СПОСОБ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ ЗАЩИТЫ ДЕЦЕНТРАЛИЗОВАННОЙ ПОЧКИ Российский патент 1994 года по МПК A61K31/16 A61K31/33 A61K37/64 

Изобретение относится к медицине, в частности к патологической физиологии и трансплантологии, и предназначено для сохранения структурно-функциональной полноценности почек, подвергнутых нервно-лимфатической децентрализации или трансплантации.

Трансплантационная изоляция (полная децентрализация) почки подразумевает воздействие на орган сосудистой, нервной и лимфатической децентрализации как результата разобщения всех его анатомических связей с организмом. Непосредственным эффектом выключения органа из кровотока является ишемия, денервации - медиаторный дефицит, нарушения лимфооттока - лимфостаз. Указанные факторы совокупным отрицательным влиянием предопределяют так называемое неспецифическое трансплантационное повреждение почечного трансплантата, снижающее его структурно-функциональную полноценность и объективно требующее патогенетически обоснованных корригирующих воздействий. Как известно, сосудистая децентрализация в процессе трансплантации традиционно ликвидируется "включением" изолированной почки в кровоток реципиентного организма.

Наряду с этим известны способы фармакологической защиты децентрализованной почки, направленные на повышение ее структурно-функциональной полноценности преимущественно за счет предупреждения и коррекции ишемического- реперфузионного повреждения:
путем введения фармакологических препаратов в организм, из которого изымается (изолируется, децентрализуется) почка-трансплантат накануне самой процедуры забора органа;
путем введения лекарств с противоишемическим действием в перфузионный раствор-консервант на этапе полной децентрализации (изоляции-консервации) почки, пребывающей в экстракорпоральных условиях;
путем введения лекарственных веществ с антипостишемическим действием в опытный (реципиентный) организм с включенной в кровоток децентрализованной почкой, т. е. это фармакокоррекция структурно-функционального состояния децентрализованной (пересаженной) почки в "постдецентрализационном" (постишемическом, посттрансплантационном) периоде (аналог).

Известен также способ фармакологической защиты децентрализованной ин ситу почки от постденервационных нарушений путем длительного введения в опытной организм метилурацила и дофамина (прототип).

Недостатком как аналога, так и прототипа является то, что эти способы не влияют на развитие инициальных патогенетических механизмов отрицательных последствий нервно-лимфатической децентрализации, т. е. первичное нейро- и лимфогенное повреждение паренхиматозных элементов, в частности канальцевого эпителия (составляет до 85% почечной массы), и поэтому не защищают децентрализованную почку от инициально развивающихся в ней соответствующих изменений в виде дистрофических изменений тубулярной системы.

Нарастающие даже в условиях сохраненного (при нервно-лимфатической децентрализации ин ситу) или восстановленного (в результате трансплантации) кровотока внутритканевой медиаторный дефицит и лимфостаз с первых же часов после децентрализации (трансплантации) при еще не начавшейся спонтанной реиннервации и релимфатизации являются отнюдь не сразу и не бесследно проходящими, а также далеко не полностью обратимыми явлениями, закономерно приводящими почку к умеренно выраженной, но стойкой тубуло-интерстициальной нефропатии, отчетливо снижающей ее структурно-функциональную полноценность. Известные методы активной хирургической реиннервации и частичного хирургического восстановления путей лимфооттока не дают "сиюминутного" (быстрореализующегося) корригирующего эффекта сразу после их осуществления из-за медленной регенерации нервов и постепенного восстановления достаточного объема эксорганного лимфопассажа от децентрализованной почки. В связи с этим последняя не менее двух недель (минимальный срок до начала спонтанной реиннервации и релимфатизации трансплантанта) пребывает в опытном (реципиентном) организме в условиях выраженного медиаторного дефицита на фоне недостаточности интраренального лимфообращения.

Цель изобретения - сохранение структурно-функциональной полноценности децентрализованной (пересаженной) почки за счет медикаментозного нивелирования (коррекции) инициальных (первичных) механизмов повреждающего (отрицательного) влияния на нее денервации и нарушения лимфооттока.

Цель достигается тем, что в организм с децентрализованной или/и трансплантированной почкой в течение двух недель после децентрализации дважды в сутки вводят по 10 мг/кг нилаамида, по 200 мг/кг ионола и 2 000 АТрЕ/кг контрикала.

Способ осуществляют следующим образом. Производят децентрализацию почки (без выключения из кровотока ин ситу или с таковым с последующей трансплантацией абсолютно децентрализованного органа). Контрлатеральную интактную почку удаляют из опытного организма. После воспроизведения модели децентрализации в опытный (реципиентный организм) с первых суток и далее в течение двух недель двукратно вводят нилаамид, ионол и контрикал в указанных дозах. В динамике исследуют параметры экскреторной функции и структурное состояние децентрализованной почки.

П р и м е р 1. Беспородным белым крысам-самцам (N= 30) под гексеналовым (50 мг/кг) наркозом осуществляли абсолютную нервно-лимфатическую децентрализацию левой почки хирургическим и электрофоретическим способом в сочетании с правосторонней нефрэктомией, получая тем самым наиболее адекватную модель для исследования нейролимфогенного трансплантационного повреждения почки (контрольная серия). С первых же суток децентрализации всем животным начинали вводить "плацебо" двукратно в сутки физраствор по 4 мл (используемый в опытной группе в качестве растворителя нилаамида и контрикала) и по 2 мл стерильного раствора рафинированного подсолнечного масла (растворитель ионола). На 3-й, 7-е и 15-е сутки по 10 животных выводили из эксперимента декапитацией, предварительно исследуя у них в балансовых клетках клубочковую фильтрацию по креатинину и реабсорбцию натрия. После эвтапазии опытные почки изымали для проведения морфологических и внутритканевых биохимических исследований, позволяющих оценивать структурно-функциональную полноценность органа. Электронно-микроскопически в клетках проксимальных канальцев рассчитывали коэффициент энергоэффективности митохондрий. В тканях коры определяли содержание первичного продукта пероксидации липидов - диеновых конъюгатов, и активность лизосомальных гидролаз - кислой фосфатазы и катепсина Д, а также внутритканевое содержание норадреналина, АТФ и активность сукцинатдегидрогеназы (см. таблицу).

Показатели структурно-функционального состояния единственной почки в условиях сохранных нервных влияний и лимфооттока (норма), после нервно-лимфатической децентрализации на фоне введения плацебо (контроль) и в условиях фармакологической защиты (опыт) на 15-е сутки сведены в таблицу.

Из представленных в колонке "контроль" таблицы данных явствует, что нервно-лимфатическая децентрализация приводит к существенному нарушению чресканальцевого транспорта натрия при недостоверных изменениях гломерулярной фильтрации, что свидетельствует об угнетении активных "энергоемких" процессов в тубулярном эпителии децентрализованной почки. Результатом нервной децентрализации является зарегистрированное резкое снижение внутритканевой концентрации норадреналина как маркера адренергической нейромедиации и, как следствие, индуцируемого им фермента аэробного окисления - сукцинатдегидрогеназы. Наряду с этим возрастает активность лизосомальных гидролаз и повышается активность самих лизосом в виде появления в цитоплазме проксимальных канальцев фаголизирующих форм, а также поврежденных митохондрий. Последнее протекает параллельно увеличением содержания в коре продукта пероксидации липидов мембран - диеновых конъюгатов и снижения коэффициента энергетической эффективности митохондрий, а также продукции ими макроэргов, в частности АТФ.

Следовательно, результаты исследований в группе с введением плацебо свидетельствуют о снижении структурно-функциональной полноценности децентрализованной почки даже в условиях сохранного почечного кровотока.

П р и м е р 2. Беспородным белым крысам (N= 30) воспроизводили модель единственной абсолютно денервированной почки (нервно-лимфатическая децентрализация). В этой серии (опыт) в составе указанных растворителей ежедневно двукратно вводили по 10 мг/кг ниаламида, 200 мг/кг ионола и по 2 000 АТрЕ/кг контрикала. Животных по 10 выводили из эксперимента в сроки, аналогичные таковым в примере 1, и приводили описанные исследования, результаты которых представлены в таблице (колонка "опыт"). Представленные данные статистически достоверно отражают эффективность фармакологической защиты децентрализованной почки, поскольку демонстрируют отчетливое "нивелирование" практически всех регрессивных сдвигов.

П р и м е р 3. Двум беспородным собакам-самцам массой 21 и 24 кг под общим обезболиванием моделировали феномен децентрализации почки по собственной методике без выключения органа из кровотока. Первому животному (контрольному) в течение двух недель вводили плацебо (как в примере 1), а второму (опыт) - ниаламид, ионол и контрикал по заявляемой схеме. На 15-е сутки у обоих животных исследовали состояние реабсорбции натрия в относительных величинах, так как у них были разные величины фильтрационного феномена Кэннона-Розенблюта по собственной методике. После исследования указанных функциональных показателей собакам под наркозом с помощью иглы ВНИИКЭХ произвели чрескожные биопсии опытных почек и изъятые кусочки коркового вещества после соответствующей обработки исследовали в электронном микроскопе jЕМ-100С. Результаты сравнительных исследований показали, что относительная величина реабсорбции натрия по отношению к его фильтрационному заряду составила: в контроле 99,24% , а в опыте 99,78% ; длительность анурической паузы в ответ на введение в системный кровоток субпороговой дозы экзогенного норадреналина соответственно 11 и 5 мин. При ультрастуктурных исследованиях ультратонких аралдитных срезов обоих биоптатов обнаружено, что в канальцевом эпителии контрольного органа выявляется большое число активных фаголизосом и поврежденных митохондрий, в то время как в опыте, несмотря на повышенное число лизосом внутри цитоплазмы проксимальных канальцев, ни одна из них не имела признаков контактного фаголизирования органелл, в частности митохондрий, причем последние выглядели в большинстве своем совершенно интактными с сохраненными мембранными структурами.

П р и м е р 4. Беспородным собакам-самцам массой 27 и 31 кг под общим обезболиванием производили аутотрансплантацию почек с предварительной реконструкцией лимфооттока и хирургической реиннервацией в реципиентной зоне. Обе пересадки завершили созданием модели для бесфистульного исследования функции почечного трансплантата. Контрольному животному в течение 15 сут вводили плацебо, опытному - ниаламид, ионол, контрикал дважды в сутки. На последнем сроке в условиях пероральной водной нагрузки определили реабсорбируемые фракции натрия, выраженность денервационного феномена и произвели биопсии коркового вещества обоих трансплантатов. Величины относительной реабсорбции натрия соответственно составили 99,10 и 99,64% , длительность реактивных анурических пауз на введение экзогенного норадреналина 14 и 6 мин. При ультраструктурном исследовании контрольного нефробиоптата отметили множество активных фаголизосом, контактирующих с поврежденными митохондриями и выраженный лизис гиалоплазмы. В опытном биоптате цитоплазма клеток проксимальных канальцев по электронной плотности была близка к нормальной, большинство мембранных структур выглядели интактными, отсутствовали признаки активизации лизосомального аппарата (несмотря на повышенное количество лизосом) и симптомы повреждения митохондрий (целые кристы, умеренно разреженный матрикс).

Отчетливый положительный эффект при апробации заявляемого способа на аутотрансплантантах (переживших полную децентрализацию, т. е. плюс выключение почки из кровотока) свидетельствует о том, что предложенная схема не противоречит принципам противоишемической защиты пересаженных органов в организме реципиента, т. е. пригодна для использования в посттрансплантационном периоде для коррекции нейролимфогенного повреждения почки без ущерба мероприятиям по инвелированию постишемических нарушений.

Совокупность приведенных в примерах результатов отражают положительный эффект способа, полностью соответствующий поставленной цели.

Достижение поставленной цели, т. е. сохранение структурно-функциональной полноценности децентрализованной почки обеспечивается тем, что согласно фармакологическим эффектам использованных в предлагаемом способе фармпрепаратов:
ингибитор моноаминоксидазы ниаламид, препятствуя катаболизму катехоламинов, в частности норадреналина как адренэргического нейромедиатора (наиболее свойственного почке и превалирующего в ней), способствует частичному нивелированию, точнее, предотвращению развития выраженного внутритканевого медиаторного дефицита (см. данные таблицы) за счет предотвращения быстрого истощения запасов нейротрансмиттера в денервированном органе. Кроме того, действие препарата в системном кровотоке служит обеспечению выраженной доставки норадреналина к децентрализованной почке, закономерно обретающей (в силу реализации закона денервированных структур Кэннона-Розенблюта) повышенную чувствительность к циркулирующим в кровотоке медиаторам. Так оба механизма действия ниаламида способствуют нивелированию проявлений постденервационного медиаторного дефицита и его последствий - интраренальной паретической вазодилатации, ослаблению активности ключевых энергообразующих дегидрогеназ (СДГ) в канальцевых клетках, снижению антиокислительного резерва денервированных тканей и др;
активный антиоксидант ионол предохраняет канальцевый эпителий от регистрируемого перекисного повреждения мембранных структур, в частности, митохондрий, предохраняя, тем самым, децентрализованную почку от энергетического дефицита и связанных с ним функциональных нарушений - угнетения транспорта натрия как наиболее "энергоемкого" процесса. Кроме того, ионол стабилизирует мембранную оболочку лизосом, протеазы которых, как известно, участвуют в повреждении канальцевых клеток;
ингибитор протеаз контрикал инактивирует повреждающее действие лизосомальных ферментов в цитоплазме по отношению к ее жизненно важным органеллам, белковым молекулам и генетическому аппарату, ограждая тем самым клетки от запускаемых в них аутолитических процессов.

Исследования по разработке и проверке эффективности заявляемого способа проведены на кафедре оперативной хирургии с топографической анатомией и ЦНИЛ Донецкого медицинского института на 180 крысах и 36 собаках с децентрализованными и пересаженными почками. Первоначально каждый из фармпрепаратов апробирован по отдельности в соответствующих сериях и сроках. Максимальный протективный эффект в отношении повышения структурно-функциональной полноценности децентрализованной почки получен именно при сочетанном использовании указанных лекарственных препаратов.

Способ в реализации прост и весьма доступен, равно как и все составляющие предложенной схемы фармакокоррекции. Заявляемый способ является первым, позволившим эффективно воздействовать на пусковые и первичные механизмы нейролимфогенной регрессии децентрализованной почки в "критическом" ее периоде. Не нарушая принципов противоишемической защиты органа в реципиентном организме, способ может быть использован в посттрансплантационном периоде до момента начала реализации эффектов спонтанной или активной реиннервации и релимфатизации почечного трансплантатата. (56) Шумаков В. И. и др. Фармакологическая защита трансплантата. М. : 1983, с. 158-160.

Изобретение относится к медицине, в частности к патфизиологии и трансплантологии. Цель - сохранение структурно-функциональной полноценности почки за счет коррекции первичного повреждающего влияния денервации и нарушения лимфооттока в организме с децентрализованной in situ и/или трансплантированной почкой. Для этого в течение 2-х недель после децентрализации ежедневно двукратно вводят ниаламин 10 мг/кг, ионол 200 мг/кг и контрикал 2000 АТр Е/кг. 1 табл.

СПОСОБ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ ЗАЩИТЫ ДЕЦЕНТРАЛИЗОВАННОЙ ПОЧКИ, отличающийся тем, что, с целью сохранения структурно-функциональной полноценности органа за счет коррекции первичного повреждающего влияния денервации и нарушения лимфооттока в организме с децентрализованной in sitn или/и трансплантированной почкой, в течение двух недель после децентрализации органа ежедневно двукратно вводят ниаламид 10 мг/кг, ионол 200 мг/кг и контрикал 2000 АТрЕ/кг.