Питательная среда для выращивания @ @ Советский патент 1984 года по МПК C12N1/00 C12N1/20 

О

о

00

о

С/э Изобретение относится к ветеринарной микробиологии f в частности к получению питательной среды для выращивания Pasteurella multocida Пастереллез - инфекционная болезнь многих видов.животных, в том числе и птиц, вызываемая отдельными разновидностями Пастерелл, Для получения диагностических сывороток, а также препаратов специфической 11рофилактики пастерелле зов сельскохозяйственных животных необходимо наличие штаммов с полно ценной антигенной структурой. Past urella multocida обладает большой степенью изменчивости, что сопрово дается снижением их иммуногенной активности и вирулентности. В связи с этим представляет важное значение восстановление утраченных па стереллами свойств путем выращивания их на определенных средах, а получение полноценных питательных сред для культивирования пастерелл является актуальной проблемой. Известна питательная среда для выращивания Р.multос Ida ClJ следую щего состава: ia2HPO -±2HyO 32,3 90 КН2Р041,36 10 NaCE1,19 20 Mg.SO47H20 0,25 1 Глюкоза6,0 30 л-Аргинин, нее 0,2 1 л-Аспаргиновая кислота1,6 12 л-Цистеин 0,12 0,5 л-Глютамино вая кислота 0,15 1 дл-Серин 0,2 2 л-Изолейцин 0,65 0,5 л-Лейцин 0,065 0,5 л-Фениланин 0,085 0,5; л-Тирозин 0,09 0,5 Са-пантотенат 0,002 Никотиноамидная кислота 0,005 Витамин В-, (тиамин нее, 0,001 Железо (ш) цитрат 0,001 - Оротная кислота 0,015 0,1 В связи со сложной технологией изготовления эта среда не нашла пр менения в -практике. Известна питательная среда для выращивания Р.multос Ida, состоящая из бульона на основе перевара Хоттингера 23. Однако Р.multocida, выращиваемая на этой питательной среде, обладает высокой CTeneHiaK) диссоциации и в пр цессе длительных пассажей снижает., свои вирулентные свойства. ЦелЬю изобретения является получение питательной среды, восстанавливающей вирулентность Р.multocida различных серологических типов вследствие деблокирования синтеза сахаров в полисахаридной цепи, входящей в состав капсулы бактерий, ответственной за вирулентность. Поставленная цель достигается тем, что питательная среда для выращивания Pasteurella multocida, включающая бульон на оснойе перевара Хоттингера, дополнительно содержит маннозу, галактозу, рамнозу и глюкозу при следующем соотношении компонентов , мае.% 1 Манноза 0,1-1,2 Галактоза 0,1-1,2 Рамноза 0, глюкоза 0,1-1,2 Бульон на основе перевара Хоттингера Остальное Способ изготовления среды состоит в следующем. Берут навески маннозы 10-120 г, галактозы 10-120 г, рамнозы 10-120 г, глюкозы 10-120 г, В каждую навеску в отдельности наливают дистиллированную воду до 100 мл, полученные растворы стерилизуют текущим паром, в колбу наливают по 10 мл растворов маннозы, галактозы, рамнозы и гЛюкозы и добавляют бульон на основе перевара Хоттингера до 1000 мл. Пример. Питательная среда с содержанием маннозы,.галактозы, ра1 1нозы и глюкозы по 0,1%, бульон на основе перевара ХоттИнгера - до 100%. При культивировании серологического варианта в .multocida на этой среде значения ЛД-дколебались в пределах 170-250 бактерий. Пример 2. Питательная среда содержанием маннозы, ..галактозы, амнозы и глюкозы по 0,.б%, бульон а основе перевара Хоттингера - до 00%. Значения .ЛД Р.,nul.tp-ci.da сеоварианта В колебались в пределах 50-220 бактерий. Пример 3. Питательная среа с содержанием маннозы, галактоы, рамнозы и глюкозы по 1,2%, бульн на основе перевара Хоттингера о 100%. Значения ЛД Р.multocida ероварианта В колебались в предеах 200-270 бактерий. Пример 4. Питательная среа с содержанием маннозы, галактоы, рамнозы и глюкозы по 0,05%, ульон на основе перевара Хоттингеа - до 100%. Значения ЛД jp выраиеной на этой среде культуры сероваианта В составили 0,5-1 мпнл.бактеий, Пример 5. питательная среда содержанием маннозы, галактоз л, амнозы и глюкозы по 1,8%, бульон

на основе перевара Хбттингера - до 100%. Культура P.multocida Серова-, рианта В, выращенная на этой среде, имела значение ЛДгд 1-1,5 млн, бактерий.

Из приведенных примеров следует, что оптимальной концентрацией сахаров маннозы, галактозы, рамнозы и глюкозы в питательной среде, обеспечивающей восстановление вирулентмости.P.multocida, является 0,1-1,2% Концентрация Сахаров ниже 0,1% не достаточна для деблокирований ферментов, ответственных за синтез полисахаридной цепи капсульного антигена. Избыточное содержание Сахаров (выше 1,2% ) также не обеспечивает Деблокирование ферментов, по-видимому вследствие повышенного парциального давления и нарушения осмоса и диффузии Сахаров внутрь бактериальных клеток.

П р и м е р б. Для изучения восстановления вирулентности культур Pasiteurella multocida различных серологических типов вариантов культивировали одни и те же штаммы Pasteurella multocida в предлагаемой и известной (бульон Хоттингера ) средах.

Вирулентность Пастерелла мультоцида различных серологических вариантов, выра11енных в известной и предлагаемой питательной среде, приведена в таблице.

Из приведенных данных следует, что культивирование Пастерелла мультоцида разных серовариантов в предлагаемой среде способствует восстановлению утраченной вирулентности культур, вследствие чего вирулентность их повышается в десятки и несколько тысяч раз. Поскольку вирупентность пастерелл коррелирует с иммуногенностью, то предлагаемая питательная среда может быть использована не только для восстановления вирулентности штаммов, но и для изготовления более активных вакцин пастереллеза.

ЛДдд- количество микробных клеток, вызываю.дих гибель 50% зараженных белых мышей массой 16-18 г.

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ PASTEUHELLA MULTOCIDA, Включающая бульон на основе перевара Хоттингера, отличающаяся тем, что, с целью восстановления вирулентности, она дополнительно содержит моннозу, галактозу, рамнозу и глюкозу при следующем соотношении компонентов, мас.%$ Манноза 0,1-1,2 Галактоза 0,1-1,2 Рамноза 0,1-1,2 Глюкоза 0,1-1,2 Бульон на основе перевара ХоттингераОстальное 9