Образец для электронно-микроскопической ультрамикротомии Советский патент 1983 года по МПК G01N1/28 

Изобретение относится к технике подготовки матер ала для исследования в эпектро1гаом микроскопе, а точнее к образ цам для. прицельной электронно-микроскопической ультрамикротомии. По основному авт. св. № 86645О, известен образец для электронно-микроско пической ультракгакротомин, состоящий из иилгощра, выполненного из твердого материала с низким коэффициентом линейного расширения и низкой текучестью, например из керамики, соединенного своей торцовой поверхностью с конусом, вьтолненным из заполимеризованной заливочной среды, .в терминальной (нижней) части которого расположен исследуемый объект размером О.,1-О,2 мм L-l. Однако известный образец предназначен для выполнения рандомизированной электронно-мккроскопической упьтрамикротомии с объекта, например кусочка ткани, когда выбор определенного участка образца не требуется, и для исследователя не имеет значения с Какой клет- кп будет изготовлен ультратонкий срез. Следовательно, этот образед нельзя использовать для прицельной электронномикроскопической ультрамикротомии, так как цилиццр оптически непрозрачен, и предварительное изучение (выбор) объекта невозможно. Кроме того, в терминальной части конуса образца нельзя располагать множество объектов, различающихся между собой по тем или иным морфологическим критериям, которые можно было бы подвергнуть анализу в световом микро скопе, с целью выбора для ультрамикрото- мии определенного типа клеток, например, мегакариоцитов костного мозга, так как все типы клеток этого препарата должны быть расположены в одной плоскости (рас пластаны на горизонтальной поверхности) для их просмотра в световом микроскопе Цель изобретения - повышение информа тивности образца.. Указанная цель достигается тем, что в офазце, содержащем цилшщр, вьгаопненный из твердого материала с низким коэффициентом линейного расширения и низкой текучестью и снабженный конусом, вьшолненным из заполимеризованной заливочной среды, которая жестко сое,цинена с пиливдром, а также исследуемый объект, расположенный в нижней конической части образца, конус выполнен усеченным, а ЦИЛ1ЩДР - оптически прозрачным в видимой части спектра. Отношение диаметров оснований усеченного конуса составляет 1,25-2,0, ЦИЛИНДР выполнен в виде тонкостенной трубки, внутренний диаметр которой не менее диаметра меньшего основания конуса. В результате такого вьшолнения элементов образца образуется плоская поверхность в терминальной части конуса, на которой могут быть распластаны биообъекты, например гетерогенные клетки пушстата костного мозга или сложные по составу гистоструктуры, что создает благоприятные условия для их просмотра и выбора с помощью светового микроскопа на этапе подготовки образца к прицельной ультрамикротомии. Соотношение диаметров основания (базальной части) и меньшего основания (терминальной части) усеченного конуса целесообразно выбирать в пределах 1,,0. Это соотношение является наиболее оптимальным и имеет значение для процедурь из- , готовления образцов (извлечения готовых офазцов из ячеек матрицы). Увеличение диаметра терминальной части усеченного конуса (приближение усечённого конуса по форме к цилшадру) приведет к затруднению этой процедуры и по данной причине является нецелесообразным. Уменьшение диаметра терминальной части конуса такаю неоправдано, так как это приведет к снижению полеаюй площдци терминальной поверхности и, следовательно, на ней может быть размещено значительно меньшее количество гетерогенных объектов, что соответственно ухудшает условия выбора искомых структур вследствие их малочисленности на условной единице площади терминальной пов хности конуса. Этот фактор приобретает особое значение при выборе для прицельной ультрамикротомии крайне малочисленных интересующих исследователя объектов, располагающихся среди множества прочих. Циливдр может быть выполнен в виде полого циливдра с тонкими стенками (оптически прозрачного в продольном направлении в вищимой части спектра, что необходимо для прохождения света от конденсатора светового микроскопа и освещения снизу терминальной поверхности усеченного конуса с находящимися на ней биообъектами), например из керамики, причем внутренний диаметр полого цилиндра должен быть не менее диаметра терминальной части усеченного конуса, так как в случае уменьшения диаметра просвета цилиндра освещенность поверхности усеченного конуса, на которой находятся объекты будет неполной (затененной поКраям), что снижает возможность полноценного просмотра объектов на всей поверхности усеченного конуса, а .увеличение диаметра неоправдано, так как избыток света по п иферии площади конуса с объектами не будет использован. На чертеже показан образец для прицельной электронно-микроскопической ультрамикротомии. Образец состоит из заполимеризованноТо заливочного материала I в виде усеченного конуса, прочно соединенного своей д более широкой частью с торцом пoлo oци- лицпра 2, выполненного нз твердого материала, например из керамики (керамической трубки), а на термической части усеченного конуса расположены исследуемые j объекты 3, предназначенные для выбора под контролем светового микроскопа. С образцом работают следующим образом. Образец помещают на предметный сто- 2о лик светового микроскопа так, чтобы исследуемые объекты 3 находились сверху, а снизу от ковденсатора микроскопа направляют свет, который, проходя через полый цилиццр 2 образца, освещает объек-25 ты, распластанные на терминальной части конуса I. Под визуальным контролем с помощью метчика отмечают содержащий искстлые объекты участок на поверхности образца, на котором будет заточена пирамвда и произведена прицельная ультрамик ротомия. После приготовления пирамидки (операция по срезанию вокруг выбрШ1Ного участка офазца, например определенной выфанной клетки, заполимеризоваиной заливочной среды со всет.1и прочими объектами, которым не было отдано предпочтение в процессе отбора участка с теми или иными структурами на поверхности усеченного конуса) образец плотно зажисмают в патроне объектодержателя ультрамикротома, причем зажатию подвергают только цилиндр 2, обла,аающнй низким коэффициентом линейного расширения и низкой текучестью. Так как силы деформации не действуют на заливочный материал, наход5ПД11йся на торце образца, в последнем устраняется эффект текучести, в силу чего получают ультратонкие срезы ста- бильной толщины в соответствии с заданными параметрами. О стабильности толщины приготовленных срезов сввдетельствует однозначная интерференционная картина отраженного света в серии ультратонких срезов. . Таким образом, конструктивные особенности образца обеспечивают возможность размещения множества гетерогенных объектов на т минальной части усеченкого конуса, освещения распластанных объектов снизу от конпенсатора светового микроскопа через светооптически прозрачный (полый) цилинар и, следоватепьно, выбор интересующих исследователя структур из множества гетерогенных объектов для последующей прицельной упьтрамикротомии. При этом образец обладает всеми достоинствами, свойственными двухфрагментным образцам, главным из которых является отсутствие твердотельной текучести образца при зажатии его в патроне объектодержателя ультрамикротома и, следовательно, высокое качество изготавливаемых срезов. Кроме того, при изготовлении предлагаёмых образцов достигают значительной экономии дорогостоящего заливочного материала,поскольку основная часть образца выполнена не из зал1шочной среды, а из пустотелого керам1гческого цилшадра.

I. ОБРАЗЕЦ ДЛЯ ЭЛЕКТРОННОЕ ИКРОСКОПИЧЕСКОЙ :.УЛЬТРАМИК-. РОТОМИИпоавг.св.М 86645О, о г ли-, чающийся тем, что с целью повышения его Ш1фо1%1атЕШ1ос1Я) ковус выполнен усеченным, a цштнлр - оптически прозрачным в вианмой части спектра. 2. Образец по п. 1, о т л в ч a ю . щ и и с я тем, что отнош ве .диаметров оснований усечишого конуса составляет 1,25-2.0. 13. Образец по п. t, о т л и чаю щ и и с я тем, что. цилщвр в&гаолвев в виде тонкостш:ной тру&Ш| ввугреегавй диаметр которой не менее диаметра мваьш&го основания конуса. W с