СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИСТИННОЙ АЦЕТИЛХОЛИНЭСТЕРАЗЫ Советский патент 1996 года по МПК A61K35/14 

Изобретение относится к области биохимии, а именно к производству медикаментов из органических веществ животного происхождения.

Известен способ получения истинной ацетилхолинэстеразы путем отделения эритроцитов крови, гемолизирования их, промывания полученной стромы эритроцитов и центрифугирования.

Однако известный способ трудоемок, используют кровь дорогое и специфическое сырье, выход пpепарата по активности составляет 20% от лиофилизированной стромы.

Целью изобретения является расширение сырьевой базы, упрощение способа и повышение активности целевого продукта.

Цель достигается тем, что при осуществлении способа получения истинной ацетилхолинэстеразы путем отделения эритроцитов крови, гемолизирования их, промывания полученной стромы эритроцитов и центрифугирования, отличительной особенностью способа является то, что в качестве источника сырья используют кровь промысловых китов, при этом гемолиз и отмывание стромы эритроцитов проводят подкисленной уксусной кислотой, дистиллированной водой при рН 4,5 5,0.

П р и м е р. В процессе разделки кита вскрывают крупные сосуды грудной полости и кровь собирают в емкости по 10 л. Емкости оставляют при комнатной температуре на 15 мин, осевшие эритроциты переносят в центрифужные пробирки, одновременно промывают и гемолизируют 10 объемами дистиллированной воды и центрифугируют при 300 об/мин 15 мин.

Последний раз строму эритроцитов промывают фосфатным буфером (рН 8,0) оставляя 0,3 мл буфера в пробирках.

Полученную концентрированную строму разливают в стерильные ампулы и лиофилизируют. Потеря активности истинной ацетилхолинэстеразы в процессе приготовления сухого сырца составляет 50% за счет отмытого гемолизата.

От одного кита со средним весом 35 т получают 1,5-1,4 т крови, а 50-60% всей массы крови составляют эритроциты.

Предлагаемый способ прост в осуществлении, не требует дорогостоящего или уникального оборудования.

Совмещение операций (промывания стромы солевым раствором, гемолизирования и промывания водой) в один этап, а именно промывание 10-кратными объемами дистиллированной воды, значительно упрощает получение истинной ацетилхолинэстеразы. Промывание стромы фосфатным буфером в последний раз, при котором часть буфера остается с осадком стромы, повышает выход фермента при дальнейшей лиофилизации.

Предлагаемый способ позволяет расширить сырьевую базу и прост в осуществлении.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИСТИННОЙ АЦЕТИЛХОЛИНЭСТЕРАЗЫ путем отделения эритроцитов крови, гемолизирования их, промывания полученной стромы эритроцитов и центрифугирования, отличающийся тем, что, с целью расширения сырьевой базы, упрощения способа и повышения активности целевого продукта, в качестве источника сырья используют кровь промысловых китов, при этом гемолиз и отмывание стромы эритроцитов проводят подкисленной уксусной кислотой дистиллированной водой при pH 4,5-5,0.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИСТИННОЙ АЦЕТИЛХОЛИНЭСТЕРАЗЫ путем отделения эритроцитов крови, гемолизирования их, промывания полученной стромы эритроцитов и центрифугирования, отличающийся тем, что, с целью расширения сырьевой базы, упрощения способа и повышения активности целевого продукта, в качестве источника сырья используют кровь промысловых китов, при этом гемолиз и отмывание стромы эритроцитов проводят подкисленной уксусной кислотой дистиллированной водой при pH 4,5-5,0.