Способ подготовки почвенного образца для электронно-сканирующего микроскопирования Советский патент 1984 года по МПК G01N33/38 

ч

о:

ас

i F

СпосоО относится к биологии и почвоведению, в частности к способам микроскопических исследований биологических объектов.

Известен способ подготовки почвы для микроскопических исследований путем фиксации образца канадским или пихтовым бальзамами и искусственными полимеризующимися смолами с по следующим получением тонкого среза почвы - почвенного шлифа Cl.

. Однако данный способ сложен в исполнении и дорогостоящий, так как используются вещества, отечественные аналоги которых отсутствуют. Кроме того, способ не обеспечивает подготовку образца к электронно-сканирующей микроскопии с сохранением всех почвенных компонентов (особенно почвенных микроорганизмов и простейшихЗ так как способ предусматривает обработку почвенного образца погружением в кипящие растворы бальзамов и смол. Это искажает результаты исследований и делает практически невозможным изу чение почвенных простейших и микроор ганизмов.

Известен также способ подготовки для злектронно-сканирукадего микроскопирования, включающий зачистку почвенного образца скальпелем, ка клеивание его на столик-держатель электропроводящим клеем и напыление золота в вакууме 2.

Однако известный способ характеризуется сложностью сохранения нативной структуры почвенного образца из-за его непрочности. В большинстве случаев в период подготовки образцы почв разрушаются, а исследование проводят по сколам почвенного образца, т.е. только по поверхностям почвенных агрегатов. Изучение внутриагрегативной (внутрипедной) почвенной массы практически невозможно.

Кроме того, известным способом нельзя изучить почвы, легкие по меха ническому составу (супесчаные, песчаные) , а также исследовать внутренний состав многочисленных легко разрушающихся почвенных структур биогенного происхождения (капролиты дождевых червей, экспременты почвенных беспозвоночных).

Цель изобретения - повышение точности измерений.

Поставленная цель достигается тем что образец почвы покрывают со всех сторон клеем на водной основе, после его высыхания верхнюю часть почвенного образца срезают и выдерживают в парах биофиксатора в течение 2-3 мин с последукяцим высушиванием при комнатной температуре.

В качестве клея на водной основе Используют поливиналацетатный клей, а в качестве биофиксатора - осмиевую кислоту.

Пример 1. При помощи пинцета переносим монолит почвы в крышку алюминиевого бюкса с поливинилацетатным клеем (слой клея 2-3 мм) и выдерживаем 2 мин. Этого времени достаточно для того, чтобы клей пропитал основание понолита почвы. Затем помещаем почвенный монолит на предварительно обезжиренный столик-держатель и покрываем монолит с боковых сторон поливинилацетатньгм клеем с помощью кисточки. После затвердевания клея скальпелем срезаем верхнюю часть монолита на необходимой для исследования глубине. Затем помещаем столик-держатель с монолитом в бюкс с осмиевой кислотой на 2 мин для . фиксации простейших и микроорганизмов. Высушиваем образец при комнат-ной температуре.

П р и м е р 2. Берем комочек почвы объемом не более 1 см . При помощи пинцета погружаем его на 1/3 в поли винилацетатный клей и -вьщерживаем 3 мин. После затвердевания клея скальпелем делаем срез в проклеенной нижней части почвенного образца так, чтобы получилась ровная поверхность, На предварительно обезжиренный столик-держатель наносим каплю поливинилацет тного клея и помещаем почвенный образец нижней частью на столик-держатель. Кисточкой покрываем со всех сторон комочек почвы клеем. После затвердевания клея скальпелем срезаем верхнюю часть образца и фиксируем приклееный образец в парах осмиевой кислоты 3 мин. Высушиваем при комнатной температуре. Слабокорродированный фитолит в ненарушенном образце почвы (дерново-подзолистая почва, гумусо-аккумулятивНый горизонт А).

П р и м е р 3. Капролит при помощи скальпеля переносим в крышку алюминиевого бюкса с поливинилацетатнБМ клеем (слой клея 1-2 мм) на 1 мин. Затем помецрем на предварительно обезжиренный столик-держатель и кисточкой покрываем его со всех сторон поливинилацетатным клеем. После затвердевания клея делаем срез верхней части капролита и приклеенный капролит фиксируем 3 мин в парах осмиевой кислоты.

Обрастание свежеобразовавшегося капролита (2-й день актиномицетами,

П р и м е р 4. При помощи шприца пропитываем поливинилацетатным клеем слой почвы толщиной 3 мм и площадью 1 см. После затвердевания клея кисточкой покрываем переднюю стенку почвы над площадной размером 1 см. При помощи скальпеля осторожно открывает поочередено боковые стенки монолита и покрываем их поливинилацетатным клеем. Вынимаем моноS 10768324

лит из почвы и скальпелем удаляемсрезаем верхнюю «асть монолита и

прилипшие песчаные частицы, зачицаемфиксируем почвеннЕ1й образец в парах

нижнюю часть монолита.осмиевой кислоты 2 мин. Высушивание

На предварительно обезжиренныйпроводим как и в предыдущих примерах

столик-держатель наносим каплю поли-при комнатной температуре,

вииилацетатного клея. После затвер-5 Обрастание минеральной частицы

девания клея скальпелем осторожноактино1«шцетг1мн.

1. СПОСОБ ПОДГОТОВКИ ПОЧВЕННОГО ОБРАЗЦА ДЛЯ ЭЛЕКТРОННО-СКАНИРУКЬ ЩЕГО МИКРОСКОПИРОВАНИЯ,.включающий зачистку почвенного образца скальпелем, наклеивание его на столик-держатель электропроводящим клеем и на пыление золота в вакууме о т л и чающийся тем что, с целью iповышения точности измерений,, образец почвы покрывают со. всех сторон клеем на водной основе, после его высыхания верхнюю часть почвенного образца срезают и В1шерживают в парах биофиксатора в течение 2-3 мии с последующим высушиванием при ко натвой температуре., 2. Способ по п.. 1, о т я и ч а ющ и и с я тем, что в качестве клея на водной основе используют поливиI нилацетатный клей, а в качестве фиксатора - осмиевую каслоту. (Л