Способ таргетной диагностики риска нарушения кровотока в сонных и позвоночных артериях у коморбидных больных с сосудистой патологией Российский патент 2025 года по МПК A61B8/06 A61B8/08 G01N33/49 G01N33/50 A61B5/26 A61B5/145 

Изобретение относится к области клинической медицины, а именно к диагностике, и может быть использовано для диагностики риска нарушения кровоснабжения головного мозга у коморбидных больных в амбулаторных и стационарных условиях.

Одним из ведущих факторов нарушения кровотока в артериях шеи является атеросклеротическое сужение сонных и позвоночных артерий, снижающее кровоснабжение головного мозга и являющееся важным патогенетическим механизмом цереброваскулярной патологии. Атеросклероз, являясь хроническим заболеванием артерий эластического типа, связан с нарушением обмена липидов и белков, отложением их в стенке сосудов, реактивным разрастанием соединительной ткани, последующим склерозом и кальцинозом, формированием бляшек и стенотических поражений сосудов. В зависимости от локализации и степени выраженности атеросклероза формируются определенные клиническо-морфологические проявления [Свистунов В.В., Макарова А.Е., Воронцова М.В. Атеросклероз, гипертоническая болезнь // ФГБОУ ВО ИГМУ Минздрава России. - Иркутск: ИГМУ. - 2018. - 70 с, Nezu T., Hosomi N., Aoki S., Matsumoto M. Carotid intima-media thickness for atherosclerosis // Journal of atherosclerosis and thrombosis. – 2016. – Vol. 23, N 1 – P. 31989].

Эндотелий сосудов играет важную роль в процессах регуляции сосудистого тонуса, ремоделирования сосудистой стенки, выполняет барьерную, секреторную, гемостатическую функцию, участвует в процессах воспаления.

К основным факторам, стимулирующим секреторную активность эндотелия, относятся изменение скорости кровотока, нейрогормоны (катехоламины, вазопрессин, ацетилхолин, брадикинин, аденозин, гистамин и др.), тромбоцитарные факторы (серотонин, аденозиндифосфат, тромбин) и гипоксия. К факторам риска повреждения эндотелия относятся гиперхолестеринемия, гипергомоцистеинемия, повышенный уровень цитокинов (интерлейкинов-1β и -8, фактора некроза опухоли альфа) [Латфуллин И. А. Атеросклероз (краткие сведения истории развития, причины, патогенез заболевания, факторы риска, принципы профилактики) // Казань: Изд-во Казан. ун-та. – 2015. – 144 с]. Выделение биологически активных веществ при повреждении эндотелия приводит к возникновению эндотелиальной дисфункции. Основную роль в этом процессе играют оксидативный стресс, синтез мощных вазоконстрикторов, а также цитокинов и фактора некроза опухоли, которые подавляют продукцию оксида азота (NО).

Оксидативный стресс определяется как нарушение баланса между избыточным образованием свободных радикалов и недостаточностью механизмов антиоксидантной защиты. Происходит деструкция клеточных мембран вследствие процессов перекисного окисления липидов, снижения антиоксидантной активности, а также фосфолипазного гидролиза. При повреждении эндотелия активируется продукция активных форм кислорода, обладающих вазоконстрикторным эффектом, обеспечивающая повышенный тонус гладкомышечных клеток. Возникает вазомоторная форма эндотелиальной дисфункции (ЭД), которая имеет значение в механизмах как системного повышения АД, так и локального ангиоспазма, что подчеркивает ее роль в патогенезе АГ и атеросклероза. Дислипидемия тесно связана с активацией механизмов перекисного окисления липидов, радикалообразования, и, следовательно, поражения сосудистого русла. Гиперхолестеринемия ведет к снижению продукции NO и уменьшению его вазодилатирующего действия. На поверхности ЛПНП в интиме сосудов представлен рецептор LOX-1, повышенный уровень которого у пациентов с гиперхолестеринемией и АГ сочетается с уменьшением NO-зависимой вазодилатации и, соответственно, прогрессированием АГ [Lu H., Daugherty A. Atherosclerosis: cell biology and lipoproteins // Current opinion in lipidology. – 2015. – Т. 26, N 2. – P. 152-153].

На современном этапе развития методов диагностики нарушения кровотока в сонных артериях одним из наиболее эффективных является оценка состояния стенок и кровотока сонных артерий с помощью ультразвукового дуплексного сканирования артерий, позволяющего выявлять нестабильные атеросклеротические бляшки [Нозадзе Д.Н., Бурмистенко О.С., Семенова А.Е., Сергиенко И.В., Балахонова Т.В., Власик Т.Н. Инструмпентальные и лабораторные методы в выявлении нестабильных атеросклеротических бляшек //Атеросклероз и дислипидемии. - 2013. - № 3 (12). - С. 4-10].

В процесс развития атеросклероза вовлечены многие сложные молекулярные и клеточные процессы, включая нарушение липидного обмени [Rafieian-Kopaei M. et al. Atherosclerosis: process, indicators, risk factors and new hopes // Int J Prev Med. – 2014. - N Aug;5(8). – P. 927-46; Sachdeva A., Cannon C.P., Deedwania P.C. et al. Lipid levels in patients hospitalized with coronary artery disease: an analysis of 136.905 hospitalizations in Get With The Guidelines // Am Heart J. – 2009. - N 157. – P. 111-7; Carmena R., Duriez P., Fruchart J.C. Atherogenic lipoprotein particles in atherosclerosis // Circulation. – 2004. - N 109. – P. 2-7; Berneis K.K., Krauss R.M. Metabolic origins and clinical significance of LDL heterogeneity // J Lipid Res. – 2002. - N 43. – P. 1363-79; Kwiterovich P.O. Clinical relevance of the biochemical, metabolic, and genetic factors that influence low-density lipoprotein heterogeneity // Am J Cardiol. – 2002. - N 90(8A). – P. 30i-47i; Krauss R.M. Lipoprotein subfractions and cardiovascular disease risk // Curr Opin Lipidol. – 2010. - N 21(4). – P. 305-311]. На ранней стадии атерогенеза дисфункция эндотелиальных клеток способствует экспрессии хемоаттрактантов или молекул адгезии, что вызывает адгезию циркулирующих моноцитов к эндотелиальным клеткам [Scioli M. G. et al. Oxidative stress and new pathogenetic mechanisms in endothelial dysfunction: potential diagnostic biomarkers and therapeutic targets // Journal of Clinical Medicine. – 2020. – Т. 9. – N 6. – P. 1995]. Объединенные моноциты мигрируют в интиму сосудов и дифференцируются в макрофаги. Макрофаги интимы поглощают избыток липидов, полученный из окисленных ЛПНП (oxLDL), которые возникают в результате окисления холестерина ЛПНП в плазме, и превращаются в пенистые клетки [Pertiwi K. R. et al. Extracellular traps derived from macrophages, mast cells, eosinophils and neutrophils are generated in a time‐dependent manner during atherothrombosis //The Journal of pathology. – 2019. – Т. 247. – №. 4. – С. 505-512]. Чрезмерное количество пенистых клеток приводит к очаговому накоплению эфиров холестерина, которое называется липидной полоской. В липидной полоске макрофаги и Т-лимфоциты секретируют провоспалительные цитокины, способствуя усилению миграции гладкомышечных клеток (ГМК) из среды в интиму [Herman A. B. et al. Regulation of stress granule formation by inflammation, vascular injury, and atherosclerosis //Arteriosclerosis, thrombosis, and vascular biology. – 2019. – Т. 39, N 10. – P. 2014-2027]. Мигрировавшие ГМК утолщают артериальную стенку, а липидная полоска трансформируется в стабильную атеросклеротическую бляшку. На поздней стадии атеросклероза ГМК в бляшках пролиферируют и секретируют белки внеклеточного матрикса, которые создают фиброзный колпачок, а апоптотическая или некротическая гибель клеток, содержащих липиды, приводит к возникновению некротического ядра. Некротическое ядро ​​содержит отложения сложного эфира холестерина и мертвые клетки или его остатки. Постоянное накопление пенистых клеток и Т-клеток в интиме вызывает хроническое воспаление, которое привлекает еще больше ГМК и воспалительных клеток в интиму. Во время этого процесса истончение фиброзной капсулы, кальцификация и повреждение стенки артерии кристаллами холестерина в некротическом ядре превращают стабильные бляшки в нестабильные фиброзные бляшки. Наконец, нестабильная бляшка с тонкой фиброзной крышкой и большим некротическим ядром начинает разрываться и приводит к образованию тромба, что создает угрозу окклюзии сосуда в дальнейшем [Chatterjee P. et al. Interaction between the apelinergic system and ACE2 in the cardiovascular system: therapeutic implications //Clinical Science. – 2020. – Т. 134, N 17. – P. 2319-2336].

Повышенный уровень в крови общего холестерина (ХС), в основном за счет ХС липопротеинов низкой плотности (ЛПНП) и триглицеридов (ТГ), наряду с низкой концентрацией ХС липопротеинов высокой плотности (ЛПВП) увеличивает риск развития атеросклероза и связанного с ним нарушения кровотока в сонных артериях [Krauss R.M. Lipoprotein subfractions and cardiovascular disease risk // Curr Opin Lipidol. – 2010. - N 21(4). – P. 305-11], в то же время липопротеины крови представляют собой гетерогенный спектр частиц, различающихся по плотности, размеру, электрическому заряду, химическому составу [Abdolmaleki F., Hayat S. M. G., Bianconi V. et al. Atherosclerosis and immunity: a perspective // Trends Cardiovasc Med. – 2019. - N Aug;29(6). – P. 363-371; Scioli M. G. et al. Oxidative stress and new pathogenetic mechanisms in endothelial dysfunction: potential diagnostic biomarkers and therapeutic targets // Journal of Clinical Medicine. – 2020. – Т. 9. – N 6. – P. 1995].

Критическими этапами атерогенеза являются поглощение окисленно модифицированных ЛПНП макрофагами интимы и превращение последних в пенистые клетки [Chatterjee P. et al. Interaction between the apelinergic system and ACE2 in the cardiovascular system: therapeutic implications //Clinical Science. – 2020. – Т. 134, N 17. – P. 2319-2336].

В патогенетических механизмах атеросклероза ключевая роль принадлежит нарушению обмена липидов, эндотелиальной дисфункции, воспалительным, иммунным патологическим процессам, окислительному стрессу, которые взаимосвязаны между собой. Как в условиях физиологической нормы, так и при развитии патологических процессов, в первую очередь – связанных с формированием редокс-дисбаланса, в том числе при атерогенезе, центральное место занимает гомеостазирующая регуляторная система антиоксидант-респонсивного элемента Keap1/Nrf2/ARE [Mimura J., Itoh K. Role of Nrf2 in the pathogenesis of atherosclerosis // Free Radical Biology and Medicine. – 2015. – N 88. – P. 221–232].

Роль Nrf2-опосредованной регуляции в развитии и прогрессировании атеросклероза неоднозначна: выявлены ряд как антиатерогенных (снижение окисления ЛПНП и их токсического действия, усиление синтеза антиоксидантных ферментов гемоксигеназы-1 и глутатионпероксидазы, повышение экспорта из клеток холестерина через транспортер АВСА1), так и проатерогенных (рост содержания ХС в крови, повышение экспрессии скэвинджер-рецепторов CD36 и миграции моноцитов в интиму, а также перевод макрофагов в проатерогенное состояние Mox) эффектов активации системы Keap1/Nrf2/ARE [Krauss R.M. Lipoprotein subfractions and cardiovascular disease risk // Curr Opin Lipidol. – 2010. - N 21(4). – P. 305-11]. На поздней стадии атеросклероза клетки гладких мышц сосудов (КГМС) мигрируют в интиму и секретируют белки внеклеточного матрикса для стабилизации бляшек. Хотя неизвестно, модулирует ли Nrf2 функцию КГМС во время атерогенеза, ряд исследований предполагает возможное антиатерогенное действие Nrf2 на КГМС. Окислительный стресс влияет на некоторые функции КГМС, такие как пролиферация, миграция и выработка воспалительных цитокинов [Tonelli C., Chio I. I. C., Tuveson D. A. Transcriptional regulation by Nrf2 // Antioxidants and Redox Signaling. - 2018. – V 29, N 17. - P. 1727–1745]. Показано, что индукция системы Keap1/Nrf2/ARE снижает окислительный стресс и ингибирует пролиферацию КГМС и экспрессию моноцитарного хемотаксического белка 1 (MCP-1), а снижение стационарной концентрации Nrf2 малыми интерферирующими РНК увеличивает индуцированную фактором роста тромбоцитов миграцию КГМС [Chen J.-S., Huang P.-H., Wang C.-H. et al. Nrf-2 mediated heme oxygenase-1 expression, an antioxidant-independent mechanism, contributes to anti-atherogenesis and vascular protective effects of ginkgo biloba extract // Atherosclerosis. – 2011. - Vol. 214, N. 2. - P. 301–309; Shen T., Li H.-Z., Li A.-L., Li Y.-R., Wang X.-N., Ren D.-M. Homoeriodictyol protects human endothelial cells against oxidative insults through activation of Nrf2 and inhibition of mitochondrial dysfunction // Vascular Pharmacology. – 2018. - Vol. 109. - P. 72–82]. Nrf2 – (Nuclear factor erythroid 2-related factor 2) представляет собой фактор транскрипции с антиоксидантными эффектами, тесно связанный с некоторыми сердечно-сосудистыми заболеваниями, включая атеросклероз [Cheng L., Zhang H., Wu F., Liu Z., Cheng Y., Wang C. Role of Nrf2 and its activators in cardiocerebral vascular disease // Oxidative Medicine and Cellular Longevity. – 2020. - Article ID 4683943. - 19 p]. Nrf2 регулирует биосинтез, утилизацию и регенерацию глутатиона, тиоредоксина и НАДФН, а также продукцию активных форм кислорода через митохондрии и НАДФН-оксидазу для поддержания клеточного окислительно-восстановительного гомеостаза [Tonelli C., Chio I. I. C., Tuveson D. A. Transcriptional regulation by Nrf2 // Antioxidants and Redox Signaling. - 2018. – V 29, N 17. - P. 1727–1745]. Nrf2 может снизить риск хронических заболеваний, ассоциированных с атеросклерозом, за счет корректирующего влияния на функцию эндотелия [Chen J.-S., Huang P.-H., Wang C.-H. et al. Nrf-2 mediated heme oxygenase-1 expression, an antioxidant-independent mechanism, contributes to anti-atherogenesis and vascular protective effects of ginkgo biloba extract // Atherosclerosis. – 2011. - Vol. 214, N. 2. - P. 301–309; Shen T., Li H.-Z., Li A.-L., Li Y.-R., Wang X.-N., Ren D.-M. Homoeriodictyol protects human endothelial cells against oxidative insults through activation of Nrf2 and inhibition of mitochondrial dysfunction // Vascular Pharmacology. – 2018. - Vol. 109. - P. 72–82; Rajendran P., Alzahrani A. M., Ahmed E. A., Veeraraghavan V. P. Kirenol inhibits B[a]P-induced oxidative stress and apoptosis in endothelial cells via modulation of the Nrf2 signaling pathway // Oxidative Medicine and Cellular Longevity. - 2021. - Article ID 5585303. - 13 p]. В наши дни активно изучаются механизмы и потенциальные мишени Nrf2, влияющие в том числе на дисфункцию эндотелиальных клеток и замедляющие атеросклероз, формируются идеи для разработки новых терапевтических методов для лечения сердечно-сосудистых и иных заболеваний.

В современной клинической практике возрастает встречаемость кардиоваскулярной патологии в условиях коморбидности, которая наиболее важна у больных с кардиоваскулярной патологией [Nikolaev Yu.A., Mitrifanov I.M., Polyakov V.Ya., Dolgova N.A. Arterial hypertension associated with somatic pathology in present-day practice of internal diseases // Health. – 2014. T. 6, № 1. – C. 94-98. Сочетанная патология является одной из актуальных проблем в современной клинической медицине. Она связана не только с увеличением количества больных с несколькими заболеваниями, но и сложностями организации диагностики и лечения, с тяжестью состояния этих пациентов, «маскированием» разных нозологий сходными синдромами, ухудшением прогноза и сложностями проведения профилактики осложнений [Поляков В.Я., Николаев Ю.А., Митрофанов И.М., Долгова Н.А., Щепанкевич Л.А., Севостьянова Е.В. Особенности встречаемости артериальной гипертензии, сочетанной с дорсопатией позвоночника, в современной терапевтической клинике // Успехи современного естествознания. – 2015. - № 4. – С. 54-58; Севостьянова Е.В., Николаев Ю.А., Митрофанов И.М., Поляков В.Я., Долгова Н.А. Роль факторов риска хронических неинфекционных заболеваний в развитии транснозологической полиморбидной патологии в современной терапевтической клинике // Клиническая медицина. - 2017. - Т. 95, N 8. - C. 735-741; Вахитова З.Р. Оценка сердечно-сосудистого риска при коморбидной патологии // Beau Bassin. 2017. – 46 с.]. Артериальная гипертензия (АГ) является ведущим фактором риска развития сердечно-сосудистых (инфаркт миокарда, ишемическая болезнь сердца, хроническая сердечная недостаточность), цереброваскулярных (ишемический или геморрагический инсульт, транзиторная ишемическая атака) и почечных (хроническая болезнь почек) заболеваний. Стойкое и длительное повышение артериального давления (АД) обусловлено изменением соотношения гемодинамических показателей: повышением общего периферического сосудистого сопротивления, увеличением сердечного выброса и увеличением объема циркулирующей крови [Клинические рекомендации «Артериальная гипертензия у взрослых». разработчик Российское кардиологическое общество. - 2020. – 136 с. https://scardio.ru/content/Guidelines/Clinic_rek_AG_2020.pdf]. АГ является многофакторным заболеванием. В патогенезе формирования и прогрессирования АГ участвуют многие факторы. Происходит активация симпатоадреналовой системы через альфа- и бета-адренорецепторы, активация ренин-ангиотензин-альдостероновой системы и повышение продукции минералокортикоидов. Играет роль также нарушение мембранного транспорта катионов (Nа⁺, Са²⁺, К⁺), увеличение реабсорбции натрия в почках, дисфункция эндотелия с преобладанием продукции вазоконстрикторных субстанций (тканевого ангиотензина-II, эндотелина) и снижением выработки депрессорных соединений (брадикинина, NО, простациклина). Оказывают влияние структурные изменения сосудистой стенки артерий мышечного и эластического типа, в том числе вследствие низкоинтенсивного неинфекционного воспаления, нарушение микроциркуляции, повышение жесткости крупных сосудов, что важно при диагностике патологии [Coll B. et al. The role of carotid ultrasound in assessing carotid atherosclerosis in individuals at low-to-intermediate cardiovascular risk //Revista Española de Cardiología (English Edition). – 2013. – Т. 66, N 12. – P. 929-934].

С целью повышения эффективности диагностики нарушения кровотока в брахеоцефальных артериях, обусловленного атеросклерозом, включая сонные артерии, актуальным признается разработка комплексных подходов с использованием дуплексного сканирования сонных артерий и биохимических диагностических методов [Поляков В.Я., Николаев Ю.А., Пегова С.В., Мациевская Т.Р., Обухов И.В. Особенности показателей ультразвукового дуплексного сканирования сосудов шеи у больных артериальной гипертензией с коморбидной патологией // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. – 2015. - № 12-1. - С. 88-90; Генкель В.В., Салашенко А.О., Алексеева О.А., Денисенко М.Н., Шапошник И.И. Показатели эндотелиальной скорости сдвига у больных с М

Известен способ диагностики церебральной ишемии при атеросклерозе брахиоцефальных артерий, т.е. риска нарушения кровотока в сонных, позвоночных и других артериях шеи, относящихся к брахиоцефальным, обусловленного атеросклерозом. Способ включает проведение однофотонной эмиссионной компьютерной томографии головного мозга с применением однократного введения в качестве радиофармпрепарата 199-таллия-диэтилдитиокарбамат, анализ полученных на основе перфузии головного мозга сцинтиграфических изображений, по результатам которого диагностируют церебральную ишемию при снижении накопления препарата головным мозгом более чем на 15% по сравнению с контралатеральной стороной [патент на изобретение РФ № 2132634, дата опубл.10.07.1999]. Недостатком данного способа является то, что при оценке нарушения кровотока (т.е. ишемии сосудов) в брахиоцефальных артериях, не оценивается степень выраженности ишемии, т.е. степень нарушения кровотока, не учитываются другие факторы, влияющие на нарушение кровотока, от которых зависит риск прогрессирования нарушения кровоснабжения мозга, включающие показатели липидного обмена, генетические факторы антиоксидантной защиты.

Известен способ прогнозирования риска развития субклинического атеросклероза сонных артерий у вахтовых рабочих в условиях Арктики, характеризующийся тем, что учитывают результаты суточного мониторинга артериального давления и показатели биохимического анализа крови, определяют значение функции F: F = -7,664 + 0,225хХол + 0,366xГлюк + 0,057хДАД24; где переменная «Хол» – уровень холестерина в крови в ммоль/л, «Глюк» – уровень глюкозы в крови в ммоль/л, «ДАД24» – среднесуточное диастолическое давление, по данным суточного мониторирования; рассчитывают риск развития субклинического атеросклероза сонных артерий (Р) по формуле: Р = 1/(1+е^(-F)), где е – математическая константа, равная 2,718; F – значение функции; при значении Р меньше или равно 0,606 определяют низкий риск развития субклинического атеросклероза сонных артерий; при значении Р больше 0,606 определяют высокий риск развития субклинического атеросклероза сонных артерий [патент на изобретение RU 2770269 C1 от 15.04.2022, опубликовано 15.04.2022 Бюл. № 11]. Недостатком известного способа является то, что он ограничен оценкой риска развития субклинического атеросклероза у относительно здоровых лиц трудоспособного возраста без коморбидной патологии, т.к. при его разработке исключены лица с ишемической болезнью сердца, ожирением, сахарным диабетом, перенесённым до начала исследования острым инфарктом миокарда, острым нарушением мозгового кровообращения, обострением хронических заболеваний.

Известен способ диагностики течения «асимптомного» каротидного атеросклероза, т.е. риска нарушения кровотока в сонных артериях, обусловленного субклиническим атеросклерозом, включающий иммуноферментное определение в плазме крови иммуноферментным методом уровня тканевого активатора плазминогена (t-PA), ингибитора активатора плазминогена (PAI-1), адипонектина, асимметричного диметиларгинина (ADMA) и биохимическим методом в сыворотке крови уровни нитрата, нитрита и оксида азота (NO), причем каждому биомаркеру присваивают 0 или 1 балл в зависимости от его снижения или повышения относительно нормы, а именно при значении уровней t-PA, адипонектина и оксида азота выше нормы этим биомаркерам присваивают 0 баллов, а при их снижении относительно нормы - 1 балл, при значении уровней PAI-1, ADMA, нитрата и нитрита выше нормы данным биомаркерам присваивают 1 балл, а при их снижении относительно нормы - 0 баллов, затем рассчитывают сумму баллов и при ее значении менее 4 баллов диагностируют благоприятное течение «асимптомного» каротидного атеросклероза, а при значении 4 и более – неблагоприятное. [патент на изобретение RU 2592237, опубл. 20.07.2016 Бюл. № 20]. Использованные биомаркеры связаны с разнообразными механизмами развития атеросклероза и тромбообразования, нарушающими кровоток в сонных артериях. Недостатком известного способа является то, что он разработан на группе лиц с предварительно подтвержденным стенозом одной из внутренних сонных артерий не менее 50%, у которых в анамнезе отсутствовали указания на перенесенное нарушение мозгового кровообращения (как ипси-, так и контралатерально по отношению к стенозированной артерии) любой этиологии (как ишемического, так и геморрагического генеза). Это существенно ограничивает круг пациентов, для которых применим указанный способ.

Известен способ диагностики нарушения кровотока в сонных артериях, обусловленного атеросклерозом, у коморбидных больных с артериальной гипертензией, сочетанной с доброкачественным пароксизмальным позиционным головокружением, включающий определение с помощью ультразвукового дуплексного сканирования наличия и степени стенозирования сонной артерии без уточнения её вида, и заключение о степени выраженности атеросклеротических изменений: при 30–50% стенозирования – как об умеренных; при более 50% стенозирования – как о выраженных [Поляков В.Я., Щепанкевич Л.А., Николаев Ю.А., Пегова С.В., Новикова Е.Г., Севостьянова Е.В. Диагностическая значимость структурно-функциональных изменений сонных и позвоночных артерий при артериальной гипертензии, сочетанной с доброкачественным пароксизмальным позиционным головокружением // Сибирский научный медицинский журнал. 2019. Т. 39. № 6. С. 84-91]. В рамках указанного исследования кроме стенозирования выявляли наличие гемодинамически значимого ускорения кровотока в зоне стеноза общих и внутренних сонных артерий слева и справа, позвоночных артерий слева и справа; наличие признаков нестабильности атеросклеротических бляшек (АСБ) общих сонных и внутренних сонных и позвоночных артерий. К гемодинамически значимым относили изменения кровотока в артерии при его градиенте более 30 % либо превышении пиковой систолической скорости кровотока более 100 см/с. Однако в результате исследований не внесено дополнений в вышеизложенный способ диагностики нарушения кровотока. Все дополнительно перечисленные показатели были связаны с сопутствующей артериальной гипертензией с наличием или отсутствием доброкачественного пароксизмального позиционного головокружения. Головокружение у таких больных в большей степени выражено при утолщении комплекса «интима – медиа», что отражает повышение жесткости артерий при появлении их атеросклеротического изменения и гемодинамически значимой извитости сонных и позвоночных артерий. Недостатком известного способа является то, что ограничение диагностики нарушений кровотока в шейных артериях исследованием стенозирования сонных артерий методом ультразвукового дуплексного сканирования приводит к противоречивым заключениям, как это видно при сравнении данного аналога с вышеуказанным по патенту на изобретение № 2592237. В первом случае при стенозе одной из внутренних сонных артерий не менее 50% возможно благоприятное течение «асимптомного» каротидного атеросклероза, т.е. не наблюдается значимых нарушений кровотока в сонной артерии; во втором случае 50% стенозирования сонной артерии является переходным от умеренного к выраженному нарушению кровотока, обусловленному атеросклерозом.

При изучении методом ультразвукового дуплексного сканирования кровотока в сонных и позвоночных артериях у коморбидных больных с артериальной гипертензией, атеросклерозом и дорсопатией установлена взаимосвязь между ультразвуковыми характеристиками кровотока экстракраниальных отделов сонных и позвоночных артерий с клинико-лабораторными показателями и уровнем экспрессии генов маркеров антиоксидантной защиты. Оценивали результаты дуплексного сканирования сосудов шеи с определением толщины комплекса интима-медиа (КИМ), скорости кровотока общих сонных артерий (ОСА), внутренних сонных артерий (ВСА), позвоночных артерий (ПА), степени стенозирования артерий. Определяли показатели общего холестерина (ОХС), холестерина липопротеинов низкой плотности (ХС-ЛПНП), липопротеинов высокой плотности (ХС-ЛПВП) и триглицеридов (ТГ) Определяли уровни экспрессии генов системы антиоксидантной защиты. Установлена прямая корреляционная связь между толщиной КИМ и коэффициентом атерогенности; между показателями ОХС и скоростью кровотока в ВСА; показателями скорости кровотока в ПА и концентрацией ТГ, ХС-ЛПНП. У больных с эхоскопическими признаками умеренного и выраженного атеросклеротического стенозирования СА выявлено снижение экспрессии генов редокс-респонсивного элемента антиоксидантной защиты NRF2: HMOX1 на 64%; NRF2 на 12%, GSTP1 на 51%. [Поляков В.Я., Гусев А.В., Николаев Ю.А., Севостьянова Е.В., Пегова С.В. Ультразвуковое дублексное сканирование артерий, экспрессия генов маркеров антиоксидантной защиты в диагностике церебрального кровотока у больных с коморбидной патологией // Кардиологический вестник. 2023. Т. 18. № 2-2. С. 136-137]. По результатам данного исследования не был предложен способ диагностики степени риска нарушения кровотока в сонных и позвоночных артериях у коморбидных больных с сосудистой патологией на основе дуплексного сканирования сосудов шеи с учетом удельного вклада показателей липидного обмена, экспрессии генов системы антиоксидантной защиты, т.к. выявление корреляционных связей между факторами, влияющими на нарушение кровотока, недостаточно для определения удельного веса каждого из них на риск развития нарушения кровотока в артериях шеи.

Наиболее близким аналогом является способ диагностики нарушения кровотока в сонных артериях, включающий определение стенозирования сонных артерий методом дублексного сканирования сосудов шеи у коморбидных больных; при выявлении степени стенозирования сонных артерий менее 30% делают заключение о незначительном нарушении кровотока, от 30 до 70% - об умеренном нарушении, при более 70% - о выраженном нарушении кровотока [Поляков В.Я., Ковригин И.И., Кожин П.М., Николаев Ю.А., Малов А.С., Севостьянова Е.В., Меньщикова Е.Б. Особенности взаимосвязи клинико-лабораторных, ультразвуковых признаков атеросклероза и выраженности антиоксидантной защиты у больных с коморбидной патологией // Терапия. 2021. Т.7. № 9 (51). С. 76-84]. В ходе указанного обследования пациентов с коморбидной патологией проводили дуплексное сканирование сосудов шеи с определением диаметра общих сонных артерий, внутренних сонных артерий, наружных сонных артерий, позвоночных артерий, толщины комплекса «интима-медиа», пиковой систолической скорости кровотока общих сонных, внутренних сонных, наружных сонных, позвоночных артерий, извитости артерий, определяли процент стеноза брахицефальных артерий, содержание ОХС, ХС-ЛПНП, ХС-ЛПВП и ТГ, уровень экспрессии генов Nrf2, NQO1, GSTP1, HMOX1. При оценке экспрессии указанных генов в качестве референсного использовали ген домашнего хозяйства GAPDH. Установили прямую корреляцию между показателями общего ХС и скоростью кровотока во внутренней сонной артерии (ВСА), прямую корреляционную связь между показателями скорости кровотока в позвоночных артериях и концентрациями ТГ и ЛПНП. У пациентов с верифицированным атеросклерозом брахиоцефальных артерий без уточнения вида стенозированных артерий выявили снижение экспрессии гена GSTP1 на 49% по сравнению с контролем, экспрессии гена NQO1 – на 51%, экспрессии гена NRF2 – на 44%, в то время как экспрессия гена HMOX1 не изменена. Показана обратная корреляция между экспрессией гена NQO1 и процентом стеноза в левой общей сонной артерии, прямая зависимость между уровнем мРНК гена NRF2 и концентрацией ЛПВП, обратная корреляция между экспрессией гена GSTP1 и коэффициентом атерогенности. Несмотря на полученные результаты исследования, указанный выше способ УЗИ-диагностики нарушений кровотока в сонных артериях не был дополнен маркерами, характеризующими липидный обмен и уровень экспрессии генов Nrf2, NQO1, GSTP1, HMOX1, т.к. выявленные корреляционные связи не позволили определить удельный вклад каждого из выявленных факторов в нарушение кровотока в сонных и позвоночных артериях.

Таким образом, недостатком наиболее близкого аналога, является неудовлетворительная точность диагностики риска нарушений кровотока в шейных артериях у больных с коморбидной патологией. Это обусловлено тем, что способ ограничен оценкой стенозирования сонных артерий методом дублексного сканирования, что, как показано в других аналогах, приводит к противоречивым заключениям.

Технологической проблемой является повышение точности диагностики риска нарушения кровотока в сонных и позвоночных артериях у коморбидных больных с сосудистой патологией.

Решение технической проблемы достигается тем, что дополнительно оценивают наличие и степень стенозирования или наличие гемодинамически значимого ускорения кровотока в зоне стеноза общих и внутренних сонных артерий слева и справа, позвоночных артерий слева и справа; выявляют наличие признаков нестабильности атеросклеротических бляшек (АСБ) общих сонных и внутренних сонных и позвоночных артерий; наличие извитости и ускорения кровотока в зоне извитости во внутренних сонных и позвоночных артериях слева и справа; определяют наличие дислипидемии по содержанию в сыворотке крови общего холестерина (ХС), холестерина липопротеинов низкой плотности (ХС ЛПНП) и высокой плотности (ХС-ЛПВП), триглицеридов; определяют уровень экспрессии генов антиоксидантной защиты, кодирующих транскрипционный фактор Nrf2 (NRF2), белки NAD(P)H системы хиноноксидоредуктаза 1 (NQO1), гемоксигеназа 1 (HMOX1), глутатион-S-трансфераза P1 (GSTP1); при степени стенозирования до 30% хотя бы одной из указанных сонных артерий слева, позвоночной артерии слева и/или хотя бы одной из указанных сонных артерий справа, позвоночных артерий справа присваивают по 2 балла, 31-70% - по 3 балла соответственно; при степени стенозирования более 70% либо наличии гемодимачески значимого ускорения кровотока в зоне стеноза хотя бы одной из указанных сонных артерий слева, позвоночной артерии слева и/или хотя бы одной из указанных сонных артерий справа, позвоночных артерий справа присваивают по 5 баллов; при отсутствии стенозирования по всем сонным и позвоночным артериям – 0 баллов; при наличии признаков нестабильности атеросклеротических бляшек хотя бы по одной из сонных или позвоночных артерий слева или справа присваивают 5 баллов, при их отсутствии по всем указанным артериям – 0 баллов; при отсутствии извитости внутренней сонной артерии справа или её наличии без ускорения кровотока в зоне извитости – 0 баллов; при наличии извитости внутренней сонной артерии справа и ускорении кровотока в зоне извитости до 100% включительно - 0,5 баллов; при наличии извитости сонной артерии справа и ускорении кровотока в зоне извитости более 100% - 2 балла; при отсутствии извитости внутренней сонной артерии слева или её наличии без ускорения кровотока в зоне извитости – 0 баллов; при наличии извитости внутренней сонной артерии слева и ускорении кровотока в зоне извитости до 100% включительно - 0,5 баллов; при наличии извитости внутренней сонной артерии слева и ускорении кровотока в зоне извитости более 100% - 3 балла; при наличии извитости позвоночной артерии слева и/или справа – без ускорения кровотока в зоне извитости – по 1 баллу по каждой из позвоночных артерий; при наличии извитости позвоночной артерии слева и/или справа с ускорением кровотока в зоне извитости до 100% включительно – по 2 балла по каждой из позвоночных артерий; при наличии извитости позвоночной артерии слева и/или справа с ускорением кровотока в зоне извитости более 100% – по 3 балла по каждой из позвоночных артерий; при наличии дислипидемии по одному из указанных показателей присваивают 1 балл, по двум показателям – 2 балла, по трем и более показателям – 5 баллов; при отсутствии признаков дислипидемии – 0 баллов; при снижении экспрессии по каждому из указанных генов присваивают по 2 балла, при его отсутствии – 0 баллов; определяют общую сумму баллов по всем показателям; при общей сумме баллов, равной 0, делают заключение об отсутствии риска снижения кровотока по сонным и позвоночным артериям; при общей сумме баллов от 1 до 9,5 при условии, что сумма баллов по стенозированию сонных артерий и признакам нестабильности АСБ равна менее 5, – о наличии риска незначительного снижения кровотока; при общей сумме баллов от 10 по 25 включительно при условии, что сумма баллов по стенозированию сонных и позвоночных артерий и признакам нестабильности АСБ равна менее 5, - о наличии риска умеренного снижения кровотока; при общей сумме баллов 25,5 – 42 или при сумме баллов по стенозированию сонных и позвоночных артерий и признакам нестабильности АСБ, равной 5 и более, - о наличии риска выраженного острого снижения кровотока. О нестабильности АСБ судят по наличию неровного внутреннего контура и/или десквамации внутреннего контура хотя бы одной из сонных или позвоночных артерий. Уровень экспрессии генов антиоксидантной защиты, кодирующих транскрипционный фактор Nrf2 (NRF2), белки NAD(P)H системы хиноноксидоредуктаза 1 (NQO1), гемоксигеназа 1 (HMOX1), глутатион-S-трансфераза P1 (GSTP1) определяют относительно экспрессии референсного гена глицеральальдегид-3-фосфатдегидрогеназы GAPDH.

Техническим результатом является расширение числа значимых факторов, влияющих на риск нарушения кровотока в шейных артериях у коморбидных больных с сосудистой патологией с учетом их удельного вклада в риск развития нарушения кровотока, что позволило повысить точность диагностики.

Раскрытие сущности изобретения

Способ диагностики риска нарушения кровотока в шейных артериях у коморбидных больных с сосудистой патологией включает определение методом ультразвукового дуплексного сканирования наличия и степени стенозирования или наличия гемодинамически значимого ускорения кровотока в зоне стеноза общих и внутренних сонных артерий слева и справа, позвоночных артерий слева и справа; выявление наличия признаков нестабильности атеросклеротических бляшек (АСБ) общих сонных и внутренних сонных и позвоночных артерий; наличие извитости и ускорения кровотока в зоне извитости во внутренних сонных и позвоночных артериях слева и справа. Дополнительно определяют наличие дислипидемии по содержанию в сыворотке крови общего холестерина (ОХС), холестерина липопротеинов низкой плотности (ХС-ЛПНП) и высокой плотности (ХС-ЛПВП), триглицеридов (ТГ). Определяют уровень экспрессии генов антиоксидантной защиты, кодирующих транскрипционный фактор Nrf2 (NRF2), белки NAD(P)H системы хиноноксидоредуктаза 1 (NQO1), гемоксигеназа 1 (HMOX1), глутатион-S-трансфераза P1 (GSTP1) относительно экспрессии референсного гена глицеральальдегид-3-фосфатдегидрогеназы GAPDH.

При степени стенозирования до 30% хотя бы одной из указанных сонных артерий слева, позвоночной артерии слева и/или хотя бы одной из указанных сонных артерий справа, позвоночных артерий справа присваивают по 2 балла, при степени стенозирования 31-70% - по 3 балла соответственно. При степени стенозирования более 70% либо наличии гемодимачески значимого ускорения кровотока в зоне стеноза хотя бы одной из указанных сонных артерий слева, позвоночной артерии слева и/или хотя бы одной из указанных сонных артерий справа, позвоночных артерий справа присваивают по 5 баллов. При отсутствии стенозирования по всем сонным и позвоночным артериям присваивают 0 баллов.

При наличии признаков нестабильности атеросклеротических бляшек хотя бы по одной из сонных или позвоночных артерий слева или справа присваивают 5 баллов, при их отсутствии по всем указанным артериям – 0 баллов.

При отсутствии извитости внутренней сонной артерии справа или её наличии без ускорения кровотока в зоне извитости – 0 баллов; при наличии извитости внутренней сонной артерии справа и ускорении кровотока в зоне извитости до 100% включительно - 0,5 баллов; при наличии извитости сонной артерии справа и ускорении кровотока в зоне извитости более 100% - 2 балла; при отсутствии извитости внутренней сонной артерии слева или её наличии без ускорения кровотока в зоне извитости – 0 баллов; при наличии извитости внутренней сонной артерии слева и ускорении кровотока в зоне извитости до 100% включительно - 0,5 баллов; при наличии извитости внутренней сонной артерии слева и ускорении кровотока в зоне извитости более 100% - 3 балла; при наличии извитости позвоночной артерии слева и/или справа – без ускорения кровотока в зоне извитости – по 1 баллу по каждой из позвоночных артерий; при наличии извитости позвоночной артерии слева и/или справа с ускорением кровотока в зоне извитости до 100% включительно – по 2 балла по каждой из позвоночных артерий; при наличии извитости позвоночной артерии слева и/или справа с ускорением кровотока в зоне извитости более 100% – по 3 балла по каждой из позвоночных артерий.

При наличии дислипидемии по одному из показателей липидного обмена - ОХС, ХС-ЛПНП, ХС-ЛПВП, ТГ - присваивают 1 балл, по двум показателям – 2 балла, по трем и более показателям – 5 баллов; при отсутствии признаков дислипидемии – 0 баллов.

При снижении экспрессии по каждому из генов NRF2, NQO1, HMOX1, GSTP1 относительно экспрессии референсного гена GAPDH. присваивают по 2 балла, при его отсутствии – 0 баллов.

Определяют общую сумму баллов по всем показателям.

При общей сумме баллов, равной 0, делают заключение об отсутствии риска снижения кровотока по сонным и позвоночным артериям.

При общей сумме баллов от 1 до 9,5 при условии, что сумма баллов по стенозированию сонных артерий и признакам нестабильности АСБ равна менее 5, делают заключение о наличии риска незначительного снижения кровотока.

При общей сумме баллов от 10 по 25 включительно при условии, что сумма баллов по стенозированию сонных и позвоночных артерий и признакам нестабильности АСБ равна менее 5, делают заключение о наличии риска умеренного снижения кровотока.

При общей сумме баллов 25,5 – 42 или при сумме баллов по стенозированию сонных и позвоночных артерий и признакам нестабильности АСБ, равной 5 и более, - о наличии риска выраженного острого снижения кровотока.

О нестабильности АСБ судят по наличию неровного внутреннего контура и/или десквамации внутреннего контура хотя бы одной из сонных или позвоночных артерий.

Уровень экспрессии генов антиоксидантной защиты, кодирующих транскрипционный фактор Nrf2 (NRF2), белки NAD(P)H системы хиноноксидоредуктаза 1 (NQO1), гемоксигеназа 1 (HMOX1), глутатион-S-трансфераза P1 (GSTP1) определяют относительно экспрессии референсного гена глицеральальдегид-3-фосфатдегидрогеназы GAPDH.

Осуществление изобретения

Способ осуществляют следующим образом.

Больному с коморбидной патологией проводят ультразвуковой дуплексное сканирование сонных и позвоночных артерий на аппарате экспертного класса, позволяющего проводить допплеровское исследование (аналогичное Vivid E9, GE, США) с определением показателей:

- пиковой систолической скорости кровотока (Vps, см/с) ОСА, ВСА, ПА вне зон стенозирования, извитости или компрессии;

- степень стенозирования указанных артерий по площади и/или диаметру в % в зависимости от максимальной разрешающей возможности ультразвукового сканирования;

- максимальная пиковая систолическая скорость кровотока в области стенозирования;

- максимальная пиковая систолическая скорость кровотока в области извитости.

- признаки нестабильности атеросклеротической бляшки при наличии неровного внутреннего контура и/или десквамация внутреннего контура.

Путем расчетов и сравнительного анализа определяют наличие ускорения кровотока в области стенозирования и/или извитости.

Для дальнейшего использования в способе выбирают при наличии нескольких показателей стеноза артерии – максимальный процент стеноза. При невозможности измерить процент стеноза по площади или диаметру используют показатель стенозирования артерии, соответствующий ускорению кровотока в области стенозирования.

Путем биохимического анализа сыворотки крови пациента проводят оценку показателей липидного спектра: общего холестерина сыворотки крови, холестерина липопротеинов низкой плотности, холестерина липопротеинов высокой плотности, триглицеридов;

Определение компонентов липидного спектра крови проводят в сыворотке крови, взятой в утренние часы натощак; с использованием биохимического анализатора «Konelab 30i» (Thermo Clinical Labsystems, Финляндия) определяют ОХС, ХС-ЛПНП, ХС-ЛПВП, ТГ. При повышении содержания ОХС в сыворотке крови более 5 ммоль/л и/или увеличении концентрации ХС-ЛПНП более 3 и/или ТГ - при значении более 1,7 ммоль/л и/или снижении уровня ХС-ЛПВП менее 0,9 ммоль/л делают заключение о наличии дислипидемии.

Путем генетического анализа проводят определение уровня экспрессии генов антиоксидантной защиты. Для оценки экспрессии генов забирают цельную венозную кровь, получают лейкоциты, из которых впоследствии выделяют РНК с использованием TRIzol Reagent (Thermo Fisher Scientific, США). Для получения кДНК проводят обратную транскрипцию с помощью набора реагентов iScript cDNA Synthesis Kit (BioRad Laboratories, США) согласно инструкции. Методом TaqMan ПЦР в режиме реального времени на амплификаторе CFX96 (Bio-Rad Laboratories) изучают изменение экспрессии мРНК гена, кодирующего транскрипционный фактор Nrf2 (NRF2), и мРНК контролируемых им генов белков NAD(P)H:хиноноксидоредуктазы 1 (NQO1), гемоксигеназы 1 (HMOX1), глутатион-S-трансферазы P1 (GSTP1).

В качестве референсного используют ген глицеральальдегид-3-фосфатдегидрогеназы GAPD, т.к. он относится к группе генов «домашнего хозяйства», необходимых для поддержания важнейших жизненных функций организма, которые экспрессируются практически во всех тканях и клетках на относительно постоянном уровне.

Реакцию амплификации проводят в следующих условиях: реакционная смесь ПЦР объемом 20 мкл, содержащая буфер для ПЦР, 2,5 мМ MgCl₂, 0,2 мМ dNTP’s, 1,25 е. а. Taq-полимеразы. Амплификацию выполняют согласно следующей программе: 3 мин при 95 °С начальной денатурации, далее 40 циклов: 10 с при 95 °С для денатурации, 20 с при 60 °С для гибридизации праймеров, съем флуоресцентного сигнала, 20 с при 72 °С для элонгации. Подобранные пары праймеров:

Ген Последовательность GAPDH F: 5’-AACTTTGGCATTGTGGAAGGGCTC-3’
R: 5’-ACCAGTGGATGCAGGGATGATGTT-3’ NRF2 F: 5’-TGATGGACTTGGAGTTGC-3’
R: 5’-TCAAACACTTCTCGACTTACT-3’ NQO1 F: 5’-CGAATCTGACCTCTATGCTATG-3’
R: 5’-TAGAGATGACTCGGAAGGATAC-3’ HMOX1 F: 5’-CACTCTGGAGATGACACCTGAG-3’
R: 5’-GTGTTCCTCTGTCAGCATCACC-3’ GSTP1 F: 5′-TCCTTCCACGCACATCCTCT-3′
R: 5′-AGCCCCTTTCTTTGTTCAGC-3′

Уровень экспрессии мРНК генов NRF2, NQO1, HMOX1, GSTP1 рассчитывают согласно методу 2^-ΔΔCT и нормируют относительно референсного гена GAPDH (Real-time-PCR-HER2/neu. Инструкция по применению набора реагентов для определения дозы гена HER2/neu в геномной ДНК человека с использованием ПЦР в режиме реального времени (Регистрационное удостоверение № ФСР 2012/13492).

По таблице 1 рассчитывают в баллах интегральный риск нарушения кровотока по сонным и позвоночным артериям – основным артериям, снабжающим кровью церебральные сосуды.

Таблица 1. Алгоритм расчета в баллах интегрального риска нарушения кровотока в сонных и позвоночных артериях

№ Сектор диагностики Оцениваемый показатель Характеристика показателя Оценка в баллах 1 Ультразвуковое исследование сонных артерий, дуплексное сканирование (берут максимальную степень стеноза по соответствующей стороне) Стенозирование общей и/или внутренней сонной артерии справа нет стенозирования 0 стенозирование до 30% 2 стенозирование до 70% 3 более 70%
либо гемодинамически значимое ускорение кровотока в зоне стеноза 5 Стенозирование общей и/или внутренней сонной артерии слева нет стенозирования 0 стенозирование до 30% 2 стенозирование до 70% 3 более 70%
либо гемодинамически значимое ускорение кровотока в зоне стеноза 5 2 Ультразвуковое исследование сонных и позвоночных артерий, дуплексное сканирование Признаки нестабильности АСБ: неровный внутренний контур, десквамация внутреннего контура. нет 0 есть 5 3 Ультразвуковое исследование позвоночных артерий, дуплексное сканирование Стенозирование позвоночной артерии справа нет стенозирования 0 стенозирование до 30% 2 стенозирование до 70% 3 более 70%
либо гемодинамически значимое ускорение кровотока в зоне стеноза 5 Стенозирование позвоночной артерии слева нет стенозирования 0 стенозирование до 30% 2 стенозирование до 70% 3 более 70%
либо гемодинамически значимое ускорение кровотока в зоне стеноза 5 4 Ультразвуковое исследование сонных артерий Извитость внутренней сонной артерии справа Нет или есть без ускорения кровотока в зоне извитости 0 Есть, с ускорением кровотока в зоне извитости до 100% 0,5 Есть, с ускорением кровотока в зоне извитости более 100% 2 Извитость внутренней сонной артерии слева Есть без ускорения кровотока 0 Есть, с ускорением кровотока в зоне извитости до 100% 0,5 Есть, с ускорением кровотока в зоне извитости более 100% 3 5 Ультразвуковое исследование позвоночных артерий Извитость позвоночной артерии справа Есть без ускорения кровотока в зоне извитости 1 Есть, с ускорением кровотока в зоне извитости до 100% 2 Есть, с ускорением кровотока в зоне извитости более 100% 3 Извитость позвоночной артерии слева Есть без ускорения кровотока в зоне извитости 1 Есть, с ускорением кровотока в зоне извитости до 100% 2 Есть, с ускорением кровотока в зоне извитости более 100% 3 6 Оценка липидного спектра, биохимическое исследование Дислипидемия
по содержанию в сыворотке крови
ОХС, ХС-ЛПНП,
ХС-ЛПВП, ТГ. нет 0 По одному показателю 1 По двум показателям 2 По трем и более показателям 5 7 Оценка экспрессии генов антиоксидант-респонсивного элемента, генетическое исследование Ген NRF2 Экспрессия не снижена 0 Экспрессия снижена 2 Ген GSTP1 Экспрессия не снижена 0 Экспрессия снижена 2 Ген HMOX1 Экспрессия не снижена 0 Экспрессия снижена 2 Ген NQO1 Экспрессия не снижена 0 Экспрессия снижена 2 Всего:
максимальное возможное количество баллов 42

По таблице 1 определяют общую сумму баллов по всем показателям.

При общей сумме баллов, равной 0, делают заключение об отсутствии риска снижения кровотока по сонным и позвоночным артериям.

При общей сумме баллов от 1 до 9,5 при условии, что сумма баллов по стенозированию сонных артерий и признакам нестабильности АСБ равна менее 5, делают заключение о наличии риска незначительного снижения кровотока.

При общей сумме баллов от 10 по 25 включительно при условии, что сумма баллов по стенозированию сонных и позвоночных артерий и признакам нестабильности АСБ равна менее 5, делают заключение о наличии риска умеренного снижения кровотока.

При общей сумме баллов 25,5 – 42 или при сумме баллов по стенозированию сонных и позвоночных артерий и признакам нестабильности АСБ, равной 5 и более, делают заключение о наличии риска выраженного острого снижения кровотока.

О нестабильности АСБ судят по наличию неровного внутреннего контура и/или десквамации внутреннего контура хотя бы одной из сонных или позвоночных артерий.

Уровень экспрессии генов антиоксидантной защиты, кодирующих транскрипционный фактор Nrf2 (NRF2), белки NAD(P)H системы хиноноксидоредуктаза 1 (NQO1), гемоксигеназа 1 (HMOX1), глутатион-S-трансфераза P1 (GSTP1) определяют относительно экспрессии референсного гена глицеральальдегид-3-фосфатдегидрогеназы GAPDH.

Примеры осуществления способа

Пример 1. Пациент Д, 34 года. Диагноз: Нейроциркуляторная дистония по смешанному типу. Дорсопатия грудного отдела позвоночника, хроническое течение, ремиссия.

Результаты ультразвукового дуплексного сканирования брахиоцефальных артерий: эхоскопические признаки атеросклеротических изменений сонных и позвоночных артерий в виде стенозирования или извитости или признаков нестабильности АСБ отсутствуют, гемодинамически значимые извитости отсутствуют.

Результаты биохимического анализа липидов сыворотки крови:

ОХС – 4,7 ммоль/л (референсное значение ≤5,0 ммоль/л);

ХС-ЛПНП – 2,9 ммоль/л (референсное значение <3,7 ммоль/л);

ХС ЛПВП – 1,84 ммоль/л (референсное значение >1,0 ммоль/л),

Признаки дислипидемии отсутствуют.

Результаты анализа экспрессии генов системы антиоксидантной защиты:

ген NRF2 – 29,74, Δсt с референсным значением 2,38, не снижен;

ген GSTP1– 26,23, Δсt с референсным значением 1,51, не снижен;

ген HMOX1 – 28,15 Δсt с референсным значением 1,29, не снижен

ген NQO1 – 30,92 Δсt с референсным значением 2,89, не снижен

Общая сумма баллов: 0 баллов.

Заключение: риск нарушения кровотока в сонных и позвоночных артериях отсутствует.

Пример 2. Пациентка Б., 76 лет. Гипертоническая болезнь II стадии, контролируемая ишемическая болезнь сердца, дислипидемия. Риск 4. Целевой уровень АД-130/80 мм рт ст. Диагноз сопутствующий: Сахарный диабет 2 типа. Целевой уровень гликированного гемоглобина HBA1C < 7 %. Глюкоза плазмы натощак < 7 ммоль/л. Глюкоза плазмы через 2 часа после еды < 9 ммоль/л. Диабетическая дистальная сенсорная полинейропатия. Нефропатия сложного генеза (диабетическая, гипертензивная). Кисты почек. Хроническая болезнь почек С3Б (по CKD-EPI 37 мл/мин/1,73м в 2 от 07.10.2022г). Острое лекарственное почечное повреждение. Хроническая нефрогенная анемия легкой степени тяжести. Инфекция мочевыводящих путей, латентное течение Ожирение II ст конституционально-алиментарное по абдоминальному типу. Цереброваскулярная болезнь I-II стадия. Вестибуло-атактический синдром. Атеросклероз сонных артерий, гемодинамически незначимый (справа в области бифуркации ОСА-до 35% стеноза).

Результаты ультразвукового дуплексного сканирования брахиоцефальных артерий:

cтеноз правой ОСА 35% – 3 балла;

извитость правой ВСА, без ускорения кровотока – 0 баллов;

извитость правой ПА, без ускорения кровотока – 1 балл;

извитость левой ПА – 2 балла, ускорение кровотока менее 100%

отсутствие стеноза и извитости в левой ОСА, левой ВСА, правой ПА – 0 баллов

Биохимические показатели липидного обмена:

ОХС – 7,6 ммоль/л (референсное значение ≤5,0 ммоль/л);

ХС-ЛПНП – 3,2 ммоль/л (референсное значение <3,7 ммоль/л) ;

ХС-ЛПВП – 0,72 ммоль/л (референсное значение >1,0 ммоль/л).

Выявлена дислипидемия по 2 показателям – 2 балла.

Результаты анализа экспрессии генов системы антиоксидантной защиты:

ген NRF2 – 30,17, Δсt с референсным значением 2,33, не снижен;

ген HMOX1 – 29,24, Δсt с референсным значением 1,78, не снижен

ген NQO1 – 32,73, Δсt с референсным значением 1,92, не снижен

ген GSTP1– 23,89, Δсt с референсным значением -5,85, снижение экспрессии гена GSTP1 – 2 балла.

Общая сумма баллов: 10 баллов. Сумма баллов по стенозированию сонных артерий и признакам нестабильности АСБ равна 3 баллам

Заключение: риск умеренного снижения кровотока в сонных и позвоночных артериях.

Пример 3. Пациент Ш. Возраст 51 год. Диагноз: Гипертоническая болезнь III стадия. Неконтролируемая АГ, Риск 4 (очень высокий). Целевой уровень АД 120-130/70-80 мм рт ст, ГЛЖ. Атеросклероз сонных артерий (справа в бульбусе ОСА- до 50%, слева в дистальном отделе ОСА- до 31%, в устье ВСА- до 52%), гемодинамически незначимый. Цереброваскулярная болезнь, II стадия. Ишемическая болезнь сердца. Стенокардия напряжения ФК II. Постинфарктный кардиосклероз (нижний инфаркт миокарда левого желудочка от 06.2019 г.). Чрескожная транслюминальнач коронарная ангиопластика (ЧТКА) со стентированием правой коронарной артерии (ПКА) от 06.2019 г. Маммарокоронарное шунтирование передней нисходящей артерии. Аортокоронарное аутовенозное шунтирование диагональной артерии от 13.11.2019 г. Осложнение: хроническая сердечная недостаточность - ХСНпФВ (промежуточная фракция выброса 48%) IIа ст. ФК III (Функциональный класс по классификации Нью-йоркской кардиологической ассоциации - NYHA). Ожирение II ст, Дислипидемия, СД, Гиперурикемия, табакокурение. Хронический необструктивный бронхит, вне обострения. Неалкогольная жировая болезнь печени. Хронический некалькулёзный холецистит, вне обострения. МКБ, камневыделитель Дорсопатия поясничного отдела позвоночника, хроническое рецидивирующее течение, люмбалгия. ДОА пястно-фаланговых суставов обоих кистей, обострение.

Результаты ультразвукового дуплексного сканирования брахиоцефальных артерий:

cтеноз правой ОСА до 50% (гемодинамически незначимый) – 3 балла;

cтеноз левой ОСА до 32% - 3 балла, стеноз левой ВСА до 52% (гемодинамически незначимые) – 3 балла;

извитость правой ВСА, с ускорением кровотока в зоне извитости более 100%,– 3 балла;

извитость левой ВСА, без ускорения кровотока– 0 баллов;

извитость правой ПА ускорение кровотока до 100% гемодинамически незначимая – 2 балла;

извитость левой ПА гемодинамически значимая – 3 балла;

признаков нестабильности АСБ нет.

Биохимические показатели липидного обмена:

ОХС – 4,1 ммоль/л (референсное значение ≤5,0 ммоль/л);

ХС-ЛПНП – 2,5 ммоль/л (референсное значение <3,7 ммоль/л);

ХС-ЛПВП – 1,43 ммоль/л (референсное значение >1,0 ммоль/л),

Заключение: признаки дислипидемии отсутствуют.

Результаты анализа экспрессии генов системы антиоксидантной защиты:

ген NRF2 – 30,19, Δсt с референсным значением 1,97, не снижен;

ген GSTP1– 26,71, Δсt с референсным значением 1,24 не снижен;

ген HMOX1 – 27,98, Δсt с референсным значением 1,89; не снижен;

ген NQO1 – 31,37, Δсt с референсным значением 2,72; не снижен

Заключение: экспрессия генов антиоксидантной защиты не снижена.

Общая сумма баллов: 17 баллов. Сумма баллов по стенозированию сонных и позвоночных артерий и признакам нестабильности АСБ равна 9 баллов.

Заключение: риск выраженного острого снижения кровотока.

Пример 4. Больной Д. 56 лет. Диагноз основной: Гипертоническая болезнь IIст, степень АГ-2. Риск 3, ухудшение. Гипертензивная энцефалопатия 1 стадии, ангиоцефалгический синдром, синдром вестибуло-атактических нарушений, церебраcтенический синдром Атеросклероз сонных артерий (стеноз левой ВСА 73%). Цереброваскулярная болезнь, II стадия. Диагноз сопутствующий: дислипидемия. Сахарный диабет 2 типа. Целевой уровень гликированного гемоглобина HBA1C < 6.5 %. Ожирение 1ст. Диффузный зоб 1ст. Эутиреоз. Дорсопатия позвоночника с преимущественным поражением шейного и поясничного отделов, обострение хронической рецидивирующей вертеброгенной цервикобрахиалгии, люмбалгии, фаза неполной клинической ремиссии, лёгкий болевой синдром, лёгкие мышечно-тонические нарушения. Соматоформное вегетативное расстройство.

Результаты ультразвукового дуплексного сканирования брахиоцефальных артерий:

cтеноз правой ОСА до 28% (гемодинамически незначимый) – 2 балла;

cтеноз левой ВСА до 73%– 5 баллов.

отсутствие стеноза и извитости в левой ОСА, правой ВСА, левой и правой ПА – 0 баллов;

признаков нестабильности АСБ нет.

Биохимические показатели липидного обмена:

ОХС – 5,9 ммоль/л (референсное значение ≤5,0 ммоль/л);

ХС-ЛПНП – 2,3 ммоль/л (референсное значение <3,7 ммоль/л);

ХС-ЛПВП – 1,57 ммоль/л (референсное значение >1,0 ммоль/л),

Заключение: дислипидемия по одному показателю – 1 балл;

Результаты анализа экспрессии генов системы антиоксидантной защиты:

ген NRF2 – 28,91, Δсt с референсным значением 1,71, не снижен;

ген GSTP1– 30,47, Δсt с референсным значением 2,43, не снижен;

ген HMOX1 29,12, Δсt с референсным значением 1,59, не снижен;

ген NQO1 – 32,69, Δсt с референсным значением 2,28, не снижен.

Заключение: экспрессия генов антиоксидантной защиты не снижена

Общая сумма баллов: 8 баллов, в т.ч. сумма баллов по стенозированию сонных артерий и признакам нестабильности АСБ равна 7 баллов.

Заключение: риск выраженного снижения кровотока.

Пример 5. Пациент К. 68 лет, Диагноз основной: Мультифокальный атеросклероз. Ишемическая болезнь сердца (ИБС): Стенокардия напряжения 1 ФК. Атеросклероз сонных артерий. Цереброваскулярная болезнь, II-III стадия. Выраженная ишемическая энцефалопатия. Стеноз брюшной аорты. Атеросклероз артерий нижних конечностей. Диагноз сопутствующий: Гипертоническая болезнь 3 ст, контролируемая АГ. Незначительный стеноз аортального клапана. Дислипидемия. СД 2 тип., риск 4. ХОБЛ, средней степени тяжести вне обострения. ДН2. Гипертензивная энцефалопатия 1 ст. Хроническая сердечная недостаточность - ХСН 1 (Функциональный класс по классификации Нью-йоркской кардиологической ассоциации NYHA 1 ФК).

Результаты ультразвукового дуплексного сканирования брахиоцефальных артерий:

стеноз правой ВСА 61% - 3 балла;

стеноз левой ОСА – 58% - 3 балла;

признаки нестабильности внутреннего контура АСБ – 5 баллов

извитость левой позвоночной артерии, гемодинамически значимая – 3 балла;

отсутствие стеноза и извитости в правой ОСА, правой ВСА, правой ПА – 0 баллов

Биохимические показатели липидного обмена:

ОХС – 8,9 ммоль/л (референсное значение ≤5,0 ммоль/л);

ХС-ЛПНП – 5,2 ммоль/л (референсное значение <3,7 ммоль/л);

ХС-ЛПВП – 1,98 ммоль/л (референсное значение >1,0 ммоль/л),

Заключение: дислипидемия по 2 показателям – 2 балла.

Результаты анализа экспрессии генов системы антиоксидантной защиты:

ген HMOX1 – 30,72, Δсt с референсным значением 2,23, не снижен

ген NQO1 – 31,28, Δсt с референсным значением 1,58 не снижен

ген NRF2 – 21,35, Δсt с референсным значением –7,45, снижен;

ген GSTP1– 23,46, Δсt, с референсным значением – 6, 91, снижен;

снижение экспрессии гена NRF2 – 2 балла.

снижение экспрессии гена GSTP1 – 2 балла.

Общая сумма баллов: 20 баллов, в том числе сумма баллов по стенозированию сонных и позвоночных артерий и признакам нестабильности АСБ 11 баллов.

Заключение: риск выраженного снижения кровотока.

Пример 6. Больная С. 67 года. Диагноз основной: Гипертоническая болезнь 3стадии, неконтролируемая АГ. Гипертрофия левого желудочка. Ишемическая болезнь сердца. Риск 4. Целевой уровень АД-120/80 мм рт ст. 25.11.21г Чрескожная транслюминальная коронарная ангиопластика (ЧТКА) со стентированием правой коронарной артерии стентом Resolute Integrity 3,5х15мм. Атеросклероз сонных артерий: стеноз провой ОСА 55%; стеноз устья левой ВСА - 62%. Цереброваскулярная болезнь, III стадия. Диагноз сопутствующий: Дислипидемия. Желудочковая экстрасистолия 4 Акл по Лауну. Хронический гастрит, ремиссия. НР(-). Хронический некалькулезный холецистит, ремиссия. Доброкачественная гипербилирубинемия (синдром Жильбера). Посттравматический деформирующий остеоартроз коленных суставов (справа Rg 1ст., слева Rg 2ст). НФС 0-1ст. Подагра, суставная форма. Дорсопатия шейного, поясничного отдела позвоночника, хроническое течение, ремиссия.

Результаты ультразвукового дуплексного сканирования брахиоцефальных артерий:

стеноз устья правой ВСА 62 % – 3 балла;

стеноз устья левой OСА 55% – 3 балла;

извитость левой ВСА гемодинамически значимая – 3 балла;

извитость правой ПА гемодинамически значимая – 3 балла;

извитость левой ПА гемодинамически значимая – 3 балла;

признаков нестабильности АСБ нет.

Биохимические показатели липидного обмена:

ОХС – 6,8 ммоль/л (референсное значение ≤5,0 ммоль/л);

ХС-ЛПНП – 4,3 ммоль/л (референсное значение <3,7 ммоль/л);

ХС-ЛПВП – 0,71 ммоль/л (референсное значение >1,0 ммоль/л),

Заключение: дислипидемия по 3 показателям – 5 баллов;

Результаты анализа экспрессии генов системы антиоксидантной защиты:

ген GSTP1– 29,17, Δсt с референсным значением 1,41, не снижен;

ген NRF2 – 19,29, Δсt с референсным значением -7,22, снижен;

ген HMOX1 – 23,76, Δсt с референсным значением – 5,92, снижен

ген NQO1 – 23,82, Δсt с референсным значением – 9,31, снижен

снижение экспрессии гена NRF2 – 2 балла.

снижение экспрессии гена HMOX1– 2 балла.

снижение экспрессии гена NQO1 – 2 балла.

Общая сумма баллов 26, в т.ч. за счет сумме баллов по стенозированию сонных и позвоночных артерий и признакам нестабильности АСБ 6 баллов.

Заключение: риск выраженного снижения кровотока.

Таким образом, заявленный способ позволяет получить более точную оценку риска нарушения кровотока в сонных и позвоночных артериях у коморбидных больных, т.к. позволяет учесть удельный вклад результатов дуплексного сканирования сосудов, степени выраженности дислипидемии и уровня экспрессии генов системы антиоксидантной защиты в риск нарушения кровотока в сонных и позвоночных артериях. При этом значение результатов дуплексного сканирования сосудов может быть доминирующим только при выраженном нарушении кровотока. Кроме того, способ позволяет учесть вклад не только стенозирования сонных артерий, но и стенозирования позвоночных артерий, степени извитости внутренних сонных и позвоночных артерий, наличия нестабильной атеросклеротической бляшки в результаты дуплексного сканирования сосудов.

Изобретение относится к медицине, а именно к ультразвуковой диагностике, неврологии, ангиологии, и может быть использовано для диагностики риска нарушения кровоснабжения головного мозга у коморбидных больных в амбулаторных и стационарных условиях. Определяют степень стенозирования сонных артерий. Оценивают наличие и степень стенозирования или наличие гемодинамически значимого ускорения кровотока в зоне стеноза общих и внутренних сонных артерий слева и справа, позвоночных артерий слева и справа. Выявляют наличие признаков нестабильности атеросклеротических бляшек общих сонных и внутренних сонных и позвоночных артерий, наличие извитости и ускорения кровотока в зоне извитости во внутренних сонных и позвоночных артериях слева и справа. Определяют наличие дислипидемии по содержанию в сыворотке крови общего холестерина, холестерина липопротеинов низкой плотности и высокой плотности, триглицеридов. Определяют уровень экспрессии генов антиоксидантной защиты, кодирующих транскрипционный фактор Nrf2, белки NAD(P)H системы хиноноксидоредуктаза 1, гемоксигеназа 1, глутатион-S-трансфераза P1. По каждому показателю проводят балльную оценку. В зависимости от полученной суммы определяют риск нарушения кровотока в сонных и позвоночных артериях. Способ повышает точность диагностики за счет оценки совокупности наиболее значимых показателей. 2 з.п. ф-лы, 1 табл., 6 пр.

1. Способ диагностики риска нарушения кровотока в шейных артериях у коморбидных больных с сосудистой патологией, включающий определение степени стенозирования сонных артерий методом ультразвукового дуплексного сканирования, отличающийся тем, что дополнительно оценивают наличие и степень стенозирования или наличие гемодинамически значимого ускорения кровотока в зоне стеноза общих и внутренних сонных артерий слева и справа, позвоночных артерий слева и справа; выявляют наличие признаков нестабильности атеросклеротических бляшек (АСБ) общих сонных и внутренних сонных и позвоночных артерий; наличие извитости и ускорения кровотока в зоне извитости во внутренних сонных и позвоночных артериях слева и справа; определяют наличие дислипидемии по содержанию в сыворотке крови общего холестерина (ОХС), холестерина липопротеинов низкой плотности (ХС-ЛПНП) и высокой плотности (ХС-ЛПВП), триглицеридов; определяют уровень экспрессии генов антиоксидантной защиты, кодирующих транскрипционный фактор Nrf2 (NRF2), белки NAD(P)H системы хиноноксидоредуктаза 1 (NQO1), гемоксигеназа 1 (HMOX1), глутатион-S-трансфераза P1 (GSTP1); при степени стенозирования до 30% хотя бы одной из указанных сонных артерий слева, позвоночной артерии слева и/или хотя бы одной из указанных сонных артерий справа, позвоночных артерий справа присваивают по 2 балла, 31-70% - по 3 балла соответственно; при степени стенозирования более 70% либо наличии гемодимачески значимого ускорения кровотока в зоне стеноза хотя бы одной из указанных сонных артерий слева, позвоночной артерии слева и/или хотя бы одной из указанных сонных артерий справа, позвоночных артерий справа присваивают по 5 баллов; при отсутствии стенозирования по всем сонным и позвоночным артериям – 0 баллов; при наличии признаков нестабильности атеросклеротических бляшек хотя бы по одной из сонных или позвоночных артерий слева или справа присваивают 5 баллов, при их отсутствии по всем указанным артериям – 0 баллов; при отсутствии извитости внутренней сонной артерии справа или ее наличии без ускорения кровотока в зоне извитости – 0 баллов; при наличии извитости внутренней сонной артерии справа и ускорении кровотока в зоне извитости до 100% включительно - 0,5 баллов; при наличии извитости сонной артерии справа и ускорении кровотока в зоне извитости более 100% - 2 балла; при отсутствии извитости внутренней сонной артерии слева или ее наличии без ускорения кровотока в зоне извитости – 0 баллов; при наличии извитости внутренней сонной артерии слева и ускорении кровотока в зоне извитости до 100% включительно - 0,5 баллов; при наличии извитости внутренней сонной артерии слева и ускорении кровотока в зоне извитости более 100% - 3 балла; при наличии извитости позвоночной артерии слева и/или справа – без ускорения кровотока в зоне извитости – по 1 баллу по каждой из позвоночных артерий; при наличии извитости позвоночной артерии слева и/или справа с ускорением кровотока в зоне извитости до 100% включительно – по 2 балла по каждой из позвоночных артерий; при наличии извитости позвоночной артерии слева и/или справа с ускорением кровотока в зоне извитости более 100% – по 3 балла по каждой из позвоночных артерий; при наличии дислипидемии по одному из указанных показателей присваивают 1 балл, по двум показателям – 2 балла, по трем и более показателям – 5 баллов; при отсутствии признаков дислипидемии – 0 баллов; при снижении экспрессии по каждому из указанных генов присваивают по 2 балла, при его отсутствии – 0 баллов; определяют общую сумму баллов по всем показателям; при общей сумме баллов, равной 0, делают заключение об отсутствии риска снижения кровотока по сонным и позвоночным артериям; при общей сумме баллов от 1 до 9,5 при условии, что сумма баллов по стенозированию сонных артерий и признакам нестабильности АСБ равна менее 5, – о наличии риска незначительного снижения кровотока; при общей сумме баллов от 10 по 25 включительно при условии, что сумма баллов по стенозированию сонных и позвоночных артерий и признакам нестабильности АСБ равна менее 5, - о наличии риска умеренного снижения кровотока; при общей сумме баллов 25,5 – 42 или при сумме баллов по стенозированию сонных и позвоночных артерий и признакам нестабильности АСБ, равной 5 и более, - о наличии риска выраженного острого снижения кровотока.

2. Способ по п.1, где о нестабильности АСБ судят по наличию неровного внутреннего контура и/или десквамации внутреннего контура хотя бы одной из сонных или позвоночных артерий.

3. Способ по п.1, где уровень экспрессии генов антиоксидантной защиты NRF2, NQO1, HMOX1, GSTP1 определяют относительно экспрессии референсного гена GAPDH.