СМЕСЬ КОМПОНЕНТОВ С ВЫСОКОЙ МОЛЕКУЛЯРНОЙ МАССОЙ, ПОЛУЧЕННЫХ ИЗ ВОСКА САХАРНОГО ТРОСТНИКА (Saccharum officinarum L.) Российский патент 2025 года по МПК A61K36/899 C13B99/00 

Область техники изобретения

Настоящее изобретение относится к пищевой и фармацевтической областям за счет того, что в нем представлена смесь веществ с высокой молекулярной массой (ВВММ) с антиоксидантным и нейропротективным действиями, которые могут использоваться как активный ингредиент (АИ) в пищевых добавках или лекарственных формах. Указанный активный ингредиент содержит соли жирных кислот, жирные спирты и альдегиды с высокой молекулярной массой, получаемые из очищенного воска сахарного тростника (Saccharum officinarum L.) в конкретных пропорциях, которые гарантируют синергическое действие, причем фармакологический эффект описываемой смеси превосходит совокупность фармакологических эффектов групп соединений, входящих в ее состав.

Несколько заболеваний, связанных с нервной системой, отрицательно сказываются на качестве жизни и могут привести к летальному исходу для больных, вследствие чего текущую проблему представляет необходимость в новых, безопасных и эффективных стратегиях нейропротективного лечения. Среди множества заболеваний, при которых поражаются клетки нервной системы, имеются спинальная мышечная атрофия, первичный латеральный склероз, прогрессирующая спинобульбарная мышечная атрофия и аниотрофный латеральный склероз. Последнее из них - наиболее известное и опасное нейродегенеративное заболевание, поскольку оно смертельно. Данное состояние, широко известное публике как ставшее причиной смерти известных личностей, таких как ученый Стивен Хокинг и спортсмены Лу Гериг, Джанлука Синьорини и Стефано Боргоново, характеризуется постепенной утратой функции и последующей гибелью нейронов, отвечающих за движение мышц, что приводит к прогрессирующему параличу мышц.

С учетом того, что неврологические расстройства отрицательно сказываются на качестве жизни, а некоторые могут привести к летальному исходу для больных, представляют собой важную проблему здравоохранения в глобальном масштабе, а также факт того, что существующие традиционные способы лечения не могут вылечить их или предотвратить их развитие до необходимой степени, требуется найти новые эффективные нейропротективные средства для профилактики и лечения этих заболеваний.

С другой стороны, актуальной темой также является поиск веществ-антиоксидантов. Образование активных форм кислорода и свободных радикалов обычно происходит при клеточном метаболизме, и в нормальных физиологических условиях это компенсируется системой антиоксидантов, которая поддерживает окислительно-восстановительный баланс и жизнеспособность клеток. Тем не менее, существуют несколько факторов, таких как воздействие загрязнителей и окружающей среды, способ жизни и различные патологии, которые могут изменить этот баланс за счет образования избыточного и накапливающегося количества свободных радикалов, что провоцирует окислительный стресс (ОС) (Польшак, 2011). Было продемонстрировано, что ОС играет важную роль в развитии и прогрессировании различных хронических дегенеративных патологий, таких как атеросклероз, рак, болезнь сердца и нейродегенеративные расстройства (Мальдонадо, 2010, Фарлейн, 2004, Гуишардан, 2009). Таким образом, употребление веществ-антиоксидантов может предотвратить или уменьшить клеточную и функциональную деградацию организма, вызванную ОС, оказывая дополнительное полезное влияние на профилактику данных патологий (Оксилиа, 2010).

Предыдущий уровень техники

Существуют несколько патентов и публикаций по получению экстрактов из воска сахарного тростника (S. officinarum L.), но ни в одной из них не идет речь о получении смеси с нейропротективным и антиоксидантными эффектами, соответствующими композиции, представленной в настоящем изобретении. В большинстве опубликованных работ идет речь о получении чистых смесей спиртов для лечения состояний, относящихся к липидному спектру, гиперспособности тромбоцитов к агрегации и коронарных состояниях. Для тех же целей для улучшения вышепредставленных фармакологических эффектов также получали смеси спиртов и жирных кислот (с преимущественным содержанием жирных спиртов), чистые смеси жирных кислот, а также сочетания этих веществ с различными препаратами.

Среди первых работ, опубликованных на эту тему, имеется получение смеси жирных спиртов (≥90%) посредством омыления воска из сахарного тростника и экстракции с помощью органических растворителей, что эффективно при лечении гиперхолестеринемии, атеросклеротических осложнений, таких как гиперагрегация тромбоцитов, ишемия и тромбоз, с одновременной профилактикой язвенной болезни желудка и повышением сексуальной активности у мужчин (Лагуна, US5856316). Важные фармакологические эффекты, демонстрируемые указанной смесью, дали мотивацию на получение из этого воска других смесей с высоким содержанием жирных спиртов для тех же фармацевтических целей как с использованием аналогичных способов получения (Альмагро, US20070295326A1, Рибейро, BRPI0702137A и Маткин, US20060013842 A1), так и с помощью других технологий, таких как жидкостная экстракция в сверхкритических условиях (Шинтаку, BRPI0701341A2), многофазное гидролитическое извлечение (Сомайя, 1058/MUM/2005) и проведение реакции воска с водородом в присутствии катализатора (Сомайя, WO2010103549).

С целью получения лекарственных средств с гипохолестеринемическим, кардиопротективным и антитромбоцитарным действиями из воска сахарного тростника также получали другие экстракты и смеси, например, представленные Гонсалесом и соавторами (US6486205 B2), которые состоят из жирных кислот с количеством атомов углерода от 26 до 36; представленные Кутни и Уессманом (US20050234025), которые предлагают сочетание как минимум одного спирта и жирной кислоты из воска со стероидными спиртами и/или производными аскорбиновой кислоты (без указания пропорции этих веществ); и представленные Маткином и соавторами (US20060013842), которые предлагают смесь с содержанием жирных спиртов не менее 60%, содержанием жирных кислот до 40% и, при необходимости, салициловой кислотой, которую также можно получить из прочих видов воска, животных или растений. Аналогичным образом из других видов натурального воска, таких как пчелиный, воск из сорго и просо, получали экстракты со спиртами и прочими жирными веществами, которые обладают аналогичными фармакологическими эффектами на липидный спектр, представленный выше (Перес, EP1189605B1 и Хагроу и соавт., US20060127449).

Что касается использования жирных кислот в нейропротективных композициях, было установлено, что Миллер (US20110280852A1) предложил использовать ненасыщенные жирные кислоты с количеством атомов углерода от 18 до 22, активированные как нитрозамещенные или кетокислоты, в то время как в работах Пакуина и Рузелла (US20020128316 и US20090280199) предлагалось использовать триглицериды (или их свободные кислоты) и омега-3 жирные кислоты соответственно, смешанные с другими веществами.

Описание нейропротективной и антиоксидантной композиции, состоящей из смеси жирных кислот с количеством атомов углерода более 26 в форме солей, в конкретной пропорции, а также содержащей жирные спирты и альдегиды с высокой молекулярной массой в конкретных пропорциях, ранее не приводилось.

Техническая задача

Как указывалось ранее, несмотря на то, что неврологические расстройства представляют собой важные проблемы для здоровья, которые отрицательно сказываются на качестве жизни и могут привести к летальному исходу, существующие традиционные способы лечения не в состоянии излечить их или предотвратить их развитие должным образом. Поэтому необходимо найти новые эффективные нейропротективные средства для профилактики и лечения этих заболеваний. С другой стороны, поиск веществ-антиоксидантов также необходим и актуален, поскольку имеются несколько факторов, за счет которых образуется избыточное количество и накопление свободных радикалов, которые отрицательно воздействуют на развитие и прогрессирование различных хронических дегенеративных патологий.

Решение задачи

В качестве положительного решения текущей задачи предлагается смесь веществ с высокой молекулярной массой (ВВММ) с антиоксидантными и нейропротективными эффектами, которая является целью настоящего изобретения. Эта смесь может использоваться в качестве активного ингредиента (АИ) в пищевых добавках или лекарственных средствах. Указанный АИ содержит соли жирных кислот, жирные спирты и альдегиды с высокой молекулярной массой, получаемые из очищенного сахарного тростника (Saccharum officinarum L.) в конкретных пропорциях, которые гарантируют синергическое действие, причем фармакологический эффект описываемой смеси превосходит совокупность фармакологических эффектов групп соединений, входящих в ее состав.

Краткое описание изобретения

АИ, представленный в качестве цели настоящего изобретения, характеризуется тем, что содержит следующие группы соединений в конкретных пропорциях: жирные кислоты (60-80% масс.), жирные спирты (10-30% масс) и альдегиды с высокой молекулярной массой (10-30% масс.). Основные составляющие, представленные жирными кислотами, присутствуют в композиции в виде щелочей или щелочно-земельных солей в следующей пропорции: C26:0 от 0,3 до 5%, C27:0 от 0,3 до 5%, C28:0 от 20,0 до 40,0%, C29:0 от 1,0 до 3,0%, C30:0 от 12,0 до 25,0%, C31:0 от 0,5 до 2,0%, C32:0 от 5,0 до 15,0%, C33:0 от 0,5 до 3,0%, C34:0 от 5,0 до 18.0%, C35:0 от 0,3 до 1,5% и C36:0 от 1,0 до 8,0%. Основные алифатические спирты, присутствующие в смеси, представлены гомологическими соединениями с количеством атомов углерода от 24 до 34, среди которых преобладает 1-октакозанол (С28), а среди альдегидов преобладают ненасыщенные αβ с количеством атомов углерода более 48. Новый АИ может быть получен для перорального введения в твердой форме (таблетки, капсулы) или жидкой форме (суспензии), для чего они могут быть смешаны со вспомогательными веществами, принятыми в области фармацевтики.

Следует отметить, что пропорция, в которой вещества с высокой молекулярной массой пребывают в АИ, являющимся целью настоящего изобретения, не достигается естественным путем посредством простых процессов экстракции и очистки, но является результатом смешивания в конкретных количествах экстрагированных и очищенных фракций каждой группы веществ в зависимости от чистоты, с которой была получена каждая фракция. Таким образом, конечная композиция, являющаяся целью настоящего изобретения, представляет собой результат процесса стандартизации, при котором содержание каждой группы составляющих доводится до конкретных концентраций и пропорций, описанных в настоящем документе, что гарантирует синергическое взаимодействие между ее составляющими и необходимые фармакологические эффекты, как было установлено посредством фармакологических исследований.

В связи с этим мощные фармакологические эффекты настоящей композиции намного превосходят эффекты от введения этих трех групп веществ по отдельности, что просматривается в примерах реализации, а также показывает наступление синергического эффекта, неизвестного на предыдущем уровне техники. Таким образом, АИ, являющийся целью настоящего изобретения, значительно расширяет фармакологические эффекты в качестве антиоксиданта, причем как экстракта жирных кислот, так и экстрактов жирных спиртов и альдегидов с высокой молекулярной массой, и обеспечивает мощные нейропротективные эффекты, которые не наблюдаются в отношении какого-либо из трех типов веществ, составляющих этот АИ.

Процедура получения фармацевтической композиции, являющейся целью настоящего изобретения, характеризуется начальным этапом гидролиза тростникового воска в сыром или переработанном виде с щелочью или щелочно-земельными гидроксидами с последующими процессами экстракции спиртов и альдегидов, а также этапами очистки остаточных солей, равно как и спиртовых и альдегидных фракций за счет использования на всех вышеприведенных этапах органических растворителей или CO₂ в сверхкритических условиях, а также с окончательной стандартизацией концентрации трех групп веществ согласно предписанным конкретным пропорциям, что гарантирует получение необходимого фармакологического эффекта.

Полезные эффекты

Преимущества настоящей композиции над уже существующими, которые также получаются из тростникового воска, заключаются в том, что она обладает повышенной эффективностью в виде антиоксидантного и нейропротективного эффекта, который отсутствует в какой-либо предыдущей композиции. Настоящее изобретение имеет промышленное применение, является инновационным, а также обладает изобретательским уровнем, поскольку из предыдущего уровня техники не известно об описании смеси из трех групп веществ в указанных пропорциях и концентрациях, которая бы демонстрировала синергический эффект с фармакологическими преимуществами. Настоящее изобретение относится к пищевой и фармацевтической отраслям, поскольку получаемая композиция может использоваться в качестве пищевой добавки благодаря ее полезному действию на окислительный стресс, а также как лекарственное средство для профилактики неврологических заболеваний и заболеваний, связанных с расстройствами вследствие окислительного стресса.

Примеры реализации

Пример 1. Получение смеси веществ с высокой молекулярной массой (ВВММ) с нейропротективным и антиоксидантным эффектами.

Один килограмм тростникового воска был подвергнут процессу гидролиза в щелочной среде с гидроксидом калия, после чего омыленный воск был экстрагирован с помощью CO₂ при сверхкритических условиях, и как смесь остаточных солей, так и спиртовые и альдегидные фракции, экстрагированные с помощью CO₂, прошли этапы очистки с помощью гексана и ацетона. Полученные фракции были проанализированы посредством газовой хроматографии и спектрофотометрии для определения содержания в них солей, спиртов и альдегидов, и далее они были смешаны в необходимых пропорциях для получения следующего соотношения: 76% жирных кислот калиевых солей, 13% жирных спиртов и 11% альдегидов с высокой молекулярной массой, причем пропорция жирных кислот была следующей: C26:0 1,5%, C27:0 1,4%, C28:0 30,6%, C29:0 1,2%, C30:0 13,5%, C31:0 1,0%, C32:0 8,3%, C33:0 1,7%, C34:0 11,6%, C35:0 1,4% и C36:0 3.8%.

Пример 2. Получение смеси веществ с высокой молекулярной массой (ВВММ) с нейропротективным и антиоксидантным эффектами.

Один килограмм тростникового воска был подвергнут процессу гидролиза в щелочной среде, после чего омыленный воск был экстрагирован с помощью горячего гексана, органическая фракция была охлаждена, и перекристаллизированная твердая фракция была подвержена процессу очистки посредством последовательной промывки этанолом и ацетоном. Как смесь остаточных солей, так и экстрагированная и очищенная фракция были проанализированы посредством газовой хроматографии и спектрофотометрии для определения содержания в них солей, спиртов и альдегидов, и далее они были смешаны в необходимых пропорциях для получения следующего соотношения: 70% жирных кислот кальциевых солей, 19% жирных спиртов и 11% альдегидов с высокой молекулярной массой, причем пропорция жирных кислот была следующей: C26:0 1,2%, C27:0 1,1%, C28:0 26.3%, C29:0 1,1%, C30:0 15,3%, C31:0 0,7%, C32:0 6,9%, C33:0 1,5%, C34:0 11,4%, C35:0 1,0% и C36:0 3,7%.

Пример 3. Оценка нейропротективного и антиоксидантного эффектов на индукционную модель церебральной ишемии.

Для оценки нейропротективного эффекта смеси с веществами с высокой молекулярной массой, являющейся целью настоящего изобретения, была использована опытная модель глобальной церебральной ишемии посредством закупоривания и реперфузии сонных артерий. Композиция из веществ с высокой молекулярной массой (ВВММ), полученная в примере 1, была подвергнута предклиническому испытанию на животных, при котором фармакологический эффект сравнивался с эффектами чистых экстрактов жирных кислот в виде солей (AcGS), жирных спиртов (AlcG) и альдегидов с высокой молекулярной массой (AldG), которые вводились в дозах, равных пропорциям, в которых каждое из веществ присутствует в 200 мг/кг активного ингредиента с ВВММ. Кроме того, эффект ВВММ сравнивался с эффектом чистого экстракта жирной кислоты (AcGL), вводимым в равных дозах.

Использовались самцы монгольской песчанки (60-80 г), которые в течение 7 дней адаптировались к стандартным лабораторным условиям (температура 20-25°C, относительная влажность 60 ± 5%, дневной/ночной цикл, равный 12 часам), со свободным доступом к воде и питанию. Разные вещества для оценки были приготовлены в виде суспензий в наполнителе из аравийской камеди/воды (1%).

По окончании карантина песчанок поделили на 8 групп: группу отрицательного контроля, которая получала только наполнитель, и в которой не вызывалась церебральная ишемия (ЦИ), и на 7 групп, в которых вызывалась ЦИ. Одна из групп с вызванной ЦИ служила для положительного контроля, получала только наполнитель, а прочие 6 групп с ЦИ получали ВВММ (200 мг/кг), AcGS (132 мг/кг), AlcG (40 мг/кг), AldG (28 мг/кг), AcGL (200 мг/кг) и аспирин (60 мг/кг) в качестве препарата сравнения. Все лекарственные препараты вводились перорально посредством внутрижелудочной интубации (0,5 мл/70 г массы тела) за 1 час до провоцирования ишемии. Глобальная церебральная ишемия вызывалась билатеральной ишемией и реперфузией. Для этого песчанки получали обезболивающее в галотановой среде, в передней центральной части шеи делался надрез и оголялись общие сонные артерии. Данные артерии изолировались и отделялись путем обмотки черной шелковой нитью, после чего песчанкам давалось 30 минут для восстановления после обезболивания. По окончании этого срока шелковая нить извлекалась, а на каждую сонную артерию устанавливался давящий зажим для полного перекрытия кровотока на 5 минут. Далее зажим снимался для возобновления кровообращения в течение 24 часов.

Оценка неврологической функции выполнялась через 4 часа после ишемии/реперфузии (согласно МакГроу, 1977) следующим образом: 0: отсутствие симптомов; 1: изгибания торса или ощетинивание шерсти; 2: птоз; 3: движение по кругу (манежные движения); 4: вытягивание задних лап и 5: конвульсии. Оценка локомоторной активности песчанок выполнялась на открытом пространстве в течение 24 часов после ишемии (согласно Катсумата и соавт., 2006). Для этого каждая песчанка была помещена в центр коробки размером 60,5 см в длину ×46 см в ширину с дном, разделенным на 12 секторов размером 14,5 см². В течение 6 минут подсчитывалось количество пересечений разных секторов песчанками передними лапами и количество остановок или наклонов.

По завершении наблюдений за поведением песчанкам вводилось обезболивающее в галотановой среде, а также отбирались образцы крови из полой вены, которые собирались в пластмассовые пробирки и смешивались с ЭДТА (10%). Их мозг незамедлительно удалялся для гистологического анализа. Кровь центрифугировалась со скоростью 3 000 об/мин для получения плазмы, которая подвергалась биохимической количественной оценке перокисного окисления липидов и окисления белков. Для определения перокисного окисления липидов подсчитывалось количество образования веществ, вступающих в реакцию с тиобарбитурной кислотой (ВРТБК) (согласно Охкава и соавт., 1979) в плазме, и это было выражено в виде нмоль малондиальдегида (МДА)/мг белка.

Для определения окисления белков были определены сульфгидрильные (СГ) группы (методика, описанная Мяо-Линь Ху, 1994). Отбиралась аликвота 50 мкл плазмы, 950 мкл ДТНБ 10 ммоль. Она инкубировалась в течение 20 минут при комнатной температуре. Оптическая плотность супернатанта считывалась при 412 нм. С ДТНБ подготавливалась холостая проба, а также подсчитывалось суммарное количество СГ-групп с использованием коэффициента поглощения 13 600 см^-1моль^-1, которое выражалось в ммоль. По измененному методу Лоури (Марксвелл, 1987) была определена концентрация белка.

Для гистологического анализа мозги были зафиксированы в растворе буферного формалина 10%, обезвожены, залиты в парафин, а срезы, содержащие гиппокамп, были окрашены гематоксилином и эозином. Оценка каждого мозга выполнялась посредством системы баллов при световой микроскопии для определения повреждения пирамидных нейронов участка CA1 гиппокампа с билатеральными средними значениями. Патологогистологическая система баллов (основанная на способе, использованном Бартусом и соавт., 1998), была следующей: 0 = нормально окрашенные, плотно расположенные клетки с закругленным телом и хорошо окрашенным центральным ядром; 1 = некоторое сморщивание и неровность формы клеток с бледным хроматолитическим участком, окруженным периферийным кольцом цитоплазмы; 2 = некоторая утрата клеток с участками пикнотических клеток; 3 = умеренная утрата клеток и пикноз; 4 = утрата базофильного вещества, указывающая на заметное истощение нейронов, и лишь редкое наличие нейронов среди многочисленной микроглии.

Результаты

Даже кратковременная глобальная церебральная ишемия приводит к избирательной нейродегенерации в уязвимых участках мозга, например, на участке гиппокампа, прилегающем к коре (ПК). В частности, пирамидные нейроны CA1 относятся к числу клеток, наиболее уязвимых для ишемии/реперфузии (Шарма, 2005 и Кирино, 2000). Модель глобальной церебральной ишемии, вызванной двусторонней перевязкой двух общих сонных артерий на 5 минут и их реперфузией в течение 24 часов представляет собой полезную модель для оценки веществ с потенциальным полезным эффектом при ишемическом инсульте (Равиндер, 2009). Неврологическая оценка по шкале оценки клинических симптомов МакГроу и увеличение локомоторной активности, измеренное при испытании на открытом пространстве, представляют собой показатели гистологических повреждений тканей мозга (МакГроу, 1977; Катсумата, 2006).

Результаты показали наличие клинических симптомов и повышенную двигательную активность в группе животных для положительного контроля, изменения, купируемые аспирином, что соответствует сведениям, заявленным относительно настоящей модели, и подтверждает ее действительность в созданных экспериментальных условиях. Данное исследование демонстрирует, что композиция с ВВММ (200 мг/кг) может значительно уменьшить клинические симптомы (ингибирование в объеме 91,6%) и гиперлокомоцию (ингибирование в объеме 86,1%), вызываемые глобальной церебральной ишемией, у монгольских песчанок. Лечение с помощью чистого экстракта отдельных составляющих ВВММ (AcGS, AlcG и AldG) привело к умеренному, но значительному уменьшению количества баллов по клиническим симптомам (ингибирование в объеме 36,6, 21,6 и 11,6% соответственно) и гиперлокомоции (ингибирование в объеме 33,4, 21,7 и 11,1% соответственно) в сравнении с группой положительного контроля. Сравнение ВВММ (200 мг/кг) с каждым чистым экстрактом его отдельных составляющих дало значительные результаты, показав повышенную эффективность, и они даже превосходили сумму эффектов трех экстрактов, что демонстрирует синергический или усиливающий эффект трех составляющих, когда они собраны вместе в АИ, представленном ВВММ (Таблица 1).

С другой стороны, введение ВВММ (200 мг/кг) также дало защиту от клинических симптомов, значительно превосходящую таковую под действием чистого экстракта AcGL (200 мг/кг), продемонстрировав лучшую неврологическую защиту посредством экстракта, в котором сочетаются наличие жирных кислот в виде солей, жирных спиртов и жирных альдегидов (Таблица 1).

Таблица 1. Воздействие на оценку по клиническим симптомам и локомоторную активность (на открытом пространстве) монгольских песчанок при глобальной ишемии головного мозга/реперфузии (И/Р)

Лекарственное средство Дозировка
(мг/кг/день) Баллы по КС Ингибирование
(%) Пересечения
(#) Ингибирование
(%) Отрицательный контроль
(наполнитель) 0 0 ± 0*** -- 250,8 ± 14,8** -- Положительный контроль
(наполнитель + И/Р) 0 3,00 ± 0,52 --- 355,5 ± 12,4 --- ВВММ + И/Р 200 0,25 ± 0,12***ab 91,6 265,3 ± 9,4**ab 86,1 AcGS + И/Р 132 1,90 ± 0,35** 36,6 320,5 ± 13,5* 33,4 AlcG + И/Р 40 2,35 ± 0,25* 21,6 332,7 ± 13,5* 21,7 AldG + И/Р 28 2,65 ± 0,40 * 11,6 343,8 ± 12,2* 11,1 AcGL + И/Р 200 1,85 ± 0,32** 38,3 322,8 ± 15,1* 31,2 АСК + И/Р 60 0,40 ± 0,35** 86,6 286,2 ± 15,2* 66,2

Данные в виде среднего значения ± СПС (стандартная погрешность среднего значения), КС: клинические симптомы

*p<0,05; **p<0,01; ***p<0,001: сравнение с группой положительного контроля

при p < 0,05 в сравнении с AcGS и AcGL; b p <0,001: сравнение с AlcG и AldG

(U-критерий Манна-Уитни)

На фиг. 2 представлены результаты гистологического исследования. В мозгах из группы отрицательного контроля отсутствовали какие-либо изменения, в то время как в мозгах из группы положительного контроля обнаружилось исчезновение повреждений многочисленных пирамидных нейронов на участке CA1. Введение аспирина (60 мг/кг), препарата сравнения, умеренно (32,4%) и значительно снизило гистологическую оценку повреждений мозга, что подтверждает результаты в экспериментальных условиях.

Введение ВВММ (200 мг/кг) значительно снизило гистологическую оценку повреждений мозга (ингибирование в объеме 89,8%), вызванных реперфузией билатеральной ишемии у монгольских песчанок. Отдельные чистые экстракты AcGS (132 мг/кг), AlcG (40 мг/кг) и AldG (28 мг/кг) значительно снизили гистологическую оценку в сравнении с группой положительного контроля. Сравнение между ВВММ и каждым из экстрактов его отдельных составляющих показало эффективность не только в отношении каждого чистого экстракта, но также в отношении суммарного эффекта этих трех веществ. Данный результат согласуется с наблюдениями в отношении клинических симптомов и подкрепляет критерий синергии между тремя составляющими, присутствующими в АИ, представленном ВВММ.

Введение ВВММ (200 мг/кг) также было эффективнее чистого экстракта AcGL (200 мг/кг) для защиты от гистологических повреждений, что подтверждает наблюдения в отношении клинических симптомов, лучшую неврологическую защиту за счет экстракта, который сочетает наличие жирных кислот в виде солей, жирных спиртов и жирных альдегидов. (Таблица 2)

Таблица 2. Воздействие на гистологическую оценку мозга монгольских песчанок с ишемией/реперфузией (И/Р)

Лекарственное средство Дозировка
(мг/кг/день) Гистологическая оценка Ингибирование
(%) Отрицательный контроль (наполнитель) 0 0,00 ± 0,00 *** -- Положительный контроль (наполнитель + И/Р) 0 2,96 ± 0,07 --- ВВММ + И/Р 200 0,30 ± 0,09***ab 89,8 AcGS + И/Р 132 1,97 ± 0,06 ** 33,4 AlcG + И/Р 40 2,32 ± 0,06 * 21,6 AldG + И/Р 28 2,66 ± 0,05 * 10,1 AcGL + И/Р 200 1,95 ± 0,07 ** 34,1 АСК + И/Р 60 2,00 ± 0,15 ** 32,4

Данные в виде среднего значения ± СПС (стандартная погрешность среднего значения)

*p<0,05, ** p<0,01, *** p<0,001: сравнение с группой положительного контроля.

при p < 0,05 в сравнении с AcGS и AcGL; b p <0,001: сравнение с AlcG и AldG

(U-критерий Манна-Уитни)

Результаты исследования окислительных изменений, связанных с процессом глобальной церебральной ишемии, вызванной ишемией и реперфузией у монгольских песчанок, представлены в таблице 3. Процесс ишемии и реперфузии привел к повышению концентрации МДА (показатель перокисного окисления липидов) и сульфгидрильных групп (показатель окисления белков) в плазме в группе положительного контроля по сравнению со здоровыми животными в группе отрицательного контроля.

Пероральное введение ВВММ (200 мг/кг) в значительной мере предотвратило увеличение концентрации МДА и СГ-групп в плазме (ингибирование в объеме 97,7 и 80% соответственно) в сравнении с группой положительного контроля. Отдельные чистые экстракты с AcGS (132 мг/кг) и AlcG (40 мг/кг) значительно снизили концентрацию МДА (ингибирование в объеме 41,5 и 25,9% соответственно) и СГ-групп (ингибирование в объеме 80 и 36% соответственно) в плазме в сравнении с группой положительного контроля. Кроме того, чистый экстракт с AldG (28 мг/кг) привел к слабому снижению МДА (ингибирование в объеме 11%) и СГ-групп (ингибирование в объеме 12%) без достижения статистической значимости. Сравнение между ВВММ и каждым из экстрактов его отдельных составляющих показало эффективность не только в отношении каждого чистого экстракта, но также в отношении суммарного эффекта этих трех веществ. Таким образом, очевиден антиоксидантный эффект настоящего нового вещества с ВВММ, которое защищает как липидные, так и белковые структуры, и эффективность которого соответствует синергическому действию трех его составляющих.

С другой стороны, экстракт AcGL (200 мг/кг) также обеспечил антиоксидантный эффект за счет значительного снижения значений МДА (ингибирование в объеме 40%) и СГ-групп (ингибирование в объеме 36%) в плазме по сравнению с группой положительного контроля. Однако, сравнение ВВММ (200 мг/кг) с AcGL (200 мг/кг) показало лучшую антиоксидантную эффективность ВВММ, что подкрепляет их повышенную нейропротективную эффективность, которая проявляется как в отношении симптомов, так и в оценке гистологических повреждений мозга.

Введение АСК (60 мг/кг) не привело к переменам окислительных изменений, что соответствует профилю ее действия, поскольку нейропротективная эффективность основывается на антитромбоцитарной активности, а не на антиоксидантных эффектах.

Таблица 3. Воздействие на концентрацию МДА и сульфгидрильных групп в плазме монгольских песчанок с церебральной ишемией/реперфузией (И/Р).

Лекарственное средство Дозировка
(мг/кг/день) МДА
(нмоль/мг/т) Ингибирование
(%) СГ
(ммоль) Ингибирование
(%) Негативный контроль
(наполнитель) 0 38,8 ± 3,01** -- 0,40 ± 0,02** -- Положительный контроль
(наполнитель + И/Р) 0 72,16 ± 5,88 --- 0,65 ± 0,03 --- ВВММ + И/Р 200 39,55 ± 1,55***ab 97,7 0,45 ± 0,01 ***ab 80 AcGS + И/Р 132 58,3 ± 1,8 ** 41,54 0,56 ± 0,02 ** 36 AlcG + И/Р 40 63,5 ± 2,3 * 25,9 0,59 ± 0,01 * 24 AldG + И/Р 28 68,50 ± 3,42 11 0,62 ± 0,02 12 AcGL + И/Р 200 58,8 ± 2,1 ** 40,04 0,56 ± 0,02 ** 36 АСК + И/Р 60 72,30 ± 4,63 0,0 0,62 ± 0,03 12

Данные в виде среднего значения ± СПС (стандартная погрешность среднего значения)

*p<0,05; ***p<0,001: сравнение с группой положительного контроля.

при p < 0,05 в сравнении с AcGS и AcGL; b p <0,001: сравнение с AlcG и AldG

(U-критерий Манна-Уитни)

Пример 4. Оценка нейропротективного эффекта на индукционной модели ишемии спинного мозга.

Нейропротективный эффект смеси ВВММ, являющейся целью настоящего изобретения, также исследовался с помощью экспериментальной модели провоцирования ишемии спинного мозга. Композиция, полученная в примере 2, была подвергнута предклиническому испытанию, при котором фармакологический эффект сравнивался с эффектами чистых экстрактов жирных кислот в виде солей (AcGS), жирных спиртов (AlcG) и альдегидов с высокой молекулярной массой (AldG), которые вводились в дозах, равных дозам каждого вещества, присутствующего в 200 мг/кг активного ингредиента с ВВММ. Кроме того, эффект ВВММ сравнивался с эффектом чистого экстракта свободных жирных кислот (AcGL), вводимым в равных дозах.

Использовались самцы новозеландского кролика (1,8-2,2 кг), которые в течение 15 дней адаптировались к лабораторным условиям (температура 20-25°C, относительная влажность 60 ± 5%, дневной/ночной цикл, равный 12 часам), со свободным доступом к воде и питанию.

В наполнителе из аравийской камеди/воды (1%) были приготовлены вещества ВВММ, AcGS, AlcG, AldG, AcG и аспирин. По завершении карантина кроликов разделили на 8 групп: группу отрицательного контроля, которая получала только наполнитель, и в ней не вызывалась ишемия, и 7 групп с ишемией спинного мозга: группа положительного контроля, которой вводился только наполнитель, и 6 групп, которым вводился ВВММ (200 мг/кг), AcGS (132 мг/кг), AlcG (40 мг/кг), AldG (28 мг/кг) и аспирин (2 мг/кг) в качестве препарата сравнения. Все лекарственные средства вводились перорально путем внутрижелудочной интубации (1 мл/2 кг массы тела) в течение 10 дней.

Для вызывания ишемии спинного мозга кроликам вводилось обезболивающее в виде тиопентала (20 мг/кг внутривенно). Брюшина была депилирована, и был нанесен антисептический раствор, был сделан надрез в передней центральной части и выполнено проникновение в забрюшинное пространство. Аорта и почечная артерия были иссечены и оголены. Аорта была перевязана путем установки зажима сразу под левой почечной артерией на 20 минут, после чего он был удален, и начался период реперфузии. Надрез был сшит. После 4 и 24 часов реперфузии неврологическая недостаточность животных оценивалась слепым методом 2 независимыми наблюдателями (согласно Зивин и соавт., 1982). Использовалась следующая шкала:

Оценка 0: полный паралич

Оценка 1: частичная неврологическая недостаточность

Оценка 3: норма

Животные были умерщвлены через 24 часа после реперфузии. Для гистологического анализа были извлечены срезы костного мозга. После извлечения срезов спинного мозга (поясничных) они фиксировались в растворе буферного формалина 10%. Образцы были обезвожены в спиртах с растущей концентрацией, залиты в парафин и нарезаны в виде срезов 4 мкм на горизонтальном микрометре. Срезы были окрашены гематоксилином и эозином. Были проведены последовательные наблюдения с помощью микроскопа Olympus BH2. Повреждения спинного мозга оценивались слепым методом по критериям, описанным Де Жиролами, 1982, и Зивин, 1982.

3 - без повреждений

2 - слабые повреждения: когда в образце серого вещества обнаруживается только 1 из 10 некротических нейронов с задействованием лишь 33% вещества.

1 - умеренные повреждения: когда в образце серого вещества обнаруживаются только 10 из 20 некротических нейронов с задействованием 33-66% вещества.

0 - сильные повреждения: когда в образце серого вещества обнаруживаются более 20 некротических нейронов с задействованием более 66% площади среза.

Результаты

Закупоривание и реперфузия брюшной аорты приводит к неврологическим повреждениям у кроликов, которые провоцируют паралич задних лап и неспособность к совершению прыжков. В таблице 4 представлена оценка клинических симптомов неврологической недостаточности в баллах, а также процент смертности. После 20 минут закупоривания брюшной аорты у животных из группы положительного контроля проявилась симптоматика с оценкой в балла[ значительно ниже, чем в группе отрицательного контроля (здоровые животные), с одновременным наличием смертности в объеме 80%. Введение аспирина (2 мг/кг), препарата сравнения, в значительной мере обеспечило защиту как от проявления клинических симптомов, так и от смертности, что подтверждает результаты, полученные в опытных условиях. Введение повторных доз ВВММ (200 мг/кг) значительно повысило оценку клинических симптомов в баллах на 4 и 24 часы реперфузии брюшной аорты и снизило общую смертность. Введение AcGS (132 мг/кг), AlcG (40 мг/кг) и AldG (28 мг/кг) обеспечило значительную защиту от клинических симптомов на 4 и 24 часы, в то время как AcGS снизил смертность на 50% в сравнении с группой положительного контроля (80%). Сравнение ВВММ (200 мг/кг) с чистыми экстрактами его отдельных составляющих также показало статистическую значимость с указанием повышенной эффективности ВВММ в сравнении с каждой составляющей по отдельности. Кроме того, экстракт AcGL (200 мг/кг) также обеспечил защиту от клинических симптомов и смертности, хотя его сравнение с ВВММ показало большую эффективность последнего.

Таким образом, сравнение результатов введения показало повышенную эффективность ВВММ в сравнении с другими веществами в плане улучшения клинических симптомов, после 4 и 24 часов реперфузии, а также в плане снижения смертности. Композиция с ВВММ обеспечила значительную защиту от смертности, например, смертность в группе, получавшей данное вещество (0,0%) была значительно ниже, чем в группе положительного контроля (80%), что указывает на защиту в объеме 100%.

Гистологический анализ (таблица 5) показал сильные повреждения спинного мозга животных в группе положительного контроля, которые выражались некрозом нейронов и вакуолизацией нейропилей. Аспирин обеспечил умеренную, но значительную защиту относительно группы положительного контроля.

Введение ВВММ (200 мг/кг) значительно ингибировало гистологические повреждения спинного мозга, спровоцированные неврологической недостаточностью, достигнув наивысшей эффективности среди всех примененных лекарственных средств (ингибирование в объеме 93,3%). Введение AcGS (132 мг/кг), AlcG (40 мг/кг) и AldG (28 мг/кг) обеспечило умеренную защиту от гистологических повреждений (ингибирование в объеме 40, 24 и 11,6% соответственно), причем эффективность ВВММ была выше, чем у каждого из них, и даже превосходила суммарные эффекты всех трех веществ. Данный результат указывает на наличие синергического эффекта у трех веществ, входящих в состав АИ, представленного ВВММ, в плане защиты от неврологической недостаточности спинного мозга кроликов с ишемией и реперфузией. Кроме того, степень защиты за счет ВВММ была выше, чем таковая за счет чистого экстракта AcGL, что подтверждает преимущества данного нового АИ.

В заключение, введение композиции с ВВММ продемонстрировало преимущества за счет увеличения полезного нейропротективного действия, эффективного уменьшения проявления клинических симптомов, смертности и гистологических повреждений в баллах в отношении спинного мозга.

Таблица 4. Воздействие на проявление симптомов и смертность у кроликов с повреждениями спинного мозга, вызванными ишемией/реперфузией (И/Р).

Лекарственное средство Дозировка
(мг/кг/день) Баллы Смертность
24 ч (%) 4 ч 24 ч Отрицательный
контроль (наполнитель) 0 2 ± 0*** 2 ± 0*** 0 Положительный контроль
(наполнитель + И/Р) 0 0,30 ± 0,17 0,15 ± 0,1 80 ВВММ + И/Р 200 1,75 ± 0,3***ab 1,5 ± 0,13***ab 0++ cd AcGS + И/Р 132 1,05 ± 0,26** 0,82 ± 0,18** 50 + AlcG + И/Р 40 0,82 ± 0,18 * 0,72 ± 0,11* 60 AldG + И/Р 28 0,54 ± 0,16 * 0,48 ± 0,1* 70 AcGL + И/Р 200 1,1 ± 0,22** 0,80 ± 0,15** 50 + АСК + И/Р 2 0,90 ± 0,25* 0,50 ± 0,24* 40+

Данные в виде среднего значения ± СПС (стандартная погрешность среднего значения)

*p<0,05, **p<0,01, ***p<0,001: сравнение с группой положительного контроля

при p < 0,05 в сравнении с AcGS и AcGL; b p <0,001: сравнение с AlcG и AldG

(U-критерий Манна-Уитни)

+p<0,05; ++p<0,01: сравнение с группой положительного контроля

c p<0,01: сравнение с AcGS и AcGL; d p< 0,05 сравнение с AlcG и AldG

(точный тест вероятности Фишера)

Таблица 5. Воздействие на гистологическую оценку спинного мозга кроликов с ишемией/реперфузией (И/Р).

Лекарственное средство Дозировка
(мг/кг/день) Гистологическая оценка Ингибирование
(%) Негативный контроль
(наполнитель) 0 3,00 ± 0,00 *** -- Положительный контроль
(наполнитель + И/Р) 0 0,00 ± 0,05 -- ВВММ + И/Р 200 2,80 ± 0,19***ab 93,3 AcGS + И/Р 132 1,20 ± 0,14 ** 40 AlcG + И/Р 40 0,72 ± 0,13 * 24 AldG + И/Р 28 0,35 ± 0,08 * 11,6 AcGL + И/Р 200 1,22 ± 0,13 ** 40,6 АСК + И/Р 60 0,9 ± 0,15 * 30

Данные в виде среднего значения ± СПС (стандартная погрешность среднего значения)

*p<0,05, ** p<0,01, *** p<0,001: сравнение с группой положительного контроля.

при p < 0,05 в сравнении с AcGS и AcGL; b p <0,001: сравнение с AlcG и AldG

(U-критерий Манна-Уитни)

Пример 5. Оценка нейропротективного действия на модель нейронального повреждения, вызванного токсическим веществом.

Нейропротективный эффект смеси с ВВММ, являющейся целью настоящего изобретения, также исследовался с помощью экспериментальной модели нейронального повреждения, вызванного дигеновой кислотой. Композиция, полученная в примере 2, была подвергнута предклиническому испытанию, при котором фармакологический эффект сравнивался с эффектами чистых экстрактов жирных кислот в виде солей (AcGS), жирных спиртов (AlcG) и альдегидов с высокой молекулярной массой (AldG), которые вводились в дозах, равных дозам каждого вещества, присутствующего в активном ингредиенте с ВВММ. Кроме того, она сравнивалась с чистым экстрактом свободных жирных кислот (AcGL).

Использовались самцы крыс Уистара (250-300 г), которые в течение 7 дней адаптировались к лабораторным условиям (температура 20-25°C, относительная влажность 60 ± 5%, дневной/ночной цикл, равный 12 часам), со свободным доступом к воде и питанию.

В наполнителе из аравийской камеди/воды (1%) были приготовлены вещества ВВММ, AcGL, AcGS, AlcG, AldG и аспирин. По окончании карантина крысы были распределены по 7 группам: группу отрицательного контроля без нейрональных повреждений, которая получала только наполнитель, и 6 групп с нейротоксичностью. Из числа последних одна группа была представлена группой положительного контроля и получала только наполнитель, а прочие 5 групп получали ВВММ (200 мг/кг), AcGS (132 мг/кг), AlcG (40 мг/кг), AldG (28 мг/кг), AcGL (200 мг/кг) и AcGL (200 мг/кг). Все лекарственные препараты вводились перорально посредством внутрижелудочной интубации (5 мл/кг массы тела) за 30 минут до провоцирования нейротоксичности.

Нейротоксичность вызывалась инъекцией дигеновой кислоты (6 мг/кг; внутрибрюшинно) крысам. Спустя час оценивалась исследовательская активность у крыс на открытом пространстве (Фернандес, 1987). Для этого крыс помещали в середине коробки (60,5 см в длину × 46 см в ширину, а дно было поделено на сектора по 14,5 см²), и выполнялся количественный подсчет количества пересечений разных секторов (С), а также количества их остановок или наклонов (Р) в течение 6 минут после их помещения в устройство.

По завершении поведенческого опыта крысы были умерщвлены в галотановой среде, а мозги были быстро извлечены и зафиксированы в растворе буферного формалина 10%. Далее тангенциальные срезы были залиты в парафин, срезаны и окрашены реактивом Шиффа в течение 30 секунд для определения гибели нейронов (Ли, 2000). Наличие ацидофильных нейронов (положительная реакция на дигеновую кислоту) - переменная, указывающая на нейрональное повреждение (Ли, 2002). Для подсчета клеток с положительной реакцией на дигеновую кислоту с помощью светового микроскопа было проведено исследование пирамидных нейронов CA1 и CA3 гиппокампа каждой крысы на площади 250 μм² в центре этих участков.

Результаты

Дигеновая кислота представляет собой аналог глутамата, который при системном или внутрицеребральном введении обеспечивает нейротоксичность вследствие избирательной деградации нейронов, в которой участвуют рецепторы данного вещества (Койл, 1983; Борг, 1991). В зависимости от введенной дозы дигеновая кислота может вызвать припадки без судорог и с судорогами таким образом, что дозы, не вызывающие судороги, провоцируют изменение спонтанного поведения и пагубно влияют на процесс, связанный с поддержанием внимания, что дает возможность проанализировать воздействие на поведение животных (Микулецкая, 1999).

Введение дигеновой кислоты вызвало уменьшение как составляющих исследовательской активности (пересечения и остановок), так и глобальной исследовательской активности в сравнении с группой отрицательного контроля, что соответствует изменениям поведения, описанным в литературных источниках, а также подтверждает действительность модели в данных условиях проведения опытов. Пероральное введение единичных доз с ВВММ (200 мг/кг) увеличило обе составляющие, а также общую активность в сравнении с группой положительного контроля, обеспечив наивысшую эффективность среди всех лекарственных средств. Введение AcGS (132 мг/кг), AlcG (40 мг/кг) и AldG (28 мг/кг) повысило количество пересечений и остановок, а также общую активность, несмотря на то, что последняя достигла лишь статистической значимости в целом. ВВММ (200 мг/кг) было эффективнее каждой своей отдельной составляющей (AcGS, AlcG и AldG) в отношении всех измеренных поведенческих переменных и даже превзошло суммарные эффекты всех трех веществ. Кроме того, эффективность ВВММ по увеличению пересечений, остановок и их суммированию была выше, чем эффективность экстракта AcGL (200 мг/кг), что подтверждает преимущество данного нового АИ. (Таблица 6)

На фиг. 7 представлены результаты гистологического исследования. Как ожидалось, системное введение дигеновой кислоты привело к дегенерации нейронов, что связано с воздействием, оказываемым экситотоксином на гиппокамп крыс, за счет провокации дегенерации пирамидных нейронов на участках гиппокампа CA1 и CA3 (Микулецкая, 199; Перес, 1996). Введение ВВММ (200 мг/кг) значительно снизило степень гибели нейронов (ингибирование в объеме 85,3%). Чистые экстракты AcGS (132 мг/кг), AlcG (40 мг/кг) и AldG (28 мг/кг) умеренно снизили гибель нейронов (ингибирование в объеме 35, 22,05 и 11,7% соответственно). Сравнение эффектов ВВММ с каждой из его отдельных составляющих показало значительные отличия с указанием на повышенную эффективность данного экстракта, которую обеспечивают данные три вещества в сочетании. В то же время, его эффективность была выше суммы отдельных эффектов каждого вещества по отдельности, что указывает на наличие синергического нейропротективного эффекта ВВММ в данной модели.

С другой стороны, экстракт AcGL (200 мг/кг) также произвел нейропротективный эффект, обеспечив умеренную защиту от гибели нейронов под действием дигеновой кислоты (ингибирование в объеме 30,8%), несмотря на то, что в данном случае ВВММ также превосходил его по эффективности.

Таким образом, факт того, что композиция с ВВММ в этой модели обеспечила защиту от гибели нейронов, доказывает ее нейропротективные эффекты, которые наблюдались в моделях, описанных в предыдущих примерах, а также ее повышенную эффективность в сравнении с остальными лекарственными средствами, равно как и синергический эффект ее составляющих представляет потенциальные преимущества при лечении нейродегенеративных заболеваний.

Таблица 6. Воздействие нейротоксичности, вызванной дигеновой кислотой (ДК), на исследовательскую активность крыс (на открытом пространстве).

Лекарственное средство Дозировка
(мг/кг/день) Пересечения (#) Остановки
(#) Пересечения + остановки
(#) Негативный контроль
(наполнитель) 0 40,0 ± 3,83*** 15,8 ± 1,88*** 55,8 ± 3,41*** Положительный контроль
(наполнитель + ДК) 0 17,7 ± 4,56 4,3 ± 1,12 22,0 ± 3,2 ВВММ + ДК 200 38,7 ± 2,5**ab 15,00 ± 1,9**ab 53,7 ± 4,3**ab AcGS + ДК 132 27,5 ± 2,3 * 10,3 ± 1,5 * 37,8 ± 3,5 * AlcG + ДК 40 24,0 ± 4,2* 8,1 ± 0,9 * 32,1 ± 2,2* AldG + ДК 28 21,8 ± 3,7 6,6 ± 1,1 28,4 ± 2,8* AcGL+ AA 200 28,6 ± 3,4* 10,2 ± 2,5* 38,8 ± 4,5*

Данные в виде среднего значения ± СПС (стандартная погрешность среднего значения)

*p<0,05, ** p<0,01, *** p<0,001: сравнение с группой положительного контроля.

при p < 0,05 в сравнении с AcGS и AcGL; b p <0,001: сравнение с AlcG и AldG

(U-критерий Манна-Уитни)

Таблица 7. Воздействие нейротоксичности, вызванной дигеновой кислотой (ДК), на гибель нейронов крыс.

Лекарственное средство Дозировка
(мг/кг/день) Гибель нейронов (кол-во) Ингибирование
(%) Негативный контроль
(наполнитель) 0 0,00 ± 0,00 *** -- Положительный контроль
(наполнитель + ДК) 0 34,00 ± 1,25 --- ВВММ + ДК 200 5,0 ± 0,8 ***ab 85,3 AcGS + ДК 132 22,1 ± 1,5 * 35 AlcG + ДК 40 26,5 ± 1,2 * 22,05 AldG + ДК 28 30,0 ± 0,6 * 11,7 AcGL+ ДК 200 23,5 ± 1,10 * 30,8

Данные в виде среднего значения ± СПС (стандартная погрешность среднего значения)

(количество клеток с положительной реакцией на окрашивание реактивом Шиффа)

*p<0,05, ** p<0,01, *** p<0,001: сравнение с группой положительного контроля.

при p < 0,05 в сравнении с AcGS и AcGL; b p <0,001: сравнение с AlcG и AldG

(U-критерий Манна-Уитни)

Пример 7. Получение таблеток

5 кг композиции, полученной в примере 1, перемешивались с 5 кг карбоксиметилцеллюлозы, 30 кг лактозы и 10 кг микрокристаллической целлюлозы в поворотном барабане из нержавеющей стали со скоростью 5 об/мин в течение 10 мин. Далее в предыдущую смесь добавлялся 1 кг стеарата магния и, продолжалось перемешивание конечных гранул в поворотном барабане со скоростью 5 об/мин в течение 5 минут.

Готовая смесь прессовалась на таблетировочном прессе со скоростью 30 000 таблеток/ч для получения таблеток со средней массой 450 мг. Они имели круглую выпуклую форму с обеих сторон диаметром 12 мм, время их растворения в воде составляло менее 20 мин, их истираемость составляла менее 1%, а твердость составила от 44 до 60 Н согласно способам Фармакопеи США.

Пример 8. Покрытие таблеток

На таблетки, полученные в предыдущем примере, можно нанести покрытие. Для этого они были смешаны со следующими ингредиентами в смесителе лопастного типа для образования суспензии для покрытия: 25 кг ацетата фталата целлюлозы в водном растворе 28%, 0,6 кг талька, 0,9 кг диоксида титана. Конечная масса покрытых таблеток составила 470 мг. В раствор для покрытия может быть добавлен краситель, и покрытые таблетки могут быть отполированы с помощью воска или парафина.

Пример 9. Получение капсул

В качестве альтернативного варианта гранулы, полученные в примере 7, могут быть заключены в капсулы. Для этой цели твердые желатиновые капсулы заполнялись 430 мг гранул, полученных в примере 7, за счет чего были получены капсулы со следующими характеристиками: средняя масса 455,0 +/- 30 мг, растворение в воде менее 20 минут.

Пример 10. Получение суспензии

200 г композиции, представленной в примере 2, 40 кг сорбитола, 5,00 г консервантов (смесь метил- и пропилпарабенов, растворенных в спирте) были смешаны со 158 литрами воды в реакторе из нержавеющей стали, оснащенном лопастным смесителем. Далее добавляли 2 кг яблочной эссенции и продолжали помешивание. Полученная суспензия упаковывалась со скоростью 115 мл в бутылки из желтого стекла с пластмассовыми крышками, а в качестве дозировки предлагалась одна столовая ложка (15 мл).

Изобретение относится к биотехнологии. Предложена смесь компонентов с высокой молекулярной массой для использования в качестве активного начала с нейропротективным и антиоксидантным эффектом, получаемая из воска сахарного тростника, при этом она состоит из жирных кислот с количеством атомов углерода от 26 до 36 в виде щелочи или щелочно-земельных солей, первичных алифатических спиртов с количеством атомов углерода от 24 до 34 и ненасыщенных αβ-альдегидов с количеством атомов углерода более 48. Также предложены пищевые фармацевтические композиции, которые содержат данную смесь. Изобретение обеспечивает нейропротективные эффекты за счет ингибирования неврологической недостаточности, также полученная смесь обладает антиоксидантным действием. 3 н. и 7 з.п. ф-лы, 7 табл., 10 пр.

1. Смесь компонентов с высокой молекулярной массой для использования в качестве активного начала с нейропротективным и антиоксидантным эффектом, получаемая из воска сахарного тростника, отличающаяся тем, что она состоит из жирных кислот с количеством атомов углерода от 26 до 36 в виде щелочи или щелочно-земельных солей, первичных алифатических спиртов с количеством атомов углерода от 24 до 34 и ненасыщенных αβ-альдегидов с количеством атомов углерода более 48.

2. Смесь по п. 1, отличающаяся тем, что она содержит жирные кислоты в виде щелочи или щелочно-земельных солей в объеме от 60 до 80% по массе в следующей пропорции: C26:0 от 0,3 до 5%, C27:0 от 0,3 до 5%, C28:0 от 20,0 до 40,0%, C29:0 от 1,0 до 3,0%, C30:0 от 12,0 до 25,0%, C31:0 от 0,5 до 2,0%, C32:0 от 5.0 до 15,0%, C33:0 от 0,5 до 3,0%, C34:0 от 5,0 до 18,0%, C35:0 от 0,3 до 1.5% и C36:0 от 1,0 до 8,0%; а также гомологические первичные алифатические спирты в количестве от 10 до 30 % по массе с количеством атомов углерода от 24 до 34, среди которых преобладает 1-октакозанол; а также альдегиды в количестве 10 до 30% по массе, среди которых преобладают ненасыщенные αβ с количеством атомов углерода более 48.

3. Смесь по пп. 1 и 2, отличающаяся тем, что вещества, содержащиеся в ней, получают из сырого или обработанного воска сахарного тростника Saccharum officinarum посредством процесса, который включает омыливание воска щелочными или щелочно-земельными гидроксидами с дальнейшими последовательными этапами экстракции и очистки фракций солей жирных кислот, спиртов и альдегидов с высокой молекулярной массой с помощью органических растворов или жидкостей с содержанием CO₂ в сверхкритических условиях, а также с последующим заключительным доведением концентрации указанных соединений до необходимой.

4. Смесь по пп. 1-3, отличающаяся тем, что они используются в нейропротективных и антиоксидантных композициях.

5. Пищевая композиция, отличающаяся тем, что содержит смесь по пп. 1-4 в дозировке от 5 до 50 мг на единицу дозирования, а также вспомогательные вещества, принятые в пищевой промышленности.

6. Пищевая композиция по п. 5, отличающаяся тем, что она выполнена в виде таблеток или капсул для перорального введения, при этом в дополнение к смеси соединений с высокой молекулярной массой она содержит вспомогательные вещества-наполнители, вяжущие вещества, разрыхлители, смазочные вещества и красители.

7. Пищевая композиция по п. 5, отличающаяся тем, что она выполнена в виде суспензии для перорального введения, при этом в дополнение к смеси соединений с высокой молекулярной массой она содержит суспендирующие вещества, консерванты, красители, подсластители, ароматизаторы и растворители.

8. Нейропротекторная и антиоксидантная фармацевтическая композиция, отличающаяся тем, что содержит смесь по пп. 1-4 в дозировке от 5 до 50 мг на единицу дозирования, а также вспомогательные вещества, принятые в фармацевтической отрасли.

9. Фармацевтическая композиция по п. 8, отличающаяся тем, что она выполнена в виде таблеток или капсул для перорального введения, при этом в дополнение к смеси соединений с высокой молекулярной массой она содержит вспомогательные вещества-наполнители, вяжущие вещества, разрыхлители, смазочные вещества и красители.

10. Фармацевтическая композиция по п. 8, отличающаяся тем, что она выполнена в виде суспензии для перорального введения, при этом в дополнение к смеси соединений с высокой молекулярной массой она содержит суспендирующие вещества, консерванты, красители, подсластители, ароматизаторы и растворители.