Способ определения половой эякуляторной активности самца комара Советский патент 1984 года по МПК A01K67/00 

Изобретение относится к медицине и сельскому хозяйству, в частности к размножению насекомых, и может быть использовано при разработке оптимальных методов массового культивирования комаров в токсикологии при разработке методов борьбы и оце ке эффективности мероприятий против насекомых - переносчиков возбудителей паразитарных болезней. Самец насекомых при копуляции извергает в половые пути самки семенную жидкость (эякулят), в состав которой входят сперматозоиды и секрет половых придаточных желез. Секрет половых придаточных желез самца играет жизненно важную роль в процессах нормального размножения насекомых. Самцу он необходим для активации спермы, сохранения ее подвижности, для переноса спермы в саыку при копуляции. Самке он необходим для нормального оплодотворения яиц, обеспечения жизнеспособности и нормального развития эмбриона, а также для стимуляции яйцекладки. Без секрета придаточных желез самец не в состоянии осеменить самку, а самка дать потомство. Известен способ определения половой зякуляторной активности самца ко мара по количеству попавших в самку сперматозоидов. Способ основан на извлечении из прокопулировавшей самки органов половой системы(сперматек, бурсы) и подсчете в них числа сперматозоидов I , Однако этот способ очень трудоемкий и неточный, так как подсчет спер матозоидов (в среднем 20 .OOu в каждой , самке) проводится визуально и с боль шим приближением. Известен способ определения количества секрета придаточных желез, необходимого для моногамии. Способ включает получение экстракта из конца брюшка, содержащего продаточные железы, разведение экстракта, микроинъекции в самку и выражение количества секрета, вызывающего моногамию у самки, в эквивалентах (1/2, 1/А, ... 1/t28 часть железы), а не в абсолютных значениях 2 . Наиболее близким к предлагаемому является способ определения половой эякуляторной активности самца комара, в основе которого лежит совместное содержание самца с самками, из49влечение сперматек и бурсы из самок и определение методом фазово- контрастного микроскопирования степени наполненности их эякулятом, т.е. секретом со сперматозоидами (много-мало) 3. Недостатком этого способа является оценка эякулята по совокупности входящих в его состав компонентов, а не раздельно по сперматозоидам и секрету придаточных желез. Кроме того, эякулят оценивается не в абсолютных значениях, а в относительных единицах с помощью символов, которые означают полное (++) или частичное (+) заполнение эякулятом сперматек и бурсы, либо отсутствие его в сперматеках (-) и бурсе (о). Цель изобретения - повышение точности способа. Поставленная цель достигается тем, что,согласно способу определения Половой эякуляторной активности самца комара, самца содержат совместно с самками в течение 50-70 мин, количество извергаемой семенной жидкости оценивают путем сравнения количества секрета в придаточньпс железах у прокопулировавшего и девственного самцов, а половую эякуляторную активность определяют по количеству извергаемого самцсм белка секрета в процессе одной копуляции. Предлагаемый способ был испытан на желтолихорадочном комаре Aedes аеeypti, культивируемом в лаборатории. Пример 1. Определение количества белка секрета, извергаемого из придаточных желез самцов Ae.aegypti в процессе первой копуляции. В контроль брали 25 девственньк самцов 3-х дневного возраста, рассаженных по одному в садок. В опыт брали брачные 50 девственных самцов того же возраста и 50 самок 5-ти дневого возраста, рассаженных попарно в садок. Через 1 ч из самок выделяли и вскрывали сперматеки. Из 50 самок у 40 в сперматеках были сперматозоиды.у 10 - нет. Следовательно, из 50 самцов прокопулировало 40, каждый из которых опознан по осемененной самке. Из 25 девственных и 40 прокопулировавших самцов вьзделили придаточые железы в физиологическом растворе Aedes. Из них экстрагиро вали екрет 1,28 М раствором ЫаС1,опредега1и количество белка в экстракте. Для

того вьщеленные железы перенесли в пробирку с 1,28 М раствором NaClи поестили на 24 ч в холодные условия. Надосадок отделили от осадка центрифугированием при 800 об/мин в течение 10 мин и определили в нем количество белка по методу LowryB модификации Нагtree.

Установили,что в придаточных железах содержится: у 25 девственных самцов - 18,9 мкг белка секрета, т.е. в среднем 0,756 мкг белка/особь, у 40 однократно прокопулировавших самцов - 15,8 мкг белка секрета, т.е. в среднем 0,395 мкг белка/особь. Белка секрета в придаточных железах у однократно прокопулировавшего самца .меньше по сравнению с контролем на 0,361 мкг (0,756 мкг - 0,395 мкг 0,361 мкг).

Следовательно, половая эякуляторная активность самца Ae.Aegypti при однократной копуляции составила в среднем 0,361 мкг белка секрета на самку.

Пример 2. Определение количества белка секрета, извергаемого самцом Ae.aegypti при многократной копуляции.

В контроль брали 25 девственных самцов, как в примере 1 . В опыт брали гаремы: 25 самцов, к каждому из Которых подсаживали по 10- самок 5-ти дневного возраста (всего 250 самок). Через час из самок вьщелили и вскрыли сперматеки. Из 250 самок у 110 в сперматеках .были сперматозоиды, следовательно 25 подопытных самцов совершили 110 копуляций, в среднем каждый самец копулировал 4,4 раза.

Из 25 девственных и 25 прокопулировавших самцов вьщелили придаточные железы в физиологическом растворе Aedes, из них экстрагировали секрет и определили количество белка, как в примере 1.

Установили, что в придаточных железах содержится: у 25 девственных самцов- 18,6 мкг белка секрета, т.е. в среднем 0,744 мкг белка секрета/особь, у 25 многократно прокопулировавших самцов - 2,5 мкг белка секрета, т.е. в среднем 0,1 мкг белка/особь. Белка секрета в придаточных железах самца, осеменившего 4,4 самки меньше по сравненю) с девственными на 0,644 мкг (0,744 мкг - 0,1 мкг 0,644 мкг). На одну самку пришлось в среднем 0,146 мкг белка секрета (0,644 мкг белка : 4,4 копуляций 0,146 мкг белка). Следовательно, половая эякуляторная активность самца при ьшогократной копуляции составила в среднем 0,146 мкг белка секрета на самку.

Видно, что половая эякуляторная активность самца непостоянна. Она истощается при многократной копуляции, так как на .каждую осемененную самку приходится в среднем 0,146 мкг белка секрета (пример 2), вместо 0,361 мкг белка у самок.из брачной Пары (пример 1).

В таблице суммированы результаты опытов, поставленных на самцах Ae.aegypti 3-х дневного врзраста с нормальной копулятивной активностью (4,2 +; 0,3 самки), из которых видно, что предлагаемый способ является чувствител ньм и обеспечивает хорошую воспроизводимость результатов.

В предлагаемом способе совместное содержание самца с самками осуществляется в течение 50-70 мин, поскольку установлено, что в этот период самцы в гаремах полностью реализуют свою половую потенцию. Способ позволяет определить максимальную половую эякуляторную активность самца комара по брачным парам и истощение ее в зависимости от числа осемененных самок. Предлагаемым способом возможно определить количество секрета, вызывающее моногамию у самки. Так максимальное количество эякулируемого самцом секрета (0,36liO,11 мкг белка) можно рассматривать как верхний предел значений, вызывающих моногамию у самки Aedes aegypti. Способ может быть использован с диагностической целью для выявления в репродуктивной системе самца тончайших нарушений, которые могут существ ;нно повлиять на репродуктивный потенциал самки и брачное поведение.

Число совершенных самцом копуляций

0,750±0,05 0,75010,05

4,2±0,3

опытов

Количество белка секрета (мкг), извергаемого в составе эякулента в самку М4м м, %

3 3

0,361±0,011 3,1 0,14610,017 11,6

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГОЛОВОЙ ЭЯКУЛЯТОРНОЙ АКТИВНОСТИ .СМЦА КОМАРА, включаощий его совместное содержание с самками и определение количества извергаемой семенной жидкости, о тл и ч а ю щ и йс я. тем, что, с целью повьшения точности способа, совместное содержание самца и самок осуществляют в течение 50-70 мин, количество извергаемой семенной жидкости оценивают путем сравнения количества секрета в придаточных железах у прокопулировавшего и девственного самцов, а половую эякуляторную активность определяют по количеству i извергаемого самцом белка секрета в процессе одной копуляции.