, обмениваются ионами кадмия, депонированных в гепатоцитах печени, а ионы цинка, вступая в биохимическую связь (метаболизм), образуют цинк-металлотионеины (Zn Metallotionein - ZnMn), обладающие, во-первых, антикадмиевым действием, декорпорируя пораженную токсикантом клетку-мишень и, во-вторых, запуская механизм срабатывания системы антиоксидантной защиты (САЗ), включающей ферменты антиоксидантной защиты: супероксиддисмутазы и каталазы, ликвидируя тем самым тяжелые последствия интоксикации.

Лечебно-декорпорирующий эффект (ЛДЭ) при применении предлагаемого глобулино-минерального препарата (МНКГТ) при комбинированном (радиационно-химическом) поражении организма достигается за счет антирадиотоксического действия специфических противолучевых глобулинов-антител, вступающих в иммунохимическое взаимодействие с детерминантами радиационного поражения - радиотоксинами, которые являются специфическими радиоантигенами, нейтрализуя тем самым токсические продукты радиолиза (хиноидные, липидные радиотоксины, активные формы кислорода: Н⁺, ОН^-, Н₂О₂, Н², являющиеся радикалами-убийцами лимфоцитов, моноцитов, миелоцитов (детерминантов выживаемости при радиационном поражении организма). Следовательно, при использовании заявляемого препарата достигается синергизм (усиление) радиозащитного и антидотного (антикадмиевого) эффекта, обеспечивающего более быстрое (экстренное) очищение организма от токсиканта и радиоиндуцированных токсических продуктов радиолиза: радиотоксинов, радиоантигенов, оксидативной модификации макромолекул и активных форм кислорода.

Способ получения препарата для лечения комбинированного радиационно-химического поражения осуществляют следующим образом.

На первом этапе проводят обработку минерального сорбента - бентонита путем диспергирования бентонитового порошка на ультразвуковой установке «УЗУ-0,25» при частоте 18,5 кГц, мощности 80 Вт и амплитуде колебаний волновода - 5 мкм.

У исходного и полученного методом ультразвуковой обработки образцов бентонита определяют содержание монтмориллонита методом рентгеновской дифракции при помощи рентгеновского дифрактометра ULTUMA-14 компании Riganu (Япония). Рабочий режим - 40 кВ, 40 мА, анодное излучение, никелевый фильтр. Величину емкости катионного обмена (ЕКО) определяют методом адсорбции красителя метиленового голубого в соответствии с ГОСТ 21283-93. Коллоидальность бентонитовых частиц определяют по формуле:

К=V⋅100/15, где

V - объем осадка бентонита в пробирке, мл;

15 - общий объем бентонита и воды в пробирке, мл (Бортников С.В., Горенкова Г.А. Получение органомодифицированного бентонита при взаимодействии с азотосодержащими соединениями // (Усп. сов. естествознания. - 2018. - №8. - С. 12-17). Размеры частиц исходного обработанного ультразвуком образцов бентонита определяют методом электронной микроскопии (Эйриш М.В. Изучение кристаллической структуры органомориллонитовых комплексов с применением методов электронной микроскопии и микромодификации // Литология и полезные ископаемые. - 1976. - №4. - С. 24-117).

В результате проведенных исследований установлено, что обработка исходного бентонитового сырья утьтразвуком приводит к резкому увеличению емкости катионного обмена - ЕКО (85-90 мг-экв/100 г против 35-45 мг-экв/100 г у исходного, обработанного по известному способу активации), увеличению монтмориллонитовой (высокодисперсной) фракции до 93,5% против 45% - у микроварианта, полученного по известному способу, увеличения коллоидальности до 86,6% по сравнению с 45,3% у известного (микроварианта) бентонита и значительному увеличению (до 80%) содержанию высокодисперсных (75-80 нм) частиц против 0,0006-0,0009 мм у известного способа активации бентонита.

На втором этапе приготавливают полифункциональную композицию на основе 10%-го раствора противолучевого гамма-глобулина и наноразмерной монтмориллонитовой фракции бентонита (НМФБ). Для составления композиции берут определенное количество (например, 100 см³) 10%-го раствора противолучевого гамма-глобулина, содержащего 100 мг/мл белка иммуноглобулина, вносят обработанный ультразвуком порошок с наночастицами бентонита (НМФБ) в количестве 0,19-0,21 мг на 1 мл (см³) иммуноглобулина, смесь гомогенизируют (диспергируют) путем тщательного перемешивания на шуттель-аппарате при 110 качаний в минуту в течение 20 минут при температуре 20-22°С. По истечении указанной экспозиции иммуноглобулино-нанобентонитовую суспензию подвергают радиостерилизации на гамма-установке «Пума» с источником излучения ¹³⁷Cs в дозе 25 кГр, затем в стерильных условиях разливают в стеклянные флаконы емкостью 250-300 см³. Герметично закрывают и хранят при температуре 4±2°С.

Полученный по вышеописанному способу препарат на основе специфического противолучевого гамма-глобулина и высокодисперсной фракции бентонита используют в качестве средства для экстраиммунной терапии комбинированного радиационно-химического (кадмиевого) поражения летально облученных и затравленных тяжелым металлом (CdCl₂) лабораторных и с.-х. животных.

Способ получения препарата для лечения радиационно-химического поражения организма животных иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Определение токсичности и безвредности полученного препарата

В соответствии с требованиями Фармакопеи РФ, что каждый вновь разработанный препарат должен пройти фармако-токсикологическую экспертизу, проводили определение токсичности, безвредности и ареактогенности глобулин-минеральной композиции. Для этой цели полученный нанопрепарат, в различных дозах (1,0; 2,0; 3,0; 4,0; 5,0; 6,0; 7,0; 8,0; 9,0; 10 мг/кг живой массы) перорально, внутримышечно, внутривенно, внутрибрюшинно, 1-, 2- и 3-кратно с интервалом 30, 60, 120 мин вводили белым мышам, используя по 6 животных на каждую дозу препарата, учитывая наличие или отсутствие адекватной или неадекватной реакции на препарат, а также случаи гибели подопытных животных. Установлено, что введение животным вышеуказанных доз препарата не вызывало побочных реакций: животные были активны, охотно принимали корм и воду, адекватно реагировали на посторонние раздражители, случаи гибели животных отсутствовали. Полученные данные свидетельствует об ареактогенности, безвредности и переносимости препарата или диапазона доз, путей и кратности применения препарата.

Пример 2. Определение оптимального соотношения компонентов в препарате

Для выполнения поставленной задачи предварительно получали суспензии препарата, содержащие различные количества (0,1; 0,11; 0,12; 0,13; 0,14; 0,15; 0,16; 0,17; 0,18; 0,19; 0,20; 0,23; 0,26; 0,29; 0,31; 0,62; 1,2; 2,4; 2,8; 3,0% нанобентонита в 1 см³ (мл) 10%-го раствора противолучевого гамма-глобулина. Полученные варианты препарата испытывали на 60 белых мышах, затравленных кадмием хлоридом в дозе 1/5 ЛД₅₀ (31,0 мг/кг), разделенных на 20 групп, по 3 мыши в каждой. Затравленным CdCl₂ животным соответствующих (1-я, 2-я, 3-я, 4-я, и т.д.) групп через 24 часа после затравки CdCl₂ однократно подкожно вводили иммуноглобулин-нанобентонитовую суспензию, содержащую 0,1 мг/мл наночастиц бентонита (1-я группа); 0,11 мг/мл (2-я группа) и так далее до 0,30 мг/мл (20-я группа). Через 5 суток после затравки и введения соответствующих концентраций наночастиц бентонита в иммуноглобулине животные всех групп были убиты и исследованы на содержание в органах и тканях кадмия на плазменном атомно-адсорбционном спектрометре ААС-3. Установлено, что наименьшая концентрация кадмия была обнаружена в органах и тканях затравленных CdCl₂ животных, получавших суспензию иммуноглобулинов, содержащих наночастицы бентонита, начиная с концентрации 0,19-0,21 мг/мл. Использование менее концентрированных суспензий нанобентонита в иммуноглобулине от 0,1 до 0,18 мг/мл не обеспечивало достаточной декорпорации кадмия хлорида, а использование более концентрированных суспензий нанобентонита в 10%-м растворе иммуноглобулина приводило к незначительному повышению декорпорирующего действия, увеличивая, однако, расход наночастиц бентонита. Следовательно, оптимальные соотношения компонентов в предлагаемой композиции являются 0,19-0,21 мг нанобентонита в 1 см³ 10%-го раствора противолучевого гамма-глобулина.

Пример 3. Определение оптимальной лечебной дозы лечебно-декарпорирующей наноконструкции при парентеральном (подкожном) применении на подвергнутых комбинированному радиационно-химическому воздействию животных

Для этого глобулин-белковую суспензию подвергали лиофилизации и полученный лиофилизат ресуспендировали в кипяченой воде в концентрациях 100,0; 50,0; 25,0; 20,0; 19,0; 18,0; 17,0; 16,0; 15,0; 14,0 мг/мл. Приготовленные в вышеуказанных концентрациях иммуноглобулин-нанобентонитовые суспензии однократно подкожно вводили облученным гамма-лучами в летальной дозе (7,7 Гр) и затравленным CdCl₂ в дозе 1/5 ЛД_50-100 белым мышам, разделенным на 10 групп, по 10 животных в каждой. Установлено, что при однократном подкожном введении 100,0; 50,0; 25,0; 20,0; 19,0; 18,0; 17,0 и 16,0 мг/кг выживаемость животных составила 90% (выжило 9 животных из 10). При введении менее концентрированных иммуноглобулин-нанобентонитовых суспензий наступало постепенное снижение лечебного эффекта с 60% (при дозе 15,0 мг/кг) до 10% (при дозе 14,0 мг/кг). Следовательно, повышение лечебной дозы от 30,0 до 100,0 мг/кг не обеспечивает возрастания лечебного эффекта, а снижение лечебной дозы ниже 16,0 мг/кг ведет к резкому ослаблению лечебного эффекта. Следовательно, оптимальная лечебная доза предложенной композиции составляет 16,0-19,0 мг/кг живой массы.

Пример 4. Оценка лечебной эффективности предложенной нанокомпозиции при комбинированном поражении организма с.-х. животных

Опыты проводили на 25 овцах породы «Прекос» 18-месячного возраста со средней живой массой 38±3 кг. Животные были разделены на 5 групп, по 5 животных в каждой. Животные 1-й группы получали CdCl₂ однократно в дозе 1/4 ЛД₅₀ (45 мг/кг) с последующим облучением в дозе 4,2 Гр (ЛД₅₀ для овец) и подвергали их лечению по известному способу. Животных 2-й группы, облученных γ-лучами и затравленных CdCb в аналогичных дозах, подвергли лечению предложенным способом. Животных 3-й группы подвергли облучению γ-лучами в дозе ЛД₁₀₀ (6,0 Гр) и затравлению CdCl₂ в дозе 1/4 ЛД₅₀ и подвергали лечению известным способом путем подкожного введения глобулин-бентонитовой композиции на основе микрочастиц бентонита в дозе 25 мг/кг живой массы. Животных 4-й группы, облученных γ-лучами и затравленных CdCl₂ в аналогичных дозах, что и животных 3-й группы, подвергали лечению предложенной композицией путем однократного подкожного введения глобулин-бентонитовой композиции на основе наночастиц бентонита в дозе 19,0 мг/кг живой массы. Животных 5-й группы, облученных γ-лучами в дозе 6,0 Гр и затравленных CdCl₂ в дозе 1/4 ЛД₅₀, не лечили, и они служили контролем абсолютно смертельного радиационно-химического поражения.

За животными вели клиническое наблюдение, регистрируя павших и выживших животных в течение 30 суток после нанесения комбинированной патологии. Критериями лечебной эффективности испытуемых препаратов служили выживаемость пораженных двумя экологическими агентами (γ-лучи и CdCl₂) животных, выраженность клинического проявления комбинированной радиационно-химической патологии, степень декорпорации тяжелого металла из организма, степень детоксикации - по убыли концентрации радиоиндуцированных тканевых продуктов радиолиза (хиноидных радиотоксинов) в РБФ (реакция бентонитовой флокуляции) тест-системе с использованием антительного варианта бентонитового диагностикума (АТБД) на основе наночистого бентонита, содержанию лимфоцитов в периферической крови животных и по концентрации антирадикальных ферментов (супероксиддисмутазы и каталазы) в сыворотке крови пораженных γ-лучами и CdCl₂ животных с использованием метода спектрофотометрического анализа исследуемых проб. Результаты опытов представлены в таблице 1.

Из данных таблицы 1 видно, что при облучении в полулетальной дозе (ЛД50) и затравке CdCl₂ в дозе 1/4 ЛД₅₀ известный способ обеспечивает 80%-ю защиту от комбинированного поражения. Однако использование абсолютно летальной дозы γ-лучей в сочетании с кадмиевой затравкой в дозе 1/4 ЛД₅₀ резко снижает лечебный эффект известной композиции, снижая выживаемость животных в 4 раза (20%-я защита против 80% при полулетальном облучении животных). Использование предлагаемой композиции на фоне абсолютно летального комбинированного поражения обеспечивает 90%-ю защиту животных от радиационно-химической патологии против 20%-й защиты животных при использовании известного способа лечения.

В отличие от известного, использование предлагаемого средства обеспечивало эффективное лечение комбинированного радиационно-химического поражения, существенно повышая выживаемость пораженных в абсолютно летальных дозах γ-лучами животных, которое составляло 90% против 20% в известном. Эффективная защита организма от абсолютно летальных доз комбинированного поражения реализовалась путем нейтрализации радиотоксинов, обеспечивая тем самым защиту лимфоцитов (детерминантов выживаемости) от радиационной гибели, ингибируя снижение уровня антирадикальных ферментов - супероксиддисмутазы и каталазы, эффективно декорпорируя тяжелый металл из депонированного в критических органах токсиканта.

Таким образом, предлагаемый препарат для лечения радиационно-кадмиевого поражения обладает бифункциональным (лечебно-декорпорирующим) свойством, обеспечивает надежное лечение комбинированного радиационно-химического поражения, то есть объединяет в монопрепарате лечебное и декорпорирующее свойства при одновременном уменьшении в 1,29 раза лечебной дозы иммуноглобулина (16-19 мг/кг против 20-25 мг/кг у известного), а также расход бентонита при одновременном 4,5-кратном увеличении радио-химзащитной эффективности предлагаемого препарата по сравнению с известным прототипом.

Изобретение относится к области радиационной биологии и токсикологии, а именно к способу получения препарата для лечения животных при радиационно-кадмиевом поражении. Способ получения препарата для лечения животных при радиационно-кадмиевом поражении, предусматривающий суспендирование 0,19-0,21 мг высокодисперсной фракции бентонита с размерами частиц 78-80 нм в 1 мл 10%-ного раствора противолучевого гамма-глобулина при постоянном перемешивании путем шуттелирования, стерилизацию путем облучения на гамма-установке при поглощенной дозе 25 кГр, стерильную фасовку путем разлива в стеклянные флаконы емкостью 250-300 см³, герметичное закупоривание и хранение при температуре от 2 до 6°С. Изобретение позволяет лечить комбинированное радиационно-химическое поражение, объединить в препарате лечебное и декорпорирующее свойства при одновременном уменьшении лечебной дозы иммуноглобулина и расхода бентонита. 1 з.п. ф-лы, 1 табл., 4 пр.

1. Способ получения препарата для лечения животных при радиационно-кадмиевом поражении, предусматривающий суспендирование 0,19-0,21 мг высокодисперсной фракции бентонита с размерами частиц 78-80 нм в 1 мл 10%-ного раствора противолучевого гамма-глобулина при постоянном перемешивании путем шуттелирования, стерилизацию путем облучения на гамма-установке при поглощенной дозе 25 кГр, стерильную фасовку путем разлива в стеклянные флаконы емкостью 250-300 см³, герметичное закупоривание и хранение при температуре от 2 до 6°С.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что высокодисперсную фракцию бентонита с размерами частиц 78-80 нм получают путем диспергирования бентонитового порошка на ультразвуковой установке при частоте 18,5 кГц, мощности установки 80 Вт и амплитуде колебаний волновода 5 мкм.