СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ АЦЕТИЛХОЛИНЭСТЕРАЗЫ ИЗ ЭРИТРОЦИТОВ ТЕПЛОКРОВНЫХ ЖИВОТНЫХ Советский патент 1966 года по МПК C12N9/18 

Известен способ выделения препарата ацетилхолииэстеразы из эритроцитов теплокровных животных, заключающийся в том, что эритроциты отмывают от плазмы, гемолизируют, осаждают и лиофилизируют строму, обрабатывают ее бутаиолом с последующей экстракцией, очисткой и сушкой. Однако активность препарата, изготовленного указанным способом, очень низка.

По предлагаемому способу в качестве детергента используют первичный октиловый спирт нормального строения.

Пример. Свежую дефибринированную кровь центрифугируют 30 мин, сыворотку отсасывают и удаляют. Затем эритроциты отмывают шесть-семь раз 0,9%-ным раствором поваренной соли. К 1 л отмытых эритроцитов для гемолиза их добавляют 6 л воды и 68 мл 1М раствора уксусной кислоты. Получающаяся при этом строма оседает в течение 10- 24 час. Гемолизат над осадком стромы декантируют с помощью сифона, а осевшую внизу строму взмучивают в 10 л 0,01 М раствора NaH2PO4. После оседания стромы через 10- 24 час жидкость удаляют. Для удаления NaH9PO4 к осадку добавляют 2 л дистиллированной воды и центрифугируют. Плотный осадок стромы смешивают с 500 мл фосфатного буфера, и полученную смесь подвергают лиофильной сушке. К сухой строме добавляют

октиловый спирт и через 10 мин центрифугируют. Из осадка стромы фермент экстрагируют 0,01 М фосфатным буфером и, спустя 60 мин, смесь центрифугируют. Раствор фермента добавляют к влажному гидроксиланатиту--из расчета 1,0-1,5 г су.хого адсорбеита на 100 мл раствора, - а смесь центрифугируют 10 мин при 5000 оборотов. Для удаления октилового спирта раствор фермента фильтруют через колонку, заполненную сефадексом g 50. Полученный препарат в 300 раз превышает удельную активность исходного материала. Молекулярная активность составляет 350000 единиц.

Препараты могут быть пспользованы для определения антихолинэстеразных свойств фосфороорганических и других соединений, применяемых в качестве инсектицидов и лекарственных веществ.

Предмет изобретения

Способ выделения ацетилхолинэстеразы из эритроцитов теплокровных животных путем экстрагирования фермента из стромы эритроцптов после разрушения лииоиротеинового комплекса с помощью детергента, отличающийся тем, что, с целью сохранения активности ацетилхолинэстеразы в нроцессе выделения и очистки, в качестве детергеита используют первичный октиловый спирт нормального строения.