Способ определения чувствительности к хемостерилянтам самцов комаров Советский патент 1983 года по МПК A01M1/00 

11 Изобретение относитея к медицине и сельскому хозяйству, в частности к способам борьбы с насекомыми - переносчиками болезней человека путем половой стерилизации химическими веществами, и может быть использовано при выборе препаратов стерилизующего действия и их доз для различных видов комаров. Известен способ определения чувствитальности к хемостерилянтом самцов комаров Aedes aegyptij заключаю щийся в том, что самцов на предимагинальной фазе развития - фазе личин ки обрабатывают хемостерилянтом, выделяют из имаго самцов придаточные железы и.по объему желез определяют чувствительность самцов к хемостерилянту С1 3Однако этот способ является очень неточным, так как придаточные железы самцов Aedes.aegypti не имеют определенной формы и их лишь условно принимают за конус и по соответствую :щей формуле рассчитывают объем, при изменении нормальной формы, например после копуляции, при стрессовых воздействиях и т.п., когда железы могут принять еще более неопределенные очертания, количественная оценка их по объему известным способом вообще становится невозможной. Целью изобретения является повыше ние точности и сокращение времени определения. Поставленная цель достигается тем что обработку самцов комаров проводят на . фазе куколки хемостерилянтом в дозе, дающей уровень стерильности 98-100%, придаточные железы выделяют из имаго в возрасте 0,5-2 сут а чувствительность определ;;ют по количеству белка, содержащегося в приТ а б л и ц а 1 0 даточных железах, и сравнивают с количеством белка у необработанных хемостерилянтом самцов. Предложенный способ был испытан на комарах Aedes aegypti L, Anophe-. les atroparvus. П p и M e p 1. В качестве хемостерилянта использовали тиофосфамид (тиотэф). Брали 300 куколок самцов, из которых 120 - контрольные, 180 - обработаны 0,9 тиотэфом,Т.е. дозой, дающей уровень стерильности 98, путем погружения в раствор на t ч с последующим промыванием в чистой дехлорированной воде. Вылетевших самцов из обработанных и необработанных куколок содержали в одинаковых условиях при температуре ZStI С и относительной влажности 75t5. Из контрольных и обработанных самцов в возрасте 0,5 сут выделили по 25 пар придаточных желез в физиологическом растворе aeges, из них экстрагировали секрет. Для этого выделенные железы перенесли в пробирку с 1,28 М NaCl и поместили на 2 ч в холодные условия. Надосадок отделили от осадка центрофугированием при 8000 об/мин в течение 10 мин и определили в нем количество белка по методу Лоури в модификации Hartee, Для сравнения была определена чувствительность самцов комаров к тиотэфу по прототипу (по объему придаточных желез). Результаты .действия обработки тиотэфом самцов Aedes aegypti на фазе куколки (0,9 раствор - 4ч) на секреторную активность и размеры придаточных желез имаго в возрасте 0,5 сут приведены в табл. 1.

0,,0262,2 100

0,37±0,02100,0

100

361±7 П3±3 1,22tO,08 96,8 . ЗбО±10 11514 1,2.6+0,08 100,0

3101

Как видно из таблицы, обработка самцов Aedes aegypti дозой тиотэфа (0,9 раствор - i ч фаза куколка) оказывает отрицательное воздействие на секреторную активность придаточных желез имаго: у стерилизованных самцов в возрасте 0,5 сут дефицит белка полового секрета - в придаточных железах 37,8 по сравнению с контролем (не обработанными самцами) (табл. 1, графы 3, А). Разница достоверна при Р 0,95. В то же время при определении чувствительности по известному способу следует, что

Стерили., Как видно из табл. 2, отрицательное воздействие минимально эффективной дозы тиотэфа, установленное на 0,5 суточных самцах (табл. 1 графы 3, 4), стойко сохраняется у комаров старшего возраста: у стерилизованных самцов в возрасте 1 сут дефицит белка полового секрета в придаточных) железах возрос до 45,% по сравнению .с контролем (табл. 2 графл 3,) .Разница достоверна при ,95. Сравнивая данные, полученные пред-

лагаемым способом на одновозрастных самцах Aedes aegypti (табл. 1 графа 4, табл. 2 графа Ц} и Anopheles

04

взятая доза тиотэфа не вызывает угнетающего действия на половую железу.

П р и м е р 2. Обработку самцов

комаров проводили как в примере 1. Придаточные железы выделяли из самцов в возрасУе 1 сут.

Результаты действия обработки тиотэфом самцов Aedes aegypti на фазе куколки (0,9 раствор - А ч) на секреторную активность и размеры придаточных желез имаго в возрасте 1 сут представлены в табл. 2.

I Т а б л и ц а 2

Примерз. Способ был Mcnbitaif на самцах комаров Anopheles atroparvus на фазе куколки, обработку самцов проводили как в примере 1.

Результаты действия обработки тиотэфом самцов Anopheles atroparvus на фазе куколки (О ,9 раствор - k ч) на секреторную активность придаточных желез имаго в возрасте 0,5 сут представлены в табл. 3.

ТаблицаЗ

что указанные виды самцов 4 еравноценны по чувствительности к установленным минимально эффективным дозам atroparvus (табл. 3 графа 5) видно.

тиотэфа. Исходя из полученных данных можно считать, что 0, раствор, тиотэфа при действии на куколок в течение-4 ч является оптимальной дозой для Anopheles atroparvus, так как у них сохраняется секреторная активность придаточных желез с пределах нормы при требуемом уровне стерильности яиц. Для самцов Aedes aegypti эта доза токсична, так как обработка kyкoлoк О. раствором тиотэфа в течение 4 ч сопровождается ингибированием активности половых желез у имаго.

Угнетение секреции половых желез у самцов приводит к снижению количества полового секрета, передаваемого самке при копуляции, что, в свою очередь, существенно влияет на половое поведение самок.

В гредложенном способе используют стерилизованных самцов не старше 2-х дневного возраста, поскольку установлено, что половые железы стерилизованных и нормальных самцов в этот период находятся в идентичном состоянии, а именно, в фазе накопления секрета и поэтому количественно

сопоставимы.

Предложенный способ может быть использован для определения чувствительности к хемостерилянтам у самцов с железами любой морфологии. Способ является более точным, требует меньшего времени определения, позволяет выявлять изменения йа более ранних стадиях воздействия стерилянтом, т.е. на стадиях, когда морфологические изменения желез еще не регистрируются .

Преимуществом способа является также, то что им оценивается функциональное состояние желез стерилизованных самцов непосредственно - по количеству секретированного белка, р не косвенно - по размерам желез, как это делается по известному метоДУ.