Способ консервации органов и тканей Советский патент 1983 года по МПК A01N1/00 

ел

35Х1

00 Иаобрвч ние относится к клинической экспериментальной медицине, а именно трансплантологии. Известен способ консервации органов ;и тканей, включающий их обработку pacW вором циметилсульфоксида fll . HeqccTBTKOM известного способа является деструкция клеточных элементов ткани, лабилизация лизосомального аппа рата клетки, что ухудшает сохранность структур трансплантата. Цель изобретения - повышение жизне спосо&1ости трансплантата. Поставленная цель достигается тем, что согласно способу консервации органов и тканей, включающему введение в н диметилсульфоксида, предварительно донору за ч до удаления органа или ткани вводят диметилсульфоксид в дозе 0,5 г/кг. Пример 1.5 крысам за 2 4 до опыта внутрибрюшинно вводят в дозе О,5 г/кг диметилсульфоксид в виде 4О%-ного водного раствора. 5 других крыс. служили контролем. У всех животных под гексеналовым наркозом удбшяют сердце и почку и промывают 10%-«ым раствором диметилсульфоксида (ДМСО) на основе раствора для консервации сердца, при 10 С в течение 1О мин и помешают в тот же раствор сше на 20 мин. После этого почки и сердце помещают в аппарат для программного замораживания и охлаждают со скоростью 1 С/мин в интервале температур от 4-1О цо - 1О и t со скоростью lot/мин до . Замороженные органы извлекают и помещают в водяную баню при +37°С. После полного отогрева определяют следующие параметры: активность ЛЛГ в гомогенате ткани, активность ДНК-азы-Пвгомогенате и окружающем растворе и длительность изменения окислительно-восстановительного потенциала (ОВП) ткани. Полученные результаты представлены в табл. 1. Таблица

СПОСОБ КОНСЕРВАЦИИ ОРГА НОВ и ТКАНЕЙ, включающий их обработку раствором пиметилсульфоксиаа, о т п имеющий с.я тем, что, с целью повышения жизнеспособности трансплантате преаварительно донору за 1-24 ч до уца- : ления органа или ткани вводят аиметил- сульфоксиц в дозе 0,5 г/кг.

Из результатов видно достоверное уменьшение степени повреждения почек и сердца после аамораживания при использовании предлагаемого способа.

I ,

Пример 2.5 крысам за 2 ч до эксперимента внутрибрюшинно вводят ДМСО в дозе 0,5 г/кг в виде 40%-ного водного раствора. 5 других крыс служили контролем. Сердца и почки удаляюти промывают 20%-ным раствором ДМСО, как в примере 1. После промывки органы помешают в тот же раствор и хранят при 4°С в течение 4 ч. По истечении

указанного срока определяют содержание молочной кислоты в ткани и в окружающем растворе, активность ЛДГ в ткани и в окружающем растворе и активность ДНКазь П в ткани. Результаты представлены

в табл. 2. Из результате виано аостоверное уменьшение токсичности действия криопротектора на клетки органов, Преалагаемый способ позволяет yvieirt шить степень повреждений органов и тканей при замор1аживании и ослабить токсическое, аействие криопротектора. Проверка эффективности преалагаемог способа осуществлялась путем его срав цения с известным способом при замора живании органов (на почках) и при замо раживании тканей (на крови). Лля крови .в качестве сопоставляемого показателя берут процент гемолиза после оттаивани пробы (табл. 3). Таблица 3 Процент гемо лиза Контроль (без зашиты) 49,3+3,1 Обработка lO%-iiUM раствором ДМСО (известный способ)11,8±2,О Ввеаение ДМСО животному с послеауюшей обработкой 1О%-41ЫМ раствором ДМСО (прецлагаемый способ)2,2±0,5 Для почек в качестве сопоставляемых показателей после оттаивания берут активность ДНК-азы (табл. 4), гистологичвсжую структуру и целостность клеточЯШ ёмбран. .

Таблица 2 JT а б л и а а 4 Контроль (без защиты) 1,20О+О,1О5 0,260+0,014 Обработка 1О%-«ым раствором |ДМСО(иэшестныйО,37О+О,042 0,209+0,020 способ) Введение, ДМСО животному с последующей обработкой 10%-ным раствором ДМСО (предлагаемыйспособ)0,258+0,259 0,169+0,016 Целостность клеточных мембран oiipe аеляют по времени стабилизации скорости ультразвука в почке, помешенной & раствор крвопротекгтора, так как при повреждении клеточных мембран ускоряется проникновение криопротектора в клвт- &и. Чем выраженнее повреждение« тем скорее проис содит выравнивание вне и внут риклеточных концентраций, а, следовательно , и быстрее наступает стабилизация скорости ультразвука в органе (табл. 5).

Контроль (без зашиты). 15±2

Обработка i 1Ь%н1ым

рвстйором JJMCO (извест

яый способ) -.21t3

Ввеоение ДМСО живот ному с последующей обработкой раст вором ДМСО (преалагаемый способ)30±3

По цанным гистологического исслецования предлагаемый способ приаоцит к меньшей аекструкции клеточных элементов ткани, к менее выраженной лабилизации лизосомального аппарата клетки;

при этом уменьшается степень вне и BHyiw риклеточного отека.

Таким образом, при применении преппагаемого способа отмечается существенное уменьшение степени повреждений при замораживании органов и тканей по сравнению с известным способом. Степень повреждений зависит от времени введения донору

димeтилcyльфoкcидa и от его дозы. Минимальное повреждение соответствует введению донору за 1-24 ч до удаления органа диметилсульфоксида в дозе 0,5 г/кг. Заблаговременное ввведение криопротектора в организм стимулирует метаболическую и. структурную перестройку в органах и тканях, делая их более устойчивыми к действию повреждаюших факторов замораживания.

Использование предлагаемого способа будет способствовать повышению жизнеспособности трансплантата, повышению результативности операций при пересадке криоконсервированных тканей.