СОЕДИНЕНИЯ БЕНЗОТИАДИАЗЕПИНА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В КАЧЕСТВЕ МОДУЛЯТОРОВ ЖЕЛЧНЫХ КИСЛОТ Российский патент 2025 года по МПК C07D285/36 A61K31/554 A61P1/16 A61P3/06 A61P3/08 A61P9/00 

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

В данной заявке испрашивается приоритет согласно заявке на патент Индии No.201911049980, поданной 4 декабря 2019 года, описание которой включено в данное описание ссылкой во всей ее полноте.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Изобретение относится к производным 1,2,5-бензотиадиазепина формулы (I). Эти соединения представляют собой модуляторы желчных кислот, обладающие активностью ингибирования апикального натрий-зависимого переносчика желчных кислот (ASBT) и/или переносчика желчных кислот печени (LBAT). Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим эти соединения, и к применению этих соединений в лечении сердечно-сосудистых заболеваний, нарушений метаболизма жирных кислот и утилизации глюкозы, желудочно-кишечных заболеваний и заболеваний печени.

ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Желчные кислоты представляют собой физиологические детергенты, которые играют важную роль в кишечной абсорбции и транспорте липидов, питательных веществ и витаминов. Они также являются сигнальными молекулами, которые активируют ядерные рецепторы и сигнальные пути клеток, которые регулируют липидный, глюкозный и энергетический метаболизм. Желчные кислоты являются стероидными кислотами, которые синтезируются из холестерина в печени и хранятся в желчном пузыре в виде смешанных мицелл. Во время пищеварения двенадцатиперстная кишка инициирует выброс гормонов, которые вызывают сокращение желчного пузыря, тем самым высвобождая желчные кислоты в тонком кишечнике, где они обеспечивают всасывание жирорастворимых витаминов и холестерина. Когда желчные кислоты достигают подвздошной кишки, они реадсорбируются из кишечника и секретируются в кровь портальной вены для возвращения в печень через портальное венозное кровообращение. Таким образом, более 90% желчных кислот перерабатываются и возвращаются в печень. Эти желчные кислоты затем транспортируются через синусоидальную мембрану гепатоцитов и повторно секретируются через канальцевую мембрану в желчь. При первом прохождении 75-90% желчных кислот поглощаются гепатоцитами, завершая один цикл энтерогепатической циркуляции. Фракция желчных кислот, которая не выводится печенью, попадает в системный кровоток, где свободные желчные кислоты фильтруются почечными клубочками, эффективно регенерируются в проксимальных канальцах и выводятся обратно в большой круг кровообращения. Интересно, что наибольшая часть желчных кислот, секретируемых через канальцевую мембрану в желчь, поступает из рециркулирующего пула, и менее 10% приходится на новый синтез в печени de novo. Небольшая часть желчных кислот, которая не реабсорбируется в подвздошной кишке, достигает толстой кишки. Внутри просвета кишечника первичные желчные кислоты превращаются во вторичные желчные кислоты под действием кишечных бактерий, главным образом, в результате реакций одинарного или двойного дегидроксилирования стероидного ядра. Желчные кислоты, которые не всасываются в кишечнике, затем выводятся с калом.

В целом, эффективная транспортная система помогает поддерживать постоянный пул желчных кислот, обеспечивая достаточно высокие уровни конъюгированных желчных кислот в тонком кишечнике, чтобы способствовать всасыванию липидов, а также снизить бактериальную нагрузку на тонкий кишечник. Эта система также минимизирует потерю желчных кислот с калом и мочой и защищает кишечные и гепатобилиарные компартменты, устраняя потенциально цитотоксические детергенты (согласно обзорам Kosters and Karpen (Xenobiotica 2008, vol. 38, p. 1043-1071); Chiang (J. Lipid Res. 2009, vol. 50, p. 1955-1966); и Dawson (Handb. Exp. Pharmacol. 2011, vol. 201, p. 169-203)).

Было обнаружено, что регулирование размера пула желчных кислот играет ключевую роль в гомеостазе холестерина за счет преобразования холестерина в желчную кислоту в печени, что является основным путем выведения холестерина из организма. Печень играет важную роль в удалении из организма эндогенных и ксенобиотических соединений. Нормальная гепатобилиарная секреция и энтерогепатическая циркуляция необходимы для выведения из организма эндогенных соединений, таких как холестерин, билирубин и их метаболиты, тем самым поддерживая гомеостаз липидов и желчных кислот (Kosters and Karpen, Xenobiotica 2008, vol. 38, p. 1043-1071).

Реабсорбция желчных кислот в подвздошной кишке может подавляться соединениями-ингибиторами апикального натрий-зависимого переносчика желчных кислот (ASBT). Сообщалось, что ингибирование реабсорбции желчных кислот полезно в лечении нескольких заболеваний, включая дислипидемию, диабет, ожирение, запоры, холестатические заболевания печени, неалкогольный стеатогепатит и другие заболевания печени. Ряд соединений-ингибиторов ASBT был раскрыт за последние десятилетия, см., например, WO 93/16055, WO 94/18183, WO 94/18184, WO 96/05188, WO 96/08484, WO 96/16051, WO 97/33882, WO 98/03818, WO 98/07449, WO 98/40375, WO 99/35135, WO 99/64409, WO 99/64410, WO 00/47568, WO 00/61568, WO 00/38725, WO 00/38726, WO 00/38727, WO 00/38728, WO 00/38729, WO 01/66533, WO 01/68096, WO 02/32428, WO 02/50051, WO 03/020710, WO 03/022286, WO 03/022825, WO 03/022830, WO 03/061663, WO 03/091232, WO 03/106482, WO 2004/006899, WO 2004/076430, WO 2007/009655, WO 2007/009656, WO 2011/137135, WO 2019/234077, WO 2020/161216, WO 2020/161217, DE 19825804, ЕР 864582, ЕР 489423, ЕР 549967, ЕР 573848, ЕР 624593, ЕР 624594, ЕР 624595, ЕР 624596, ЕР 0864582, ЕР 1173205, ЕР 1535913 и ЕР 3210977.

Несмотря на ряд соединений-ингибиторов ASBT, о которых сообщалось ранее, существует потребность в дополнительных соединениях, модулирующих желчные кислоты, которые имеют оптимизированный профиль в отношении эффективности, селективности и биодоступности.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Было обнаружено, что некоторые производные 1,2,5-бензотиадиазепина являются мощными ингибиторами апикального натрий-зависимого переносчика желчных кислот (ASBT) и/или переносчика желчных кислот печени (LBAT) и могут быть полезны для лечения заболеваний, при которых желательно ингибирование циркуляции желчных кислот.

В первом аспекте изобретение относится к соединению формулы (I)

где

R¹ и R² каждый независимо представляет собой С_1-4алкил;

R³ независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, C_1-4алкила, С_1-4галогеналкила, С_1-4алкокси, С_1-4галогеналкокси, циано, нитро, амино, N-(С_1-4алкил)амино, N,N-ди(С_1-4алкил)амино и N-(арил-С_1-4алкил)амино;

n равен целому числу 1, 2 или 3; и

R⁴ выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, циано, C_1-4алкила, С_3-6циклоалкила, C_1-4алкокси, С_3-6циклоалкилокси, С_1-4алкилтио, С_3-6циклоалкилтио, амино, N-(С_1-4алкил)амино и N,N-ди(С_1-4алкил)амино;

или его фармацевтически приемлемой соли,

при условии что указанное соединение не представляет собой соединение, выбранное из группы, состоящей из:

2-((3,3-дибутил-7-метил-5-фенил-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)уксусной кислоты;

2-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-5-фенил-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)уксусной кислоты; и

2-((7-бром-3,3-дибутил-5-фенил-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)уксусной кислоты.

В некоторых воплощениях R¹ представляет собой н-бутил.

В некоторых воплощениях R² представляет собой С_2-4алкил. В предпочтительном воплощении R² представляет собой этил. В другом предпочтительном воплощении R² представляет собой н-пропил. В еще одном предпочтительном воплощении R² представляет собой н-бутил.

В некоторых воплощениях R³ независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, циано, C_1-4галогеналкила, С_1-4алкокси и С_1-4галогеналкокси. В предпочтительном воплощении R³ независимо выбран из группы, состоящей из водорода, фтора, хлора, брома, гидрокси, циано, трифторметилс, метокси и трифторметокси.

В предпочтительном воплощении n равен 1, т.е. фенильное кольцо замещено только одним заместителем R³. В другом предпочтительном воплощении R³ находится в пара-положении.

В некоторых воплощениях R⁴ выбран из группы, состоящей из галогена, гидрокси, циано, С_1-4алкила, С_1-4алкокси, С_1-4алкилтио, амино, N-(С_1-4алкил)амино и N,N-ди(С_1-4алкил)амино. В предпочтительном воплощении R⁴ выбран из группы, состоящей из фтора, хлора, брома, гидрокси, циано, метила, метокси, этокси, метилтио, этилтио, амино, метиламино и диметиламино. В другом предпочтительном воплощении R⁴ выбран из группы, состоящей из фтора, хлора, брома, гидрокси, циано, метокси, этокси, метилтио, этилтио и диметиламино.

В предпочтительном воплощении соединение формулы (I) представляет собой соединение формулы (I-а)

где

R² представляет собой С_2-4алкил;

R³ независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, циано, С_1-4галогеналкила, С_1-4алкокси и С_1-4галогеналкокси;

n равен целому числу 1 или 2;

R⁴ выбран из группы, состоящей из галогена, гидрокси, циано, С_1-4алкила, С_1-4алкокси, C_1-4алкилтио, амино, N-(С_1-4алкил)амино и N,N-ди(С_1-4алкил)амино;

или его фармацевтически приемлемой соли,

при условии что указанное соединение не представляет собой соединение, выбранное из группы, состоящей из:

2-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-5-фенил-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)уксусной кислоты; и

2-((7-бром-3,3-дибутил-5-фенил-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)уксусной кислоты.

В другом предпочтительном воплощении соединение формулы (I) представляет собой соединение формулы (I-b)

где

R² представляет собой этил, н-пропил или н-бутил;

R³ выбран из группы, состоящей из водорода, фтора, хлора, брома, гидрокси, циано, трифторметила, метокси и трифторметокси;

R⁴ выбран из группы, состоящей из фтора, хлора, брома, гидрокси, циано, метокси, этокси, метилтио, этилтио и диметиламино;

или его фармацевтически приемлемой соли,

при условии что указанное соединение не представляет собой соединение, выбранное из группы, состоящей из:

2-((3,3-дибутил-7-(метилтио)-5-фенил-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)уксусной кислоты; и

2-((7-бром-3,3-дибутил-5-фенил-1,1-диоксидо-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)уксусной кислоты.

Предпочтительные соединения по изобретению представляют собой соединения формулы (I-b), как определено выше, где М и R¹-R⁴ являются такими, как указано в Таблице 1 ниже, или их фармацевтически приемлемую соль:

В конкретном воплощении соединение формулы (I) выбрано из группы, состоящей из:

2-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидробензо-1,2,5-тиадиазепин-8-ил)окси)уксусной кислоты;

(S)-2-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)уксусной кислоты; и

(R)-2-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)уксусной кислоты;

или его фармацевтически приемлемой соли.

Используемый в данном документе термин «галоген» относится к фтору, хлору, брому и йоду.

Используемый в данном документе термин «С_1-6алкил» относится к алкильной группе с прямой или разветвленной цепью, имеющей от 1 до 6 атомов углерода, и термин «С_1-4алкил» относится к алкильной группе с прямой или разветвленной цепью, имеющей от 1 до 4 атомов углерода. Примеры С_1-4алкила включают метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил и трет-бутия.

Используемый в данном документе термин «С_1-4 галогеналкил» относится к С_1-4алкильной группе с прямой или разветвленной цепью, как определено в данном документе, в которой один или более атомов водорода заменены галогеном. Примеры С_1-4галогеналкила включают хлорметил, фторэтил и трифторметил.

Используемые в данном документе термины «С_1-4алкокси» и «С_1-4алкилтио» относятся к С_1-4алкильной группе с прямой или разветвленной цепью, присоединенной к остальной части молекулы через атом кислорода или серы, соответственно.

Используемый в данном документе термин «С_3-6циклоалкил» относится к моноциклическому насыщенному углеводородному кольцу, имеющему от 3 до 6 атомов углерода. Примеры С_3-6циклоалкила включают циклопропил, циклобутил, циклопентил и циклогексил.

Термин «арил» означает ароматическое моноциклическое кольцо, состоящее из 6 атомов углерода, или ароматическую бициклическую кольцевую систему, состоящую из 10 атомов углерода. Примеры ар ила включают фенил, нафтил и азуленил.

Термин «амино» относится к группе -NH₂. Используемые в данном документе термины «N-(С_1-4алкил)амино» и «N,N-ди(С_1-4алкил)амино» относятся к аминогруппе, в которой один или оба атома водорода, соответственно, заменены на С_1-4алкильную группу с прямой или разветвленной цепью. Примеры N-(С_1-4алкил)амино включают метиламино, этиламино и трет-бутиламино, и примеры N,N-ди(С_1-4алкил)амино включают диметиламино и диэтиламино.

Используемый в данном документе термин «N-(арил-С_1-4алкил)амино» относится к аминогруппе, в которой атом водорода заменен на арил-С_1-4алкильную группу. Примеры N-(арил-С_1-4алкил)амино включают бензиламино и фенилэтиламино.

Используемый здесь термин «фармацевтически приемлемый» относится к тем соединениям, материалам, композициям и/или лекарственным формам, которые подходят для фармацевтического применения человеком и которые обычно безопасны, нетоксичны и не являются нежелательными ни с биологической, ни с иной точки зрения.

Используемый здесь термин «примерно» относится к значению или параметру в данном документе, который включает (и описывает) воплощения, которые относятся к этому значению или параметру как таковому. Например, описание, относящееся к «примерно 20», включает описание «20». Числовые диапазоны включают числа, определяющие диапазон. Вообще говоря, термин «примерно» относится к указанному значению переменной и ко всем значениям переменной, которые находятся в пределах экспериментальной ошибки указанного значения (например, в пределах 95% доверительного интервала для среднего) или в пределах 10 процентов от указанного значения, в зависимости от того, какое из них больше.

1,2,5-Бензотиадиазепиновые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли являются ингибиторами апикального натрий-зависимого переносчика желчных кислот (ингибиторы ASBT), переносчика желчных кислот печени (ингибиторы LBAT) или как апикального натрий-зависимого переносчика желчных кислот, так и переносчика желчных кислот печени (двойные ингибиторы ASBT/LBAT). Следовательно, они полезны в лечении или предупреждении состояний, нарушений и заболеваний, при которых желательно ингибирование циркуляции желчных кислот, таких как сердечно-сосудистые заболевания, нарушения метаболизма жирных кислот и утилизации глюкозы, желудочно-кишечные заболевания и заболевания печени.

Сердечно-сосудистые заболевания и нарушения метаболизма жирных кислот и утилизации глюкозы включают, без ограничения, гиперхолестеринемию; нарушения обмена жирных кислот; сахарный диабет 1 и 2 типа; осложнения диабета, в том числе катаракту, микро- и макрососудистые заболевания, ретинопатию, невропатию, нефропатию и замедленное заживление ран, ишемию тканей, диабетическую стопу, артериосклероз, инфаркт миокарда, острый коронарный синдром, нестабильную стенокардию, стабильную стенокардию, инсульт, окклюзионную болезнь периферических артерий, кардиомиопатию, сердечную недостаточность, нарушения сердечного ритма и рестеноз сосудов; заболевания, связанные с диабетом, такие как инсулинорезистентность (нарушение гомеостаза глюкозы), гипергликемию, гиперинсулинемию, повышенные уровни жирных кислот или глицерина в крови, ожирение, дислипидемию, гиперлипидемию, включая гипертриглицеридемию, метаболический синдром (синдром X), атеросклероз и гипертензию; и для повышения уровня липопротеинов высокой плотности.

Заболевания и расстройства желудочно-кишечного тракта включают запор (включая хронический запор, функциональный запор, хронический идиопатический запор (CIC), периодический/спорадический запор, запор на фоне сахарного диабета, запор на фоне инсульта, запор на фоне хронического заболевания почек, запор на фоне рассеянного склероза, запор на фоне болезни Паркинсона, запор на фоне системного склероза, запор, вызванный лекарствами, синдром раздраженного кишечника с запором (IBS-C), синдром раздраженного кишечника смешанный (IBS-M), детский функциональный запор и запор, вызванный опиоидами); болезнь Крона; первичную мальабсорбцию желчных кислот; синдром раздраженного кишечника (IBS); воспалительное заболевание кишечника (IBD); воспаление подвздошной кишки; и рефлюксную болезнь и ее осложнения, такие как пищевод Барретта, желчный рефлюксный эзофагит и желчный рефлюксный гастрит.

Заболевание печени, как определено в данном документе, представляет собой любое заболевание печени и связанных с ней органов, таких как поджелудочная железа, воротная вена, паренхима печени, внутрипеченочные желчные протоки, внепеченочные желчные протоки и желчный пузырь. В некоторых случаях заболевание печени представляет собой заболевание печени, зависимое от желчных кислот. Заболевания и нарушения печени включают, без ограничения, наследственное нарушение метаболизма печени; врожденные нарушения синтеза желчной кислоты; врожденные аномалии желчных протоков; атрезию желчевыводящих путей; билиарную атрезию после проведения операции по Касаи; посттрансплантационную атрезию желчных путей; неонатальный гепатит; неонатальный холестаз; наследственные формы холестаза; церебросухожильный ксантоматоз; вторичный дефект синтеза желчных кислот (ВА); синдром Цельвегера; заболевание печени, связанное с муковисцидозом; дефицит альфа1-антитрипсина; синдром Алажиля (ALGS); синдром Байлера; первичный дефект синтеза желчной кислоты (ВА); прогрессирующий семейный внутрипеченочный холестаз (PFIC), включая PFIC-1, PFIC-2, PFIC-3 и неспецифический PFIC, PFIC после отведения желчи и посттрансплантационный PFIC; доброкачественный рецидивирующий внутрипеченочный холестаз (BRIC), включая BRIC1, BRIC2 и неспецифический BRIC, BRIC после трансплантации желчных путей и BRIC после трансплантации печени; аутоиммунный гепатит; первичный билиарный цирроз (РВС); фиброз печени; неалкогольную жировую болезнь печени (NAFLD); неалкогольный стеатогепатит (NASH); портальную гипертензию; холестаз; холестаз при синдроме Дауна; лекарственный холестаз; внутрипеченочный холестаз беременных (желтуха при беременности); внутрипеченочный холестаз; внепеченочный холестаз; холестаз, связанный с парентеральным питанием (PNAC); холестаз, связанный с низким уровнем фосфолипидов; синдром холестаза с лимфедемами 1 (LSC1); первичный склерозирующий холангит (PSC); холангит, связанный с иммуноглобулином G4; первичный билиарный холангит; желчекаменную болезнь (желчные камни); желчный литиаз; холедохолитиаз; желчнокаменный панкреатит; болезнь Кароли; злокачественное новообразование желчных протоков; злокачественное новообразование, вызывающее непроходимость желчного дерева; стриктуры желчных путей; холангиопатию при СПИД; ишемическую холангиопатию; кожный зуд из-за холестаза или желтухи; панкреатит; хроническое аутоиммунное заболевание печени, ведущее к прогрессирующему холестазу; стеатоз печени; алкогольный гепатит; острый жировой гепатоз; ожирение печени при беременности; лекарственный гепатит; нарушения при перенасыщении железом; врожденный дефект синтеза желчных кислот 1-го типа (BAS 1-го типа); лекарственное поражение печени (DILI); фиброз печени; врожденный фиброз печени; цирроз печени; гистиоцитоз клеток Лангерганса (LCH); неонатальный ихтиоз, склерозирующий холангит (NISCH); эритропоэтическую протопорфирию (ЕРР); идиопатическую дуктопению в зрелом возрасте (IAD); идиопатический неонатальный гепатит (PNH); несиндромальную недостаточность междольковых желчных протоков (NS PILBD); цирроз у детей североамериканских индейцев (NAIC); саркоидоз печени; амилоидоз; некротический энтероколит; токсичность сывороточной желчной кислоты, включая нарушения сердечного ритма (например, фибрилляцию предсердий) при аномальном профиле сывороточных желчных кислот, кардиомиопатию, связанную с циррозом печени («холекардию»), и истощение скелетных мышц, связанное с холестатической болезнью печени; поликистоз печени; вирусный гепатит (включая гепатит А, гепатит В, гепатит С, гепатит D и гепатит Е); гепатоцеллюлярную карциному (гепатому); холангиокарциному; рак желудочно-кишечного тракта, связанный с желчными кислотами; и холестаз, вызванный опухолями и новообразованиями печени, желчевыводящих путей и поджелудочной железы. Соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли также полезны для усиления терапии кортикостероидами при заболевании печени.

Другие заболевания, которые можно лечить или предупреждать с помощью соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемых солей, включают синдромы гиперабсорбции (включая абеталипопротеинемию, семейную гипобеталипопротеинемию (FHBL), болезнь задержки хиломикронов (CRD) и ситостеролемию); гипервитаминоз и остеопетроз; гипертензию; клубочковую гиперфильтрацию; поликистоз почек (PKD), включая аутосомно-доминантный поликистоз почек (ADPKD) и аутосомно-рецессивный поликистоз почек (ARPKD); и кожный зуд при почечной недостаточности. Соединения также полезны для защиты от повреждения почек, связанного с заболеванием печени или метаболическим заболеванием.

Транспорт желчных кислот в организме человека контролируется действием членов семейства белков-переносчиков растворенных веществ SLC10, в частности, полипептида, переносящего Na+-таурохолат (NTCP, также называемого переносчиком желчных кислот печени (LBAT); символ гена SLC10A1), который экспрессируется в синусоидальной мембране гепатоцитов, и апикального натрий-зависимого переносчика желчных кислот (ASBT, также называемого переносчиком желчных кислот подвздошной кишки (IBAT), ISBT, АВАТ или NTCP2; генный символ SLC10A2), который экспрессируется в апикальной мембране энтероцитов подвздошной кишки, клетках проксимальных почечных канальцев, билиарном эпителии, больших холангиоцитах и эпителиальных клетках желчного пузыря. В печени желчные кислоты эффективно извлекаются из портальной крови переносчиком желчных кислот печени (LBAT) и повторно секретируются через канальцевую мембрану с помощью насоса экспорта солей желчных кислот (BSEP; символ тепа, АВСВ11). Реабсорбция желчных кислот в подвздошной кишке осуществляется апикальным натрий-зависимым переносчиком желчных кислот (ASBT), где его обычно называют переносчиком желчных кислот в подвздошной кишке (IBAT). Как LBAT, так и ASBT действуют как электрогенные котранспортеры растворенного натрия, которые переносят два или более иона Na⁺ на молекулу растворенного вещества.

Ксенобиотики и эндобиотики, включая желчные кислоты, поглощаются печенью из портальной крови и секретируются в желчь различными транспортными белками с индивидуальной специфичностью к субстрату. Конъюгированные с глицином и таурином желчные кислоты существуют в анионной форме и не могут проникать через мембраны путем диффузии и, таким образом, полностью зависят от мембранных транспортных белков для входа или выхода из гепатоцита (Kosters and Karpen, Xenobiotica 2008, vol. 38, p. 1043-1071). ASBT и LBAT предпочитают конъюгированные с глицином и таурином соли желчных кислот по сравнению с их неконъюгированными аналогами и демонстрируют более высокое сродство к солям дигидрокси-желчных кислот, чем к солям тригидрокси-желчных кислот. Субстратов, не являющихся желчными кислотами, для ASBT пока не обнаружено, однако также было обнаружено, что LBAT переносит различные стероидные сульфаты, гормоны и ксенобиотики.

LBAT не так подробно охарактеризован как ASBT, с точки зрения требований к ингибированию лекартсвенными средствами. Dong et al. идентифицировали одобренные FDA лекарственные средства, которые ингибируют LBAT человека, и сравнили требования к ингибированию LBAT и ASBT. Был проведен ряд исследований ингибирования LBAT с использованием лекарственных средств, одобренных FDA, в сочетании с разработкой итеративной вычислительной модели. Скрининговые исследования позволили идентифицировать 27 лекарственных средств в качестве новых ингибиторов LBAT, включая ирбесартан (Ki равно 11,9 мкМ) и эзетимиб (Ki равно 25,0 мкМ). Общая особенность фармакофора указывает на то, что два гидрофоба и один акцептор водородной связи важны для ингибирования LBAT. Из 72 лекарственных средств, проверенных in vitro, в общей сложности 31 лекарственное средство ингибировало LBAT, в то время как 51 лекарственное средство (то есть более половины) ингибировало ASBT. Следовательно, несмотря на перекрытие ингибиторов, ASBT неожиданно оказался более пермиссивным к ингибированию лекарственного средства, чем LBAT, и это может быть связано с тем, что LBAT обладает меньшим количеством фармакофорных свойств (Dong et al., Mol. Pharm. 2013, vol. 10, p. 1008-1019).

Vaz et al. описывают идентификацию дефицита LBAT как новую врожденную ошибку метаболизма с относительно мягким клиническим фенотипом. Идентификация дефицита LBAT подтверждает, что этот переносчик является основной системой импорта конъюгированных солей желчных кислот в печень, но также указывает на то, что вспомогательные переносчики способны поддерживать энтерогепатический цикл в его отсутствие (Vaz et al., Hepatology 2015, vol. 61, p. 260-267). Эти данные подтверждают гипотезу о том, что ингибирование LBAT является безопасным механизмом действия, поскольку гепатоциты все еще имеют возможность поглощать необходимое количество желчных кислот.

Liu et al. описывают идентификацию нового типа гиперхоланемии, которая связана с гомозиготностью по мутации p. Ser267Phe в SLC10A1 (LBAT). Частота аллелей этой мутации в гене SLC10A1 варьирует в разных популяциях, при этом наибольшая частота встречается в Южном Китае (8% и 12% у китайских популяций Хань и Дай, соответственно) и во Вьетнаме (11%). Считалось, что эта «скрытая» гиперхоланемия затронула 0,64% китайской популяции Южных Хань, 1,44% популяции Дай и 1,21% населения Вьетнама. Также наблюдалось повышение уровней конъюгированной и неконъюгированной ВА в сыворотке крови у гомозиготных индивидуумов. Liu et al. предполагают, что это обнаружение, скорее всего, связано со снижением транспорта ВА из портального кровотока в гепатоциты. Это подтверждает гипотезу о том, что физиологическая функция энтерогепатической циркуляции заключается не только в рециркуляции желчных кислот, но и в удалении желчных кислот из кровотока для достижения гомеостаза (Karpen and Dawson, Hepatology 2015, vol. 61, p. 24-27). Альтернативно, печень может синтезировать повышенные уровни желчных кислот для компенсации пониженной энтерогепатической рециркуляции у гомозиготных носителей. Поскольку LBAT также переносит неконъюгированные желчные кислоты, увеличение количества неконъюгированных желчных кислот в этом исследовании не было неожиданным (Liu et al., Scientific Reports 2017, 7: 9214, p. 1-7).

Было обнаружено, что LBAT отрицательно регулируется при нескольких формах холестатического поражения печени и холестаза, тогда как ASBT отрицательно регулируется при различных желудочно-кишечных расстройствах, таких как болезнь Крона, первичная мальабсорбция желчных кислот, воспалительные заболевания кишечника и воспаление подвздошной кишки, но положительно регулируется при холестазе. LBAT также функционирует как клеточный рецептор для проникновения вируса гепатита В (HBV) и вируса гепатита D (HDV), которые, в свою очередь, являются основной причиной заболеваний печени и гепатоцеллюлярной карциномы.

Ингибирование ASBT было исследовано на предмет снижения уровня холестерина в плазме и улучшения инсулинорезистентности, а также для уменьшения нагрузки желчных кислот в печени при холестатической болезни печени. Кроме того, было обнаружено, что ингибирование ASBT восстанавливает уровни инсулина и нормогликемию, что делает ингибирование ASBT перспективным лечением сахарного диабета 2 типа. Ингибиторы ASBT также используют для лечения функциональных запоров.

Поскольку ASBT преимущественно экспрессируется в подвздошной кишке (где его часто называют IBAT), ингибиторы ASBT не обязательно должны быть доступны системно. С другой стороны, ASBT также экспрессируется в клетках проксимальных канальцев почек. Следовательно, системные ингибиторы ASBT могут также ингибировать обратный захват желчных кислот почками. Полагают, что это приведет к повышению уровня желчных кислот в моче и к усиленному удалению желчных кислот из организма с мочой. Поэтому ожидается, что системно доступные ингибиторы ASBT, которые оказывают свое действие не только на подвздошную кишку, но и на почки, приведут к большему снижению уровней желчных кислот, чем несистемно доступные ингибиторы ASBT, которые оказывают свое действие только на подвздошную кишку.

Соединения, обладающие высокой активностью ингибирования ASBT, особенно подходят для лечения заболеваний печени, вызывающих холестаз, таких как прогрессирующий семейный внутрипеченочный холестаз (PFIC), синдром Алажиля, атрезия желчных путей и неалкогольный стеатогепатит (NASH).

Атрезия желчевыводящих путей представляет собой редкое заболевание печени у детей, которое включает частичную или полную закупорку (или даже отсутствие) крупных желчных протоков. Эта блокировка или отсутствие вызывает холестаз, который приводит к накоплению желчных кислот, которые повреждают печень. В некоторых воплощениях накопление желчных кислот происходит во внепеченочных желчных протоках. В некоторых воплощениях накопление желчных кислот происходит во внутрипеченочных желчных протоках. Современный стандарт лечения представляет собой процедуру Касаи, являющуюся операцией по удалению закупоренных желчных протоков и прямому соединению части тонкой кишки с печенью. В настоящее время нет одобренных лекарственных препаратов для лечения этого расстройства.

В настоящем документе предложены способы лечения атрезии желчных путей у субъекта, нуждающегося в этом, включающие введение терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях субъект прошел процедуру Касаи перед введением соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях субъекту вводят соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль до прохождения процедуры Касаи. В некоторых воплощениях лечение атрезии желчных путей снижает уровень сывороточных желчных кислот у субъекта. В некоторых воплощениях уровень сывороточных желчных кислот определяют, например, с помощью ферментативного анализа ELISA или анализов для измерения общего количества желчных кислот, как описано у Danese et al., PLoS One. 2017, vol. 12 (6): e0179200, который полностью включен в настоящий документ ссылкой. В некоторых воплощениях уровень сывороточных желчных кислот может снижаться, например, на 10-40%, 20-50%, 30-60%, 40-70%, 50-80% или более 90% от уровня сывороточных желчных кислот до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях лечение атрезии желчных путей включает лечение зуда.

PFIC представляет собой редкое генетическое заболевание, которым по оценкам страдает один на каждые 50000-100000 детей, рожденных во всем мире, и которое вызывает прогрессирующее, опасное для жизни заболевание печени.

Одним из проявлений PFIC является зуд, который часто приводит к серьезному ухудшению качества жизни. В некоторых случаях PFIC приводит к циррозу и печеночной недостаточности. Современные методы лечения включают частичное внешнее отведение желчных протоков (PEBD) и трансплантацию печени, однако эти варианты могут нести значительный риск послеоперационных осложнений, а также психологических и социальных проблем.

Были идентифицированы три альтернативных генных дефекта, которые коррелируют с тремя отдельными подтипами PFIC, известными как типы 1, 2 и 3:

• PFIC типа 1, который иногда называют «болезнью Байлера», вызывается нарушением секреции желчи из-за мутаций в гене АТР8В1, который кодирует белок, помогающий поддерживать соответствующий баланс жиров, известных как фосфолипиды, в клеточных мембранах в желчных протоках. Дисбаланс этих фосфолипидов связан с холестазом и повышенным содержанием желчных кислот в печени. У субъектов, пораженных PFIC типа 1, холестаз обычно развивается в первые месяцы жизни, а при отсутствии хирургического лечения прогрессирует до цирроза и терминальной стадии заболевания печени до конца первого десятилетия жизни.

• PFIC типа 2, который иногда называют «синдромом Байлера», вызывается нарушением секреции солей желчных кислот из-за мутаций в гене АВСВ11, который кодирует белок, известный как насос экспорта желчной соли, который выводит желчные кислоты из печени. У субъектов с PFIC типа 2 часто развивается печеночная недостаточность в течение первых нескольких лет жизни, и они подвержены повышенному риску развития типа рака печени, известного как гепатоцеллюлярная карцинома.

• PFIC типа 3, который обычно проявляется в первые годы детства прогрессирующим холестазом, вызывается мутациями в гене АВСВ4, который кодирует переносчик, перемещающий фосфолипиды через клеточные мембраны.

Кроме того, предполагается, что причиной PFIC являются мутации гена TJP2, гена NR1H4 или гена Myo5b. Кроме того, у некоторых субъектов с PFIC нет мутации ни в одном из генов АТР8В1, АВСВ11, АВСВ4, TJP2, NR1H4 или Myo5b. В этих случаях причина данного состояния неизвестна.

Типичные мутации гена АТР8В1 или полученного белка перечислены в Таблицах 2 и 3 с нумерацией на основе человеческого белка АТР8В1 дикого типа (например, SEQ ID NO: 1) или гена (например, SEQ ID NO: 2). Типичные мутации гена АВСВ11 или полученного белка перечислены в Таблицах 4 и 5 с нумерацией на основе человеческого белка АВСВ11 дикого типа (например, SEQ ID NO: 3) или гена (например, SEQ ID NO: 4).

Специалистам в данной области техники понятно, что положение аминокислоты в последовательности референсного белка, которое соответствует конкретному положению аминокислоты в SEQ ID NO: 1 или 3, может быть определено путем выравнивания последовательности референсного белка с SEQ ID NO: 1 или 3 (например, с помощью программного обеспечения, такого как ClustalW2). Изменения в этих остатках (называемые в данном документе «мутациями») могут включать одиночные или множественные аминокислотные замены, вставки внутри последовательностей или фланкирующие их, а также делеции внутри последовательностей или фланкирующие их. Как может быть понятно специалистам в данной области техники, положение нуклеотида в последовательности референсного гена, которое соответствует определенному положению нуклеотида в SEQ ID NO: 2 или 4, может быть определено путем выравнивания последовательности референсного гена с SEQ ID NO: 2 или 4 (например, с помощью программного обеспечения, такого как ClustalW2). Изменения этих остатков (называемые в данном документе «мутациями») могут включать замены одного или нескольких нуклеотидов, вставки внутри последовательностей или фланкирующие их, а также делеции внутри последовательностей или фланкирующие их. См. также Kooistra, et al., "KLIFS: A structural kinase-ligand interaction database," Nucleic Acids Res. 2016, vol. 44, no. D1, pp. D365-D371, который полностью включен в настоящий документ ссылкой.

Каноническая последовательность белка АТР8В1 (SEQ ID NO: 1) - Uniprot ID O43520

Каноническая последовательность ДНК для АТР8В1 (SEQ ID NO: 2)

В некоторых воплощениях мутация в АТР8В1 выбрана из L127P, G308V, Т456М, D554N, F529del, I661T, Е665Х, R930X, R952X, R1014X и G1040R.

Каноническая последовательность белка АВСВ11 (SEQ ID NO: 3) - Uniprot ID O95342

Каноническая последовательность ДНК АВСВ11 (SEQ ID NO: 4)

^А Мутация в «X» обозначает ранний стоп-кодон

Список литературы для Таблиц 4 и 5

¹ Noe et al., J Hepatol. 2005, vol. 43(3), p. 536-543.

² Lam et al., Am J Physiol Cell Physiol. 2007, vol. 293(5), p. C1709-16.

³ Stindt et al., Liver Int. 2013, vol. 33(10), p. 1527-1735.

⁴ Gao et al., Shandong Yiyao 2012, vol. 52(10), p. 14-16.

⁵ Strautnieks et al., Gastroenterology. 2008, vol. 134(4), p. 1203-1214.

⁶ Kagawa et al., Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2008, vol. 294(1), p. G58-67.

⁷ Byrne et al., Hepatology. 2009, vol. 49(2), p. 553-567.

⁸ Chen et al., J Pediatr. 2008, vol. 153(6), p. 825-832.

⁹ Davit-Spraul et al., Hepatology 2010, vol. 51(5), p. 1645-1655.

¹⁰ Droge et al., Sci Rep. 2016, vol. 6: 24827.

¹¹ Lang et al., Pharmacogenet Genomics. 2007, vol. 17(1), p. 47-60.

¹² Ellinger et al., World J Gastroenterol. 2017, vol. 23(29), p.: 5295-5303.

¹³ Vitale et al., J Gastroenterol. 2018, vol. 53(8), p. 945-958.

¹⁴ Knisely et al., Hepatology. 2006, vol. 44(2), p. 478-86.

¹⁵ Ellis et al., Hepatology. 2018, vol. 67(4), p. 1531-1545.

¹⁶ Lam et al., J Hepatol. 2006, vol. 44(1), p. 240-242.

¹⁷ Varma et al., Hepatology 2015, vol. 62(1), p. 198-206.

¹⁸ Treepongkaruna et al., World J Gastroenterol. 2009, vol. 15(34), p. 4339-4342.

¹⁹ Zarenezhad et al., Hepatitis Monthly: 2017, vol. 17(2); e43500.

²⁰ Hayashi et al., Hepatol Res. 2016, vol. 46(2), p. 192-200.

²¹ Guorui et al., Linchuang Erke Zazhi 2013, vol. 31(10), 905-909.

²² van Mil et al., Gastroenterology. 2004, vol. 127(2), p. 379-384.

²³ Anzivino et al., Dig Liver Dis. 2013, vol. 45(3), p. 226-232.

²⁴ Park et al., World J Gastroenterol. 2016, vol. 22(20), p. 4901-4907.

²⁵ knagawa et al., J Hum Genet. 2018, vol. 63(5), p. 569-577.

²⁶ Giovannoni et al., PLoS One. 2015, vol. 10(12): e0145021.

²⁷ Hu et al., Mol Med Rep.2014, vol. 10(3), p. 1264 1274.

²⁸ Lang et al,. Drug Metab Dispos. 2006, vol. 34(9), p. 1582-1599.

²⁹ Masahata et al., Transplant Proc. 2016, vol. 48(9), p. 3156-3162.

³⁰ Holz et al., Hepatol Commun. 2018, vol. 2(2), p. 152-154.

³¹ Li et al., Hepatology International 2017, vol. 11, No. 1, Supp. Supplement 1, pp. S180. Abstract Number: OP284.

³² Francalanci et al., Laboratory Investigation 2011, vol. 91, Supp. SUPPL. 1, pp. 360A. Abstract Number: 1526.

³³ Francalanci et al., Digestive and Liver Disease 2010, vol. 42, Supp.SUPPL. 1, pp. S16. Abstract Number: T.N. 5.

³⁴ Shah et al., J Pediatr Genet. 2017, vol. 6(2), p. 126-127.

³⁵ Gao et al., Hepatitis Monthly 2017, vol. 17(10), e55087/l-e55087/6.

³⁶ Evason et al., Am J Surg Pathol. 2011, vol. 35(5), p. 687-696.

³⁷ Davit-Spraul et al., Mol Genet Metab. 2014, vol. 113(3), p. 225-229.

³⁸ Maggiore et al., J Hepatol. 2010, vol. 53(5), p. 981-6.

³⁹ McKay et al., Version 2. F1000Res. 2013; 2: 32. DOI: 10.12688/f1000research.2-32. v2

⁴⁰ Liu et al., Pediatr Int. 2013, vol. 55(2), p. 138-144.

⁴¹ Waisbourd-Zinman et al., Ann Hepatol. 2017, vol. 16(3), p. 465-468.

⁴² Griffin, et al., Canadian Journal of Gastroenterology and Hepatology 2016, vol. 2016. Abstract Number: A200. Meeting Info: 2016 Canadian Digestive Diseases Week, CDDW 2016. Montreal, QC, United States. 26 Feb 2016-29 Feb 2016

⁴³ Qiu et al., Hepatology 2017, vol. 65(5), p. 1655-1669.

⁴⁴ Imagawa et al., Sci Rep.2017, 7:41806.

⁴⁵ Kang et al., J Pathol Transl Med. 2019 May 16. doi: 10.4132/jptm.2019.05.03. [Epub ahead of print]

⁴⁶ Takahashi et al., Eur J Gastroenterol Hepatol. 2007, vol. 19(11), p. 942-6.

⁴⁷ Shimizu et al., Am J Transplant. 2011, vol. 11(2), p. 394-398.

⁴⁸ Krawczyk et al., Ann Hepatol. 2012, vol. 11(5), p. 710-744.

⁴⁹ Sharma et al., BMC Gastroenterol. 2018, vol. 18(1), p. 107.

⁵⁰ Sattler et al., Journal of Hepatology 2017, vol. 66, No. 1, Suppl. S, pp. S177. Meeting Info.: International Liver Congress / 52nd Annual Meeting of the European-Association-for-the-Study-of-the-Liver. Amsterdam, NETHERLANDS. April 19-23, 2017. European Assoc Study Liver.

⁵¹ Jung et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2007, vol. 44(4), p. 453-458.

⁵² Sciveres. Digestive и Liver Disease 2010, vol. 42, Supp. SUPPL. 5, pp. S329. Abstract Number: C018. Meeting Info: 17th National Congress SIGENP. Pescara, Italy. 07 Oct 2010-09 Oct 2010

⁵³ Sohn et al., Pediatr Gastroenterol Hepatol Nutr. 2019, vol. 22(2), p. 201-206.

⁵⁴ Ho et al., Pharmacogenet Genomics. 2010, vol. 20(1), p. 45-57.

⁵⁵ Wang et al., Hepatol Res. 2018, vol. 48(7), p. 574-584.

⁵⁶ Shaprio et al., J Hum Genet. 2010, vol. 55(5), p. 308-313.

⁵⁷ Bounford. University of Birmingham. Dissertation Abstracts International, (2016) Vol. 75, No. 1С.Order No.: AAI10588329. ProQuest Dissertations & Theses.

⁵⁸ Stolz et al., Aliment Pharmacol Ther. 2019, vol. 49(9), p. 1195-1204.

⁵⁹ Jankowska et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2014, vol. 58(1), p. 92-95.

⁶⁰ Kim. Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition 2016, vol. 62, Supp. SUPPL. 1, pp. 620. Abstract Number: H-P-045. Meeting Info: 49th Annual Meeting of the European Society for Paediatric Gastroenterology, Hepatology and Nutrition, ESPGHAN 2016. Athens, Greece. 25 May 2016-28 May 2016.

⁶¹ Pauli-Magnus et al., Hepatology 2003, vol. 38, No. 4 Suppl. 1, pp. 518A. print. Meeting Info.: 54th Annual Meeting of the American Association for the Study of Liver Diseases. Boston, MA, USA. October 24-28, 2003. American Association for the Study of Liver Diseases.

⁶² Li et al., Hepatology International 2017, vol. 11, No. 1, Supp. Supplement 1, pp. S362. Abstract Number: PP0347. Meeting Info: 26th Annual Conference of the Asian Pacific Association for the Study of the Liver, APASL 2017. Shanghai, China. 15 Feb 2017-19 Feb 2017.

⁶³ Rumbo et al., Transplantation 2018, vol. 102, No. 7, Supp.Supplement 1, pp. S848. Abstract Number: P.752. Meeting Info: 27th International Congress of The Transplantation Society, TTS 2018. Madrid, Spain. 30 Jun 2018-05 Jul 2018.

⁶⁴ Lee et al., Pediatr Gastroenterol Hepatol Nutr. 2017, vol. 20(2), p. 114-123.

⁶⁵ Sherrif et al., Liver international: official journal of the International Association for the Study of the Liver 2013, vol. 33, No. 8, pp. 1266-1270.

⁶⁶ Blackmore et al., J Clin Exp Hepatol. 2013, vol. 3(2), p. 159-161.

⁶⁷ Matte et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2010, vol. 51(4), p. 488-493.

⁶⁸ Lin et al., Zhongguo Dang Dai Er Ke Za Zhi. 2018, vol. 20(9), p. 758-764.

⁶⁹ Harmanci et al., Experimental и Clinical Transplantation 2015, vol. 13, Supp. SUPPL. 2, pp. 76. Abstract Number: P62. Meeting Info: 1st Congress of the Turkic World Transplantation Society. Astana, Kazakhstan. 20 May 2015-22 May 2015.

⁷⁰ Herbst et al., Mol Cell Probes. 2015, vol. 29(5), p. 291-298.

⁷¹ Moghadamrad et al., Hepatology. 2013, vol. 57(6), p. 2539-2541.

⁷² Holz et al., Zeitschrift fur Gastroenterologie 2016, vol. 54, No. 8. Abstract Number: KV275. Meeting Info: Viszeralmedizin 2016, 71. Jahrestagung der Deutschen Gesellschaft fur Gastroenterologie, Verdauungs- und Stoffwechselkrankheiten mit Sektion Endoskopie - 10. Herbsttagung der Deutschen Gesellschaft fur Allgemein- und Viszeralchirurgie. Hamburr, Germany. 21 Sep 2016-24 Sep 2016.

⁷³ Wangetal., PLoS One. 2016; vol. 11(4): e0153114.

⁷⁴ Hao et al., International Journal of Clinical and Experimental Pathology 2017, vol. 10(3), p. 3480-3487.

⁷⁵ Arnell et al., J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2010, vol. 51(4), p. 494-499.

⁷⁶ Sharma et al., Indian Journal of Gastroenterology 2017, vol. 36, No. 1, Supp.Supplement 1, pp.A99. Abstract Number: M-20. Meeting Info: 58th Annual Conference of the Indian Society of Gastroenterology, ISGCON 2017. Bhubaneswar, India. 14 Dec 2017-17 Dec 2017.

⁷⁷ Beausejour et al., Can J Gastroenterol. 2011, vol. 25(6), p. 311-314.

⁷⁸ Imagawa et al., Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition 2016, vol. 63, Supp.Supplement 2, pp. S51. Abstract Number: 166. Meeting Info: World Congress of Pediatric Gastroenterology, Hepatology и Nutrition 2016. Montreal, QC, Canada. 05 Oct 2016-08 Oct 2016.

⁷⁹ Peng et al., Zhonghua er ke za zhi (Chinese journal of pediatrics) 2018, vol. 56, No. 6, pp. 440-444.

⁸⁰ Tibesar et al., Case Rep Pediatr. 2014, vol. 2014: 185923.

⁸¹ Ng et al., Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition 2018, vol. 66, Supp.Supplement 2, pp. 860. Abstract Number: H-P-127. Meeting Info: 51st Annual Meeting European Society for Paediatric Gastroenterology, Hepatology and Nutrition, ESPGHAN 2018. Geneva, Switzerland. 09 May 2018-12 May 2018.

⁸² Wonget al., Clin Chem. 2008, vol. 54(7), p. 1141-1148.

⁸³ Pauli-Magnus et al., J Hepatol. 2005, vol. 43(2), p. 342-357.

⁸⁴ Jericho et al., Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition. 60, vol. 3, p. 368-374.

⁸⁵ Scheimann et al., Gastroenterology 2007, vol. 132, No. 4, Suppl. 2, pp. A452. Meeting Info.: Digestive Disease Week Meeting/108th Annual Meeting of the American-Gastroenterological-Association. Washington, DC, USA. May 19-24, 2007. Amer Gastroenterol Assoc; Amer Assoc Study Liver Dis; Amer Soc Gastrointestinal Endoscopy; Soc Surg Alimentary Tract.

⁸⁶ Jaquotot-Haerranz et al., Rev Esp Enferm Dig. 2013, vol. 105(1), p.52-54.

⁸⁷ Khosla et al., American Journal of Gastroenterology 2015, vol. 110, No. Suppl. 1, pp. S397. Meeting Info.: 80th Annual Scientific Meeting of the American-College-of-Gastroenterology. Honolulu, HI, USA. October 16 -21, 2015.

⁸⁸ Droge et al., J Hepatol. 2017, vol. 67(6), p. 1253-1264.

⁸⁹ Liu et al., Liver International 2010, vol. 30(6), p. 809-815.

⁹⁰ Chen et al., Journal of Pediatrics 2002, vol. 140(1), p. 119-124.

⁹¹ патент США No. 9295677

В некоторых воплощениях мутация в АВСВ11 выбрана из А167Т, G238V, V284L, E297G, R470Q, R470X, D482G, R487H, А570Т, N591S, A865V, G982R, R1153C и R1268Q.

Предложены способы лечения PFIC (например PFIC-1 и PFIC-2) у субъекта, которые включают выполнение анализа образца, полученного от субъекта, чтобы определить, есть ли у субъекта мутация, ассоциированная с PFIC (например, мутация АТР8 В1, АВСВ11, АВСВ4, TJP2, NR1H4 или Myo5b), и введение (например, специфическое или селективное введение) терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли субъекту, у которого определена мутация, ассоциированная с PFIC. В некоторых воплощениях мутация представляет собой мутацию АТР8 В1 или АВСВ11. Например, мутация, представленная в любой из Таблиц 1-4. В некоторых воплощениях мутация в АТР8 В1 выбрана из L127P, G308V, Т456М, D554N, F529del, I661T, Е665Х, R930X, R952X, R1014X и G1040R. В некоторых воплощениях мутация в АВСВ11 выбрана из А167Т, G238V, V284L, E297G, R470Q, R470X, D482G, R487H, А570Т, N59IS, A865V, G982R, R1153C и R1268Q.

Также предложены способы лечения PFIC (например PFIC-1 и PFIC-2) у субъекта, нуждающегося в этом, включающие: (а) обнаружение мутации, ассоциированной с PFIC (например, мутация АТР8 В1, АВСВ11, АВСВ4, TJP2, NR1H4 или Myo5b) у субъекта; и (б) введение субъекту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях способы лечения PFIC могут включать введение терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли субъекту, имеющему мутацию, ассоциированную с PFIC (например, мутацию АТР8 В1, АВСВ11, АВСВ4, TJP2, NR1H4 или Myo5b). В некоторых воплощениях мутация представляет собой мутацию АТР8 В1 или АВСВ11. Например, мутация, представленная в любой из Таблиц 1-4. В некоторых воплощениях мутация в АТР8 В1 выбрана из L127P, G308V, Т456М, D554N, F529del, 1661T, Е665Х, R930X, R952X, R1014X и G1040R. В некоторых воплощениях мутация в АВСВ11 выбрана из А167Т, G238V, V284L, E297G, R470Q, R470X, D482G, R487H, А570Т, N591S, A865V, G982R, R1153C и R1268Q.

В некоторых воплощениях изобретения субъект определен как имеющий мутацию, ассоциированную с PFIC, у субъекта или в образце биопсии из субъекта с помощью любых признанных в данной области тестов, включая секвенирование следующего поколения (NGS). В некоторых воплощениях изобретения субъект определен как имеющий мутацию, ассоциированную с PFIC, с использованием одобренного регулирующим органом, например, одобренного FDA теста или анализа для идентификации мутации, ассоциированной с PFIC, у субъекта или образца биопсии из субъекта, либо путем выполнения любого из неограничивающих примеров анализов, описанных в данном документе. Дополнительные методы диагностики PFIC описаны в Gunaydin, М. et al., Hepat Med. 2018, vol. 10, p. 95-104, полностью включенном в настоящий документ ссылкой.

В некоторых воплощениях лечение PFIC (например PFIC-1 или PFIC-2) снижает уровень сывороточных желчных кислот у субъекта. В некоторых воплощениях уровень сывороточных желчных кислот определяют, например, с помощью ферментативного анализа ELISA или анализов для измерения общего количества желчных кислот, как описано в Danese et al., PLoS One. 2017, vol. 12(6): e0179200, полностью включенном в настоящий документ ссылкой. В некоторых воплощениях уровень сывороточных желчных кислот может снижаться, например, на 10-40%, 20-50%, 30-60%, 40-70%, 50-80% или более 90% от уровня сывороточных желчных кислот до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях лечение PFIC включает лечение зуда.

Поскольку LBAT экспрессируется на гепатоцитах, LBAT и вещества с двойным ингибированием ASBT/LBAT должны иметь по меньшей мере некоторую биодоступность и свободную фракцию в крови. Поскольку соединения-ингибиторы LBAT должны переноситься только из кишечника в печень, ожидается, что относительно низкая системная экспозиция таких соединений будет достаточной, тем самым минимизируя потенциальный риск любых побочных эффектов в остальной части тела. Ожидается, что ингибирование LBAT и ASBT будет иметь по меньшей мере аддитивный эффект в снижении концентрации внутрипеченочных желчных кислот. Также ожидается, что двойной ингибитор ASBT/LBAT может снижать уровни желчных кислот, не вызывая диареи, как это иногда наблюдается с ингибиторами ASBT.

Ожидается, что соединения, обладающие высокой эффективностью ингибирования LBAT и достаточной биодоступностью, будут особенно подходящими для лечения гепатита. Ожидается, что соединения, обладающие активностью двойного ингибирования ASBT/LBAT и достаточной биодоступностью, будут особенно подходящими для лечения неалкогольного стеатогепатита (NASH).

NASH представляет собой распространенное и серьезное хроническое заболевание печени, которое имеет сходство с алкогольной болезнью печени, но встречается у людей, которые пьют мало или совсем не употребляют алкоголь. У пациентов с NASH накопление жира в печени, известное как неалкогольная жировая болезнь печени (NAFLD) или стеатоз, и другие факторы, такие как высокий уровень холестерина LDL и инсулинорезистентность, вызывают хроническое воспаление в печени и могут привести к прогрессирующему рубцеванию ткани, известному как фиброз, и циррозу, за которыми в конечном итоге следует печеночная недостаточность и смерть. Было обнаружено, что у пациентов с NASH общие концентрации сывороточных желчных кислот значительно выше, чем у здоровых субъектов в условиях голодания (увеличение NASH в 2,2-2,4 раза) и во всех временных точках после приема пищи (увеличение NASH в 1,7 2,2 раза). Они вызваны повышенным содержанием первичных и вторичных желчных кислот, конъюгированных с таурином и глицином. Пациенты с NASH демонстрировали более высокую вариабельность профиля желчных кислот натощак и после приема пищи. Эти результаты показывают, что пациенты с NASH имеют более высокое воздействие желчных кислот натощак и после приема пищи, включая более гидрофобные и цитотоксические вторичные виды. Повышенное воздействие желчных кислот может быть связано с повреждением печени и патогенезом NAFLD и NASH (Ferslew et al., Dig Dis Sci. 2015, vol. 60, p. 3318-3328). Следовательно, вероятно, что ингибирование ASBT и/или LBAT будет полезным для лечения NASH.

NAFLD характеризуется стеатозом печени без вторичных причин стеатоза печени, включая чрезмерное употребление алкоголя, другие известные заболевания печени или длительный прием стеатогенных медикаментов (Chalasani et al., Hepatology 2018, vol. 67(1), p. 328-357). NAFLD можно разделить на неалкогольную жировую болезнь печени (NAFL) и неалкогольный стеатогепатит (NASH). Согласно Chalasani et al., NAFL определяют как наличие не менее 5% стеатоза печени без признаков гепатоцеллюлярного повреждения в виде баллонирования гепатоцитов. NASH определяют как наличие не менее 5% стеатоза печени и воспаления с повреждением гепатоцитов (например баллонированием), с фиброзом печени или без него. NASH также часто связан с воспалением и фиброзом печени, который может прогрессировать до цирроза, терминальной стадии заболевания печени и гепатоцеллюлярной карциномы. Хотя фиброз печени не всегда присутствует при NASH, тяжесть фиброза, если она присутствует, может быть связана с долгосрочными последствиями.

Существует множество подходов, используемых для оценки наличия у субъекта NAFLD и, в случае наличия, степени тяжести заболевания, включая дифференциацию NAFLD на NAFL или NASH. В некоторых воплощениях степень тяжести NAFLD можно оценить с помощью NAS. В некоторых воплощениях обработку NAFLD можно оценить с помощью NAS. В некоторых воплощениях NAS может быть определен, как описано в Kleiner et al., Hepatology. 2005, 41(6): 1313-1321, которая полностью включена в настоящий документ ссылкой. См., например, Таблицу 6, где представлена упрощенная схема NAS, адаптированная Kleiner.

В некоторых воплощениях NAS определяют неинвазивно, например, как описано в публикации заявки США №2018/0140219, которая полностью включена в настоящий документ ссылкой. В некоторых воплощениях NAS определяют для образца от субъекта до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях NAS определяют в течение периода времени или после периода введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях более низкий балл NAS в течение периода времени или после периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли по сравнению с периодом до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли указывает на лечение NAFLD (например, NASH). Например, уменьшение NAS на 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 указывает на лечение NAFLD (например, NASH). В некоторых воплощениях NAS после введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли составляет 7 или меньше. В некоторых воплощениях NAS в течение периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли составляет 5 или меньше, 4 или меньше, 3 или меньше, или 2 или меньше. В некоторых воплощениях NAS в течение периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли составляет 7 или меньше. В некоторых воплощениях NAS в течение периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли составляет 5 или меньше, 4 или меньше, 3 или меньше, или 2 или меньше. В некоторых воплощениях NAS после периода введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли составляет 7 или меньше. В некоторых воплощениях NAS после периода введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли составляет 5 или меньше, 4 или меньше, 3 или меньше, или 2 или меньше.

Дополнительные подходы к определению и оценке NASH у субъекта включают определение одного или более из следующих: стеатоз печени (например, накопление жира в печени); воспаление печени; биомаркеры, указывающие на одно или более из поражения печени, воспаления печени, фиброза печени и/или цирроза печени (например, сывороточные маркеры и панели). Дополнительные примеры физиологических показателей NASH могут включать морфологию печени, эластичность печени и размер или массу печени субъекта. В некоторых воплощениях NASH у субъекта подтверждают накоплением печеночного жира и обнаружением биомаркера, указывающего на повреждение печени. Например, повышенный уровень ферритина в сыворотке и низкие титры аутоантител в сыворотке могут быть общими признаками NASH.

В некоторых воплощениях способы оценки NASH включают магнитно-резонансную томографию либо с помощью спектроскопии, либо с помощью протонной плотности жировой фракции (MRI-PDFF) для количественной оценки стеатоза, транзиентной эластографии (FIBROSCAN®), градиента венозного давления в печени (HPVG), измерения эластичности печени с помощью MRE для диагностики значительного фиброза и/или цирроза печени и оценки гистологических особенностей биопсии печени. В некоторых воплощениях магнитно-резонансную томографию используют для обнаружения одного или более из стеатогепатита (NASH-MRI), фиброза печени (Fibro-MRI) и стеатоза. См., например, публикации заявок США №2016/146715 и 2005/0215882, каждая из которых полностью включена в настоящий документ ссылкой.

В некоторых воплощениях лечение NASH может включать уменьшение одного или более симптомов, связанных с NASH; уменьшение степени стеатоза печени; снижение NAS; уменьшение воспаления печени; снижение уровня биомаркеров, указывающих на одно или более из повреждения печени, воспаления, фиброза печени и/или цирроза печени; и уменьшение фиброза и/или цирроза, отсутствие дальнейшего прогрессирования фиброза и/или цирроза, или замедление прогрессирования фиброза и/или цирроза у субъекта после введения одной или более доз соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.

В некоторых воплощениях лечение NASH включает уменьшение одного или более симптомов, связанных с NASH, у субъекта. Типичные симптомы могут включать один или более из следующих симптомов: увеличение печени, усталость, боль в правом подреберье, вздутие живота, увеличение кровеносных сосудов непосредственно под поверхностью кожи, увеличение молочных желез у мужчин, увеличение селезенки, красные ладони, желтуха и зуд. В некоторых воплощениях у субъекта нет симптомов. В некоторых воплощениях общая масса тела субъекта не увеличивается. В некоторых воплощениях общая масса тела субъекта уменьшается. В некоторых воплощениях индекс массы тела (BMI) субъекта не увеличивается. В некоторых воплощениях индекс массы тела (BMI) у субъекта снижается. В некоторых воплощениях соотношение талии и бедер (Waist То Hip, WTH) субъекта не увеличивается. В некоторых воплощениях соотношение талии и бедер (WTH) субъекта уменьшается.

В некоторых воплощениях лечение NASH можно оценить путем измерения стеатоза печени. В некоторых воплощениях изобретения лечение NASH включает уменьшение стеатоза печени после введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, как описано в данном документе. В некоторых воплощениях стеатоз печени определяют одним или более способами, выбранными из группы, состоящей из ультрасонографии, компьютерной томографии (СТ), магнитно-резонансной томографии, магнитно-резонансной спектроскопии (MRS), магнитно-резонансной эластографии (MRE), транзиентной эластографии (ТЕ) (например, FIBROSCAN®), измерения размера или массы печени или с помощью биопсии печени (см., например, Di Lascio et al., Ultrasound Med Biol. 2018, vol. 44(8), p. 1585-1596; Lv et al., J Clin Transl Hepatol. 2018, vol. 6(2), p. 217-221; Reeder et al., J Magn Reson Imaging. 2011, vol. 34(4), spcone; и de Ledinghen V, et al., J Gastroenterol Hepatol. 2016, vol. 31(4), p. 848-855, каждый из которых полностью включен в настоящий документ ссылкой). Субъект с диагнозом NASH может иметь стеатоз печени более чем примерно 5%, например, от примерно 5% до примерно 25%, от примерно 25% до примерно 45%, от примерно 45% до примерно 65% или более чем примерно 65% стеатоза печени. В некоторых воплощениях изобретения субъект со стеатозом печени от более чем примерно 5% до примерно 33% имеет стеатоз печени 1 стадии, субъект со стеатозом печени от примерно 33% до примерно 66% имеет стеатоз печени 2 стадии, и субъект со стеатозом печени более чем примерно 66% стеатоза печени имеет стеатоз печени 3 стадии.

В некоторых воплощениях степень стеатоза печени определяют до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях степень стеатоза печени определяют в течение периода времени или после периода введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях изобретения снижение степени стеатоза печени в течение периода времени или после периода введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли по сравнению с тем, что было до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, указывает на лечение NASH. Например, уменьшение степени стеатоза печени от примерно 1% до примерно 50%, от примерно 25% до примерно 75% или от примерно 50% до примерно 100% указывает на лечение NASH. В некоторых воплощениях снижение степени стеатоза печени на примерно 5%, примерно 10%, примерно 15%, примерно 20%, примерно 25%, примерно 30%, примерно 35%, примерно 40%, примерно 45%, примерно 50%, примерно 55%, примерно 60%, примерно 65%, примерно 70%, примерно 75%, примерно 80%, примерно 85%, примерно 90% или примерно 95% указывает на лечение NASH.

В некоторых воплощениях наличие воспаления печени определяют одним или более методами, выбранными из группы, состоящей из биомаркеров, указывающих на воспаление печени, и образца(ов) биопсии печени из субъекта. В некоторых воплощениях степень тяжести воспаления печени определяют по образцу(ам) биопсии печени из субъекта. Например, воспаление печени в образце биопсии печени можно оценить, как описано в Kleiner et al., Hepatology 2005, vol. 41(6), p. 1313-1321 и Brunt et al., Am J Gastroenterol 1999, vol. 94, p. 2467-2474, каждый из которых включен в данный документ ссылкой полностью. В некоторых воплощениях степень тяжести воспаления печени определяют до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях степень тяжести воспаления печени определяют в течение периода времени или после периода введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях изобретения снижение тяжести воспаления печени в течение периода времени или после периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли по сравнению с тем, что было до введения соединения формулы (I) или ее фармацевтически приемлемой соли, указывает на лечение NASH. Например, уменьшение тяжести воспаления печени от примерно 1% до примерно 50%, от примерно 25% до примерно 75% или от примерно 50% до примерно 100% указывает на лечение NASH. В некоторых воплощениях снижение тяжести воспаления печени примерно на 5%, примерно 10%, примерно 15%, примерно 20%, примерно 25%, примерно 30%, примерно 35%, примерно 40%, примерно 45%, примерно 50%, примерно 55%, примерно 60%, примерно 65%, примерно 70%, примерно 75%, примерно 80%, примерно 85%, примерно 90% или примерно 95% указывает на лечение NASH.

В некоторых воплощениях лечение NASH включает лечение фиброза и/или цирроза, например, уменьшение тяжести фиброза, отсутствие дальнейшего прогрессирования фиброза и/или цирроза печени или замедление прогрессирования фиброза и/или цирроза. В некоторых воплощениях наличие фиброза и/или цирроза определяют одним или несколькими способами, выбранными из группы, состоящей из транзиентной эластографии (например, FIBROSCAN®), неинвазивных маркеров фиброза печени и гистологических характеристик биопсии печени. В некоторых воплощениях степень тяжести (например, стадию) фиброза определяют одним или более способами, выбранными из группы, состоящей из транзиентной эластографии (например, FIBROSCAN®), системы оценок фиброза, биомаркеров фиброза печени (например, неинвазивные биомаркеры) и градиента печеночного венозного давления (HVPG). Неограничивающие примеры систем оценок фиброза включают систему оценок фиброза NAFLD (см., например, Angulo et al., Hepatology 2007, vol. 45 (4), p. 846-54), систему оценок фиброза в Brunt et al., Am. J. Gastroenterol. 1999, vol. 94, p. 2467-2474, систему оценок фиброза в Kleiner et al., Hepatology 2005, vol. 41(6), p. 1313-1321, и систему оценок фиброза ISHAK (см. Ishak et al., J. Hepatol. 1995, vol. 22, p. 696-699), содержание каждого из которых полностью включено в настоящий документ ссылкой.

В некоторых воплощениях степень тяжести фиброза определяют до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях степень тяжести фиброза определяют в течение периода времени или после периода введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях изобретения снижение степени тяжести фиброза в течение периода времени или после периода введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли по сравнению с тем, что было до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, указывает на лечение NASH. В некоторых воплощениях уменьшение тяжести фиброза, отсутствие дальнейшего прогрессирования фиброза и/или цирроза или замедление прогрессирования фиброза и/или цирроза указывает на лечение NASH. В некоторых воплощениях степень тяжести фиброза определяют с использованием системы оценки, такой как любая из систем оценки фиброза, описанных в данном документе, например, оценка может указывать на стадию фиброза, например, стадию 0 (без фиброза), стадию 1, стадию 2, стадию 3 и стадию 4 (цирроз) (см., например, Kleiner et al). В некоторых воплощениях снижение стадии фиброза представляет собой уменьшение степени тяжести фиброза. Например, уменьшение на 1, 2, 3 или 4 стадии является уменьшением степени тяжести фиброза. В некоторых воплощениях уменьшение стадии, например, от стадии 4 до стадии 3, от стадии 4 до стадии 2, от стадии 4 до стадии 1, от стадии 4 до стадии 0, от стадии 3 до стадии 2, от стадии 3 до стадии 1, от стадии 3 до стадии 0, от стадии 2 до стадии 1, от стадии 2 до стадии 0 или от стадии 1 до стадии 0 указывает на лечение NASH. В некоторых воплощениях стадия фиброза уменьшается от стадии 4 до стадии 3, от стадии 4 до стадии 2, от стадии 4 до стадии 1, от стадии 4 до стадии 0, от стадии 3 до стадии 2, от стадии 3 до стадии 1, от стадии 3 до стадии 0, от стадии 2 до стадии 1, от стадии 2 до стадии 0 или от стадии 1 до стадии 0 после введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, по сравнению с тем, что было до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях стадия фиброза уменьшается от стадии 4 до стадии 3, от стадии 4 до стадии 2, от стадии 4 до стадии 1, от стадии 4 до стадии 0, от стадии 3 до стадии 2, от стадии 3 до стадии 1, от стадии 3 до стадии 0, от стадии 2 до стадии 1, от стадии 2 до стадии 0 или от стадии 1 до стадии 0 в течение периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли по сравнению с тем, что было до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях стадия фиброза уменьшается от стадии 4 до стадии 3, от стадии 4 до стадии 2, от стадии 4 до стадии 1, от стадии 4 до стадии 0, от стадии 3 до стадии 2, от стадии 3 до стадии 1, от стадии 3 до стадии 0, от стадии 2 до стадии 1, от стадии 2 до стадии 0 или от стадии 1 до стадии 0 после периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли их по сравнению с тем, что было до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.

В некоторых воплощениях присутствие NASH определяют одним или более биомаркерами, указывающими на один или более из следующих признаков: повреждение печени, воспаление, фиброз печени и/или цирроз печени, или системами их оценок. В некоторых воплощениях степень тяжести NASH определяют одним или более биомаркерами, указывающими на один или более из следующих признаков: повреждение печени, воспаление, фиброз печени и/или цирроз печени, или системами их оценок. Уровень биомаркера можно определить, например, путем измерения, количественной оценки и мониторинга уровня экспрессии гена или мРНК, кодирующей биомаркер и/или пептид или белок биомаркера. Неограничивающие примеры биомаркеров, указывающих на одно или более из поражения печени, воспаления, фиброза печени и/или цирроза печени и/или системы их оценок, включают индекс соотношения аспартатаминотрансферазы (AST) и тромбоцитов (APRI); соотношение аспартатаминотрансферазы (AST) и аланинаминотрансферазы (ALT) (AAR); оценка в баллах FIB-4, которая основана на уровнях APRI, аланинаминотрансферазы (ALT) и возрасте субъекта (см., например, McPherson et al., Gut 2010, vol. 59(9), p. 1265-9, которая полностью включена в настоящий документ ссылкой); гиалуроновую кислоту; провоспалительные цитокины; панель биомаркеров, состоящую из α2-макроглобулина, гаптоглобина, аполипопротеина А1, билирубина, гамма-глутамилтранспептидазы (GGT) во взаимосвязи с возрастом и полом субъекта для измерения фиброза и некровоспалительной активности в печени (например, FIBROTEST®, FIBROSURE®), панель биомаркеров, состоящую из билирубина, гамма-глутамилтрансферазы, гиалуроновой кислоты, α2-макроглобулина во взаимосвязи с возрастом и полом субъекта (например, HEPASCORE®; см., например, Adams et al., Clin. Chem. 2005, vol. 51(10), p. 1867-1873), и панель биомаркеров, состоящую из тканевого ингибитора металлопротеиназы-1, гиалуроновой кислоты и α2-макроглобулина (например, FIBROSPECT®); панель биомаркеров, состоящую из тканевого ингибитора металлопротеиназы 1 (TIMP-1), амино-концевого пропептида проколлагена III типа (PIIINP) и гиалуроновой кислоты (НА) (например, оценки генерализованного фиброза печени (ELF), см., например, Lichtinghagen R, et al., J Hepatol. 2013 Aug; 59(2):236-42, который полностью включен в настоящий документ ссылкой). В некоторых воплощениях наличие фиброза определяют по одному или более показателям FIB-4, панели биомаркеров, состоящей из α2-макроглобулина, гаптоглобина, аполипопротеина А1, билирубина, гамма-глутамилтранспептидазы (GGT) во взаимосвязи с возрастом и полом субъекта для измерения фиброза и некровоспалительной активности в печени (например, FIBROTEST®, FIBROSURE®), панели биомаркеров, состоящей из билирубина, гамма-глутамилтрансферазы, гиалуроновой кислоты, α2-макроглобулина во взаимосвязи с возрастом и полом субъекта (например, HEPASCORE®; см., например, Adams et al., Clin. Chem. 2005, vol. 51(10), p. 1867-1873), и панели биомаркеров, состоящей из тканевого ингибитора металлопротеиназы-1, гиалуроновой кислоты и α2-макроглобулина (например, FIBROSPECT®); и панели биомаркеров, состоящей из тканевого ингибитора металлопротеиназ 1 (TIMP-1), аминоконцевого пропептида проколлагена III типа (PIIINP) и гиалуроновой кислоты (НА) (например, оценка генерализованного фиброза печени (ELF)). В некоторых воплощениях уровень аспартатаминотрансферазы (AST) не увеличивается. В некоторых воплощениях уровень аспартатаминотрансферазы (AST) снижается. В некоторых воплощениях уровень аланинаминотрансферазы (ALT) не увеличивается. В некоторых воплощениях уровень аланинаминотрансферазы (ALT) снижается. В некоторых воплощениях «уровень» фермента относится к концентрации фермента, например, в крови. Например, уровень AST или ALT может быть выражен в единицах/л.

В некоторых воплощениях степень тяжести фиброза определяют одним или более из оценки FIB-4, панели биомаркеров, состоящей из α2-макроглобулина, гаптоглобина, аполипопротеина А1, билирубина, гамма-глутамилтранспептидазы (GGT) во взаимосвязи с возрастом и полом субъекта для измерения фиброза и некровоспалительной активности в печени (например, FIBROTEST®, FIBROSURE®), панели биомаркеров, состоящей из билирубина, гамма-глутамилтрансферазы, гиалуроновой кислоты, α2-макроглобулина во взаимосвязи с возрастом и полом субъекта (например, HEPASCORE®; см., например, Adams et al., Clin. Chem. 2005, vol. 51(10), p. 1867-1873, который полностью включен в настоящий документ ссылкой), и панели биомаркеров, состоящей из тканевого ингибитора металлопротеиназы-1, гиалуроновой кислоты и α2-макроглобулина (например, FIBROSPECT®); и панели биомаркеров, состоящей из тканевого ингибитора металлопротеиназ 1 (TIMP-1), аминоконцевого пропептида проколлагена III типа (PIIINP) и гиалуроновой кислоты (НА) (например, оценка генерализованного фиброза печени (ELF)).

В некоторых воплощениях воспаление печени определяют по уровню биомаркеров воспаления печени, например, провоспалительных цитокинов. Неограничивающие примеры биомаркеров, указывающих на воспаление печени, включают интерлейкин(IL)-6, интерлейкин(IL)-1β, фактор некроза опухоли (TNF)-α, трансформирующий фактор роста (TGF)-β, хемотаксический белок моноцитов (МСР)-1, С-реактивный белок (CRP), PAI-1 и изоформы коллагена, такие как Col1al, Col1a2 и Col4a1 (см., например, Neuman, et al., Can. J. Gastroenterol. Hepatol. 2014, vol. 28(11), p. 607-618 и патент США №9872844, каждый из которых полностью включен в настоящий документ ссылкой). Воспаление печени также можно оценить по изменению инфильтрации макрофагами, например, по изменению уровня экспрессии CD68. В некоторых воплощениях воспаление печени может быть определено путем измерения или мониторинга сывороточных уровней или циркулирующих уровней одного или более из интерлейкина(IL)-6, интерлейкина(IL)-1β, фактора некроза опухоли (TNF)-α, трансформирующего фактора роста (TGF)-β, хемотаксического белка моноцитов (МСР)-1 и С-реактивного белка (CRP).

В некоторых воплощениях уровень одного или более биомаркеров, указывающих на одно или более из повреждения печени, воспаления, фиброза печени и/или цирроза печени, определяют для образца от субъекта до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях уровень одного или более биомаркеров, указывающих на одно или более из повреждения печени, воспаления, фиброза печени и/или цирроза печени, определяют в течение периода времени или после периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях снижение уровня одного или более биомаркеров, указывающих на одно или более из повреждения печени, воспаления, фиброза печени и/или цирроза печени в течение периода времени или после периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли по сравнению с тем, что было до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, указывает на лечение NASH. Например, снижение уровня одного или более биомаркеров, указывающих на одно или более из повреждения печени, воспаления, фиброза печени и/или цирроза печени, на по меньшей мере примерно 5%, по меньшей мере примерно 10%, по меньшей мере примерно 15%, по меньшей мере примерно 20%, по меньшей мере примерно 25%, по меньшей мере примерно 30%, по меньшей мере примерно 35%, по меньшей мере примерно 40%, по меньшей мере примерно 45%, по меньшей мере примерно 50%, по меньшей мере примерно 55%, по меньшей мере примерно 60%, по меньшей мере примерно 65%, по меньшей мере примерно 70%, по меньшей мере примерно 75%, по меньшей мере примерно 80%, по меньшей мере примерно 85%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 95% или по меньшей мере примерно 99% указывает на лечение NASH. В некоторых воплощениях снижение уровня одного или более биомаркеров, указывающих на одно или более из повреждения печени, воспаления, фиброза печени и/или цирроза печени, после введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, составляет по меньшей мере примерно 5%, по меньшей мере примерно 10%, по меньшей мере примерно 15%, по меньшей мере примерно 20%, по меньшей мере примерно 25%, по меньшей мере примерно 30%, по меньшей мере примерно 35%, по меньшей мере примерно 40%, по меньшей мере, примерно 45%, по меньшей мере, примерно 50%, по меньшей мере, примерно 55%, по меньшей мере, примерно 60%, по меньшей мере, примерно 65%, по меньшей мере, примерно 70%, по меньшей мере, примерно 75%, по меньшей мере, примерно 80%, по меньшей мере примерно 85%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 95% или по меньшей мере примерно 99%. В некоторых воплощениях уровень одного или более биомаркеров, указывающих на одно или более из повреждения печени, воспаления, фиброза печени и/или цирроза печени, в течение периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли составляет по меньшей мере примерно 5%, по меньшей мере примерно 10%, по меньшей мере примерно 15%, по меньшей мере примерно 20%, по меньшей мере примерно 25%, по меньшей мере примерно 30%, по меньшей мере примерно 35%, по меньшей мере примерно 40%, по меньшей мере примерно 45%, по меньшей мере примерно 50%, по меньшей мере примерно 55%, по меньшей мере примерно 60%, по меньшей мере примерно 65%, по меньшей мере примерно 70%, по меньшей мере примерно 75%, по меньшей мере примерно 80%, по меньшей мере примерно 85%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 95% или по меньшей мере примерно 99%. В некоторых воплощениях уровень одного или более биомаркеров, указывающих на одно или более из повреждения печени, воспаления, фиброза печени и/или цирроза печени, после периода времени введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли составляет по меньшей мере примерно 5%, по меньшей мере примерно 10%, по меньшей мере примерно 15%, по меньшей мере примерно 20%, по меньшей мере примерно 25%, по меньшей мере примерно 30%, по меньшей мере примерно 35%, по меньшей мере примерно 40%, по меньшей мере примерно 45%, по меньшей мере примерно 50%, по меньшей мере примерно 55%, по меньшей мере примерно 60%, по меньшей мере примерно 65%, по меньшей мере примерно 70%, по меньшей мере примерно 75%, по меньшей мере примерно 80%, по меньшей мере примерно 85%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 95% или по меньшей мере примерно 99%.

В некоторых воплощениях лечение NASH снижает уровень сывороточных желчных кислот у субъекта. В некоторых воплощениях уровень сывороточных желчных кислот определяют, например, с помощью ферментативного анализа ELISA или анализов для измерения общего количества желчных кислот, как описано в Danese et al., PLoS One. 2017, vol. 12 (6): e0179200, который полностью включен в настоящий документ ссылкой. В некоторых воплощениях уровень сывороточных желчных кислот может снижаться, например, на 10-40%, 20-50%, 30-60%, 40-70%, 50-80% или более 90% от уровня сывороточных желчных до введения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В некоторых воплощениях NASH представляет собой NASH с сопутствующим холестазом. При холестазе выделение желчи, в том числе желчных кислот, из печени блокируется. Желчные кислоты могут вызывать повреждение гепатоцитов (см., например, Perez MJ, Briz О. World J. Gastroenterol. 2009, vol. 15(14), p. 1677-1689), вероятно, вызывая или увеличивая прогрессирование фиброза (например, цирроза) и увеличивая риск гепатоцеллюлярной карциномы (см., например, Sorrentino Р et al., Dig. Dis. Sci. 2005, vol. 50(6), p. 1130-1135 и Satapathy SK and Sanyal AJ. Semin. Liver Dis. 2015, vol. 35(3), p. 221-235, каждый из которых полностью включен в настоящий документ ссылкой). В некоторых воплощениях лечение NASH включает лечение зуда. В некоторых воплощениях лечение NASH с сопутствующим холестазом включает лечение зуда. В некоторых воплощениях у субъекта с NASH с сопутствующим холестазом наблюдается зуд.

Типичные биомаркеры NASH представлены в Таблице 7.

Список литературы для Таблицы 7

¹ McPherson et al., Gut. 2010, vol. 59(9), p. 1265-1269.

² Adams, et al. Clin Chem. 2005, vol. 51(10), p. 1867-1873.

³ Lichtinghagen, et al. J Hepatol. 2013, vol. 59(2), p. 236-242.

⁴ Neuman, et al. Can J Gastroenterol Hepatol. 2014, vol. 28(11), p. 607-618.

⁵ патент США No. 9872844

Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут иметь более высокую свободную фракцию в плазме. В некоторых воплощениях свободная фракция составляет более чем примерно 0,2%, например, более чем примерно 0,4%, например, более чем примерно 0,6%, например, более чем примерно 0,8%, например, более чем примерно 1,0%, например, больше чем примерно 1,25%, например, более чем примерно 1,5%, например, более чем примерно 1,75%, например, более чем примерно 2,0%, например, более чем примерно 2,5%, например, более чем примерно 3%, например, более чем примерно 4%, например, более чем примерно 5%, например, более чем примерно 7,5%, например, более чем примерно 10%, или, например, более чем примерно 20%.

Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут выделяться с мочой. В некоторых воплощениях доля соединения, которая выводится с мочой, составляет более чем примерно 0,2%, например, более чем примерно 0,4%, например, более чем примерно 0,6%, например, более чем примерно 0,8%, например, более чем примерно 1,0%, например, более чем примерно 2%, например, более чем примерно 3%, например, более чем примерно 5%, например, более чем примерно 7,5%, например, более чем примерно 10%, например, более чем примерно 15%, например, более чем примерно 20%, например, более чем примерно 30% или, например, более чем примерно 50%.

После абсорбции из кишечника некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут циркулировать через энтерогепатическую циркуляцию. В некоторых воплощениях доля соединения, которая циркулирует через энтерогепатическую циркуляцию, составляет более чем примерно 0,1%, например, более чем примерно 0,2%, например, более чем примерно 0,3%, например, более чем примерно 0,5%, например, более чем примерно 1,0%, например, более чем примерно 1,5%, например, более чем примерно 2%, например, более чем примерно 3%, например, более чем примерно 5%, например, более чем примерно 7%, например, более чем примерно 10%, например, более чем примерно 15%, например, более чем примерно 20%, например, более чем примерно 30% или, например, более чем примерно 50%.

Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут вызывать почечную экскрецию солей желчных кислот. В некоторых воплощениях доля циркулирующих желчных кислот, которая выводится почечным путем, составляет более чем примерно 1%, например, более чем примерно 2%, например, более чем примерно 5%, например, более чем примерно 7%, например, более чем примерно 10%, например, более чем примерно 15%, например, более чем примерно 20% или, например, более чем примерно 25%.

Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут показывать улучшенную или оптимальную проницаемость. Проницаемость может быть измерена в клетках Сасо2, и значения даны как значения Рарр (кажущаяся проницаемость) в см/с. В некоторых воплощениях проницаемость составляет более чем по меньшей мере примерно 0,1×10^-6 см/с, например, более чем примерно 0,2×10^-6 см/с, например, более чем примерно 0,4×10^-6 см/с, например, более чем примерно 0,7×10 см/с, например, более чем примерно 1,0×10^-6 см/с, например, более чем примерно 2×10^-6 см/с, например, более чем примерно 3×10^-6 см/с, например, более чем примерно 5×10^-6 см/с, например, более чем примерно 7×10^-6 см/с, например, более чем примерно 10×10^-6 см/с, например, более чем примерно 15×10^-6 см/с.

Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут показывать улучшенную или оптимальную биодоступность. В некоторых воплощениях пероральная биодоступность составляет более чем примерно 5%, например, более чем примерно 7%, например, более чем примерно 10%, например, более чем примерно 15%, например, более чем примерно 20%, например, более чем примерно 30%, например, более чем примерно 40%, например, более чем примерно 50%, например, более чем примерно 60%, например, более чем примерно 70% или например, более чем примерно 80%. В других воплощениях пероральная биодоступность составляет от примерно 10 до примерно 90%, например, от примерно 20 до примерно 80%, например, от примерно 30 до примерно 70% или, например, от примерно 40 до примерно 60%.

Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут быть субстратом для соответствующих переносчиков в почках.

Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут вызывать повышение концентраций желчных кислот в кишечнике, печени и сыворотке, которые не вызывают неблагоприятных желудочно-кишечных эффектов.

Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут снижать концентрацию желчных кислот в печени, не вызывая желудочно-кишечных расстройств, таких как диарея.

Используемые в данном документе термины «лечение», «проводить лечение» и «лечить» относятся к регрессированию, облегчению, отсрочке начала или ингибированию развития заболевания или расстройства или одного или более их симптомов, описанных в данном документе. В некоторых воплощениях лечение можно проводить после развития одного или более симптомов. В других воплощениях лечение можно проводить в отсутствие симптомов. Например, лечение может быть назначено восприимчивому индивидууму до появления симптомов (например, в свете симптомов в анамнезе и/или в свете генетических или других факторов восприимчивости). Лечение также может быть продолжено после исчезновения симптомов, например, для предупреждения или отсрочки их повторного появления.

Подходящая фармацевтически приемлемая соль соединения по изобретению представляет собой, например, соль присоединения основания соединения по изобретению, которая является достаточно кислой, такой как соль щелочного металла (например, соль натрия или калия), соль щелочно-земельного металла (например, соль кальция или магния), соль аммония или соль с органическим основанием, которое дает физиологически приемлемый катион, например, соль с метиламином, диметиламином, триметиламином, пиперидином, морфолином или трис-(2-гидроксиэтил)амином.

Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут иметь хиральные центры и/или геометрические изомерные центры (Е- и Z-изомеры). Следует понимать, что изобретение охватывает все такие оптические изомеры, диастереоизомеры и геометрические изомеры, которые обладают активностью ингибирования ASBT и/или LBAT. Изобретение также охватывает любые и все таутомерные формы соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемых солей, которые обладают активностью ингибирования ASBT и/или LBAT. Некоторые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут существовать в несольватированных, а также в сольватированных формах, таких как, например, гидратированные формы. Следует понимать, что изобретение охватывает все такие сольватированные формы, которые обладают активностью ингибирования ASBT и/или LBAT.

В другом аспекте изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли и один или более фармацевтически приемлемых эксципиентов. Эксципиенты могут, например, включать наполнители, связывающие вещества, разрыхлители, скользящие вещества и смазывающие вещества. Как правило, фармацевтические композиции могут быть приготовлены обычным способом с использованием общепринятых эксципиентов.

Примеры подходящих наполнителей включают, без ограничения, дигидрат фосфата дикальция, сульфат кальция, лактозу (например, моногидрат лактозы), сахарозу, маннит, сорбит, целлюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, сухой крахмал, гидролизованный крахмал и прежелатинизированный крахмал. В некоторых воплощениях наполнитель представляет собой маннит и/или микрокристаллическую целлюлозу.

Примеры подходящих связывающих веществ включают, без ограничения, крахмал, прежелатинизированный крахмал, желатин, сахара (такие как сахароза, глюкоза, декстроза, лактоза и сорбит), полиэтиленгликоль, воски, натуральные и синтетические камеди (такие как камедь акации и трагакантовая камедь), альгинат натрия, производные целлюлозы (такие как гидроксипропилметилцеллюлоза (или гипромеллоза), гидроксипропилцеллюлоза и этилцеллюлоза) и синтетические полимеры (например, сополимеры акриловой кислоты и метакриловой кислоты, сополимеры метакриловой кислоты, сополимеры метилметакрилата, сополимеры аминоалкилметакрилата, сополимеры полиакриловой кислоты/полиметакриловой кислоты и поливинилпирролидон (повидон)). В некоторых воплощениях связывающее вещество представляет собой гидроксипропилметилцеллюлозу (гипромеллозу).

Примеры подходящих разрыхлителей включают, без ограничения, сухой крахмал, модифицированный крахмал (такой как (частично) прежелатинизированный крахмал, крахмалгликолят натрия и карбоксиметилкрахмал натрия), альгиновую кислоту, производные целлюлозы (такие как карбоксиметилцеллюлоза натрия, гидроксипропилцеллюлоза и низкозамещенная гидроксипропилцеллюлоза (L-HPC)) и перекрестно-сшитые полимеры (такие как кармеллоза, кроскармеллоза натрия, кармеллоза кальция и перекрестно-сшитый PVP (кросповидон)). В некоторых воплощениях разрыхлитель представляет собой кроскармеллозу натрия.

Примеры подходящих скользящих веществ и смазывающих веществ включают, без ограничения, тальк, стеарат магния, стеарат кальция, стеариновую кислоту, глицерилбегенат, коллоидный диоксид кремния, водный диоксид кремния, синтетический силикат магния, тонкодисперсный оксид кремния, крахмал, лаурилсульфат натрия, борную кислоту, оксид магния, воски (такие как карнаубский воск), гидрогенизированное масло, полиэтиленгликоль, бензоат натрия, полиэтиленгликоль и минеральное масло. В некоторых воплощениях скользящее вещество или смазывающее вещество представляет собой стеарат магния или коллоидный диоксид кремния.

Фармацевтическая композиция может быть обычно покрыта одним или более слоями покрытия. Также предусмотрены слои энтеросолюбильного покрытия или слои покрытия для замедленного или целевого высвобождения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемых солей. Слои покрытия могут содержать один или более агентов покрытия и возможно могут содержать пластификаторы и/или пигменты (или красители).

Примеры подходящих агентов покрытия включают, без ограничения, полимеры на основе целлюлозы (такие как этилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза (или гипромеллоза), гидроксипропилцеллюлоза, фталат ацетата целлюлозы, сукцинат ацетата целлюлозы, сукцинат ацетата гидроксипропилметилцеллюлозы и фталат гидроксипропилметилцеллюлозы), полимеры на основе винила (например, поливиниловый спирт) и полимеры на основе акриловой кислоты и ее производных (например, сополимеры акриловой кислоты и метакриловой кислоты, сополимеры метакриловой кислоты, сополимеры метилметакрилата, сополимеры аминоалкилметакрилата, сополимеры полиакриловой кислоты/полиметакриловой кислоты). В некоторых воплощениях агент покрытия представляет собой гидроксипропилметилцеллюлозу. В других воплощениях агент покрытия представляет собой поливиниловый спирт.

Примеры подходящих пластификаторов включают, без ограничения, триэтилцитрат, глицерилтриацетат, трибутилцитрат, диэтилфталат, ацетилтрибутилцитрат, дибутилфталат, дибутилсебацинат и полиэтиленгликоль. В некоторых воплощениях пластификатор представляет собой полиэтиленгликоль.

Примеры подходящих пигментов включают, без ограничения, диоксид титана, оксиды железа (такие как желтые, коричневые, красные или черные оксиды железа) и сульфат бария.

Фармацевтическая композиция может быть в форме, подходящей для перорального введения, для парентеральной инъекции (включая внутривенную, подкожную, внутримышечную и внутрисосудистую инъекцию), для местного введения или для ректального введения. В предпочтительном воплощении фармацевтическая композиция находится в форме, подходящей для перорального введения, такой как таблетка или капсула.

Дозировка, необходимая для терапевтического или профилактического лечения, будет зависеть от пути введения, тяжести заболевания, возраста и массы тела пациента и других факторов, обычно рассматриваемых лечащим врачом при определении подходящей схемы лечения и уровня дозировки для конкретного пациента.

Количество вводимого соединения будет варьировать для пациента, которого лечат, и может варьировать от примерно 1 мкг/кг массы тела до примерно 50 мг/кг массы тела в сутки. Стандартная лекарственная форма, такая как таблетка или капсула, обычно будет содержать от примерно 1 до примерно 250 мг активного ингредиента, например, от примерно 1 до примерно 100 мг, или от примерно 1 до примерно 50 мг, или от примерно 1 до примерно 20 мг, например, примерно 2,5 мг, или примерно 5 мг, или примерно 10 мг или примерно 15 мг. Суточная доза может быть введена как разовая доза или разделена на одну, две, три или более стандартных доз. Суточная доза модулятора желчной кислоты, вводимая перорально, предпочтительно составляет от примерно 0,1 до примерно 250 мг, более предпочтительно от примерно 1 до примерно 100 мг, например, от примерно 1 до примерно 5 мг, например, от примерно 1 до примерно 10 мг, например, от примерно 1 до примерно 15 мг или от примерно 1 до примерно 20 мг.

В другом аспекте изобретение относится к соединению формулы (I)

где

R¹ и R² каждый независимо представляет собой С_1-4алкил;

R³ независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, С_1-4алкила, С_1-4галогеналкила, С_1-4алкокси, С_1-4галогеналкокси, циано, нитро, амино, N-(C_1-4алкил)амино, N,N-ди(С_1-4алкил)амино и N-(арил-С_1-4алкил)амино;

n равен целому числу 1, 2 или 3; и

R⁴ выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, гидрокси, циано, C_1-4алкила, С_3-6циклоалкила, С_1-4алкокси, С_3-6циклоалкилокси, С_1-4алкилтио, С_3-6циклоалкилтио, амино, N-(С_1-4алкил)амино и N,N-ди(С_1-4алкил)амино;

или его фармацевтически приемлемой соли для применения в качестве лекарственного средства.

В другом аспекте изобретение относится к соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли для применения в лечении или предупреждении любого из заболеваний, перечисленных в данном документе. Изобретение также относится к применению соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в изготовлении лекарственного средства для лечения или предупреждения любого из заболеваний, перечисленных в данном документе. Изобретение также относится к способу лечения или предупреждения любого из перечисленных в данном документе заболеваний у субъекта, такого как человек, включающему введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении или предупреждении, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. Комбинированная терапия

В одном аспекте изобретения соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с по меньшей мере одним другим терапевтически активным агентом, например, с одним, двумя, тремя или более другими терапевтически активными агентами. Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль и по меньшей мере один другой терапевтически активный агент можно вводить одновременно, последовательно или раздельно. Терапевтически активные агенты, которые подходят для комбинации с соединениями формулы (I), включают, без ограничения, известные активные агенты, которые полезны в лечении любого из вышеупомянутых состояний, расстройств и заболеваний.

В одном воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с другим ингибитором ASBT. Подходящие ингибиторы ASBT описаны в WO 93/16055, WO 94/18183, WO 94/18184, WO 96/05188, WO 96/08484, WO 96/16051, WO 97/33882, WO 98/03818, WO 98/07449, WO 98/40375, WO 99/35135, WO 99/64409, WO 99/64410, WO 00/47568, WO 00/61568, WO 00/38725, WO 00/38726, WO 00/38727, WO 00/38728, WO 00/38729, WO 01/66533, WO 01/68096, WO 02/32428, WO 02/50051, WO 03/020710, WO 03/022286, WO 03/022825, WO 03/022830, WO 03/061663, WO 03/091232, WO 03/106482, WO 2004/006899, WO 2004/076430, WO 2007/009655, WO 2007/009656, WO 2011/137135, WO 2019/234077, WO 2020/161216, WO 2020/161217, DE 19825804, ЕР 864582, ЕР 489423, ЕР 549967, ЕР 573848, ЕР 624593, ЕР 624594, ЕР 624595, ЕР 624596, ЕР 0864582, ЕР 1173205, ЕР 1535913 и ЕР 3210977, все из которых полностью включены в настоящий документ ссылкой.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации со связующим желчные кислоты (также называемым секвестрантом желчных кислот или смолой), таким как колесевелам, холестирамин или холестипол. В предпочтительном воплощении такой комбинации связующее желчных кислот изготовлено в виде препарата для высвобождения в толстой кишке. Примеры таких препаратов раскрыты, например, в WO 2017/138877, WO 2017/138878, WO 2019/032026 и WO 2019/032027, все из которых полностью включены в настоящий документ ссылкой.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором DPP-IV, включая глиптины, такие как ситаглиптин, вилдаглиптин, саксаглиптин, линаглиптин, гемиглиптин, анаглиптин, тенелиглиптин, трелаглиптин, аллоглиптин, омариглиптин, эвоглиптин, гозоглиптин и дутоглиптин или их фармацевтически приемлемые соли.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором HMG СоА редуктазы, таким как флувастатин, ловастатин, правастатин, симвастатин, аторвастатин, питавастатин, церивастатин, мевастатин, розувастатин, бервастатин или далвастатин или их фармацевтически приемлемая соль.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором абсорбции холестерина, таким как эзетимиб или его фармацевтически приемлемая соль.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с агонистом PPAR-альфа, включая фибраты, такие как клофибрат, безафибрат, ципрофибрат, клинофрибрат, клофибрид, фенофибрат, гемфиброзил, ронифибрат и симфрибрат или их фармацевтически приемлемую соль.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с гамма-агонистом PPAR, включая тиазолидиндионы, такие как пиоглитазон, розиглитазон и лобеглитазон или их фармацевтически приемлемые соли.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с двойным агонистом PPAR альфа/гамма, включая глитазары, такие как сароглитазар, алеглитазар, мураглитазар или тесаглитазар или их фармацевтически приемлемые соли.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с двойным агонистом PPAR альфа/дельта, таким как элафибранор.

В еще одном воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с пан-агонистом PPAR (т.е. агонистом PPAR, который обладает активностью во всех подтипах: а, у и 5), таким как IVA337.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с модуляторами рецептора фарнезоида X (FXR), включая агонисты FXR, такие как кафестол, хенодезоксихолевая кислота, 6а-этилхенодезоксихолевая кислота (обетихолевая кислота; INT-747), фексарамин, тропифексор, цилофексор и МЕТ409.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с модулятором рецептора TGR5, включая агонисты TGR5, такие как 6а-этил-23(8)-метилхолевая кислота (INT-777).

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с двойным агонистом FXR/TGR5, таким как INT-767.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с урсодезоксихолевой кислотой (UDCA). В еще одном воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с нор-урсодезоксихолевой кислотой (нор-UDCA).

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с модулятором FGF19, таким как NGM282.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с агонистом FGF21, таким как BMS-986036.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором интегрина, таким как PLN-74809 и PLN-1474.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором CCR2/CCR5, таким как ценикривирок.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором протеазы каспазы, таким как эмриказан.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором галектина-3, таким как GR-MD-02.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором стеароил-СоА десатуразы (SCD), таким как арамхол (арахидиламидохолановая кислота).

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором киназы 1 (ASK1), регулирующим сигнал апоптоза, таким как селонсертиб.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором LOXL2, таким как симтузумаб.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором АСС, таким как GS-0976.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с агонистом рецептора тиреоидного гормона-р, таким как MGL3196.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с агонистом GLP-1, таким как лираглутид.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с двойными агонистами глюкагоноподобного пептида и рецептора глюкагона, такими как SAR425899.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором митохондриального переносчика пирувата, таким как MSDC-0602K.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с антиоксидантным агентом, таким как витамин Е.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором SGLT1, ингибитором SGLT2 или двойным ингибитором SGLT1 и SGLT2. Примерами таких соединений являются дапаглифлозин, сотаглифлозин, канаглифлозин, эмпаглифлозин, LIK066 и SGL5213.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором диацилглицерин-О-ацилтрансферазы 2 (DGAT2), таким как DGAT2RX и PF-06865571.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором синтазы жирных кислот (FASN), таким как TVB-2640.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с активатором АМР-активируемой протеинкиназы (АМРК), таким как PXL-770.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с антагонистом рецептора глюкокортикоидов (GR), антагонистом рецептора минералокортикоидов (MR) или двойным антагонистом GR/MR. Примерами таких соединений являются МТ-3995 и CORT-118335.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с антагонистом каннабиноидного рецептора 1 (СВ1), таким как ГШ 02.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с Klothoβ (KLB) и активатором рецептора фактора роста фибробластов (FGFR), таким как МК-3655 (ранее известный как NGM-313).

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором хемокинового (с-с-мотив) лиганда 24 (CCL24), таким как СМ101.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с антагонистом A3, таким как PBF-1650.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с антагонистом рецептора Р2х7, таким как SGM 1019.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с агонистами рецептора P2Y13, такими как CER-209.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с сульфатированным оксистеролом, таким как Dur-928.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с антагонистом рецептора лейкотриена D4 (LTD4), таким как MN-001.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором Т-клеток-естественных киллеров 1 типа (NKT1), таким как GRI-0621.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с анти-липополисахаридным (LPS) соединением, таким как IMM-124E.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором VAP1, таким как BI1467335.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с агонистом аденозинового рецептора A3, таким как CF-102.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с активатором SIRT-1, таким как NS-20.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с агонистом рецептора 1 никотиновой кислоты, таким как ARI-3037MO.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с антагонистом TLR4, таким как JKB-121.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором кетогексокиназы, таким как PF-06835919.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с агонистом рецептора адипонектина, таким как ADP-335.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором аутотаксина, таким как РАТ-505 и PF8380.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с антагонистом хемокинового (с-с-мотив) рецептора 3 (CCR3), таким как бертилимумаб.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации со стимулятором хлоридных каналов, таким как кобипростон и любипростон.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором белка теплового шока 47 (HSP47), таким как ND-L02-s0201.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором фактора транскрипции белка, связывающегося с регуляторным элементом стерола (SREBP), таким как САТ-2003 и MDV-4463.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с бигуанидином, таким как метформин.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с инсулином.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором гликогенфосфорилазы и/или ингибитором глюкозо-6-фосфатазы.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с сульфонилмочевиной, такой как глипизид, глибенкламид и глимепирид.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с меглитинидом, таким как репаглинид, натеглинид и ормиглитинид.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором глюкозидазы, таким как акарбоза или миглитол.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором скваленсинтазы, таким как ТАК-475.

В другом воплощении соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли вводят в комбинации с ингибитором РТРВ1, таким как тродускемин, эртипротафиб, JTT-551 и кларамин.

Получение соединений

Соединения по настоящему изобретению могут быть получены в виде свободной кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли способами, описанными ниже. В последующем описании таких процессов понятно, что, где это уместно, подходящие защитные группы будут добавлены и впоследствии удалены из различных реагентов и промежуточных соединений способом, который будет легко понятен специалистам в области органического синтеза. Обычные методики использования таких защитных групп, а также примеры подходящих защитных групп описаны, например, в руководстве Greene's Protective Groups in Organic Synthesis P.G.M Wutz and T.W. Greene, 4th Edition, John Wiley & Sons, Hoboken, 2006.

Общие способы

Все использованные растворители были аналитической чистоты. Для реакций обычно использовали коммерчески доступные безводные растворители. Исходные материалы были доступны из коммерческих источников или были получены в соответствии с описанными в литературе методиками. Комнатная температура относится к 20-25°С. Составы смеси растворителей даны в объемных процентах или объемных соотношениях.

ЖХ-МС:

Название прибора: Agilent 1290 infinity П.

Метод А: Подвижная фаза: А: 0,1% НСООН в воде: ACN (95:5), В: ACN; скорость потока: 1,5 мл/мин; колонка: ZORBAX XDB С-18 (50×4,6 мм, 3,5 мкм).

Метод В: Подвижная фаза: А: 10 мМ NH4HCO3 в воде, В: ACN; скорость потока: 1,2 мл/мин; колонка: XBridge С8 (50×4,6 мм, 3,5 мкм).

Метод С: Подвижная фаза: А: 0,1% НСООН в воде: ACN (95:5), В: ACN; скорость потока: 1,5 мл/мин; колонка: ATLANTIS dC18 (50×4,6 мм, 5 мкм).

Метод D: Подвижная фаза: А: 10 мМ NH₄OAc в воде, В: ACN; скорость потока: 1,2 мл/мин; колонка: Zorbax Extend C18 (50×4,6 мм, 5 мкм).

Метод Е: Подвижная фаза: А: 0,1% TFA в воде: ACN (95:5), В: 0,1% TFA в ACN; скорость потока: 1,5 мл/мин; колонка: XBridge С8 (50×4,6 мм, 3,5 мкм).

УЭЖХ:

Название прибора: waters Acquity I Class

Метод А: Подвижная фаза: A: 0,1% HCOOH в воде, В: 0,1% НСООН в ACN; скорость потока: 0,8 мл/мин; колонка: Acquity UPLC HSS Т3 (2,1×50) мм; 1,8 мкм.

ВЭЖХ:

Название прибора: приборы серии Agilent 1260 Infinity II с использованием % с УФ-детектированием (maxplot).

Метод А: Подвижная фаза: А: 10 мМ NH₄HCO₃ в воде, В: ACN; скорость потока: 1,0 мл/мин; колонка: XBridge С8 (50×4,6 мм, 3,5 мкм).

Метод В: Подвижная фаза: А: 0,1% TFA в воде, В: 0,1% TFA в ACN; скорость потока: 2,0 мл/мин; колонка: XBridge С8 (50×4,6 мм, 3,5 мкм).

Метод С: Подвижная фаза: А: 10 мМ NH4OAC в воде Milli-q, В: ACN; скорость потока: 1,0 мл/мин; колонка: Phenomenex Gemini С18 (150×4,6 мм, 3,0 мкм).

Хиральная СФХ:

Название прибора: PIC СФХ 10 (аналитический)

Соотношение между СО₂ и сорастворителем находится в диапазоне между 60:40 и 80:20

Метод А: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламин в IP А; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: YMC Amylose-SA (250×4,6 мм, 5 мкм).

Метод В: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламин в IPA; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Chiralpak AD-H (250×4,6 мм, 5 мкм).

Метод С: Подвижная фаза: 20 мМ аммиак в метаноле; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: YMC Cellulose-SC (250×4,6 мм, 5 мкм).

Метод D: Подвижная фаза: метанол; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Lux А1 (250×4,6 мм, 5 мкм).

Метод Е: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламин в метаноле; скорость потока: 5 мл/мин; колонка: Lux С4.

Метод F: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламин в метаноле; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: YMC Cellulose-SC.

Метод G: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламин в метаноле; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Lux А1.

Метод Н: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламин в IPA; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Lux А1 (250×4,6 мм, 5 мкм).

Метод I: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламин в метаноле; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Chiral CCS (250×4,6 мм, 5 мкм).

Метод J: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламин в IPA; скорость потока: 5 мл/мин; колонка: YMC Cellulose-SC AD-H (250×4,6 мм, 5 мкм).

Преп-ВЭЖХ:

Название прибора: Agilent 1290 Infinity II

Метод А: Подвижная фаза: А: 0,1% TFA в воде; подвижная фаза; В: 0,1% TFA в ACN; скорость потока: 2,0 мл/мин; колонка: X-Bridge С8 (50×4,6 мм, 3,5 мкм).

Метод В: Подвижная фаза: А: 10 мМ NH₄OAc в воде; В: ACN; скорость потока: 35 мл/мин; колонка: X select С18 (30×150 мм, 5 мкм).

Метод С: Подвижная фаза: А: 10 мМ NH₄HCO₃ в воде; В: ACN; скорость потока: 1,0 мл/мин; колонка: XBridge С8 (50×4,6 мм, 3,5 мкм).

Метод D: Подвижная фаза: А: 0,1% НСООН в воде; В: ACN; скорость потока: 1,0 мл/мин; колонка: X-select С18 (30×150 мм, 5 мкм).

Хиральная препаративная СФХ:

Название прибора: PIC СФХ 100 и PSC СФХ 400

Соотношение между СО₂ и сорастворителем находится в диапазоне между 60:40 и 80:20

Метод А: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламин в IP А; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: YMC Amylose-SA (250×30 мм, 5 мкм).

Метод В: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламин в IPA; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Chiralpak AD-H (250×30 мм, 5 мкм).

Метод С: Подвижная фаза: 20 мМ аммиак в метаноле; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: YMC Cellulose-SC (250×30 мм, 5 мкм).

Метод D: Подвижная фаза: метанол; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Chiral CCS (250×30 мм, 5 мкм).

Метод Е: Подвижная фаза: метанол; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Lux А1 (250×30 мм, 5 мкм).

Метод F: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламин в IPA; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Lux А1 (250×30 мм, 5 мкм).

Метод G: Подвижная фаза: 0,5% изопропиламин в метаноле; скорость потока: 3 мл/мин; колонка: Chiral CCS (250×30 мм, 5 мкм).

Сокращения

ACN ацетонитрил

DCM дихлорметан

DMF диметилформамид

IPA изопропиловый спирт

ЖХ-МС жидкостная хроматография - масс-спектрометрия

ВЭЖХ высокоэффективная жидкостная хроматография

РЕ петролейный эфир

СФХ сверхкритическая флюидная хроматография

TFA трифторуксусная кислота

THF тетрагидрофуран

ТСХ тонкослойная хроматография

УЭЖХ ультраэффективная жидкостная хроматография

Изобретение далее будет описано с помощью следующих примеров, которые не ограничивают изобретение ни в каком аспекте. Все цитированные документы и источники информации включены посредством ссылки.

ПРИМЕРЫ

Промежуточное соединение 1

Гидрохлорид этил-2-аминобутаноата

К перемешиваемому раствору 2-аминобутановой кислоты (100 г, 0,97 моль) в этаноле (750 мл) добавляли тионилхлорид (78 мл, 1,07 моль) при 0°С. Реакционную смесь затем нагревали в течение 16 часов при 80°С. После завершения взаимодействия реакционную смесь концентрировали в вакууме с получением неочищенного указанного в заголовке соединения, которое использовали в том виде, как оно получено, на следующей стадии без какой-либо дополнительной очистки. Выход: 93% (152 г, белое твердое вещество).

¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 8.66 (bs, 3Н), 4.25-4.16 (m, 2Н), 3.98-3.85 (m, 1H), 1.84 (t, J=7,2 Гц, 2Н), 1.23 (t, J=6,8 Гц, 3Н), 0.92 (t, J=7,6 Гц, 3Н).

Промежуточное соединение 2

Этил-(Е)-2-(бензилиденамино)бутаноат

К перемешиваемому раствору гидрохлорида этил-2-аминобутаноата (Промежуточное соединение 1; 152 г, 0,91 моль) в DCM (900 мл) добавляли триэтиламин (152 мл, 1,09 моль) при 0°С в течение периода 30 минут. К этой реакционной смеси добавляли порциями сульфат магния (98 г, 0,82 моль) при 0°С. Затем к этой реакционной смеси добавляли бензальдегид (84 мл, 0,82 моль) при 0°С в течение периода 20 минут и реакционную смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения взаимодействия (контролируется посредством ТСХ) реакционную смесь фильтровали через целит и фильтрат концентрировали в вакууме. Полученное неочищенное вещество растворяли в петролейном эфире (1000 мл) и снова фильтровали через целит. Затем фильтрат концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения. Это неочищенное вещество переносили в том виде, как оно получено, на следующую стадию без какой-либо дополнительной очистки. Выход: 90% (180 г, бледно-коричневая жидкость).

¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 8.40 (s, 1H), 7.79-7.76 (m, 2Н), 7.49-7.47 (m, 3Н), 4.16-4.10 (m, 2Н), 3.98-3.95 (m, 1Н), 1.92-1.89 (m, 1H), 1.79-1.74 (m, 1Н), 1.19 (t, J=7,2 Гц, 3Н), 0.85 (t, J=7,2 Гц, 3Н).

Промежуточное соединение 3

Этил-(E)-2-(бензилиденамино)-2-этилгексаноат

К перемешиваемому раствору NaH (60%; 32,8 г, 0,82 моль) в DMF (100 мл) при 0°С медленно в течение периода 30 минут добавляли этил-(E)-2-(бензилиденамино)-бутаноат (Промежуточное соединение 2; 180 г, 0,82 моль) в DMF (800 мл). Реакционную смесь затем перемешивали в течение 1,5 часов при комнатной температуре. К этой реакционной смеси добавляли при 0°С н-бутилйодид (93 мл, 0,82 моль) и смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. После завершения взаимодействия (контролируется посредством ТСХ) реакционную смесь гасили 2-пропанолом (100 мл) при 0°С и затем разбавляли водой (1000 мл). Водный слой экстрагировали петролейным эфиром (1000 мл). Органический слой промывали рассолом (200 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть концентрировали в вакууме и полученное неочищенное вещество переносили в том виде, как оно получено, на следующую стадию без какой-либо дополнительной очистки. Выход: 88% (200 г, желтая жидкость).

¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 8.34 (s, 1H), 7.80-7.77 (m, 2Н), 7.47-7.44 (m, 3Н), 4.16 (q, J=7,0 Гц, 2Н), 2.51-1.79 (m, 4Н), 1.31-1.18 (m, 7Н), 0.88-0.84 (m, 6Н).

Промежуточное соединение 4

Этил-2-амино-2-этилгексаноат

К перемешиваемому раствору этил-(E)-2-(бензилиденамино)-2-этилгексаноата (Промежуточное соединение 3; 200 г, 0,73 моль) в петролейном эфире (500 мл) добавляли при 0°С разбавленную HCl (1000 мл, 1,5 н.) и реакционную смесь интенсивно перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения взаимодействия (контролируется посредством ТСХ) органический слой разделяли и водный слой промывали EtOAc (2×100 мл). Затем водный слой подщелачивали (рН примерно 8,5) с использованием твердого бикарбоната натрия (200 г) и экстрагировали EtOAc (2×200 мл). Органический слой промывали водой (2×15 мл). Объединенную органическую часть сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения. Это неочищенное вещество переносили в том виде, как оно получено, на следующую стадию без какой-либо дополнительной очистки. Выход: 80% (110 г, бледно-желтая жидкость).

¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 4.08 (q, J=7,1 Гц, 2Н), 1.68-1.00 (m, 13Н), 0.85 (t, J=7,2 Гц, 3Н), 0.77 (t, J=7,4 Гц, 3Н).

Промежуточное соединение 5

2-Амино-2-этил-N-фенилгексанамид

К перемешиваемому раствору анилина (48,3 мл, 534 ммоль) в THF (250 мл) при -78°С добавляли по каплям в течение периода 30 минут н-BuLi (2,6М в гексанах; 205 мл, 534 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 45 минут при температуре от -25°С до -30°С.Затем к этой реакционной смеси при -78°С добавляли этил-2-амино-2-этилгексаноат (Промежуточное соединение 4; 50 г, 267 ммоль) в THF (250 мл) и реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов при -78°С. После завершения взаимодействия (контролируется посредством ТСХ) реакционную смесь гасили водой (500 мл) при -78°С. Реакционную смесь экстрагировали EtOAc (2×250 мл) и органический слой промывали водой (2×15 мл). Органическую часть сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения в неочищенном виде. Этот неочищенный продукт растворяли в петролейном эфире (1000 мл). Органическую часть промывали 30% метанолом в воде (2x250 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть концентрировали в вакууме и полученное неочищенное вещество переносили в том виде, как оно получено, на следующую стадию без какой-либо дополнительной очистки. Выход: 66 г (неочищенное, коричневая жидкость).

¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 7.64 (d, J=8,4 Гц, 2Н), 7.30 (t, J=7,4 Гц, 2Н), 7.05 (t, J=7,4 Гц, 1H), 6.55 (d, J=8,5 Гц, 1H), 1.76-1.07 (m, 10Н), 0.86-0.77 (m, 6Н).

Промежуточное соединение 6

2-Этил-N1-фенилгексан-1,2-диамин

К перемешиваемому раствору 2-амино-2-этил-N-фенилгексанамида (Промежуточное соединение 5; 66 г, 0,28 моль) в THF (600 мл) добавляли при 0°С диметилсульфид борана (2М в THF, 253 мл, 0,51 моль) и реакционную смесь нагревали в течение 16 часов при 70°С. После завершения взаимодействия (контролируется посредством ТСХ) реакционную смесь гасили метанолом (300 мл) при 0°С. Реакционную смесь затем нагревали в течение 2 часов при 70°С. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и полученный остаток растворяли в EtOAc (1000 мл). Органический слой промывали водой (2×150 мл), сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали в вакууме. Полученное неочищенное вещество очищали посредством колоночной хроматографии Isolera (элюент: 40% EtOAc в гексане; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 82% (50 г, коричневая жидкость).

¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 7.04 (t, J=7,2 Гц, 2Н), 6.61 (d, J=8,4 Гц, 2Н), 6.49 (t, J=7,2 Гц, 1H), 5.15 (t, J=4,8 Гц, 1H), 2.79 (d,J=5,6 Гц, 2Н), 1.39-1.17 (m, 10Н), 0.88-0.79 (m, 6Н).

Промежуточное соединение 7

1,2-Бис(2,4-дибром-5-метоксифенил)дисульфан

К перемешиваемому раствору 3-метоксибензолтиола (100 г, 0,7 моль) в метаноле (1000 мл) добавляли по каплям при 0°С бром (73 мл, 1,4 моль) и реакционную смесь перемешивали в течение 24 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь упаривали в вакууме и полученное неочищенное вещество разбавляли EtOAc (2000 мл) и промывали водой (2×500 мл). Органический слой сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали в вакууме. Полученное неочищенное вещество растворяли в ледяной уксусной кислоте (600 мл), добавляли по каплям при комнатной температуре бром (20 мл) и реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. Полученное твердое вещество отфильтровывали, растирали с DCM и сушили в вакууме с получением очищенного указанного в заголовке соединения. Выход: 37% (78 г, белое твердое вещество).

¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 7.69 (s, 2Н), 7.17 (s, 2Н), 3.84 (s, 6Н).

Промежуточное соединение 8

2,4-Дибром-5-метоксибензолсульфонилхлорид

К перемешиваемой суспензии 1,2-бис(2,4-дибром-5-метоксифенил)дисульфана (Промежуточное соединение 7; 20,0 г, 33,67 ммоль) и нитрата калия (17,02 г, 168,35 ммоль) в ацетонитриле (200 мл) добавляли по каплям сульфурилхлорид (13,6 мл, 168,35 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 24 часов при комнатной температуре. После завершения взаимодействия (контролируется посредством ТСХ) реакционную смесь вливали на дробленый лед и полученное твердое вещество отфильтровывали. Это твердое вещество промывали водой и сушили в вакууме с получением очищенного указанного в заголовке соединения. Выход: 91% (22,5 г, белое твердое вещество).

¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 8.05 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 4.01 (s, 3Н).

Промежуточное соединение 9

2,4-Дибром-5-метокси-N-(3-((фениламино)метил)гептан-3-ил)-бензолсульфонамид

К перемешиваемому раствору 2-этил-N1-фенилгексан-1,2-диамина (Промежуточное соединение 6; 4,9 г, 22,34 ммоль) в THF (10 мл) добавляли 2,4-дибром-5-метоксибензолсульфонилхлорид (Промежуточное соединение 8; 10,5 г, 28,91 ммоль) и триэтиламин (9,3 мл, 67,02 ммоль) при 0°С и реакционную смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре. После завершения взаимодействия (контролируется посредством ТСХ) реакционную смесь разбавляли EtOAc (50 мл). Органический слой промывали водой (2×15 мл) и сушили над безводным Na₂SO₄. Органическую часть концентрировали в вакууме и полученное неочищенное вещество очищали посредством колоночной хроматографии Isolera (элюент: 10% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 59% (7,2 г, белое твердое вещество).

¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 8.01 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.03 (t, J=8,1 Гц, 2H), 6.54-6.46 (m, 3Н), 4.80 (t, J=5,1 Гц, 1H), 3.86 (s, 3Н), 3.07-2.96 (m, 2H), 1.66-1.41 (m, 4H), 1.15-0.95 (m, 4H), 0.78-0.69 (m, 6H).

Промежуточное соединение 10

1,1-Диоксид 7-бром-3-бутил-3-этил-8-метокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепина

К перемешиваемому раствору 2,4-дибром-5-метокси-N-(3-((фениламино)метил)-гептан-3-ил)бензолсульфонамида (Промежуточное соединение 9; 7,2 г, 13,1 ммоль) в DMF (50 мл) добавляли карбонат калия (3,62 г, 26,2 ммоль) и порошок меди (834 мг, 13,1 ммоль) и реакционную смесь нагревали в течение 24 часов при 150°С. После завершения взаимодействия (контролируется посредством ТСХ) реакционную смесь фильтровали через целит и промывали EtOAc (25 мл). Отфильтрованную часть концентрировали в вакууме и полученное неочищенное вещество очищали посредством колоночной хроматографии Isolera (элюент: 20% EtOAc/РЕ; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 83% (5,1 г, белое твердое вещество).

¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 7.43-7.30 (m, 4Н), 7.15-7.13 (m, 2Н), 7.03-7.01 (m, 2Н), 4.00-3.60 (m, 5Н), 1.62-1.34 (m, 4Н), 1.08-0.95 (m, 4Н), 0.74-0.71 (m, 6Н). ЖХ-МС: (Метод А) 467,0 (М⁺), Rt: 3,06 мин, 95,31% (макс).

Промежуточное соединение 11

1,1-Диоксид 7-бром-3-бутил-3-этил-8-метокси-2-(4-метоксибензил)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепина

К перемешиваемому раствору 1,1-диоксида 7-бром-3-бутил-3-этил-8-метокси-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепина (Промежуточное соединение 10; 20,0 г, 42,7 ммоль) в N-метил-2-пирролидоне (100 мл) добавляли Cs₂CO₃ (27,8 г, 85,5 ммоль) и пара-метоксибензилбромид (7,98 мл, 39,5 ммоль) при 0°С и реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. После завершения взаимодействия (контролируется посредством ТСХ) реакционную смесь разбавляли EtOAc (200 мл) и органический слой промывали водой (2×50 мл). Органическую часть сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали в вакууме. Полученное неочищенное вещество очищали посредством колоночной хроматографии Isolera (элюент: 10% EtOAc/PE; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 64% (16 г, белое твердое вещество).

ЖХ-МС: (Метод А) 587,2 (М⁺), Rt: 3,51 мин, 92,94% (макс).

Промежуточное соединение 12

1,1-Диоксид 3-бутил-3-этил-8-гидрокси-2-(4-метоксибензил)-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепина

К перемешиваемому раствору 1,1-диоксида 7-бром-3-бутил-3-этил-8-метокси-2-(4-метоксибензил)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепина (Промежуточное соединение 11; 16,0 г, 27,2 ммоль) в DMF (120 мл) добавляли тиометоксид натрия (9,5 г, 136,1 ммоль) и реакционную смесь нагревали в течение 16 часов при 60°С. После завершения реакции (контролируется посредством ЖХ-МС) реакционную смесь разбавляли EtOAc (200 мл) и органический слой промывали водой (2×50 мл). Органическую часть сушили над безводным Na₂SO₄, затем концентрировали в вакууме и полученное неочищенное вещество очищали посредством колоночной хроматографии Isolera (элюент: 10% EtOAc/РЕ; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 65% (9,2 г, белое твердое вещество).

¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 10.37 (bs, 1H), 7.31-7.22 (m, 5Н), 7.01-6.65 (m, 6Н), 4.32-4.13 (m, 2Н), 4.10-3.90 (m, 2Н), 3.74 (s, 3Н), 2.15 (s, 3Н), 1.62-1.34 (m, 4Н), 1.08-0.98 (m, 4Н), 0.74-0.65 (m, 6Н). ЖХ-МС: (Метод Е) 541,2 (М⁺+Н), Rt: 2,86 мин, 93,67% (макс).

Промежуточное соединение 13

трет-Бутил-2-((3-бутил-3-этил-2-(4-метоксибензил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)ацетат

К раствору 1,1-диоксида 3-бутил-3-этил-8-гидрокси-2-(4-метоксибензил)-7-(метилтио)-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепина (Промежуточное

соединение 12; 1 г, 1,85 ммоль) в DMF (5 мл) добавляли безводный K₂CO₃ (0,51 г, 3,70 ммоль) и трет-бутилбромацетат (0,25 мл, 2,77 ммоль) и реакционную смесь нагревали в течение 16 часов при 100°С. После завершения взаимодействия (контролируется посредством ТСХ) реакционную смесь разбавляли EtOAc (20 мл). Органический слой промывали водой (15 мл) и рассолом (15 мл), сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали в вакууме. Полученное неочищенное вещество очищали посредством колоночной хроматографии Isolera (элюент: 15% EtOAc/РЕ; силикагель: 230-400 меш) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 66% (0,8 г, белое твердое вещество).

¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 7.29-7.27 (m, 4Н), 7.11-6.96 (m, 4Н), 6.88 (d, J=7,8 Гц, 2Н), 6.81 (s, 1H), 3.31 (s, 2Н), 4.81 (s, 2Н), 4.32 (s, 2Н), 3.75 (s, 3Н), 2.15 (s, 3Н), 1.40 (s, 13Н), 1.11-0.81 (m, 4Н), 0.78-0.55 (m, 6Н). ЖХ-МС: (Метод А) 655,3 (М⁺+Н), Rt: 3,51 мин, 90,95% (макс).

Промежуточное соединение 14

трет-Бутил-(S)-2-((3-бутил-3-этил-2-(4-метоксибензил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)ацетат и трет-бутил-(R)-2-((3-бутал-3-этил-2-(4-метоксибензил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)ацетат

Эти два энантиомера рацемического трет-бутил-2-((3-бутил-3-этил-2-(4-метоксибензил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)ацетата (0,52 г, 0,79 ммоль) разделяли посредством хиральной СФХ (метод Н). Это вещество концентрировали в вакууме при 50°С. Первая элюирующаяся фракция соответствовала энантиомеру 1, и вторая элюирующаяся фракция соответствовала энантиомеру 2. Абсолютная конфигурация этих двух энантиомеров не известна.

Энантиомер 1: Выход: 38% (200 мг, белое твердое вещество). Хиральная СФХ: (Метод J) Rt: 3,13 мин, 99,90% (макс).

Энантиомер 2: Выход: 42% (220 мг, белое твердое вещество). ЖХ-МС: (Метод Е) 654,8 (М⁺+Н), Rt: 3,55 мин, 99,21% (макс). ВЭЖХ: (Метод В) Rt: 7,12 мин, 99,02% (макс). Хиральная СФХ: (Метод J) Rt: 3,84 мин, 98,09% (макс).

Пример 1

2-((3-Бутил-3 -этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидробензо-1,2,5-тиадиазепин-8-ил)окси)уксусная кислота

К перемешиваемому раствору трет-бутил-2-((3-бутил-3-этил-2-(4-метоксибензил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)ацетата (Промежуточное соединение 13; 0,8 г, 1,22 ммоль) в DCM (10 мл) при 0°С добавляли TFA (4 мл) и триэтилсилан (4 мл) и реакционную смесь перемешивали в течение 4 часов при комнатной температуре. После завершения взаимодействия (контролируется посредством ТСХ) реакционную смесь вливали в охлажденную на льду воду и водный слой экстрагировали DCM (2×10 мл). Объединенный органический слой промывали охлажденной на льду водой (20 мл) и рассолом (20 мл), сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали в вакууме. Полученное неочищенное вещество очищали посредством преп-ВЭЖХ (Метод D) с получением указанного в заголовке соединения. Выход: 20% (0,12 г, не совсем белое твердое вещество).

¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 13.18 (s, 1Н), 7.27 (t, J=8,0 Гц, 3Н), 7.18-7.04 (m, 3Н), 6.95-6.93 (m, 1H), 6.60 (s, 1H), 4.77 (s, 2H), 3.82 (s, 2H),2.12(s, 3Н), 1.62-1.52 (m, 2H), 1.49-1.43 (m, 2H), 1.40-1.35 (m, 1H), 1.24-0.97 (m, 3H), 0.76-0.72 (m, 6H). ЖХ-МС: (Метод A) 479,1 (M⁺+H), Rt: 2,65 мин, 99,44% (макс). ВЭЖХ: (Метод В) Rt: 5,58 мин, 97,46% (макс).

Примеры 2 и 3

(S)-2-((3-Бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)уксусная кислота и (R)-2-((3-бутил-3-этил-7 -(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)уксусная кислота

К раствору энантиомера 1 трет-бутил-2-((3-бутил-3-этил-2-(4-метоксибензил)-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидробензо-1,2,5-тиадиазепин-8-ил)окси)ацетата (Промежуточное соединение 14; 0,20 г, 0,33 ммоль) в толуоле (6 мл) добавляли трифениламин (0,16 г, 0,67 ммоль) и реакционную смесь охлаждали до 0°С. Затем добавляли TFA (0,77 г, 6,72 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. После завершения взаимодействия (контролируется посредством ТСХ) реакционную смесь разбавляли EtOAc (15 мл) и органический слой промывали водой (2×10 мл) и рассолом (10 мл). Органическую часть сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали в вакууме. Полученное неочищенное вещество очищали посредством колоночной хроматографии Isolera (элюент: 30% EtOAc/РЕ; силикагель: 230-400 меш) с получением энантиомера 1 указанного в заголовке соединения.

Энантиомер 2 указанного в заголовке соединения получали согласно той же методике, начиная с 0,22 г энантиомера 2 Промежуточного соединения 14. Абсолютная конфигурация этих двух энантиомеров не известна.

Энантиомер 1: Выход: 43% (70 мг, белое твердое вещество). ¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 13.14 (bs, 1H), 7.29-7.25 (m, 3Н), 7.11-7.06 (m, 3Н), 6.94 (t, J=7,2 Гц, 1H), 6.60 (s, 1H), 4.78 (s, 2H), 3.85 (bs, 2H), 2.12 (s, 3H), 1.72-1.58 (m, 1H), 1.57-1.45 (m, 1H), 1.43-1.35 (m, 2H), 1.29-1.14 (m, 1H), 1.13-0.88 (m, 3H), 0.74 (t, J=7,2 Гц, 6H). ЖХ-МС: (Метод E) 478,8 (M⁺+H), Rt: 2,92 мин, 98,18% (макс). ВЭЖХ: (Метод В) Rt: 5,54 мин, 97,87% (макс). Хиральная СФХ: (Метод G) Rt: 2,0 мин, 99,30% (макс).

Энантиомер 2: Выход: 37% (60 мг, белое твердое вещество). ¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 13.10 (bs, 1H), 7.29-7.25 (m, 3Н), 7.11-7.06 (m, 3Н), 6.96-6.94 (m, 1H), 6.60 (s, 1Н), 4.78 (s, 2H), 3.80 (bs, 2H), 2.12 (s, 3Н), 1.72-1.58 (m, 1H), 1.57-1.45 (m, 1H), 1.43-1.35 (m, 2H), 1.29-1.13 (m, 1H), 1.13-0.88 (m, 3H), 0.74 (t, J=7,2 Гц, 6H). ЖХ-МС: (Метод E) 478,9 (M⁺+H), Rt: 2,92 мин, 98,99% (макс), ВЭЖХ: (Метод В) Rt: 5,53 мин, 97,81% (макс). Хиральная СФХ: (Метод G) Rt: 1,89 мин, 100% (макс).

БИОЛОГИЧЕСКИЕ АНАЛИЗЫ

Протокол анализа IBAT (ч/м)

10000 клеток (клетки со сверхэкспрессией IB AT человека или мыши) высевали в 96-луночный планшет (Corning CLS3809) в 200 мкл среды MEM-альфа (Gibco 12571-063) с добавлением 10% FBS (Gibco 10438026), содержащего пуромицин (Gibco A1113803) (10 мкг/мл), и инкубировали при 37°С в 5% СО₂ в течение 48 часов. После инкубации среду сливали из лунок и клетки дважды промывали 300 мкл основной среды МЕМ-альфа (без FBS). После декантации основной среды MEM-альфа каждый раз планшеты постукивали о бумажное полотенце для обеспечения максимального удаления остаточной среды. Разведения тестируемого ингибитора (максимальная тестовая концентрация 10 мкМ, 3-кратное серийное разведение, 10 точек), приготовленные в DMSO (Sigma D2650), добавляли в инкубационную смесь (поддерживая конечную концентрацию DMSO 0,2%), содержащую 0,25 мкМ 3Н-таурохолевой кислоты (ARC ART-1368) и 5 мкМ охлажденной таурохолевой кислоты (Sigma Т4009). Затем в лунки добавляли 50 мкл инкубационной смеси, содержащей тестируемые ингибиторы (в двух экземплярах), и планшеты инкубировали в течение 20 минут в инкубаторе с СО₂ при 37°С. После инкубации реакцию останавливали, выдерживая планшеты на смеси льда с водой в течение 2-3 минут, а затем инкубационную смесь полностью аспирировали из лунок. Лунки дважды промывали 250 мкл охлажденной немеченой 1 мМ таурохолевой кислоты, растворенной в HEPES (Gibco 15630080)-забуференном (10 мМ) HBSS (Gibco 14175079) (рН 7,4). Планшеты постукивали о бумажное полотенце после каждой промывки, чтобы обеспечить максимальное удаление блокирующего буфера.

100 мкл MicroScint-20 (PerkinElmer 6013621) добавляли в лунки и оставляли на ночь при комнатной температуре, а затем считывали показания планшетов на счетчике сцинтилляции и люминесценции для микропланшетов TopCount NXT™ от PerkinElmer по протоколу 3Н Test (время считывания на лунку установлено 120 секунд).

Протокол LBAT (ч/м)

20000 клеток (клетки со сверхэкспрессией LBAT человека или мыши) высевали в 96-луночный планшет (Corning CLS3809) в 100 мкл среды MEM-альфа (Gibco 12571-063) с добавлением 10% FBS (Gibco 10438026), содержащего генетицин (Gibco 10131-027) (1 мг/мл), и инкубировали при 37°С в 5% СО₂ в течение 24 часов. После инкубации среду сливали из лунок и клетки дважды промывали 300 мкл основной среды MEM-альфа (без FBS). После декантации основной среды MEM-альфа каждый раз планшеты постукивали о бумажное полотенце, чтобы обеспечить максимальное удаление остаточной среды. Для человеческого LBAT инкубационную смесь готовили путем добавления разведений тестируемого ингибитора (3-кратное серийное разведение в DMSO (Sigma D2650), 10 точек) в MEM-альфа (без FBS), содержащем 0,3 мкМ 3Н-таурохолевой кислоты (ARC ART-1368) и 7,5 мкМ охлажденной таурохолевой кислоты (Sigma Т4009) (поддерживая конечную концентрацию DMSO 0,2%). Для мышиного LBAT инкубационную смесь готовили путем добавления разведений тестируемого ингибитора (3-кратное серийное разведение в DMSO, 10 точек) в MEM-альфа (без FBS), содержащем 0,3 мкМ 3Н-таурохолевой кислоты и 25 мкМ охлажденной таурохолевой кислоты, поддерживая конечную концентрацию DMSO 0,2%).

Затем в лунки добавляли 50 мкл инкубационной смеси, содержащей тестируемые ингибиторы (в двух экземплярах), и планшеты инкубировали в течение 20 минут в инкубаторе с СО₂ при 37°С. После инкубации реакцию останавливали, выдерживая планшеты на смеси льда с водой в течение 2-3 минут, а затем инкубационную смесь полностью аспирировали из лунок. Лунки дважды промывали 250 мкл охлажденной немеченой 1 мМ таурохолевой кислоты, растворенной в HEPES (Gibco 15630080)-забуференном (10 мМ) HBSS (Gibco 14175079) (рН 7,4). Планшеты постукивали о бумажное полотенце после каждой промывки, чтобы обеспечить максимальное удаление блокирующего буфера.

100 мкл MicroScint-20 (PerkinElmer 6013621) добавляли в лунки и оставляли на ночь при комнатной температуре, затем считывали показания с планшетов на счетчике сцинтилляции и люминесценции для микропланшетов TopCount NXT™ от PerkinElmer по протоколу 3Н Test (время считывания на лунку составляло 120 секунд, с нормальной ориентацией планшета).

Двунаправленный анализ проницаемости (клетки Сасо-2)

Клетки Сасо-2 (Evotec) высевали при плотности 70000 клеток/лунку в 24-луночные планшеты для культивирования клеток Millicell® со вставками и выдерживали в инкубаторе (37°С, 5% СО₂, 95% относительной влажности (RH)) в течение 21 суток со сменой среды через день.

Исходные растворы (10 мМ) тестируемых соединений, атенолола (маркер низкой проницаемости), пропранолола (маркер высокой проницаемости) и дигоксина (субстрат для пути транспорта P-gp) готовили в диметилсульфоксиде (DMSO). Промежуточный основной раствор (1 мМ) получали разбавлением 10 мкл 10 мМ основного раствора 90 мкл чистого DMSO. Рабочий исходный раствор (10 мкМ) готовили разбавлением 50 мкл 1 мМ 4950 мкл буфера FaSSIF. После добавления соединений к FaSSIF образцы подвергали обработке ультразвуком в течение 2 часов и центрифугировали при 4000 об/мин в течение 30 минут при 37°С. 4 мл полученной надосадочной жидкости использовали непосредственно в анализе. Конечная концентрация DMSO в экспериментах переноса составляла 1%.

В день анализа монослои Сасо-2 дважды промывали буфером для переноса (HBSS, рН 7,4) и предварительно инкубировали в течение 30 минут (37°С, 5% СО₂, 95% RH) в инкубаторе. Электрическое сопротивление монослоев измеряли с помощью системы Millicell® - ERS. Для анализа были выбраны монослои со значениями трансэпителиального электрического сопротивления (TEER) более 350 Ом⋅см².

Анализ проводили в направлении абсорбции (А2В) и в направлении секреции (В2А). Эксперименты по переносу инициировали добавлением аналитического буфера для переноса (буфер FaSSIF, приготовленного в HBSS), состоящего из соединений, в донорный отсек (апикальная камера А-В; базолатеральная камера В-А) в дублируемых (n=2) лунках. Не содержащий лекарственное средство буфер HBSS (рН 7,4), содержащий 1% бычьего сывороточного альбумина (BSA), вводили в приемные отсеки (А-В-базолатеральный; В-А-апикальный). Объемы апикального и базолатерального отделов составляли 0,4 и 0,8 мл, соответственно. После добавления дозируемого раствора планшеты инкубировали в инкубаторе в течение 120 минут при 37°С. Через 120 минут образцы донора и получателя собирали и сопоставляли матрицу (1:1, 30 мкл исследуемого образца + 30 мкл пустого буфера) с противоположным буфером. Матрицу дозируемых образцов приводили в соответствие (1:1, 30 мкл исследуемого образца+30 мкл пустого буфера) с противоположным буфером. Образцы обрабатывали, добавляя ацетонитрил, содержащий внутренний стандарт (60 мкл исследуемого образца + 200 мкл ацетонитрила, содержащего внутренний стандарт толбутамид, 500 нг/мл). Образцы встряхивали и центрифугировали при 4000 об/мин в течение 10 минут. Полученную надосадочную жидкость (100 мкл) разбавляли 100 мкл воды и переносили в свежие 96-луночные планшеты. Концентрацию соединений в образцах анализировали методом тандемной масс-спектрометрии с жидкостной хроматографией (ЖХ-МС/МС) с использованием биоаналитического метода исследовательского уровня, если применимо.

Среднюю кажущуюся проницаемость (Рарр, × 10^-6 см/сек) тестируемых соединений, атенолола, пропранолола и дигоксина рассчитывали следующим образом:

где dq/dt представляет собой скорость переноса (скорость переноса соединения в приемном отсеке), С₀ представляет собой начальную концентрацию в донорном отсеке, А представляет собой площадь поверхности эффективной мембраны фильтра.

Протокол анализа на основе HepaRG

Криоконсервированный флакон с дифференцированными клетками HepaRG (Biopredic International HPR116080) размораживали в среде HepaRG для размораживания/посева/общего назначения (Biopredic International ADD670C) с добавлением 200 мМ глутамакса (Gibco 35050061) в соответствии с протоколом, предоставленным Biopredic International. 70000 клеток на лунку высевали в 96-луночный планшет (Corning CLS3809) в 100 мкл среды HepaRG для размораживания/посева/общего назначения с добавлением 200 мМ глутамакса и инкубировали при 37°С в 5% СО₂ в течение 24 часов. После инкубации посевную среду заменяли средой для поддержания/метаболизма HepaRG (Biopredic International ADD620C) и инкубировали в течение 6 суток, восполняя свежей средой для поддержания/метаболизма HepaRG каждые 48 часов. Через 7 суток инкубации после посева инкубационную среду сливали из лунок и клетки промывали два раза 250 мкл базальной среды William's Е (Gibco 12551032). Каждый раз после декантации базальной среды William's Е планшеты простукивали о бумажное полотенце, чтобы обеспечить максимальное удаление остаточной среды. Инкубационную смесь готовили путем добавления разведений тестируемого ингибитора (3-кратное серийное разведение в DMSO (Sigma D2650)) в среду William's Е (базальную), содержащую 0,3 мкМ 3Н-таурохолевой кислоты (ARC ART-1368) и 7,5 мкМ охлажденной таурохолевой кислоты (Sigma Т4009) (поддерживая конечную концентрацию 0,2% DMSO). Затем в лунки (в двух экземплярах) добавляли 50 мкл инкубационной смеси, содержащей тетсируемые ингибиторы, и планшеты инкубировали в течение 30 минут в инкубаторе с 5% СО₂ при 37°С. После инкубации реакцию останавливали, выдерживая планшеты на смеси льда с водой в течение 2-3 минут, а затем инкубационную смесь полностью аспирировали из лунок. Лунки дважды промывали 250 мкл охлажденной немеченой 1 мМ таурохолевой кислоты, растворенной в HEPES (Gibco 15630080)-забуференном (10 мМ) HBSS (Gibco 14175079) (рН 7,4). После каждой промывки планшеты простукивали о бумажное полотенце, чтобы обеспечить максимальное удаление блокирующего буфера.

100 мкл MicroScint-20 (PerkinElmer 6013621) добавляли в лунки и выдерживали в течение ночи при комнатной температуре, затем считывали показания с планшетов на счетчике сцинтилляции и люминесценции для микропланшетов TopCount NXT™ от PerkinElmer по протоколу 3Н Test (время считывания на лунку составляло 120 секунд, с нормальной ориентацией планшета).

Приготовление разведений тестируемых соединений

Все тестируемые соединения были предоставлены в форме порошка при комнатной температуре. Готовили 10 мМ исходных тестируемых соединений в DMSO, разделяли на аликвоты и хранили при -20°С. Из исходного 10 мМ DMSO соединений готовили 3-кратное серийное разведение в DMSO, чтобы получить в общей сложности 10 разведений тестируемых соединений. 0,5 мкл этого разведения в DMSO добавляли к 250 мкл базальной среды без FBS, содержащей 3Н-таурохолевую кислоту и охлажденную таурохолевую кислоту, для приготовления инкубационной смеси.

Исследования биодоступности

Использовали мышей-самцов (C57BL/6 или CD1) или крыс Wistar в возрасте 8-9 недель. Для каждого тестируемого соединения использовали две группы по 3 животных в каждой. Одной группе вводили однократную внутривенную дозу 1 мг/кг (носитель 100% DMSO) через хвостовую вену, а другой группе вводили однократную пероральную дозу 10 мг/кг через желудочную иглу. Группу, которой вводили пероральную дозу, не кормили в течение ночи. Образцы крови собирали через 0,083, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8 и 24 часа после внутривенного введения и через 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8 и 24 часа после перорального введения. Кровь брали из подкожной вены. В качестве антикоагулянта использовали 0,2% EDTA. Образцы анализировали с помощью биоаналитического метода исследовательского уровня, разработанного для оценки тестируемого соединения в плазме, с использованием системы ЖХ-МС/МС.

Результаты

Биологические данные для соединений Примеров показаны в Таблице 8 ниже.

Модель PD: Оценка влияния тестируемого соединения на общие уровни желчных кислот у самцов мышей C57BL6

Мышей C57BL/6N Тас в возрасте 8-9 недель использовали для изучения влияния модуляторов желчных кислот на уровни желчных кислот. После завершения периода карантина и акклиматизации животных рандомизировали по массе тела на × экспериментальных групп: (1) контрольный носитель, и (2) тестируемое соединение у мг/кг перорально один раз в день. Животным вводили тестируемое соединение в течение 7 суток. На 5 сутки исследования животных по отдельности помещали в свежие клетки. На 7 сутки из каждой клетки собирали фекалии с последующим забором крови у каждого животного ретроорбитальным путем. Животных умерщвляли, чтобы забрать печень и терминальную часть подвздошной кишки у каждого животного для дальнейшего анализа. Массу тела и потребление пищи измеряли два раза в неделю. Липидные профили сыворотки анализировали в образцах сыворотки на 7 сутки. Общее количество желчных кислот в сыворотке измеряют в образцах сыворотки на 7 сутки. Фекальное выделение желчи измеряют в образце кала на 7 сутки. Экспрессию CYP7A1 и SHP в печени количественно оценивают в образцах печени на 7 сутки. Триглицериды печени и общий холестерин анализируют в образцах печени на 7 сутки.

Модель желчных кислот в моче: оценка влияния тестируемых соединений на уровни желчных кислот в моче у самцов мышей C57BL/6.

Мышей C57BL/6N Тас в возрасте 8-9 недель использовали для изучения влияния модуляторов желчных кислот на уровни желчных кислот. После завершения периода карантина и акклиматизации животных рандомизировали по массе тела на × экспериментальных групп: (1) контрольный носитель, и (2) тестируемое соединение у мг/кг перорально один раз в день. Животным вводили тестируемое соединение в течение 7 суток. На 6 сутки исследования животных переводили в метаболическую клетку. На 7 сутки из каждой метаболической клетки собирали фекалии и мочу с последующим забором крови у каждого животного ретроорбитальным путем. Животных умерщвляли, чтобы забрать почки у каждого животного для дальнейшего анализа. Массу тела измеряют два раза в неделю. Общее количество желчных кислот в сыворотке измеряют в образцах сыворотки на 7 сутки. Экскрецию желчных кислот с калом измеряют в образце кала на 7 сутки. Выведение желчных кислот с мочой измеряют в образце на 7 сутки. Почечную экспрессию ASBT, OSTa, OSTAb и MRP2 количественно определяют в образцах на 7 сутки.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> ALBIREO AB

<120> СОЕДИНЕНИЯ БЕНЗОТИАДИАЗЕПИНА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В КАЧЕСТВЕ

МОДУЛЯТОРОВ ЖЕЛЧНЫХ КИСЛОТ

<130> NP0503WO

<150> IN 201911049980

<151> 2019-12-04

<160> 4

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1251

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 1

Met Ser Thr Glu Arg Asp Ser Glu Thr Thr Phe Asp Glu Asp Ser Gln

1 5 10 15

Pro Asn Asp Glu Val Val Pro Tyr Ser Asp Asp Glu Thr Glu Asp Glu

20 25 30

Leu Asp Asp Gln Gly Ser Ala Val Glu Pro Glu Gln Asn Arg Val Asn

35 40 45

Arg Glu Ala Glu Glu Asn Arg Glu Pro Phe Arg Lys Glu Cys Thr Trp

50 55 60

Gln Val Lys Ala Asn Asp Arg Lys Tyr His Glu Gln Pro His Phe Met

65 70 75 80

Asn Thr Lys Phe Leu Cys Ile Lys Glu Ser Lys Tyr Ala Asn Asn Ala

85 90 95

Ile Lys Thr Tyr Lys Tyr Asn Ala Phe Thr Phe Ile Pro Met Asn Leu

100 105 110

Phe Glu Gln Phe Lys Arg Ala Ala Asn Leu Tyr Phe Leu Ala Leu Leu

115 120 125

Ile Leu Gln Ala Val Pro Gln Ile Ser Thr Leu Ala Trp Tyr Thr Thr

130 135 140

Leu Val Pro Leu Leu Val Val Leu Gly Val Thr Ala Ile Lys Asp Leu

145 150 155 160

Val Asp Asp Val Ala Arg His Lys Met Asp Lys Glu Ile Asn Asn Arg

165 170 175

Thr Cys Glu Val Ile Lys Asp Gly Arg Phe Lys Val Ala Lys Trp Lys

180 185 190

Glu Ile Gln Val Gly Asp Val Ile Arg Leu Lys Lys Asn Asp Phe Val

195 200 205

Pro Ala Asp Ile Leu Leu Leu Ser Ser Ser Glu Pro Asn Ser Leu Cys

210 215 220

Tyr Val Glu Thr Ala Glu Leu Asp Gly Glu Thr Asn Leu Lys Phe Lys

225 230 235 240

Met Ser Leu Glu Ile Thr Asp Gln Tyr Leu Gln Arg Glu Asp Thr Leu

245 250 255

Ala Thr Phe Asp Gly Phe Ile Glu Cys Glu Glu Pro Asn Asn Arg Leu

260 265 270

Asp Lys Phe Thr Gly Thr Leu Phe Trp Arg Asn Thr Ser Phe Pro Leu

275 280 285

Asp Ala Asp Lys Ile Leu Leu Arg Gly Cys Val Ile Arg Asn Thr Asp

290 295 300

Phe Cys His Gly Leu Val Ile Phe Ala Gly Ala Asp Thr Lys Ile Met

305 310 315 320

Lys Asn Ser Gly Lys Thr Arg Phe Lys Arg Thr Lys Ile Asp Tyr Leu

325 330 335

Met Asn Tyr Met Val Tyr Thr Ile Phe Val Val Leu Ile Leu Leu Ser

340 345 350

Ala Gly Leu Ala Ile Gly His Ala Tyr Trp Glu Ala Gln Val Gly Asn

355 360 365

Ser Ser Trp Tyr Leu Tyr Asp Gly Glu Asp Asp Thr Pro Ser Tyr Arg

370 375 380

Gly Phe Leu Ile Phe Trp Gly Tyr Ile Ile Val Leu Asn Thr Met Val

385 390 395 400

Pro Ile Ser Leu Tyr Val Ser Val Glu Val Ile Arg Leu Gly Gln Ser

405 410 415

His Phe Ile Asn Trp Asp Leu Gln Met Tyr Tyr Ala Glu Lys Asp Thr

420 425 430

Pro Ala Lys Ala Arg Thr Thr Thr Leu Asn Glu Gln Leu Gly Gln Ile

435 440 445

His Tyr Ile Phe Ser Asp Lys Thr Gly Thr Leu Thr Gln Asn Ile Met

450 455 460

Thr Phe Lys Lys Cys Cys Ile Asn Gly Gln Ile Tyr Gly Asp His Arg

465 470 475 480

Asp Ala Ser Gln His Asn His Asn Lys Ile Glu Gln Val Asp Phe Ser

485 490 495

Trp Asn Thr Tyr Ala Asp Gly Lys Leu Ala Phe Tyr Asp His Tyr Leu

500 505 510

Ile Glu Gln Ile Gln Ser Gly Lys Glu Pro Glu Val Arg Gln Phe Phe

515 520 525

Phe Leu Leu Ala Val Cys His Thr Val Met Val Asp Arg Thr Asp Gly

530 535 540

Gln Leu Asn Tyr Gln Ala Ala Ser Pro Asp Glu Gly Ala Leu Val Asn

545 550 555 560

Ala Ala Arg Asn Phe Gly Phe Ala Phe Leu Ala Arg Thr Gln Asn Thr

565 570 575

Ile Thr Ile Ser Glu Leu Gly Thr Glu Arg Thr Tyr Asn Val Leu Ala

580 585 590

Ile Leu Asp Phe Asn Ser Asp Arg Lys Arg Met Ser Ile Ile Val Arg

595 600 605

Thr Pro Glu Gly Asn Ile Lys Leu Tyr Cys Lys Gly Ala Asp Thr Val

610 615 620

Ile Tyr Glu Arg Leu His Arg Met Asn Pro Thr Lys Gln Glu Thr Gln

625 630 635 640

Asp Ala Leu Asp Ile Phe Ala Asn Glu Thr Leu Arg Thr Leu Cys Leu

645 650 655

Cys Tyr Lys Glu Ile Glu Glu Lys Glu Phe Thr Glu Trp Asn Lys Lys

660 665 670

Phe Met Ala Ala Ser Val Ala Ser Thr Asn Arg Asp Glu Ala Leu Asp

675 680 685

Lys Val Tyr Glu Glu Ile Glu Lys Asp Leu Ile Leu Leu Gly Ala Thr

690 695 700

Ala Ile Glu Asp Lys Leu Gln Asp Gly Val Pro Glu Thr Ile Ser Lys

705 710 715 720

Leu Ala Lys Ala Asp Ile Lys Ile Trp Val Leu Thr Gly Asp Lys Lys

725 730 735

Glu Thr Ala Glu Asn Ile Gly Phe Ala Cys Glu Leu Leu Thr Glu Asp

740 745 750

Thr Thr Ile Cys Tyr Gly Glu Asp Ile Asn Ser Leu Leu His Ala Arg

755 760 765

Met Glu Asn Gln Arg Asn Arg Gly Gly Val Tyr Ala Lys Phe Ala Pro

770 775 780

Pro Val Gln Glu Ser Phe Phe Pro Pro Gly Gly Asn Arg Ala Leu Ile

785 790 795 800

Ile Thr Gly Ser Trp Leu Asn Glu Ile Leu Leu Glu Lys Lys Thr Lys

805 810 815

Arg Asn Lys Ile Leu Lys Leu Lys Phe Pro Arg Thr Glu Glu Glu Arg

820 825 830

Arg Met Arg Thr Gln Ser Lys Arg Arg Leu Glu Ala Lys Lys Glu Gln

835 840 845

Arg Gln Lys Asn Phe Val Asp Leu Ala Cys Glu Cys Ser Ala Val Ile

850 855 860

Cys Cys Arg Val Thr Pro Lys Gln Lys Ala Met Val Val Asp Leu Val

865 870 875 880

Lys Arg Tyr Lys Lys Ala Ile Thr Leu Ala Ile Gly Asp Gly Ala Asn

885 890 895

Asp Val Asn Met Ile Lys Thr Ala His Ile Gly Val Gly Ile Ser Gly

900 905 910

Gln Glu Gly Met Gln Ala Val Met Ser Ser Asp Tyr Ser Phe Ala Gln

915 920 925

Phe Arg Tyr Leu Gln Arg Leu Leu Leu Val His Gly Arg Trp Ser Tyr

930 935 940

Ile Arg Met Cys Lys Phe Leu Arg Tyr Phe Phe Tyr Lys Asn Phe Ala

945 950 955 960

Phe Thr Leu Val His Phe Trp Tyr Ser Phe Phe Asn Gly Tyr Ser Ala

965 970 975

Gln Thr Ala Tyr Glu Asp Trp Phe Ile Thr Leu Tyr Asn Val Leu Tyr

980 985 990

Thr Ser Leu Pro Val Leu Leu Met Gly Leu Leu Asp Gln Asp Val Ser

995 1000 1005

Asp Lys Leu Ser Leu Arg Phe Pro Gly Leu Tyr Ile Val Gly Gln

1010 1015 1020

Arg Asp Leu Leu Phe Asn Tyr Lys Arg Phe Phe Val Ser Leu Leu

1025 1030 1035

His Gly Val Leu Thr Ser Met Ile Leu Phe Phe Ile Pro Leu Gly

1040 1045 1050

Ala Tyr Leu Gln Thr Val Gly Gln Asp Gly Glu Ala Pro Ser Asp

1055 1060 1065

Tyr Gln Ser Phe Ala Val Thr Ile Ala Ser Ala Leu Val Ile Thr

1070 1075 1080

Val Asn Phe Gln Ile Gly Leu Asp Thr Ser Tyr Trp Thr Phe Val

1085 1090 1095

Asn Ala Phe Ser Ile Phe Gly Ser Ile Ala Leu Tyr Phe Gly Ile

1100 1105 1110

Met Phe Asp Phe His Ser Ala Gly Ile His Val Leu Phe Pro Ser

1115 1120 1125

Ala Phe Gln Phe Thr Gly Thr Ala Ser Asn Ala Leu Arg Gln Pro

1130 1135 1140

Tyr Ile Trp Leu Thr Ile Ile Leu Ala Val Ala Val Cys Leu Leu

1145 1150 1155

Pro Val Val Ala Ile Arg Phe Leu Ser Met Thr Ile Trp Pro Ser

1160 1165 1170

Glu Ser Asp Lys Ile Gln Lys His Arg Lys Arg Leu Lys Ala Glu

1175 1180 1185

Glu Gln Trp Gln Arg Arg Gln Gln Val Phe Arg Arg Gly Val Ser

1190 1195 1200

Thr Arg Arg Ser Ala Tyr Ala Phe Ser His Gln Arg Gly Tyr Ala

1205 1210 1215

Asp Leu Ile Ser Ser Gly Arg Ser Ile Arg Lys Lys Arg Ser Pro

1220 1225 1230

Leu Asp Ala Ile Val Ala Asp Gly Thr Ala Glu Tyr Arg Arg Thr

1235 1240 1245

Gly Asp Ser

1250

<210> 2

<211> 3756

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 2

atgagtacag aaagagactc agaaacgaca tttgacgagg attctcagcc taatgacgaa 60

gtggttccct acagtgatga tgaaacagaa gatgaacttg atgaccaggg gtctgctgtt 120

gaaccagaac aaaaccgagt caacagggaa gcagaggaga accgggagcc attcagaaaa 180

gaatgtacat ggcaagtcaa agcaaacgat cgcaagtacc acgaacaacc tcactttatg 240

aacacaaaat tcttgtgtat taaggagagt aaatatgcga ataatgcaat taaaacatac 300

aagtacaacg catttacctt tataccaatg aatctgtttg agcagtttaa gagagcagcc 360

aatttatatt tcctggctct tcttatctta caggcagttc ctcaaatctc taccctggct 420

tggtacacca cactagtgcc cctgcttgtg gtgctgggcg tcactgcaat caaagacctg 480

gtggacgatg tggctcgcca taaaatggat aaggaaatca acaataggac gtgtgaagtc 540

attaaggatg gcaggttcaa agttgctaag tggaaagaaa ttcaagttgg agacgtcatt 600

cgtctgaaaa aaaatgattt tgttccagct gacattctcc tgctgtctag ctctgagcct 660

aacagcctct gctatgtgga aacagcagaa ctggatggag aaaccaattt aaaatttaag 720

atgtcacttg aaatcacaga ccagtacctc caaagagaag atacattggc tacatttgat 780

ggttttattg aatgtgaaga acccaataac agactagata agtttacagg aacactattt 840

tggagaaaca caagttttcc tttggatgct gataaaattt tgttacgtgg ctgtgtaatt 900

aggaacaccg atttctgcca cggcttagtc atttttgcag gtgctgacac taaaataatg 960

aagaatagtg ggaaaaccag atttaaaaga actaaaattg attacttgat gaactacatg 1020

gtttacacga tctttgttgt tcttattctg ctttctgctg gtcttgccat cggccatgct 1080

tattgggaag cacaggtggg caattcctct tggtacctct atgatggaga agacgataca 1140

ccctcctacc gtggattcct cattttctgg ggctatatca ttgttctcaa caccatggta 1200

cccatctctc tctatgtcag cgtggaagtg attcgtcttg gacagagtca cttcatcaac 1260

tgggacctgc aaatgtacta tgctgagaag gacacacccg caaaagctag aaccaccaca 1320

ctcaatgaac agctcgggca gatccattat atcttctctg ataagacggg gacactcaca 1380

caaaatatca tgacctttaa aaagtgctgt atcaacgggc agatatatgg ggaccatcgg 1440

gatgcctctc aacacaacca caacaaaata gagcaagttg attttagctg gaatacatat 1500

gctgatggga agcttgcatt ttatgaccac tatcttattg agcaaatcca gtcagggaaa 1560

gagccagaag tacgacagtt cttcttcttg ctcgcagttt gccacacagt catggtggat 1620

aggactgatg gtcagctcaa ctaccaggca gcctctcccg atgaaggtgc cctggtaaac 1680

gctgccagga actttggctt tgccttcctc gccaggaccc agaacaccat caccatcagt 1740

gaactgggca ctgaaaggac ttacaatgtt cttgccattt tggacttcaa cagtgaccgg 1800

aagcgaatgt ctatcattgt aagaacccca gaaggcaata tcaagcttta ctgtaaaggt 1860

gctgacactg ttatttatga acggttacat cgaatgaatc ctactaagca agaaacacag 1920

gatgccctgg atatctttgc aaatgaaact cttagaaccc tatgcctttg ctacaaggaa 1980

attgaagaaa aagaatttac agaatggaat aaaaagttta tggctgccag tgtggcctcc 2040

accaaccggg acgaagctct ggataaagta tatgaggaga ttgaaaaaga cttaattctc 2100

ctgggagcta cagctattga agacaagcta caggatggag ttccagaaac catttcaaaa 2160

cttgcaaaag ctgacattaa gatctgggtg cttactggag acaaaaagga aactgctgaa 2220

aatataggat ttgcttgtga acttctgact gaagacacca ccatctgcta tggggaggat 2280

attaattctc ttcttcatgc aaggatggaa aaccagagga atagaggtgg cgtctacgca 2340

aagtttgcac ctcctgtgca ggaatctttt tttccacccg gtggaaaccg tgccttaatc 2400

atcactggtt cttggttgaa tgaaattctt ctcgagaaaa agaccaagag aaataagatt 2460

ctgaagctga agttcccaag aacagaagaa gaaagacgga tgcggaccca aagtaaaagg 2520

aggctagaag ctaagaaaga gcagcggcag aaaaactttg tggacctggc ctgcgagtgc 2580

agcgcagtca tctgctgccg cgtcaccccc aagcagaagg ccatggtggt ggacctggtg 2640

aagaggtaca agaaagccat cacgctggcc atcggagatg gggccaatga cgtgaacatg 2700

atcaaaactg cccacattgg cgttggaata agtggacaag aaggaatgca agctgtcatg 2760

tcgagtgact attcctttgc tcagttccga tatctgcaga ggctactgct ggtgcatggc 2820

cgatggtctt acataaggat gtgcaagttc ctacgatact tcttttacaa aaactttgcc 2880

tttactttgg ttcatttctg gtactccttc ttcaatggct actctgcgca gactgcatac 2940

gaggattggt tcatcaccct ctacaacgtg ctgtacacca gcctgcccgt gctcctcatg 3000

gggctgctcg accaggatgt gagtgacaaa ctgagcctcc gattccctgg gttatacata 3060

gtgggacaaa gagacttact attcaactat aagagattct ttgtaagctt gttgcatggg 3120

gtcctaacat cgatgatcct cttcttcata cctcttggag cttatctgca aaccgtaggg 3180

caggatggag aggcaccttc cgactaccag tcttttgccg tcaccattgc ctctgctctt 3240

gtaataacag tcaatttcca gattggcttg gatacttctt attggacttt tgtgaatgct 3300

ttttcaattt ttggaagcat tgcactttat tttggcatca tgtttgactt tcatagtgct 3360

ggaatacatg ttctctttcc atctgcattt caatttacag gcacagcttc aaacgctctg 3420

agacagccat acatttggtt aactatcatc ctggctgttg ctgtgtgctt actacccgtc 3480

gttgccattc gattcctgtc aatgaccatc tggccatcag aaagtgataa gatccagaag 3540

catcgcaagc ggttgaaggc ggaggagcag tggcagcgac ggcagcaggt gttccgccgg 3600

ggcgtgtcaa cgcggcgctc ggcctacgcc ttctcgcacc agcggggcta cgcggacctc 3660

atctcctccg ggcgcagcat ccgcaagaag cgctcgccgc ttgatgccat cgtggcggat 3720

ggcaccgcgg agtacaggcg caccggggac agctga 3756

<210> 3

<211> 1321

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 3

Met Ser Asp Ser Val Ile Leu Arg Ser Ile Lys Lys Phe Gly Glu Glu

1 5 10 15

Asn Asp Gly Phe Glu Ser Asp Lys Ser Tyr Asn Asn Asp Lys Lys Ser

20 25 30

Arg Leu Gln Asp Glu Lys Lys Gly Asp Gly Val Arg Val Gly Phe Phe

35 40 45

Gln Leu Phe Arg Phe Ser Ser Ser Thr Asp Ile Trp Leu Met Phe Val

50 55 60

Gly Ser Leu Cys Ala Phe Leu His Gly Ile Ala Gln Pro Gly Val Leu

65 70 75 80

Leu Ile Phe Gly Thr Met Thr Asp Val Phe Ile Asp Tyr Asp Val Glu

85 90 95

Leu Gln Glu Leu Gln Ile Pro Gly Lys Ala Cys Val Asn Asn Thr Ile

100 105 110

Val Trp Thr Asn Ser Ser Leu Asn Gln Asn Met Thr Asn Gly Thr Arg

115 120 125

Cys Gly Leu Leu Asn Ile Glu Ser Glu Met Ile Lys Phe Ala Ser Tyr

130 135 140

Tyr Ala Gly Ile Ala Val Ala Val Leu Ile Thr Gly Tyr Ile Gln Ile

145 150 155 160

Cys Phe Trp Val Ile Ala Ala Ala Arg Gln Ile Gln Lys Met Arg Lys

165 170 175

Phe Tyr Phe Arg Arg Ile Met Arg Met Glu Ile Gly Trp Phe Asp Cys

180 185 190

Asn Ser Val Gly Glu Leu Asn Thr Arg Phe Ser Asp Asp Ile Asn Lys

195 200 205

Ile Asn Asp Ala Ile Ala Asp Gln Met Ala Leu Phe Ile Gln Arg Met

210 215 220

Thr Ser Thr Ile Cys Gly Phe Leu Leu Gly Phe Phe Arg Gly Trp Lys

225 230 235 240

Leu Thr Leu Val Ile Ile Ser Val Ser Pro Leu Ile Gly Ile Gly Ala

245 250 255

Ala Thr Ile Gly Leu Ser Val Ser Lys Phe Thr Asp Tyr Glu Leu Lys

260 265 270

Ala Tyr Ala Lys Ala Gly Val Val Ala Asp Glu Val Ile Ser Ser Met

275 280 285

Arg Thr Val Ala Ala Phe Gly Gly Glu Lys Arg Glu Val Glu Arg Tyr

290 295 300

Glu Lys Asn Leu Val Phe Ala Gln Arg Trp Gly Ile Arg Lys Gly Ile

305 310 315 320

Val Met Gly Phe Phe Thr Gly Phe Val Trp Cys Leu Ile Phe Leu Cys

325 330 335

Tyr Ala Leu Ala Phe Trp Tyr Gly Ser Thr Leu Val Leu Asp Glu Gly

340 345 350

Glu Tyr Thr Pro Gly Thr Leu Val Gln Ile Phe Leu Ser Val Ile Val

355 360 365

Gly Ala Leu Asn Leu Gly Asn Ala Ser Pro Cys Leu Glu Ala Phe Ala

370 375 380

Thr Gly Arg Ala Ala Ala Thr Ser Ile Phe Glu Thr Ile Asp Arg Lys

385 390 395 400

Pro Ile Ile Asp Cys Met Ser Glu Asp Gly Tyr Lys Leu Asp Arg Ile

405 410 415

Lys Gly Glu Ile Glu Phe His Asn Val Thr Phe His Tyr Pro Ser Arg

420 425 430

Pro Glu Val Lys Ile Leu Asn Asp Leu Asn Met Val Ile Lys Pro Gly

435 440 445

Glu Met Thr Ala Leu Val Gly Pro Ser Gly Ala Gly Lys Ser Thr Ala

450 455 460

Leu Gln Leu Ile Gln Arg Phe Tyr Asp Pro Cys Glu Gly Met Val Thr

465 470 475 480

Val Asp Gly His Asp Ile Arg Ser Leu Asn Ile Gln Trp Leu Arg Asp

485 490 495

Gln Ile Gly Ile Val Glu Gln Glu Pro Val Leu Phe Ser Thr Thr Ile

500 505 510

Ala Glu Asn Ile Arg Tyr Gly Arg Glu Asp Ala Thr Met Glu Asp Ile

515 520 525

Val Gln Ala Ala Lys Glu Ala Asn Ala Tyr Asn Phe Ile Met Asp Leu

530 535 540

Pro Gln Gln Phe Asp Thr Leu Val Gly Glu Gly Gly Gly Gln Met Ser

545 550 555 560

Gly Gly Gln Lys Gln Arg Val Ala Ile Ala Arg Ala Leu Ile Arg Asn

565 570 575

Pro Lys Ile Leu Leu Leu Asp Met Ala Thr Ser Ala Leu Asp Asn Glu

580 585 590

Ser Glu Ala Met Val Gln Glu Val Leu Ser Lys Ile Gln His Gly His

595 600 605

Thr Ile Ile Ser Val Ala His Arg Leu Ser Thr Val Arg Ala Ala Asp

610 615 620

Thr Ile Ile Gly Phe Glu His Gly Thr Ala Val Glu Arg Gly Thr His

625 630 635 640

Glu Glu Leu Leu Glu Arg Lys Gly Val Tyr Phe Thr Leu Val Thr Leu

645 650 655

Gln Ser Gln Gly Asn Gln Ala Leu Asn Glu Glu Asp Ile Lys Asp Ala

660 665 670

Thr Glu Asp Asp Met Leu Ala Arg Thr Phe Ser Arg Gly Ser Tyr Gln

675 680 685

Asp Ser Leu Arg Ala Ser Ile Arg Gln Arg Ser Lys Ser Gln Leu Ser

690 695 700

Tyr Leu Val His Glu Pro Pro Leu Ala Val Val Asp His Lys Ser Thr

705 710 715 720

Tyr Glu Glu Asp Arg Lys Asp Lys Asp Ile Pro Val Gln Glu Glu Val

725 730 735

Glu Pro Ala Pro Val Arg Arg Ile Leu Lys Phe Ser Ala Pro Glu Trp

740 745 750

Pro Tyr Met Leu Val Gly Ser Val Gly Ala Ala Val Asn Gly Thr Val

755 760 765

Thr Pro Leu Tyr Ala Phe Leu Phe Ser Gln Ile Leu Gly Thr Phe Ser

770 775 780

Ile Pro Asp Lys Glu Glu Gln Arg Ser Gln Ile Asn Gly Val Cys Leu

785 790 795 800

Leu Phe Val Ala Met Gly Cys Val Ser Leu Phe Thr Gln Phe Leu Gln

805 810 815

Gly Tyr Ala Phe Ala Lys Ser Gly Glu Leu Leu Thr Lys Arg Leu Arg

820 825 830

Lys Phe Gly Phe Arg Ala Met Leu Gly Gln Asp Ile Ala Trp Phe Asp

835 840 845

Asp Leu Arg Asn Ser Pro Gly Ala Leu Thr Thr Arg Leu Ala Thr Asp

850 855 860

Ala Ser Gln Val Gln Gly Ala Ala Gly Ser Gln Ile Gly Met Ile Val

865 870 875 880

Asn Ser Phe Thr Asn Val Thr Val Ala Met Ile Ile Ala Phe Ser Phe

885 890 895

Ser Trp Lys Leu Ser Leu Val Ile Leu Cys Phe Phe Pro Phe Leu Ala

900 905 910

Leu Ser Gly Ala Thr Gln Thr Arg Met Leu Thr Gly Phe Ala Ser Arg

915 920 925

Asp Lys Gln Ala Leu Glu Met Val Gly Gln Ile Thr Asn Glu Ala Leu

930 935 940

Ser Asn Ile Arg Thr Val Ala Gly Ile Gly Lys Glu Arg Arg Phe Ile

945 950 955 960

Glu Ala Leu Glu Thr Glu Leu Glu Lys Pro Phe Lys Thr Ala Ile Gln

965 970 975

Lys Ala Asn Ile Tyr Gly Phe Cys Phe Ala Phe Ala Gln Cys Ile Met

980 985 990

Phe Ile Ala Asn Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Gly Gly Tyr Leu Ile Ser

995 1000 1005

Asn Glu Gly Leu His Phe Ser Tyr Val Phe Arg Val Ile Ser Ala

1010 1015 1020

Val Val Leu Ser Ala Thr Ala Leu Gly Arg Ala Phe Ser Tyr Thr

1025 1030 1035

Pro Ser Tyr Ala Lys Ala Lys Ile Ser Ala Ala Arg Phe Phe Gln

1040 1045 1050

Leu Leu Asp Arg Gln Pro Pro Ile Ser Val Tyr Asn Thr Ala Gly

1055 1060 1065

Glu Lys Trp Asp Asn Phe Gln Gly Lys Ile Asp Phe Val Asp Cys

1070 1075 1080

Lys Phe Thr Tyr Pro Ser Arg Pro Asp Ser Gln Val Leu Asn Gly

1085 1090 1095

Leu Ser Val Ser Ile Ser Pro Gly Gln Thr Leu Ala Phe Val Gly

1100 1105 1110

Ser Ser Gly Cys Gly Lys Ser Thr Ser Ile Gln Leu Leu Glu Arg

1115 1120 1125

Phe Tyr Asp Pro Asp Gln Gly Lys Val Met Ile Asp Gly His Asp

1130 1135 1140

Ser Lys Lys Val Asn Val Gln Phe Leu Arg Ser Asn Ile Gly Ile

1145 1150 1155

Val Ser Gln Glu Pro Val Leu Phe Ala Cys Ser Ile Met Asp Asn

1160 1165 1170

Ile Lys Tyr Gly Asp Asn Thr Lys Glu Ile Pro Met Glu Arg Val

1175 1180 1185

Ile Ala Ala Ala Lys Gln Ala Gln Leu His Asp Phe Val Met Ser

1190 1195 1200

Leu Pro Glu Lys Tyr Glu Thr Asn Val Gly Ser Gln Gly Ser Gln

1205 1210 1215

Leu Ser Arg Gly Glu Lys Gln Arg Ile Ala Ile Ala Arg Ala Ile

1220 1225 1230

Val Arg Asp Pro Lys Ile Leu Leu Leu Asp Glu Ala Thr Ser Ala

1235 1240 1245

Leu Asp Thr Glu Ser Glu Lys Thr Val Gln Val Ala Leu Asp Lys

1250 1255 1260

Ala Arg Glu Gly Arg Thr Cys Ile Val Ile Ala His Arg Leu Ser

1265 1270 1275

Thr Ile Gln Asn Ala Asp Ile Ile Ala Val Met Ala Gln Gly Val

1280 1285 1290

Val Ile Glu Lys Gly Thr His Glu Glu Leu Met Ala Gln Lys Gly

1295 1300 1305

Ala Tyr Tyr Lys Leu Val Thr Thr Gly Ser Pro Ile Ser

1310 1315 1320

<210> 4

<211> 3966

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 4

atgtctgact cagtaattct tcgaagtata aagaaatttg gagaggagaa tgatggtttt 60

gagtcagata aatcatataa taatgataag aaatcaaggt tacaagatga gaagaaaggt 120

gatggcgtta gagttggctt ctttcaattg tttcggtttt cttcatcaac tgacatttgg 180

ctgatgtttg tgggaagttt gtgtgcattt ctccatggaa tagcccagcc aggcgtgcta 240

ctcatttttg gcacaatgac agatgttttt attgactacg acgttgagtt acaagaactc 300

cagattccag gaaaagcatg tgtgaataac accattgtat ggactaacag ttccctcaac 360

cagaacatga caaatggaac acgttgtggg ttgctgaaca tcgagagcga aatgatcaaa 420

tttgccagtt actatgctgg aattgctgtc gcagtactta tcacaggata tattcaaata 480

tgcttttggg tcattgccgc agctcgtcag atacagaaaa tgagaaaatt ttactttagg 540

agaataatga gaatggaaat agggtggttt gactgcaatt cagtggggga gctgaataca 600

agattctctg atgatattaa taaaatcaat gatgccatag ctgaccaaat ggcccttttc 660

attcagcgca tgacctcgac catctgtggt ttcctgttgg gatttttcag gggttggaaa 720

ctgaccttgg ttattatttc tgtcagccct ctcattggga ttggagcagc caccattggt 780

ctgagtgtgt ccaagtttac ggactatgag ctgaaggcct atgccaaagc aggggtggtg 840

gctgatgaag tcatttcatc aatgagaaca gtggctgctt ttggtggtga gaaaagagag 900

gttgaaaggt atgagaaaaa tcttgtgttc gcccagcgtt ggggaattag aaaaggaata 960

gtgatgggat tctttactgg attcgtgtgg tgtctcatct ttttgtgtta tgcactggcc 1020

ttctggtacg gctccacact tgtcctggat gaaggagaat atacaccagg aacccttgtc 1080

cagattttcc tcagtgtcat agtaggagct ttaaatcttg gcaatgcctc tccttgtttg 1140

gaagcctttg caactggacg tgcagcagcc accagcattt ttgagacaat agacaggaaa 1200

cccatcattg actgcatgtc agaagatggt tacaagttgg atcgaatcaa gggtgaaatt 1260

gaattccata atgtgacctt ccattatcct tccagaccag aggtgaagat tctaaatgac 1320

ctcaacatgg tcattaaacc aggggaaatg acagctctgg taggacccag tggagctgga 1380

aaaagtacag cactgcaact cattcagcga ttctatgacc cctgtgaagg aatggtgacc 1440

gtggatggcc atgacattcg ctctcttaac attcagtggc ttagagatca gattgggata 1500

gtggagcaag agccagttct gttctctacc accattgcag aaaatattcg ctatggcaga 1560

gaagatgcaa caatggaaga catagtccaa gctgccaagg aggccaatgc ctacaacttc 1620

atcatggacc tgccacagca atttgacacc cttgttggag aaggaggagg ccagatgagt 1680

ggtggccaga aacaaagggt agctatcgcc agagccctca tccgaaatcc caagattctg 1740

cttttggaca tggccacctc agctctggac aatgagagtg aagccatggt gcaagaagtg 1800

ctgagtaaga ttcagcatgg gcacacaatc atttcagttg ctcatcgctt gtctacggtc 1860

agagctgcag ataccatcat tggttttgaa catggcactg cagtggaaag agggacccat 1920

gaagaattac tggaaaggaa aggtgtttac ttcactctag tgactttgca aagccaggga 1980

aatcaagctc ttaatgaaga ggacataaag gatgcaactg aagatgacat gcttgcgagg 2040

acctttagca gagggagcta ccaggatagt ttaagggctt ccatccggca acgctccaag 2100

tctcagcttt cttacctggt gcacgaacct ccattagctg ttgtagatca taagtctacc 2160

tatgaagaag atagaaagga caaggacatt cctgtgcagg aagaagttga acctgcccca 2220

gttaggagga ttctgaaatt cagtgctcca gaatggccct acatgctggt agggtctgtg 2280

ggtgcagctg tgaacgggac agtcacaccc ttgtatgcct ttttattcag ccagattctt 2340

gggacttttt caattcctga taaagaggaa caaaggtcac agatcaatgg tgtgtgccta 2400

ctttttgtag caatgggctg tgtatctctt ttcacccaat ttctacaggg atatgccttt 2460

gctaaatctg gggagctcct aacaaaaagg ctacgtaaat ttggtttcag ggcaatgctg 2520

gggcaagata ttgcctggtt tgatgacctc agaaatagcc ctggagcatt gacaacaaga 2580

cttgctacag atgcttccca agttcaaggg gctgccggct ctcagatcgg gatgatagtc 2640

aattccttca ctaacgtcac tgtggccatg atcattgcct tctcctttag ctggaagctg 2700

agcctggtca tcttgtgctt cttccccttc ttggctttat caggagccac acagaccagg 2760

atgttgacag gatttgcctc tcgagataag caggccctgg agatggtggg acagattaca 2820

aatgaagccc tcagtaacat ccgcactgtt gctggaattg gaaaggagag gcggttcatt 2880

gaagcacttg agactgagct ggagaagccc ttcaagacag ccattcagaa agccaatatt 2940

tacggattct gctttgcctt tgcccagtgc atcatgttta ttgcgaattc tgcttcctac 3000

agatatggag gttacttaat ctccaatgag gggctccatt tcagctatgt gttcagggtg 3060

atctctgcag ttgtactgag tgcaacagct cttggaagag ccttctctta caccccaagt 3120

tatgcaaaag ctaaaatatc agctgcacgc ttttttcaac tgctggaccg acaaccccca 3180

atcagtgtat acaatactgc aggtgaaaaa tgggacaact tccaggggaa gattgatttt 3240

gttgattgta aatttacata tccttctcga cctgactcgc aagttctgaa tggtctctca 3300

gtgtcgatta gtccagggca gacactggcg tttgttggga gcagtggatg tggcaaaagc 3360

actagcattc agctgttgga acgtttctat gatcctgatc aagggaaggt gatgatagat 3420

ggtcatgaca gcaaaaaagt aaatgtccag ttcctccgct caaacattgg aattgtttcc 3480

caggaaccag tgttgtttgc ctgtagcata atggacaata tcaagtatgg agacaacacc 3540

aaagaaattc ccatggaaag agtcatagca gctgcaaaac aggctcagct gcatgatttt 3600

gtcatgtcac tcccagagaa atatgaaact aacgttgggt cccaggggtc tcaactctct 3660

agaggggaga aacaacgcat tgctattgct cgggccattg tacgagatcc taaaatcttg 3720

ctactagatg aagccacttc tgccttagac acagaaagtg aaaagacggt gcaggttgct 3780

ctagacaaag ccagagaggg tcggacctgc attgtcattg cccatcgctt gtccaccatc 3840

cagaacgcgg atatcattgc tgtcatggca cagggggtgg tgattgaaaa ggggacccat 3900

gaagaactga tggcccaaaa aggagcctac tacaaactag tcaccactgg atcccccatc 3960

agttga 3966

<---

Группа изобретений относится к области органической химии и включает соединение формулы I, 2-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидробензо-1,2,5-тиадиазепин-8-ил)окси)уксусную кислоту, их фармацевтически приемлемые соли, фармацевтическую композицию и применение соединений. В формуле (I) R¹ и R² каждый независимо представляет собой C_1-4алкил; R³ представляет собой водород; R⁴ выбран из группы, состоящей из C_3-6циклоалкилокси и C_3-6циклоалкилтио. Технический результат: производные 1,2,5-тиадиазепина, обладающие активностью ингибирования апикального натрий-зависимого переносчика желчных кислот (ASBT) и/или переносчика желчных кислот печени (LBAT). 3 н. и 8 з.п. ф-лы, 8 табл., 3 пр. (I)

1. Соединение, выбранное из группы, состоящей из соединения формулы (I)

(I),

где

R¹ и R² каждый независимо представляет собой C_1-4алкил;

R³ представляет собой водород; и

R⁴ выбран из группы, состоящей из C_3-6циклоалкилокси и C_3-6циклоалкилтио; и

2-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидробензо-1,2,5-тиадиазепин-8-ил)окси)уксусной кислоты;

или его фармацевтически приемлемая соль.

2. Соединение по п. 1, где R¹ представляет собой н-бутил.

3. Соединение по п. 1 или 2, где R² представляет собой н-бутил.

4. Соединение по п. 1 или 2, где R² представляет собой этил.

5. Соединение по п. 1, выбранное из группы, состоящей из:

(S)-2-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)уксусной кислоты; и

(R)-2-((3-бутил-3-этил-7-(метилтио)-1,1-диоксидо-5-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1,2,5-бензотиадиазепин-8-ил)окси)уксусной кислоты;

или его фармацевтически приемлемая соль.

6. Фармацевтическая композиция, обладающая активностью ингибирования апикального натрий-зависимого переносчика желчных кислот (ASBT) и/или переносчика желчных кислот в печени (LBAT), содержащая терапевтически эффективное количество соединения по любому из пп. 1-5 и один или более фармацевтически приемлемых эксципиентов.

7. Применение соединения формулы (I)

(I),

где

R¹ и R² каждый независимо представляет собой C_1-4алкил;

R³ представляет собой водород; и

R⁴ выбран из группы, состоящей из C_1-4алкокси, C_3-6циклоалкилокси, C_1-4алкилтио и C_3-6циклоалкилтио;

или его фармацевтически приемлемой соли в качестве лекарственного средства, обладающего активностью ингибирования апикального натрий-зависимого переносчика желчных кислот (ASBT) и/или переносчика желчных кислот в печени (LBAT).

8. Применение по п. 7, где лекарственное средство предназначено для лечения или предупреждения сердечно-сосудистого заболевания или нарушения метаболизма жирных кислот и утилизации глюкозы, такого как гиперхолестеринемия; нарушения обмена жирных кислот; сахарный диабет 1 и 2 типа; осложнения диабета, предпочтительно катаракта, микро- и макрососудистые заболевания, ретинопатия, невропатия, нефропатия и замедленное заживление ран, ишемия тканей, диабетическая стопа, артериосклероз, инфаркт миокарда, острый коронарный синдром, нестабильная стенокардия, стабильная стенокардия, инсульт, окклюзионная болезнь периферических артерий, кардиомиопатия, сердечная недостаточность, нарушения сердечного ритма и рестеноз сосудов; заболевания, связанные с диабетом, такие как инсулинорезистентность (нарушение гомеостаза глюкозы), гипергликемия, гиперинсулинемия, повышенные уровни жирных кислот или глицерина в крови, ожирение, дислипидемия, гиперлипидемия, предпочтительно гипертриглицеридемия, метаболический синдром (синдром X), атеросклероз и гипертензия; и для повышения уровня липопротеинов высокой плотности.

9. Применение по п. 7, где лекарственное средство предназначено для лечения или предупреждения заболевания или расстройства желудочно-кишечного тракта, такого как запор, предпочтительно хронический запор, функциональный запор, хронический идиопатический запор (CIC), периодический/спорадический запор, запор на фоне сахарного диабета, запор на фоне инсульта, запор на фоне хронического заболевания почек, запор на фоне рассеянного склероза, запор на фоне болезни Паркинсона, запор на фоне системного склероза, запор, вызванный лекарствами, синдром раздраженного кишечника с запором (IBS-C), синдром раздраженного кишечника смешанный (IBS-M), детский функциональный запор и запор, вызванный опиоидами; болезнь Крона; первичная мальабсорбция желчных кислот; синдром раздраженного кишечника (IBS); воспалительное заболевание кишечника (IBD); воспаление подвздошной кишки; и рефлюксная болезнь и ее осложнения, такие как пищевод Барретта, желчный рефлюксный эзофагит и желчный рефлюксный гастрит.

10. Применение по п. 7, где лекарственное средство предназначено для лечения или предупреждения заболевания или нарушения печени, такого как наследственное нарушение метаболизма печени; врожденные нарушения синтеза желчных кислот; врожденные аномалии желчных протоков; атрезия желчевыводящих путей; атрезия желчевыводящих путей после проведения операции по Касаи; посттрансплантационная атрезия желчевыводящих путей; неонатальный гепатит; неонатальный холестаз; наследственные формы холестаза; церебросухожильный ксантоматоз; вторичный дефект синтеза желчных кислот (ВА); синдром Цельвегера; заболевание печени, связанное с муковисцидозом; дефицит альфа1-антитрипсина; синдром Алажиля (ALGS); синдром Байлера; первичный дефект синтеза желчных кислот (ВА); прогрессирующий семейный внутрипеченочный холестаз (PFIC), предпочтительно PFIC-1, PFIC-2, PFIC-3 и неспецифический PFIC, PFIC после отведения желчи и посттрансплантационный PFIC; доброкачественный рецидивирующий внутрипеченочный холестаз (BRIC), предпочтительно BRIC1, BRIC2 и неспецифический BRIC, BRIC после трансплантации желчных путей и BRIC после трансплантации печени; аутоиммунный гепатит; первичный билиарный цирроз (PBC); фиброз печени; неалкогольная жировая болезнь печени (NAFLD); неалкогольный стеатогепатит (NASH); портальная гипертензия; холестаз; холестаз при синдроме Дауна; лекарственный холестаз; внутрипеченочный холестаз беременности (желтуха при беременности); внутрипеченочный холестаз; внепеченочный холестаз; холестаз, связанный с парентеральным питанием (PNAC); холестаз, связанный с низким содержанием фосфолипидов; синдром холестаза с лимфедемами 1 (LCS1); первичный склерозирующий холангит (PSC); холангит, связанный с иммуноглобулином G4; первичный билиарный холангит; желчекаменная болезнь (желчные камни); желчный литиаз; холедохолитиаз; желчнокаменный панкреатит; болезнь Кароли; злокачественное новообразование желчных протоков; злокачественное новообразование, вызывающее непроходимость желчного дерева; стриктуры желчных путей; холангиопатия при СПИД; ишемическая холангиопатия; кожный зуд из-за холестаза или желтухи; панкреатит; хроническое аутоиммунное заболевание печени, ведущее к прогрессирующему холестазу; стеатоз печени; алкогольный гепатит; острый жировой гепатоз; ожирение печени при беременности; лекарственный гепатит; нарушения при перенасыщении железом; врожденный дефект синтеза желчных кислот 1 типа (BAS дефект 1 типа); лекарственное поражение печени (DILI); фиброз печени; врожденный фиброз печени; цирроз печени; гистиоцитоз клеток Лангерганса (LCH); неонатальный ихтиоз, склерозирующий холангит (NISCH); эритропоэтическая протопорфирия (EPP); идиопатическая дуктопения в зрелом возрасте (IAD); идиопатический неонатальный гепатит (INH); несиндромальная недостаточность междольковых желчных протоков (NS PILBD); цирроз у детей североамериканских индейцев (NAIC); саркоидоз печени; амилоидоз; некротический энтероколит; токсичность сывороточной желчной кислоты, предпочтительно нарушения сердечного ритма, более предпочтительно фибрилляция предсердий, при аномальном профиле сывороточных желчных кислот, кардиомиопатия, связанная с циррозом печени («холекардия»), и истощение скелетных мышц, связанное с холестатической болезнью печени; поликистоз печени; вирусный гепатит, предпочтительно гепатит A, гепатит B, гепатит C, гепатит D и гепатит E; гепатоцеллюлярная карцинома (гепатома); холангиокарцинома; рак желудочно-кишечного тракта, связанный с желчными кислотами; и холестаз, вызванный опухолями и новообразованиями печени, желчевыводящих путей и поджелудочной железы; или в усилении терапии кортикостероидами при заболевании печени.

11. Применение по п. 7, где лекарственное средство предназначено для лечения или предупреждения синдромов гиперабсорбции, предпочтительно абеталипопротеинемии, семейной гипобеталипопротеинемии (FHBL), болезни задержки хиломикронов (CRD) и ситостеролемии; гипервитаминоза и остеопетроза; гипертензии; клубочковой гиперфильтрации; поликистоза почек (PKD), предпочтительно аутосомно-доминантного поликистоза почек (ADPKD) и аутосомно-рецессивного поликистоза почек (ARPKD); и кожного зуда при почечной недостаточности; или в защите от повреждения почек, связанного с заболеванием печени или метаболическим заболеванием.