СУСПЕНЗИЯ ДЛЯ ПРИЕМА ВНУТРЬ С ПРОТИВОЯЗВЕННЫМ И ХИМИОПРОТЕКТИВНЫМ ДЕЙСТВИЕМ ПРИ РАКЕ ТОЛСТОЙ КИШКИ И СПОСОБ ЕЕ ПРИГОТОВЛЕНИЯ Российский патент 2023 года по МПК A61K9/10 A61K31/45 A61K35/64 A61P35/00 A61P1/04 

Настоящее изобретение относится к новой фармацевтической композиции, состоящей из водной суспензии для приема внутрь, а также к способу ее приготовления. Настоящая суспензия обладает противоязвенными эффектами на слизистую оболочку желудка и химиопротективными свойствами при раке толстой кишки и характеризуется тем, что в качестве действующих ингредиентов содержит очищенный экстракт жирных спиртов из очищенного воска медоносных пчел, размер частиц которого уменьшен до <1,5 микрометров посредством технологической процедуры, а также микрокристаллическую целлюлозу. Помимо жирных спиртов очищенный экстракт пчелиного воска содержит диолы, парафины и соли калия жирных кислот в качестве второстепенных компонентов. Настоящая новая композиция также включает ряд вспомогательных веществ, принятых к использованию в фармацевтической отрасли, включая: один или несколько эмульгаторов, используемых на этапе уменьшения размера частиц экстракта жирных спиртов, а также увлажняющие средства, подсластители, суспендирующие вещества, консерванты, ароматизаторы и воду.

Язвенная болезнь желудка представляет собой рану на слизистой оболочке желудка, а иногда и на мышечном слое желудка, вследствие которой вокруг образуется полость с острым и хроническим воспалением, что является основной причиной желудочно-кишечного кровотечения, одним из основных ее осложнений (Вэлли 2002, Садик 2009). Другие осложнения включают в себя прободение, пенетрацию и блокаду, и все из них ведут к значительному ухудшению качества жизни больного (Сун 2010). Язвенная болезнь возникает вследствие дисбаланса при воздействии агрессивных (кислотная секреция, пепсин, H. pylori, прием нестероидных противовоспалительных препаратов) и защитных (секреция слизи и бикарбонатов, капиллярное кровообращение, простагландины, факторы роста) факторов, среди которых основными причинами являются заражение H. pylori и продолжительный прием нестероидных противовоспалительных препаратов (Рамакришнан 2007). Несмотря на текущие достижения в лечении для борьбы с H. pylori, смертность от осложнений пептической язвы остается стабильной. В клинической практике наиболее широко используемыми препаратами для лечения язвенной болезни желудка являются ингибиторы протонного насоса и антагонисты Н2-гистаминовых рецепторов, несмотря на то, что они имеют различные побочные эффекты, такие как тошнота, запор, гинекомастия и импотенция (Форгерини 2018). Эти эффекты ограничивают их применение и обусловливают необходимость поиска и применения новых фармацевтических композиций, эффективно действующих в качестве противоязвенных средств, а также обладающих лучшими показателями безопасности. Наиболее широко используемые фармакологические модели для исследования потенциальных веществ с противоязвенным действием основываются на провоцировании язв щелочными веществами, этиловым спиртом или сшиванием выходного отдела желудка, как способ охвата различных возможных механизмов, посредством которых вещество, подлежащее оценке, оказывает противоязвенное действие.

С другой стороны, рак - одна из ведущих причин смертности, приводящая к более чем 8 миллионам летальных исходов ежегодно по всему миру, а рак толстой кишки - одна из пяти самых частых причин летального исхода по всему миру с тенденцией к возрастанию, особенно в странах с малым количеством ресурсов (Торре 2015, Шатено 2014). Учитывая высокую распространенность данного заболевания, а также тот факт, что его лечение проводится преимущественно хирургическим путем с последующей химиотерапией, поиск и использование химиопротективных фармацевтических композиций, которые могут быть применены для профилактики и лечения больных этим видом рака, или у которых присутствуют факторы риска этого заболевания, такие как процессы язвообразования в желудочно-кишечном тракте (язвенный колит, болезнь Крона и прочее), являются оправданными. Наиболее широко используемые фармакологические модели для изучения потенциально химиопротективных веществ для борьбы с данным заболеванием основываются на применении канцерогенных веществ. Среди вышеприведенного одним из наиболее эффективных и часто используемых веществ является 1,2-диметилгидразин. Метаболизм этого канцерогена приводит к выработке цитотоксичных веществ для колоноцитов в течение нескольких часов после индукции (Корпет 2003, Редди 2004).

С учетом того, что и язвенная болезнь желудка, и рак толстой кишки негативно влияют на качество жизни и могут привести к летальному исходу у людей, страдающих этими заболеваниями, что представляет собой важную проблему для здравоохранения во всем мире, а также с учетом факта того, что существующие традиционные способы лечения связаны с различными отрицательными эффектами, ограничивающими их клиническое применение, а также не всегда обеспечивают излечение или профилактику распространения данных заболеваний, необходимо найти эффективные лекарственные препараты для обоих заболеваний. Необходимость в новых безопасных и эффективных стратегиях лечения язвенной болезни и рака является текущей проблемой.

Очищенный экстракт пчелиного воска, используемый в композиции, являющейся предметом настоящего изобретения, а также способ ее приготовления были запатентованы ранее. Этот экстракт был заявлен в качестве естественной смеси, состоящей из высших первичных алифатических спиртов, для лечения язвенной болезни желудка и язвы двенадцатиперстной кишки, обладающий противовоспалительным действием, и наиболее пригодная форма его введения представлена таблетками, пилюлями или капсулами (CU 22412 A1), то есть, готовыми твердыми формами. В соответствии с вышеприведенным, на Кубе и в других странах в виде пищевой добавки была зарегистрирована таблетка с этим действующим веществом, содержащая 50 мг жирных спиртов в стандартной дозировке, в качестве функционального продукта питания или средства альтернативной медицины. Однако данная лекарственная форма имеет несколько недостатков, таких как: крупный размер (655 мг), что провоцирует использование большого количества вспомогательных веществ и высокую стоимость производства; рост количества отказов от использования двух вспомогательных веществ (кроскармеллозы натрия и поливинилпирролидона) во многих странах; а также крайне низкая биодоступность жирных спиртов, входящих в ее состав (<10 %).

Следует отметить, что фармакологическая активность данной таблетки в качестве противоязвенного вещества намного ниже активности, достигаемой за счет суспензии, являющейся предметом настоящего изобретения. Когда экстракт жирного спирта подвергается технологическим процессам резки или осаждения за счет изменения температуры и перемешивания при наличии конкретных эмульгаторов с целью уменьшения размера его частиц, а также при последующем получении водной суспензии, смешивании с микрокристаллической целлюлозой в пропорциях и с конкретной концентрацией, его фармакологическая эффективность синергически расширяется, что неизвестно на этом уровне техники. Водная суспензия по настоящему изобретению значительно расширяет действие как экстракта жирных спиртов в таблетированной форме, так и микрокристаллической целлюлозы, а также оказывает мощный химиопротективный эффект при раке толстой кишки, о чем ранее не было сведений в отношении ни одного из данных веществ, что можно увидеть в примерах осуществления.

С другой стороны, микрокристаллическая целлюлоза (полученная из альфа-целлюлозы) преимущественно использовалась для производства кремов и суспензий твердых частиц в косметике, моющих средствах, а также в качестве стабилизатора в продуктах питания (Нсор-Атиндана 2017). В фармацевтической отрасли она используется для приготовления таблеток и капсул, в качестве прессующего вещества и наполнителя, несмотря на то, что также сообщалось о ее способности к секвестрованию желчных кислот (Паниагуа 1999), и ее использовали как действующий ингредиент в суспензии с противоязвенным действием с дозой 12 % (Барзага 2004). Следует отметить, что фармакологический эффект, заявленный в отношении суспензии 12 %, намного ниже, чем эффект, достигаемый с помощью суспензии, раскрываемой в настоящем изобретении, доза микрокристаллической целлюлозы в которой намного ниже (≤ 2 %), что представлено в примере осуществления номер 3. Это является результатом синергического эффекта, который возникает при смешивании микрокристаллической целлюлозы в конкретных пропорциях и с конкретной концентрацией с очищенным экстрактом жирных спиртов, получаемых из пчелиного воска, что улучшает ее противоязвенное действие, а также придает ей мощное химиопротективное действие при лечении рака толстой кишки, которое отсутствует в предыдущих лекарственных формах, о чем неизвестно на этом уровне техники.

Использование переработанного пчелиного воска и микрокристаллической целлюлозы в фармацевтической отрасли до настоящего момента ограничивалось лекарственными формами в виде твердых лекарственных средств, которые обеспечивают контролируемое высвобождение действующего ингредиента (Каллаи 2010; Рейнер 2018), или же использованием обоих ингредиентов в качестве вспомогательных веществ-наполнителей в суппозиториях или иных лекарственных формах (Ли 2018). Совместное использование экстракта жирных спиртов, полученных из пчелиного воска, и микрокристаллической целлюлозы в водной суспензии, когда оба вещества действуют синергично, сообщая композиции мощное противоязвенное и химиопротективное действие, также ранее не указывалось до появления настоящего изобретения. При использовании обоих веществ в таблетированной форме (CU 22412 A1) эффекты, наблюдаемые в отношении водной суспензии, описываемой согласно настоящему изобретению, также не достигаются, что представлено в примерах осуществления.

Процедура получения фармацевтической композиции по настоящему изобретению характеризуется следующим: А) смешивание экстракта жирных спиртов, полученного из пчелиного воска (1-2 %), с полиоксиэтиленовым гидрогенезированным касторовым маслом или полисорбатом (2-4 %), которые используются в качестве эмульгаторов; В) выполнение технологического процесса в отношении этой смеси для уменьшения размера частиц экстракта до <1,5 микрометров, что можно осуществить посредством оборудования для гомогенизации, способного выполнять измельчение частиц с частотой вращения >1 000 об/мин и при температуре >80°C в течение >1 минуты, или выполнять перемешивание этой смеси со скоростью > 1 000 об/мин и при температуре >80°C в течение > 1 минуты с последующим понижением температуры до < 60°C при сохранении той же скорости перемешивания; С) введение микрокристаллической целлюлозы в качестве второго действующего ингредиента (1-2 %) без прекращения помешивания, метил- и пропилпарабенов в качестве консервантов (0,1-0,6 %), глицерина в качестве увлажняющего средства (20-30 %), сорбитола или сахарина натрия в качестве подсластителей (1-6 %), карбоксиметилцеллюлозы в качестве суспендирующего средства (0,1-1 %), эфирных масел в качестве ароматизаторов (0,01-0,05 %) и очищенной воды (50-70 %). В результате проведения данной процедуры получают новую фармацевтическую композицию, характеризующуюся тем, что она представляет собой водную суспензию для приема внутрь, действующие ингредиенты которой представлены: экстрактом жирных спиртов и микрокристаллической целлюлозой, действующих синергично, что придает ей мощное противоязвенное и химиопротективное действие.

Данная новая фармацевтическая композиция предназначена для профилактики или лечения процессов язвообразования и других связанных с этим заболеваний с учетом защитного характера ее воздействия на желудочно-кишечный тракт, а также химиопротективного действия при лечении рака толстой кишки. Пропорция, в которой действующие ингредиенты присутствуют в настоящей фармацевтической композиции, является результатом нескольких исследований, проведенных с целью стандартизации элементов как действующих ингредиентов, так и вспомогательных веществ в готовой композиции в плане конкретной концентрации и пропорций, которые обеспечивают необходимые фармакологические эффекты в результате синергичного действия этих действующих ингредиентов в составе композиции. Мощные фармакологические эффекты настоящей композиции намного превосходят эффекты раздельного введения обоих действующих ингредиентов даже в дозировке, превышающей дозировку в настоящей композиции, что представлено в примерах осуществления, а также она демонстрирует возникновение синергического действия, которое отсутствует на текущем уровне техники.

Преимуществом данной композиции над существующими является то, что эффективность ее противоязвенного действия выше, чем у зарегистрированных на данный момент таблеток с 50 мг экстракта жирных спиртов из пчелиного воска, а также выше на 12 % чем у суспензии микрокристаллической целлюлозы, о разработке которой сообщалось ранее; иными словами, настоящая композиция обладает противоязвенным действием, намного превосходящим обе предыдущие лекарственные формы даже при уменьшенных дозировках действующих ингредиентов. С другой стороны, было продемонстрировано, что настоящая композиция оказывает эффективное химиопротективное действие при лечении рака толстой кишки, которое значительно превосходит действие обоих действующих ингредиентов по отдельности в аналогичных суспензиях, что представлено в Примере осуществления 6. Ранее данное действие, являющееся результатом синергичного действия обоих веществ в суспензии по настоящему изобретению, в отношении очищенного экстракта пчелиного воска или микрокристаллической целлюлозы не наблюдалось. Кроме того, промышленное производство этой суспензии дешевле производства таблеток с 50 мг жирных спиртов и не предполагает использование каких-либо вспомогательных веществ с ограничениями по использованию в фармацевтической отрасли в настоящий момент времени.

Настоящее изобретение имеет промышленное применение, композиция является новой, и как суспензия сама по себе, так и способ ее приготовления обладают изобретательским уровнем, поскольку из предыдущего уровня техники неизвестно о том, чтобы смесь из двух разных действующих ингредиентов с противоязвенным действием с конкретными пропорциями и концентрацией (ни один из которых не демонстрирует химопротективное действие на процессы, провоцирующие рак) показала синергичное действие с фармакологическим полезным эффектом при воздействии на язвенную болезнь желудка, а также химиопротективное действие при лечении рака толстой кишки. Настоящее изобретение относится к пищевой и фармацевтической отраслям, поскольку получаемая композиция может использоваться в качестве пищевой добавки благодаря ее полезному профилактическому действию на желудочно-кишечный тракт, а также в качестве лекарственного средства для лечения язв и рака.

Пример 1.

Во вспомогательную емкость из нержавеющей стали объемом 50 л (R1) добавили 12 л очищенной воды, и небольшими порциями с интервалами и помешиванием вводили 1 кг микрокристаллической целлюлозы. Перемешивание выполнялось на скорости 60 об/мин в течение 30 минут до тех пор, пока не была получена однородная паста. Были добавлены 5 кг сорбитола и 24 кг глицерина с перемешиванием, после чего перемешивание продолжалось в течение 10 минут для получения Смеси 1 (M1). С другой стороны, в реакторе из нержавеющей стали емкостью 300 л были нагреты до 90°C 60 л воды, 10 л были отобраны и помещены во вспомогательную емкость (R2), были введены 3 кг полисорбата 80 с перемешиванием на скорости 1 200 об/мин, и все вместе перемешивалось в течение 5 минут на скорости 1 200 об/мин. Небольшими порциями с интервалами были добавлены 1,2 кг очищенного экстракта жирных спиртов, после чего перемешивание продолжалось в течение 10 минут для получения Смеси 2 (М2), а затем температура была понижена до 30 ± 2°C без прекращения перемешивания. В другом сосуде в 1,5 л этилового спирта и с перемешиванием на скорости 60 об/мин были растворены 0,18 кг метилпарабена и 0,02 кг пропилпарабена. Были увлажнены 0,2 кг карбоксиметилцеллюлозы натрия A/V, введены 0,03 кг ароматизатора и проведено перемешивание в течение 5 минут для получения Смеси 3 (М3).

В другом вспомогательном сосуде емкостью 5 л было выполнено смешивание 1 кг глицерина с 0,5 л этилового спирта и перемешивание в течение 5 минут со скоростью 60 об/мин для получения Смеси 4 (М4). В реактор со смесью М2 была введена смесь М1 с извлечением остатков с минимальным количеством воды, отделенной в R2, и проведено перемешивание в со скоростью 60 об/мин в течение 10 минут. По истечении этого времени был введен М3, а с М4 были извлечены остатки. В последующем остатки суспензии были извлечены с помощью горячей воды в сосуде R2 и проводилось перемешивание в течение 10 минут. Далее перемешивание было прекращено, и смесь настаивалась в течение 10 часов. По истечении этого времени остаток спирта был распылен на поверхность суспензии и был разбавлен водой до получения 100 литров суспензии. В течение 5 минут выполнялось перемешивание на скорости 1 200 об/мин, суспензия была отфильтрована, и был отобран образец для контроля качества. Готовый препарат был разлит в склянки из темного стекла, закрытые пластмассовыми закручивающимися крышками, а склянки были помещены на хранение при комнатной температуре.

Пример 2.

Во вспомогательную емкость из нержавеющей стали объемом 50 л (R1) добавили 12 л очищенной воды, и понемногу с интервалами и помешиванием на скорости 40 об/мин вводили 1 кг микрокристаллической целлюлозы. Перемешивание выполнялось в течение 30 минут до тех пор, пока не была получена однородная паста. Были добавлены 5 кг сорбитола и 24 кг глицерина с перемешиванием на скорости 40 об/мин, после чего перемешивание продолжалось в течение 10 минут для получения Смеси 1 (M1). С другой стороны, в реакторе из нержавеющей стали емкостью 300 л, оснащенном системой гомогенизации политронного типа, был выполнен нагрев 60 л воды до температуры 90°C, 10 литров воды были отобраны и помещены во вспомогательную емкость (R2) с перемешиванием. Были добавлены 3 кг кремофора RH 40 с перемешиванием в течение 5 минут на скорости 9 000 об/мин. Небольшими порциями с интервалами были добавлены 1,2 кг очищенного экстракта жирных спиртов, после чего перемешивание продолжалось в течение 10 минут для получения Смеси 2 (М2), а затем температура была понижена до 30 ± 2°C без прекращения перемешивания. В другой емкости в 1,5 литрах этилового спирта были растворены 0,18 л метилпарабена и 0,02 кг пропилпарабена с перемешиванием на скорости 40 об/мин. Были увлажнены 0,3 кг карбоксиметилцеллюлозы натрия A/V, введены 0,03 кг ароматизатора и проведено перемешивание в течение 5 минут для получения Смеси 3 (М3).

В другом вспомогательном сосуде емкостью 5 л было выполнено смешивание 1 кг глицерина с 0,5 л этилового спирта и перемешивание в течение 5 минут для получения смеси 4 (М4). В реактор со смесью М2 была введена смесь М1 с извлечением остатков с минимальным количеством воды, отделенной в R2, и проведено перемешивание в со скоростью 40 об/мин в течение 10 минут. По истечении этого времени был введен М3, а с М4 были извлечены остатки. В последующем остатки суспензии были извлечены с помощью горячей воды в сосуде R2, и в течение 10 минут проводилось перемешивание на скорости 1 000 об/мин. Далее перемешивание было прекращено, и смесь настаивалась в течение 12 часов. По истечении этого времени остаток спирта был распылен на поверхность суспензии и был разбавлен водой до получения 100 литров суспензии. В течение 5 минут выполнялось перемешивание на скорости 1 000 об/мин, суспензия была отфильтрована, и был отобран образец для контроля качества. Готовый препарат был разлит в склянки из темного стекла, закрытые пластмассовыми закручивающимися крышками, а склянки были помещены на хранение при комнатной температуре.

Пример 3.

Композиция, полученная в примере 1 (FAMC), прошла предклинические испытания на животных, во время которых ее противоязвенное действие было сопоставлено с таковым у зарегистрированной таблетки с жирным спиртом (RAT), а также у суспензий жирных спиртов (FA) и микрокристаллической целлюлозы (MC) соответственно, причем последние два препарата производились с дозировкой жирных спиртов и микрокристаллической целлюлозы, равной дозировке обоих веществ в суспензии FAMC. Опытная модель, использованная в данном испытании, представляла собой индуцирование язвенной болезни желудка у крыс с помощью гидроксида натрия.

Использовались самцы крыс Спрег-Доули (250-300 г), которые в течение 7 дней адаптировались к стандартным лабораторным условиям при температуре 20-25°C, относительной влажности 60 ± 5 %, дневном/ночном цикле, равном 12 часам, а также со свободным доступом к воде и стандартному питанию для грызунов. По завершении карантина животных в произвольном порядке распределили по 10 опытным группам (10 крыс/группа): группа отрицательного контроля, которой давали только наполнитель, и 9 групп с язвенной болезнью, индуцированной с помощью 0,2 н раствора гидроксида натрия, и среди этих групп группа положительного контроля не получала лечение противоязвенным веществом, а 8 групп получали лечение оцениваемыми веществами, как представлено в таблице 1. Суспензии вводились в состоянии, как есть, в то время как RAT готовилась в наполнителе из гуммиарабика/воды. (1 %). Использование группы отрицательного контроля (не подвергавшейся воздействию гидроксида натрия), а также группы положительного контроля (подвергшейся воздействию без лечения каким-либо веществом) позволило подтвердить работоспособность модели в экспериментальных условиях, а также провести сравнение эффективности противоязвенного действия оцениваемых веществ.

Все лекарства и гидроксид натрия вводились внутрь, одноразовой дозой посредством внутрижелудочной интубации. Выбранные дозы находятся в диапазоне эффективных доз, подтвержденных опытным путем ранее. Для провоцирования язвенной болезни желудка животных не кормили в течение 24 часов до начала опыта с предоставлением свободного доступа к воде. Спустя один час после введения одноразовых доз наполнителя и различных лекарственных средств каждой крысе посредством внутрижелудочной интубации вводилось вещество, провоцирующее язвообразование (1 мл/200 г). Спустя один час крысы были умерщвлены в галотановой среде, желудки были извлечены и вскрыты по большой кривизне.

Двумя наблюдателями был произведен подсчет количества очаговых поражений слизистой методом независимого слепого наблюдения. Результаты оценки очаговых поражений были определены как совокупность размеров очаговых поражений в мм² (Охара 1992). Статистическое сопоставление усредненных участков язвообразования в разных группах проводилось с помощью непараметрического U-критерия Манна-Уитни. Изначально был задан уровень значимости α = 0,05, а также использовался коммерческий пакет программ Statistic for Windows (версия 4.2, StatSoft, Inc, США).

Таблица 1. Действие суспензий FAMC, MC, FA и RAT на язвенную болезнь желудка у крыс, спровоцированную гидроксидом натрия. Лекарственное средство Дозы
(мг/кг/день) Показатель язвенной болезни
(мм²) I (%) Отрицательный контроль (наполнитель) 0 0 ± 0,00*** ^-- Положительный контроль (наполнитель + NaOH) 0 83,70 ± 13,8 -- MC + NaOH 25 80 ± 10,6 4,4 MC + NaOH 200 75,4 ± 12,5 9,9 FA + NaOH 25 67,2 ± 11,2 19,7 FA + NaOH 200 50,3 ± 13,5** 39,9 RAT + NaOH 25 51,4 ± 10,4 ** Δ 38,6 RAT + NaOH 200 40,5 ± 12,70*** Δ 51,6 FAMC + NaOH 25 11,3 ± 3.00*** °a b 86,5 FAMC + NaOH 200 1,2 ± 0,3*** ° a b 98,6

FAMC: суспензия жирных спиртов с добавлением микрокристаллической целлюлозы

MC: суспензия микрокристаллической целлюлозы

FA: суспензия жирных спиртов

RAT: таблетка с жирными спиртами, зарегистрированная как пищевая добавка

Ингибирование I, усредненные данные ± ССО (стандартная средняя ошибка)

Сопоставление * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,0001 с группой положительного контроля

Сопоставление Δ p< 0,05, ° p <0.0001 с аналогичной дозой FA

Сопоставление a p <0,0001 с аналогичной дозой MC

Сопоставление b p <0.0001 с аналогичной дозой RAT

Как представлено в таблице 1, введение NaOH (0,2 н раствора) внутрь спровоцировало образование очаговых поражений желудка у животных в группе положительного контроля в сравнении с группой здоровых животных (отрицательный контроль), что доказывает работоспособность модели в условиях проведения опыта.

Введение внутрь FAMC, FA и RAT привело к снижению показателя язвенной болезни желудка, в то время как введение CM привело к небольшому снижению показателя, не являющемуся значительным. Суспензия FAMC (25 и 200 мг/кг) вызвала уменьшение показателя язвенной болезни желудка, которое оказалось значительным не только в сравнении с группой положительного контроля, но также и в сравнении с аналогичными дозами суспензий MC, FA и RAT. Таким образом, наивысшая эффективность противоязвенного действия была получена за счет суспензии FAMC, особенно с учетом того, что она привела к ~100 % (полному) ингибированию показателя язвенной болезни желудка при наибольшей испытуемой дозе, равной 200 мг/кг.

Кроме того, суспензия FAMC продемонстрировала процент ингибирования, превосходящий суммарный показатель, полученный за счет суспензий MC и FA по отдельности, что доказывает наличие синергизма при использовании FAMC, причем наличие экстракта FA и MC в этих пропорциях и концентрации обеспечивает повышенную эффективность противоязвенного действия.

Также следует отметить, что противоязвенное действие суспензии FAMC намного превосходит таковое у суспензии 12 % CM (Барзага 2004) при оценке обеих суспензий в моделях провоцирования язвообразования при щелочном гастрите. Таким образом, процент ингибирования, достигаемый с помощью суспензии FAMC 25 и 200 мг/кг (86,5 и 98,6 % соответственно), превосходит таковой у МС, доза которого больше на 50 % (356,38 мг/кг) (Барзага 2004), что соответствует синергичному действию FAMC, наблюдаемому в настоящем примере.

Также следует отметить, что наименьшая доза суспензии FAMC 25 мг/кг, испытанная в настоящем примере, обеспечила более высокий процент ингибирования язв желудка, равный 86,5 %, что указывает на то, что, помимо высокой эффективности, суспензия FAMC также обладает мощным действием.

Пример 4.

Композиция, полученная в примере 2 (FAMC), прошла предклинические испытания на животных, во время которых ее противоязвенное действие было сопоставлено с таковым у зарегистрированной таблетки с жирным спиртом (RAT), а также у суспензий жирных спиртов (FA) и микрокристаллической целлюлозы (MC), причем последние два препарата производились с дозировкой жирных спиртов и микрокристаллической целлюлозы, равной дозировке обоих веществ в суспензии FAMC. Опытная модель, использованная в данном испытании, представляла собой индуцирование язвенной болезни желудка у крыс с помощью этилового спирта.

Использовались самцы крыс Спрег-Доули (250-300 г), которые в течение 7 дней адаптировались к стандартным лабораторным условиям при температуре 20-25°C, относительной влажности 60 ± 5 %, дневном/ночном цикле, равном 12 часам, а также со свободным доступом к воде и стандартному питанию для грызунов. По завершении карантина животных в произвольном порядке распределили по 11 опытным группам (10 крыс/группа): группа отрицательного контроля, которой давали только наполнитель, и 10 групп с язвенной болезнью, индуцированной с помощью этилового спирта 60 %, и среди этих групп группа положительного контроля не получала лечение противоязвенным веществом, а 8 групп получали лечение оцениваемыми веществами и омепразолом, как представлено в таблице 2. Суспензии вводились в состоянии, как есть, в то время как таблетка готовилась в суспензии гуммиарабика 1 %.

Использование группы отрицательного контроля (не подвергавшейся воздействию этилового спирта), а также группы положительного контроля (подвергшейся воздействию без лечения каким-либо веществом) позволило подтвердить работоспособность модели в экспериментальных условиях, а также провести сравнение эффективности противоязвенного действия оцениваемых веществ. Все лекарства и этиловый спирт вводились внутрь, одноразовой дозой посредством внутрижелудочной интубации. Выбранные дозы находятся в диапазоне эффективных доз, подтвержденных опытным путем ранее, и доза омепразола (20 мг/кг) в данной модели также является эффективной. Для провоцирования язвенной болезни желудка животных не кормили в течение 24 часов до начала опыта с предоставлением свободного доступа к воде. Спустя один час после введения одноразовых доз наполнителя и различных лекарственных средств каждой крысе посредством внутрижелудочной интубации вводилось вещество, провоцирующее язвообразование (1 мл/200 г). Спустя один час крысы были умерщвлены в галотановой среде, желудки были извлечены и вскрыты по большой кривизне. Подсчет показателя язвенной болезни желудка проводился, как представлено в примере 3.

Результаты показателя язвообразования, спровоцированного этиловым спиртом (таблица 2), показали, что введение этилового спирта внутрь спровоцировало образование очаговых поражений желудка у животных в группе положительного контроля в сравнении с животными в группе отрицательного контроля (здоровых). У животных, которым вводилась суспензия FAMC в дозах 25 и 200 мг/кг, продемонстрировали меньший показатель язвообразования в сравнении с больными животными (группа положительного контроля). Лечение этой суспензией привело к явному и значительному уменьшению показателя язвенной болезни желудка с показателями ингибирования 93,95 и 99,85 % при дозах 25 и 200 мг/кг соответственно. Статистическое сравнение действия при использовании разных лекарственных средств с одинаковыми дозами продемонстрировало значительные отличия с явно выраженным фактом того, что суспензия FAMC продемонстрировала наилучшие результаты, превосходящие даже суммарный процент ингибирования суспензий FA и MC, показав наилучшую защиту слизистой оболочки желудка. Контрольное вещество (омепразол) также привело к уменьшению показателя язвенной болезни желудка, что подтверждает действительность результатов, полученных в данных опытных условиях. Следует отметить, что суспензия FAMC обеспечила действие, превосходящее таковое у омепразола, хоть они и вводились в разных дозах, поскольку их сравнение не являлось целью исследования.

Таблица 2. Действие суспензий FAMC, MC, FA и RAT на язвенную болезнь желудка у крыс, спровоцированную этиловым спиртом. Лекарственное средство Дозы
(мг/кг/день) Показатель язвенной болезни
(мм²) I (%) Отрицательный контроль (наполнитель) 0 0,15 ± 0,07*** ^-- Положительный контроль (наполнитель) 0 169,09 ± 12,8 -- MC + этиловый спирт 25 155,5 ± 11,6 8 MC + этиловый спирт 200 133,3 ± 13,7 21,1 FA + этиловый спирт 25 149,13 ± 12,2 11,7 FA + этиловый спирт 200 89,19 ± 14,5** 47,3 RAT + этиловый спирт 25 106,60 ± 11,40** Δ 37 RAT + этиловый спирт 200 41,74 ± 13,70*** Δ 75,4 OMP + этиловый спирт 20 35,97 ± 14,48*** 78,8 FAMC + этиловый спирт 25 10,38 ± 3,00*** °a b 93,95 FAMC + этиловый спирт 200 0,40 ± 0,34*** ° a b 99,85

FAMC: суспензия жирных спиртов с добавлением микрокристаллической целлюлозы

MC: суспензия микрокристаллической целлюлозы

FA: суспензия жирных спиртов

RAT: таблетка с жирными спиртами, зарегистрированная как пищевая добавка

Ингибирование I, усредненные данные ± ССО (стандартная средняя ошибка)

Сопоставление * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,0001 с группой положительного контроля

Сопоставление Δ p< 0,05, ° p <0.0001 с аналогичной дозой FA

Сопоставление a p <0,0001 с аналогичной дозой MC

сопоставление b p <0,0001 с аналогичной дозой RAT

(U-критерий Манна-Уитни)

В качестве заключения относительно испытания, представленного в настоящем примере, можно утверждать, что введение суспензии FAMC внутрь привело к явному и значительному ингибированию образования язвенной болезни желудка у крыс, спровоцированной этиловым спиртом, с большей эффективностью, чем достигаемая с помощью зарегистрированной таблетки с суспензиями FA и MC при тех же дозах. Кроме того, наблюдалось, что эффективность суспензии FAMC превосходила суммарную эффективность суспензий FA и MC при использовании обеих оцениваемых доз, что доказывает наличие синергичного действия композиции по настоящему изобретению.

Пример 5.

Композиция, полученная в примере 2 (FAMC), прошла предклинические испытания на животных, во время которых ее противоязвенное действие было сопоставлено с таковым у зарегистрированной таблетки с жирным спиртом (RAT), а также у суспензий жирных спиртов (FA) и микрокристаллической целлюлозы (MC), причем последние два препарата производились с дозировкой жирных спиртов и микрокристаллической целлюлозы, равной дозировке обоих веществ в суспензии FAMC. Опытная модель, использованная в данном испытании, была представлена индуцированием язвенной болезни желудка у крыс путем сшивания выходного отдела желудка, что является кислотно зависимой моделью в отличие от модели, представленной в предыдущем примере.

Использовались самцы крыс Спрег-Доули (250-300 г), которые в течение 7 дней адаптировались к стандартным лабораторным условиям при температуре 20-25°C, относительной влажности 60 ± 5 %, дневном/ночном цикле, равном 12 часам, а также со свободным доступом к воде и стандартному питанию для грызунов. По завершении карантина животных в произвольном порядке распределили по 11 опытным группам (10 крыс/группа): группа отрицательного контроля, которой давали только наполнитель, и 10 групп с язвенной болезнью, индуцированной с помощью сшивания выходного отдела желудка, и среди этих групп группа положительного контроля не получала лечение противоязвенным веществом, а 8 групп получали лечение оцениваемыми веществами и омепразолом в качестве контрольного вещества, как представлено в таблице 3. Суспензии вводились, как есть, а также была приготовлена суспензия с 1 % гуммиарабика для введения в таблетированной форме. Использование группы отрицательного контроля (не подвергавшейся сшиванию выходного отдела желудка), а также группы положительного контроля (подвергшейся воздействию без лечения каким-либо веществом) позволило подтвердить работоспособность модели в экспериментальных условиях, а также провести сравнение эффективности противоязвенного действия оцениваемых веществ.

Все лекарства вводились внутрь, одноразовой дозой посредством внутрижелудочной интубации. Выбранные дозы находятся в диапазоне эффективных доз, подтвержденных опытным путем ранее, и доза омепразола (20 мг/кг) в данной модели также является эффективной. Для провоцирования язвенной болезни желудка животных не кормили в течение 24 часов до начала опыта с предоставлением свободного доступа к воде. Спустя один час после введения одноразовой дозы наполнителя и разных лекарственных средств животные посредством внутрибрюшной инъекции получили обезболивающее в виде тиопентала натрия (35 мг/кг), в передней трети средней части брюшного одела был выполнен надрез длиной 2 см, открывший желудок, и было выполнено сшивание сфинктера привратника шелковой нитью номер 2, а также шелковой нитью была сшита стенка брюшной полости. Спустя один час крысы были умерщвлены в галотановой среде, желудки были извлечены, а также был выполнен сбор желудочного сока в пробирки для испытаний. Последний был центрифугирован на скорости 3 000 об/мин, был отделен супернатант и подсчитано его количество в мл. Желудки были вскрыты по большой кривизне, и был проведен подсчет показателя язвенной болезни желудка согласно описанию в примере 3.

Результаты показателя язвообразования, спровоцированного сшиванием выходного отдела желудка (таблица 3), показали образование очаговых поражений желудка у животных в группе положительного контроля в сравнении с животными в группе отрицательного контроля (здоровых). У животных, которым вводилась суспензия FAMC в дозах 25 и 200 мг/кг, продемонстрировали меньший показатель язвообразования в сравнении с больными животными (группа положительного контроля). Лечение этой суспензией привело к явному и значительному уменьшению показателя язвенной болезни желудка с показателями ингибирования 76,3 и 99,7 % при дозах 25 и 200 мг/кг соответственно. Статистическое сравнение эффектов различных лекарственных средств с аналогичной дозой показало, что оцениваемое вещество, представленное суспензией FAMC, обеспечивает наибольшую эффективность противоязвенного действия, поскольку оно значительно превосходило RAT, а также суспензии с одиночным лекарственным средством FA и MC соответственно. Кроме того, факт того, что ингибирование, обеспечиваемое суспензией FAMC, превосходило суммарный эффект, достигаемый при отдельном использовании MC и FA, доказывает наличие синергичного действия этих двух компонентов в смеси суспензии FAMC.

В то же время, омепразол, контрольное вещество, также привел к значительному уменьшению показателя язвенной болезни желудка, что подтверждает действительность результатов, полученных в данных опытных условиях. Объем желудочного сока под действием суспензий FAMC, MC, FA или RAT не изменился, вследствие чего предполагается, что противоязвенное действие этих веществ не зависит от выработки желудочного сока. Данная переменная уменьшилась только при использовании омепразола, что согласуется с механизмом его действия как антисекреторного ингибитора протонного насоса.

Таблица 3. Действие суспензий FAMC, MC, FA и RAT на язвенную болезнь желудка у крыс, спровоцированную сшиванием выходного отдела желудка. Лекарственное средство Дозы
(мг/кг/день) Показатель язвенной болезни
(мм²) I (%) Объем желудочного сока Отрицательный контроль (наполнитель) 0 0,0 ± 0,00*** ^-- 0,0 ± 0,00*** Положительный контроль (наполнитель + сшивание выходного отдела желудка) 0 23,2 ± 3,2 -- 9,9 ± 1,2 MC + сшивание выходного отдела желудка 25 21,1 ± 1,6 9 10 ± 1,05 MC + сшивание выходного отдела желудка 200 20,5 ± 1,7 11,6 9,5 ± 1,2 FA + сшивание выходного отдела желудка 25 18,3 ± 2,2 21,1 9,8 ± 1,3 FA + сшивание выходного отдела желудка 200 13,3 ± 3,1** 42,7 9,7 ± 1,1 RAT + сшивание выходного отдела желудка 25 16,1 ± 2,40** 30,6 9,8 ± 1,1 RAT + сшивание выходного отдела желудка 200 10,6 ± 3,2 *** 54,3 9,6 ± 0,8 OMP + сшивание выходного отдела желудка 20 3,9 ± 0,5 *** 83,2 3,4 ± 0,4 *** FAMC + сшивание выходного отдела желудка 25 5,5 ± 0,7 *** °a b 76,3 9,5 ± 0,7 FAMC + сшивание выходного отдела желудка 200 0,3 ± 0,3*** ° a b 98,7 9,4 ± 0,9

FAMC: суспензия жирных спиртов с добавлением микрокристаллической целлюлозы

MC: суспензия микрокристаллической целлюлозы

FA: суспензия жирных спиртов

RAT: таблетка с жирными спиртами, зарегистрированная как пищевая добавка

Ингибирование I, усредненные данные ± ССО (стандартная средняя ошибка)

Сопоставление * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,0001 с группой положительного контроля

Сопоставление ° p <0,0001 с аналогичной дозой FA

Сопоставление a p <0,0001 с аналогичной дозой MC

Сопоставление b p <0.0001 с аналогичной дозой RAT

(U-критерий Манна-Уитни)

В качестве заключения относительно испытания, представленного в настоящем примере, можно утверждать, что введение суспензии FAMC внутрь привело к явному и значительному ингибированию образования язвенной болезни желудка у крыс, спровоцированной сшиванием выходного отдела желудка, с большей эффективностью, чем достигаемая с помощью зарегистрированной таблетки и суспензиями FA и MC при тех же дозах. Кроме того, наблюдалось, что эффективность суспензии FAMC превосходила суммарную эффективность суспензий FA и MC при использовании обеих оцениваемых доз, что доказывает наличие синергичного действия композиции по настоящему изобретению.

Пример 6.

Композиция, полученная в примере 1 (FAMC), прошла предклинические испытания на животных, во время которых ее химиопротективное действие было сопоставлено с таковым у зарегистрированной таблетки с жирными спиртами (RAT), а также у суспензий жирных спиртов (FA) и микрокристаллической целлюлозы (MC), причем суспензии жирных спиртов (FA) и микрокристаллической целлюлозы (MC) производились с концентрацией, равной концентрации обоих веществ в суспензии FAMC. Для проведения оценки у мышей Хольтцмана с помощью 1,2-диметилгидразина (DMH) был спровоцирован рак толстой кишки. Животные трехмесячного возраста с массой тела 250 ± 20 г были в произвольном порядке распределены по следующим группам: группа введения 2 мл/кг полисорбата натрия; группа введения 20 мг/кг DMH; и группа введения DMH и суспензий FAMC, RAT, FA и MC.

DMH был приготовлен в дистиллированной воде 4 мг/мл с использованием 0,4 мг/мл ЭДТА в качестве стабилизатора при показателе рН 6,5. Он вводился подкожным путем в объеме 20 мг/кг массы тела один раз в неделю в течение 18 недель, в то время как суспензии и полисорбат вводились внутрь в течение 18-недельного периода проведения исследования. По истечении запланированного времени мыши умерщвлялись с помощью 10 мг/кг пентобарбитала спустя час после последнего введения, а толстая кишка извлекалась для проведения гистопатологического анализа. Ее осторожно промывали солевым раствором для удаления крови и содержимого, налипшего на ткани; участки опухолевых образований были зафиксированы в растворе буферного формалина 10 % в течение 7 дней; далее были выбраны и зафиксированы в парафине части размером 3-5 мкм, которые подверглись окрашиванию гематоксилином и эозином. Оценка основывалась на наблюдениях под микроскопом на предмет неоплазии и дисплазии. Статистический анализ для оценки химиопротективного действия был представлен критерием Шапиро-Уилка для проверки нормальности, непараметрическим критерием Крускала-Уоллиса и критерием Фишера.

В таблице 4 представлены сводные данные по процентному соотношению гистопатологических наблюдений толстой кишки крыс, включенных в исследование, с индуцированным раком толстой кишки и после приема различных суспензий. При применении критерия Крускала-Уоллиса с уровнем достоверности 95 % было установлено значение p < 0,05 во всех случаях, результаты по разным группам значительно разнятся по всем типам лекарственных средств и фазе развития рака (нормальная, дисплазия и неоплазия). У всех животных, получивших только DMH (100 %), развилась дисплазия или неоплазия, что доказывает работоспособность модели. Единственная группа, в которой не наблюдалось проявление неоплазии, была представлена группой, получившей композицию FAMC, и в ней только у 20 % животных развилась дисплазия, что подразумевает, что 80 % этих животных не подверглись пагубному воздействию канцерогена.

В группе, получавшей суспензии FA, MC и RAT, только у 20, 10 и 10 % животных соответственно отсутствовало поражение веществом, провоцирующим рак. Таким образом, было продемонстрировано наличие соответствующего синергичного действия между экстрактом спиртов и МС, что придает суспензии по настоящему изобретению химиопротективное действие. Химиопротективное действие суспензии FAMC значительно превосходило таковое у суспензий с отдельными веществами.

Таблица 4. Результаты гистопатологического анализа толстой кишки крыс, получивших наполнитель (PS), диметилгидразин (DMH) и различные суспензии (частота в процентах). Результат гистопатологического анализа Лекарственное средство Частота (%) Без изменений (норма) Наполнитель (раствор полисорбата) 100 DMH 0 +++ DMH + суспензия FAMC 80 DMH + суспензия RAT 10 ++ DMH + суспензия FA 20++ DMH + суспензия MC 10++ Дисплазия Наполнитель (раствор полисорбата) 0 DMH 30+ DMH + суспензия FAMC 20 DMH + суспензия RAT 40+ DMH + суспензия FA 50++ DMH + суспензия MC 60++ Неоплазия Наполнитель (раствор полисорбата) 0 DMH 70+++ DMH + суспензия FAMC 0 DMH + суспензия RAT 50++ DMH + суспензия FA 30+ DMH + суспензия MC 30+

PS: полисорбат натрия 3 %. Статистическая оценка проводилась с помощью критерия Крускала-Уоллиса с целью определения распространения в каждой группе рака относительно категорий лекарственных средств; уровень значимости составлял 0,05. Норма (p=0,01), дисплазия (p=0,049), неоплазия (p=0,01).

Сопоставление + p<0,05; ++ p<0,01; +++ p<0,001 с группой, получившей наполнитель в виде полисорбата (критерий Фишера).

В заключение, показания гистопатологического исследования показали, что суспензия, содержащая смесь жирных спиртов и микрокристаллической целлюлозы (FAMC), оказалась единственной, продемонстрировавшей значительную противоопухолевую активность при раке толстой кишки у крыс, спровоцированном диметилгидразином, с ингибированием неоплазии в 100 % случаев.

Изобретение относится к области медицины, а именно к гастроэнтерологии и онкологии, и предназначено для профилактики и лечения язвенной болезни желудка и рака толстой кишки. Суспензия для приема внутрь с противоязвенным и химиопротективным действием при раке толстой кишки представляет собой водную суспензию, в качестве действующих ингредиентов содержащую очищенный экстракт жирных спиртов из очищенного воска пчёл Apis mellifera и микрокристаллическую целлюлозу. Использование изобретения обеспечивает сильные противоязвенные и химиопротективные эффекты за счет синергического действия компонентов. 3 з.п. ф-лы, 4 табл., 6 пр.

1. Суспензия для приема внутрь с противоязвенным и химиопротективным действием при раке толстой кишки, отличающаяся тем, что она представляет собой водную суспензию, в качестве действующих ингредиентов содержащую очищенный экстракт жирных спиртов из очищенного воска пчёл Apis mellifera и микрокристаллическую целлюлозу.

2. Суспензия для приема внутрь по п. 1, отличающаяся тем, что ингредиенты имеют следующие пропорции: 1-2% экстракта жирных спиртов; 1-2% микрокристаллической целлюлозы; 2-4% эмульгаторов; 0,1-0,6% консервантов; 20-30% увлажняющих средств; 1-6% подсластителей; 0,1-1% суспендирующих веществ; 0,01-0,05% ароматизаторов и 50-70% очищенной воды.

3. Суспензия для приема внутрь по п. 2, отличающаяся тем, что размер частиц очищенного экстракта жирных спиртов из очищенного пчелиного воска составляет менее 1,5 микрометров.

4. Суспензия для приема внутрь по пп. 2 и 3, отличающаяся тем, что эмульгатор представлен полиоксиэтиленовым гидрогенезированным касторовым маслом или полисорбатом, консерванты представлены метилом и пропилпарабенами, увлажняющее средство представлено глицерином, подсластители представлены сорбитолом или сахарином натрия, суспендирующее вещество представлено карбоксиметилцеллюлозой, а ароматизатор – эфирным маслом.