Способ моделирования сочетанной патологии легочного фиброза и экспериментального рака легкого Российский патент 2025 года по МПК A61B17/00 A61K31/7036 A61K35/13 A61P43/00 G09B23/28 

Изобретение относится к области экспериментальной биологии и медицины и касается моделирования легочного фиброза, осложненного раком легкого, может быть использовано для поиска предикторов развития рака легкого на фоне легочного фиброза и разработки лекарственных средств для профилактики и лечения легочных патологий.

Все чаще признается, что идиопатический легочной фиброз увеличивает риск развития рака легкого (чаще всего немелкоклеточного рака легкого) на 7-20% [1, 2]. Доказано, что как при идиопатическом легочном фиброзе, так и при раке легкого существуют общие факторы риска (курение, сопутствующая эмфизема), которые могут быть перекрестно связаны у отдельного пациента [2]. Предполагают даже существование общих молекулярных путей, определяющих развитие идиопатического легочного фиброза и рака легкого [2]. Таким образом, связь между сопутствующими заболеваниями, идиопатическим легочным фиброзом и раком легкого подтверждается эпидемиологическими и общими патологическими механизмами. Поэтому создание новой экспериментальной модели, охватывающей идиопатический легочной фиброз и рак легкого необходимо.

Для разработки эффективных технологий лечения пациентов с легочным фиброзом, осложненным раком легкого, нацеленных на регенерацию травмированных тканей и обладающих противоопухолевой активностью, необходимо использовать адекватную экспериментальную модель, сочетающую в себе симптоматику легочного фиброза и рака легкого.

Задачей, решаемой данным изобретением, является создание модели легочного фиброза, осложненного раком легкого, в основе, которой лежат патоморфологические изменения в ткани легких, взаимно влияющие друг на друга.

Поставленная задача решается тем, что моделируют сочетанную патологию: легочной фиброз и рак легкого, характеризующуюся тем, что мышам-самцам линии С57ВL/6 однократно интратрахеально вводят блеомицин в дозе 80 мкг/мышь в 30 мкл физиологического раствора, а затем на 14 сутки после введения блеомицина подкожной трансплантацией суспензии опухолевых клеток карциномы легкого Льюис индуцируют рак легкого, определяемый на 28 сутки после введения блеомицина по гистологическим характеристикам и развитию опухолевых узлов в легочной ткани.

Новым в предлагаемом способе является экспериментальное сочетание легочного фиброза, индуцированного блеомицином, и рака легкого, индуцированного клетками карциномы легкого Льюис.

Предлагаемый способ моделирования легочного фиброза и рака легкого наиболее полно раскрывает клиническую картину нарушений, свойственных легочному фиброзу, осложненному раком легкого.

Согласно справочнику Машковского М.Д. и данным Всемирной организации здравоохранения к лекарственным средствам, к вызывающим лекарственно индуцированные интерстициальные поражения лёгких можно отнести алкилирующие цитостатики (хлорбутин, циклофосфан, метотрексат, миелосан, меркаптопурин, азатиоприн, 5-фторурацил и др.), противоопухолевые антибиотики (блеомицин, митомицин), противоопухолевые препараты других классов (прокарбазин, нитрозометилмочевина). При этом блеомицин вызывает нарушения в лёгочной ткани в 10-40% случаев [3]. Поэтому блеомицин широко используется в эксперименте для индуцирования легочного фиброза [4]. Данная модель легочного фиброза является стандартной и хорошо охарактеризованной моделью для исследования механизмов легочного фиброза и для тестирования лекарственных препаратов с антифибротической активностью [4, 5]. Показано, что однократное интратрахеальное введение блеомицина лабораторным мышам первоначально приводит к развитию воспалительной фазы заболевания, которая характеризуется увеличением уровня провоспалительных цитокинов в легких, активной инфильтрацией воспалительными клетками интерстиция альвеол и альвеолярных ходов, лейкоцитозом в периферической крови [4]. Воспаление длится около 7-10 суток и затем переходит в фибротическую фазу (после 10-14 суток), которая наиболее точно имитирует проявление идиопатического легочного фиброза у человека.

На сегодняшний день раковые заболевания являются одной из главных проблем всемирного здравоохранения. Рак легкого стал вторым по диагностированию и уровню смертности злокачественным новообразованием в мире [6]. ВОЗ выделяет 2 основных гистологических типа рака лёгкого: немелкоклеточный рак лёгкого и мелкоклеточный рак лёгкого. Немелкоклеточный рак лёгкого встречается в 80-85% случаев от всех случаев рака лёгкого [7]. Доказано, что легочный фиброз чаще всего приводит к увеличению заболеваемости и смертности от немелкоклеточного рака легкого [2].

Известно, что развитие и прогрессирование рака легкого во многом обусловлено присутствием небольших фракций стволовых опухолевых клеток, идентификация которых может помочь в ранней диагностике раковых заболеваний [8]. Стволовые опухолевые клетки экспрессируют на клеточной поверхности тканеспецифические маркеры, однако, ни один из них не является специфическим для опухолевых клеток. На настоящий момент EGFR VIII (эпидермальный фактор роста) и CD117 являются наиболее хорошо задокументированными маркерами стволовых опухолевых клеток при раке легкого [9, 10]. Другие клеточные популяции могут также претерпевать изменения в контексте легочного фиброза, и эти изменения могут способствовать развитию и/или прогрессированию, как фиброза, так и рака легкого. Для определения роли этих изменений и для поиска биомаркеров, которые прогнозируют прогрессирование легочного фиброза и риск развития рака легкого, требуются дополнительные исследования в эксперименте и клинике.

Лекарственных препаратов, успешно используемых в лечении хронических заболеваний, таких как легочный фиброз, осложненный раком легкого нет. Во многом, сложившаяся ситуация связана с отсутствием адекватных экспериментальных моделей индуцированного легочного фиброза, осложненного раком легкого, которые позволили бы произвести отбор препаратов, эффективных в условиях обеих патологий.

Способ может быть использован для поиска предикторов развития рака легкого при легочном фиброзе и эффективных лекарственных средств, способных влиять на легочной фиброз и рак легкого.

Предлагаемый способ был изучен в экспериментах на 8-10 недельных мышах линии C57BL/6 в количестве 36 голов. Животные первой категории, инбредные мыши, получены из питомника отдела экспериментального биомедицинского моделирования НИИФиРМ им. Е.Д. Гольдберга Томского НИМЦ РАН. Содержание животных и дизайн экспериментов были одобрены биоэтическим комитетом НИИФиРМ им. Е.Д. Гольдберга Томского НИМЦ РАН. С целью исключения сезонных колебаний изучаемых показателей все эксперименты проведены в осенне-зимний период. Забор материала осуществляют в утренние часы. Мышей умерщвляют передозировкой СО₂. Количество животных в каждой группе не менее 12 особей.

Изобретение поясняется фигурами 1 и 2:

на фиг. 1 изображено легкое мыши при окрашивании ткани легкого гематоксилином и эозином: мыши интактного контроля (А), мыши с карциномой лёгкого Льюис (Б), мыши с легочным фиброзом и карциномой лёгкого Льюис (В). ув. ×100. Препараты изготовлены на 28-е сутки эксперимента;

на фиг. 2 изображена гистологическая картина лёгкого мыши при окрашивании ткани лёгкого по Ван-Гизону на соединительную ткань: А - интактной; Б - мыши с карциномой лёгкого Льюис, В - мыши с легочным фиброзом и карциномой лёгкого Льюис. Препараты изготовлены на 28-е сутки эксперимента.

Способ осуществляют следующим образом.

Токсическое повреждение альвеолярного эпителия легких вызывают интратрахеальным введением цитостатика блеомицина (лиофилизат для приготовления раствора для инъекций, 15 мг, производитель Ниппон Кайяку Ко Лтд, Япония) однократно в дозе 80 мкг/мышь в 30 мкл физиологического раствора [11]. При приготовлении аптечного препарата блеомицина для исследования во флакон с лиофилизатом добавляют 5 мл 0,9% стерильного раствора хлорида натрия, далее разводят раствор в стерильных флаконах до требуемой для использования концентрации. Для анестезии во время операции используют изофлуран ингаляционно с использованием аппарата для ингаляционного наркоза Ugo Basiele, модель 21050 (Италия). Операционное поле дезинфицируют 70% раствором этанола и освобождают от волосяного покрова. По средней линии шеи рассекают кожу, подкожную клетчатку и собственную фасцию шеи. Методом тупого раздвижения тканей раздвигают мышцы на вентральной стороне трахеи. По ходу тока воздуха на вдохе производят инъекцию блеомицина с помощью шприца Гамильтона. После ушивания раны, операционное поле обрабатывают антисептиком. Животные после оперативного вмешательства в течение 30 мин находятся под наблюдением при температуре окружающей среды 28-30°С. Введение блеомицина принимают за 0 день эксперимента.

Модель спонтанного метастазирования солидной опухоли карциномы легкого Льюис используют для моделирования рака легкого на 14-е сутки после введения блеомицина [12]. Мышам подкожно в правую подмышечную область вводят клетки карциномы лёгкого Льюис (5 × 10⁶ клеток) суспендированные в 10 мкл среды RPMI. Проводят исследование размера опухоли, морфологическое и гистологическое исследование лёгких. Рост опухоли контролируют раз в три дня [13]: в течение 14-и суток после введения клеток карциномы лёгкого Льюис. У животных оценивают линейные размеры опухолевых узлов в ортогональных плоскостях и рассчитывают их объем в эллиптическом приближении [13]. Опухоль измеряют с помощью штангенциркуля и объем опухолей рассчитывают по формуле: V = π/6 × длина × ширина × высота.

На 28 сутки животных выводят из опыта и далее проводят подсчет числа крупных и мелких легочных метастазов. О выраженности метастатического процесса судят по ряду показателей:

1) частоте метастазирования опухоли - проценту животных с метастазами по отношению к общему количеству животных в группе;

2) степени поражения лёгких метастазами LLC:

- 0 ст. - метастазы отсутствуют;

- 1 ст. - меньше 10 с диаметром, не превышающим 1 мм;

- 2 ст. - от 10 до 30 метастатических узлов;

- 3 ст. - более 30 метастазов различных размеров;

- 4 ст. - менее 100 штук без сливного роста;

- 5 ст. - более 100 штук, наличие сплошных опухолевых узлов;

3) среднему числу метастазов на одно животное в каждой группе;

4) средней массе лёгких, пораженных метастазами с карциномой легкого Льюис.

Для морфологических исследований левое легкое фиксируют в 10% растворе нейтрального формалина, проводят через спирты восходящих концентраций до ксилола и заливают в парафин по стандартной методике. Депарафинизированные срезы толщиной 5 мкм окрашивают гематоксилин-эозином, а толщиной 7 мкм - по методу Ван-Гизона [14]. Микропрепараты от каждого экспериментального животного исследуются под световым микроскопом Axio Lab.A1 («Carl Zeiss», Germany) на 100- и 400-кратном увеличениях. Оцениваются нарушения гистоархитектоники ткани легких, наличие отека и воспалительной инфильтрации, венозного застоя, утолщения стенок сосудов и бронхов, количество капилляров [15].

Для каждого экспериментального животного делается микрофотографии по всей поверхности среза легочной ткани при увеличении 4× с использованием многорежимного ридера Cytation5 (BioTek Instruments, Inc., Winooski, VT, США). Полученные изображения обрабатываются с помощью программного обеспечения Gen5 (Bad Friedrichshall, Германия). Содержание коллагеновых волокон в лёгких определяется с использованием специальной функции для подсчета площади объекта на изображении. Бронхо-васкулярные тяжи изымаются из анализируемых областей.

Расчет относительной площади фиброзированной ткани производится по формуле 1:

(1)

где ∑ а - сумма пикселей, занимаемых фиброзированной тканью, на поверхности среза легочной ткани, S - количество пикселей, соответствующее полной площади, b - сумма пикселей, занимаемых пустой частью предметного стекла при получении снимка среза ткани легкого [16].

Оценку перибронхиальных и периваскулярных инфильтратов проводят по шкале воспаления и количественному подсчету перибронхиальных и периваскулярных мононуклеарных клеток [16]. Препараты кодируют, перибронхиальное воспаление оценивают слепым методом с использованием воспроизводимой системы подсчета баллов. Каждому срезу ткани присваивается значение от 0 до 3. За значение показателя 0 принимается отсутствие воспаления, значение 1 - редкие воспалительные клетки в поле зрения, значение 2 - когда большая часть бронхов или сосудов окружена тонким слоем (от одной до пяти клеток) воспалительных клеток, значение 3 - когда большая часть бронхов и кровеносных сосудов окружены толстым слоем (более пяти клеток) воспалительных клеток. Поскольку на одну мышь приходится пять случайно выбранных полей зрения легочной ткани, то показатели воспаления можно выразить как среднее значение для каждого животного и проводить сравнение между группами.

Для получения мононуклеаров легкие промываются стерильным фосфатно-солевым буфером (Сигма, США) через правый желудочек сердца и после удаления трахеи тщательно измельчается стерильными ножницами до получения однородной клеточной взвеси. Клеточная взвесь инкубируется в растворе 0,2% коллагеназы 2 типа (Сигма, США), разведенной стерильным фосфатно-солевым буфером при 37°С в течение 30 мин с периодическим перемешиванием. Для удаления стромы и крупных агрегатов клеточную взвесь фильтруют через нейлоновый фильтр диаметром 70 мкм («BD Falcon», США). После центрифугирования в течение 10 мин при 1500 об/мин надосадочную жидкость сливают. Полученный аспират переносят в пробирку с равным объемом фосфатно-солевого буфера с 2% инактивированной эмбриональной телячьей сывороткой и далее наслаивают на градиент плотности Histopaque-1077 в соотношении суспензия-градиент 2:1 и центрифугируют в течение 25 минут при 1500 об/мин. Клетки интерфазного кольца собирают и разбавляют 5-кратным объёмом фосфатно-солевого буфера с 2% инактивированной эмбриональной телячьей сывороткой и дважды отмывают центрифугированием при 1500 об/мин в течение 7-10 мин. Количество мононуклеаров подсчитывают в камере Горяева [17].

Для определения содержания эндотелиальных клеток (CD45^-CD309⁺), стволовых опухолевых клеток (CD45^-CD117⁺ и EFG⁺), общей популяции пан-лейкоцитарных клеток CD45⁺ на мононуклеарах легких изучают экспрессию поверхностных маркеров CD45 PerCP, CD117 FITC, CD309 APC, EFG (F4/80) Alexa Fluor® 647 с использованием проточного цитофлюориметра FACS Canto II с программным обеспечением FACS Diva («BD Biosciences», США).

Статистическую обработку полученных результатов проводят методами вариационной статистики с использованием пакета статистической обработки данных SPSS 12,0. Вычисляют среднее арифметическое (М), ошибку среднего арифметического (m), значение вероятности (P). Различие двух сравниваемых величин считают достоверным в том случае, если вероятность их тождества была меньше 5% (P<0,05). Используя выборочные коэффициенты асимметрии и эксцесса, оценивают степень приближения закона распределения исследуемого признака к нормальному. В случаях нормального распределения признаков для статистической оценки применяют параметрический t-критерий Стьюдента. При больших отклонениях распределений признака от нормального вида для независимых выборок используют непараматрический критерий U критерий Манна-Уитни. Для выявления достоверности различий качественных показателей используют критерий углового преобразования Фишера.

Пример 1

Проведённые эксперименты позволяют показать, что последовательное использование блеомицина и затем введение клеток карциномы легкого Льюис отражает патоморфологические изменения в легочной ткани, присущие сочетанной патологии легочному фиброзу и раку легкого.

Гистологическое исследование на 28-е сутки после введения блеомицина и 14-е сутки моделирования спонтанного метастазирования карциномы легкого Льюис показывает, что у животных формируются опухолевые узлы небольшого размера, которые на 28 сутки обнаруживаются по периферии легкого, под париетальной плеврой (рисунок 1). Метастазы представлены атипичными клетками разного размера, преобладают опухолевые клетки с гиперхромными ядрами. Среди неоплазированных клеток наблюдается клеточный и ядерный полиморфизм, анизохромия, анизоцитоз, встречаются гигантские многоядерные клетки. Ядра атипичных клеток содержат несколько ядрышек, встречаются отдельные клетки в состоянии митоза.

В лёгких мышей, группы с сочетанной патологией, отмечается значительное ускорение распространения метастазирования по сравнению c группой патологического контроля (карцинома легкого Льюис) (фиг. 1). В паренхиме легких обнаруживаются множественные периваскулярные и перибронхиальные скопления атипичных клеток. Клетки карциномы легкого Льюис стимулируют более выраженную воспалительную реакцию в легочной ткани мышей группы с сочетанной патологией по сравнению с группой мышей патологического контроля (карцинома легкого Льюис). Отмечается увеличение количества альвеолярных макрофагов, которые заполняют просвет альвеол и снижают воздушность легких. Интенсивная воспалительная инфильтрация способствует выбросу цитокинов и хемокинов макрофагами, в результате чего в очаги воспаления привлекаются фибробласты, которые в свою очередь трансформируются в миофибробласты, секретирующие компоненты межклеточного матрикса и способствующие значительному прогрессированию пневмофиброза, и, в конечном итоге, образованию сотового легкого (фиг. 1).

Важным критерием подтверждения развития опухолевого процесса являются рост опухолевых узлов и формирование метастазов. Введение клеток карциномы легкого Льюис закономерно вызывает рост опухолевых узлов в легочной ткани, развитие метастазов (табл. 1). Формирование сочетанной патологии приводит к достоверному увеличению массы опухолевых узлов и площади метастазов относительно группы патологического контроля (карцинома легкого Льюис).

Таблица 1 - Показатели роста опухоли у мышей-самцов с карциномой легкого Льюис на 28-е сутки эксперимента (М±m)

Группы исследования Масса опухолевого узла, мг Количество метастазов Площадь метастазов, мм³ Частота метастазирования,% Интактный контроль 0 0 0 0 Патологический контроль (карцинома легкого Льюис) 35,25±13,85* 2,40±0,9* 1,1±0,3* 80* Сочетанная патология (легочной фиброз + карцинома легкого Льюис) 173,43±17,25*▼ 1,71±0,6* 3,36±0,94*▼ 62,5*

Примечание: различия достоверны по сравнению: * - с интактным контролем (U критерий Манна-Уитни); ▼ p<0.05 по сравнению с животными из группы патологического контроля (U критерий Манна-Уитни).

Одним из наиболее характерных гистологических признаков острого или хронического воспаления в органе является накопление воспалительных клеток. Воспаление дыхательных путей, наблюдаемое при заболеваниях легких, характеризуется накоплением воспалительных клеток, не только перибронхиально, но и в периваскулярных пространствах дыхательных путей [18]. На 28 сутки после интратрахеального введения блеомицина и 14-е сутки после введения клеток карциномы легкого Льюис в лёгких мышей отмечается накопление воспалительных клеток в перибронхиальных и периваскулярных областях легочной ткани у животных групп, как патологического контроля, так и группы с сочетанной патологией (табл. 2).

Таблица 2 - Показатели перибронхиального и периваскулярного воспаления при моделировании сочетанной патологии легочного фиброза и введении клеток карциномы легкого Льюис (М±m)

Группы исследования Периваскулярное воспаление Перибронхиальное воспаление Интактный контроль 0,96±0,17 1,00±0,19 Патологический контроль (карцинома легкого Льюис) 2,04±0,24* 2,08±0,26* Сочетанная патология (легочной фиброз + карцинома легкого Льюис) 1,92±0,32* 2,28±0,35*

Примечание: различия достоверны по сравнению: * - с интактным контролем ((U критерий Манна-Уитни); ▼ p<0.05 по сравнению с животными из группы патологического контроля (U критерий Манна-Уитни).

Одним из основных критериев развития легочного фиброза в эксперименте является оценка роста площади соединительной ткани в легком мышей [16]. Моделирование легочного фиброза в сочетании с карциномой легкого Льюис вызывает достоверное увеличение площади соединительной ткани в легком у мышей группы с сочетанной патологией (табл. 3, фиг. 2). К 28 суткам после введения блеомицина у животных количество соединительной ткани в легких составляло 23,08%, в то время как в группе интактных животных 3,8% (табл. 3).

Таблица 3 - Площадь соединительной ткани в легких мышей в условиях совместного моделирования легочного фиброза и карциномы легкого Льюис, 28 сутки (М±m)

Группы исследования Площадь соединительной ткани на снимке, пиксель Площадь соединительной ткани на снимке, % Интактный контроль 63432,00±10082,79 3,80±0,69 Патологический контроль (карцинома легкого Льюис) 210240,40±56169,93 13,91±0,64* Сочетанная патология (легочной фиброз + карцинома легкого) Льюис) 456304,60±52105,98*▼ 23,08±1,92*▼

Примечание: различия достоверны по сравнению: * - с интактным контролем ((U критерий Манна-Уитни); ▼ p<0.05 по сравнению с животными из группы патологического контроля (U критерий Манна-Уитни).

При исследовании количества капилляров в легочной ткани мышей самцов линии C57BL/6 на 28 сутки эксперимента при сочетанной патологии наблюдается достоверное снижение количества капилляров в легких мышей по сравнению с интактным контролем (табл. 4), в группе животных с карциномой легкого Льюис наблюдается только тенденция к снижению данного показателя.

Таблица 4 - Количество капилляров в легочной ткани мышей линии С57BL/6 на 28 сутки эксперимента

Группа Количество капилляров Интактный контроль 35,55±5,25 Патологический контроль (карцинома легкого Льюис) 26,18±1,35 Сочетанная патология
(легочной фиброз + карцинома легкого Льюис) 21,90±2,80*

Примечание: различия достоверны по сравнению: * - с интактным контролем ((U критерий Манна-Уитни); ▼ p<0.05 по сравнению с животными из группы патологического контроля (U критерий Манна-Уитни).

Моделирование легочного фиброза и карциномы легкого Льюис вызывает в легких мышей значительное увеличение количества эндотелиальных клеток (CD45^-CD309⁺), пан-лейкоцитарных клеток (CD45⁺), стволовых опухолевых клеток (CD45^-CD117⁺ и EGF⁺) по сравнению с группой интактного контроля и группой патологического контроля (животные с карциномой легкого Льюис) (табл. 5).

Таблица 5 - Содержание эндотелиальных, пан-лейкоцитарных и стволовых опухолевых клеток (% от всех окрашенных мононуклеаров) в ткани легких мышей при моделировании сочетанной патологии легочного фиброза и карциномы легкого Льюис (M±m)

Группы исследования CD45^-CD309⁺ CD45^-CD117⁺ CD45⁺ EGF⁺ Интактный контроль 0,17±0,05 0,98±0,08 4,77±0,8 1,53±0,1 Патологический контроль (карцинома легкого Льюис) 0,27±0,03 1,68±0,1* 7,95±0,53* 2,10±0,05* Сочетанная патология (легочной фиброз + карцинома легкого Льюис) 0,41±0,05*▼ 2,68±0,06*▼ 10,74±0,93*▼ 2,13±0,02*

Примечание: различия достоверны по сравнению: * - с интактным контролем ((U критерий Манна-Уитни); ▼ p<0.05 по сравнению с животными из группы патологического контроля (U критерий Манна-Уитни).

Таким образом, однократное интратрахеальное введение блеомицина в дозе 80 мкг/мышь в 30 мкл физиологического раствора мышам-самцам линии С57ВL/6 и последующая подкожная трансплантация на 14 сутки после блеомицина суспензии опухолевых клеток карциномы легкого Льюис индуцирует к 28 суткам эксперимента развитие опухолевого процесса (воспаление, метастазирование, увеличение опухолевых клеток) и патоморфологических изменений в легких (деструктивные изменения легочной ткани), которые взаимно усиливают друг друга.

Литература

1. Kato E., Takayanagi N., Takaku Y., Kagiyama N., Kanauchi T., Ishiguro T., Sugita Y. Incidence and predictive factors of lung cancer in patients with idiopathic pulmonary fibrosis. //ERJ Open Res. - 2018. - 4. - P. 00111-2016. doi: 10.1183/23120541.00111-2016.

2. Ballester B., Milara J., Cortijo J. Idiopathic Pulmonary Fibrosis and Lung Cancer: Mechanisms and Molecular Targets. //International journal of molecular sciences. - 2019. - 20(3). - P. 593. doi:10.3390/ijms20030593.

3. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 16-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: Новая волна: Издатель Умеренков, 2020. - с. 1004.

4. Kolb P., Upagupta C., Vierhout M., Ayaub E., Bellaye P.S., Gauldie J., Shimbori C., Inman M., Ask K., Kolb M.R.J. The importance of interventional timing in the bleomycin model of pulmonary fibrosis // Eur Respir J. - 2020. - Vol. 55(6). - P.1901105.

5. Moeller A., Ask K., Warburton D., Gauldie J., Kolb M. The bleomycin animal model: a useful tool to investigate treatment options for idiopathic pulmonary fibrosis? // Int J Biochem Cell Biol. - 2008. - Vol. 40(3). - P. 362-82.

6. Лактионов К. К., Казаков А. М., Гордиев М. Г., Кононец П. В., Ахмедов Б. Б., Маевская Ю. Н. Адъювантная таргетная терапия при немелкоклеточном раке легкого // Современная онкология. - 2020. - №2.

7. Сибилева О.Ю., Ромашкина Н.В. Эпидемиология рака легкого и роль молекулярно-генетического исследования в тераностике заболевания (краткий обзор литературы) / О. Ю. Сибилева, Н. В. Ромашкина //ВНМТ. - 2023. - №2.

8. Maiuthed A., Chantarawong W., Chanvorachote P. Lung Cancer Stem Cells and Cancer Stem Cell-targeting Natural Compounds. //Anticancer Research. - 2018. - 38(7). - P.3797-3809.

9. Walcher L., Kistenmacher A.K., Suo H., Kitte R., Dluczek S., Strauß A., Blaudszun A.R., Yevsa T., Fricke S., Kossatz-Boehlert U. Cancer Stem Cells-Origins and Biomarkers: Perspectives for Targeted Personalized Therapies // Front. Immunol. - 2020. - Vol. 11. - P. 1280. doi: 10.3389/fimmu.2020.01280.

10. Liu, X., Wang, P., Zhang, C., Ma, Z. Epidermal growth factor receptor (EGFR): A rising star in the era of precision medicine of lung cancer. //Oncotarget. - 2017. - 8(30). - P. 50209-50220. doi:10.18632/oncotarget.16854.

11. Ortiz-Muñoz G., Looney M.R. Non-invasive Intratracheal Instillation in Mice. //Bio Protoc. - 2015. - 5(12). - e1504.

12. Stankevicius V., Kuodyte K., Schveigert D., Bulotiene D., Paulauskas T., Daniunaite K., Suziedelis K. Gene and miRNA expression profiles of mouse Lewis lung carcinoma LLC1 cells following single or fractionated dose irradiation // Oncol. Lett. - 2017. - 13 (6). - P. 4190-4200. doi: 10.3892/ol.2017.5877.

13. Tomayko M.M., Reynolds C.P. Determination of subcutaneous tumor size in athymic (nude) mice // Cancer Chemother. Pharmacol. - 1989. - 24 (3). - P. 148-154. doi: 10.1007/BF00300234.

14. Cardiff R.D., Miller C.H., Munn R.J. Manual hematoxylin and eosin staining of mouse tissue sections // Cold Spring Harb Protoc. - 2014. - 6. - P. 655-658.

15. Плотников М.Б., Алиев О.И., Анищенко А.М., Сидехменова А.В., Шаманаев А.Ю., Фомина Т.И. Параметры капиллярной сети коры головного мозга крыс линии SHR в периоды развития артериальной гипертензии и стабильно высокого артериального давления // Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова. - 2016. - Т. 102, №5. - С. 558-566.

16. Pakhomova, A., Pershina, O.; Bochkov, P.; Ermakova, N.; Pan,E.; Sandrikina, L.; Dagil, Y.; Kogai, L.; Grimm,W.-D.; Zhukova, M.; Avdeev, S. Anti-Inflammatory and Antifibrotic Potential of Longidaze in Bleomycin-Induced Pulmonary Fibrosis. //Life. - 2023. - 13. - 1932. doi:10.3390/life13091932.

17. Skurikhin E.G., Pershina O.V., Reztsova A.M., Ermakova N.N., Khmelevskaya E.S., Krupin V.A., Stepanova I.E., Artamonov A.V., Bekarev A.A., Madonov P.G., Dygai A.M. Modulation of bleomycin-induced lung fibrosis by pegylated hyaluronidase and dopamine receptor antagonist in mice //PLoS One. - 2015. - 10(4). - e0125065. doi: 10.1371/journal.pone.0125065.

18. Singh B., Shinagawa K., Taube C., Gelfand E. W., Pabst R. Strain-specific differences in perivascular inflammation in lungs in two murine models of allergic airway inflammation // Clinical and experimental immunology. - 2005. - Vol.141(2). - P.223-229.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к онкологии. Мышам-самцам линии С57ВL/6 однократно интратрахеально вводят блеомицин в дозе 80 мкг/мышь в 30 мкл физиологического раствора. На 14 сутки после введения блеомицина проводят подкожную трансплантацию суспензии опухолевых клеток карциномы легкого Льюис. На 28 сутки после введения блеомицина по гистологическим характеристикам и развитию опухолевых узлов в легочной ткани определяют развитие сочетанной патологии. Способ позволяет сформировать модель сочетанной патологии легочного фиброза, осложненного раком легкого, в основе, которой лежат патоморфологические изменения в ткани легких, взаимно влияющие друг на друга, что в свою очередь позволяет разработать эффективные технологии лечения, нацеленные на регенерацию травмированных тканей и обладающие противоопухолевой активностью. 2 ил., 5 табл., 1 пр.

Способ моделирования сочетанной патологии: легочного фиброза и рака легкого, характеризующийся тем, что мышам-самцам линии С57ВL/6 однократно интратрахеально вводят блеомицин в дозе 80 мкг/мышь в 30 мкл физиологического раствора, далее на 14 сутки после введения блеомицина подкожной трансплантацией суспензии опухолевых клеток карциномы легкого Льюис индуцируют рак легкого, на 28 сутки после введения блеомицина по гистологическим характеристикам и развитию опухолевых узлов в легочной ткани определяют развитие сочетанной патологии.