Способ определения степени иммуногенности авирулентных штаммов чумного микроба Советский патент 1986 года по МПК C12N1/00 

о

со 1 Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для первичного изучения иммуногенности авирулентных штаммов чумного микроба. . Известен способ определения степени иммуногенности авирулентных штаммов чумного микроба путем подкожного заражения белых мьшей культурой испытуемого штамма, через 21 день - культурой вирулентного штамма и через 21 день после последнего заражения определяют иммуногенность по показателю ED . Однако известный способ длителен, так как ответ получают через 42 дня. Целью изобретения является ускоре ние спо.соба. Цель достигается тем, что культуры испытуемого и вирулентного штаммов вводят совместно, при этом культуру вирулентного штамма используют в дозе 10-10 Del и иммуногенность штаммов определяют по показате лю LDjo , выраженному числом DcJ вирулентного штамма, при этом при LD равном 200 Dcf и вьш1е - шТамм иммуно генный, при LDjg менее 200 Dcf и -более 10 Del - штамм с ослабленной иммуногенностью, а при.LD , равном 10 Dcf и меньше, - штамм нейммуноген ный. Способ осуществляют следующим образом. Готовят разведение испытуемого авирулентного штамма в концентрации 2-10 м.к./мл и серийные разведения двухсуточной агаровой культуры вирулентного штамма Ч5гмнйго микроба (Dct не более 10 м.к.) в концентра циях 210Ь, 2.10 ,2-10 и 2-10 м.к./МП. Перед заражением ех tempore смешивают девять частей суспензии авирулентного штамма с одной частью каждой их четырех суспензий вирулунтного штамма. Полученными сме сями в объеме 0,5 мл заражают подкож но во внутреннюю поверхность бедра по пять белых мышей на дозу. Таким образом, каждой мьшш вводится по Ю м.к. авирулентного штамма и ми робы вирулентного штамма в одной из .следующих доз; 10, Ю, 10 и 10 м.к. Животные погибают в обычны для заболеваний чумой сроки. По результатам опыта определяют показа04тель вирулентного штамма и выражают его числом Dcf. Пример 1. Готовят суспензию двухсуточной агаровой культуры штамма Yersinia pesris EV в концентрации 2-10 м.к./мл и суспензии вирулентного штамма Y.pestis 1300 (Dcf 10 м.к.) в концентрациях 2 -10 , 2 кЮ, 2-10, 210 м.к./мл. В боксе для заражения животных смешивают по 0,5 мл каждой взвеси штамма 1300 с 4,5 мл суспензии штамма EV. По 0,5 мл каждой смеси вводят подкожно пяти беспородным белым мьшгам. Инфицирующие дозы штаммов EV и 1300 соответственно составляют Ю и 10 и . 10 и Ю; 10 и 10 м.к. Кроме того, заражают культурой штамма 1300 в дозе 10 м.к. 5 белых мьш1ей (контроль Del) и культурой штамма EV в дозе 10 м.к. 5 бельгх мьш1ей (контроль авирулентности штамма). В течение 18-21 сут. следят за гибелью животных, выживших к этому сроку белых мьшхей убивают. Результаты зацажения представлены в табл. .1. По результатам испытания культура штамма EV расценивается как иммуногенная L - D равна 208,3 Del. Пример 2, Из вакционного штамма EV получена субкультура EVFI, не продуцирующая фракцию 1 чумшэго микроба. Определение иммуногенности проводят по методике, описанной в примере 1.В табл. 2 приведены данные по иммуногенности штамма По результатам исгатания культура оценена неиммуногенной, LD равна 3,16 Del. Определение иммуногенности проведено у пяти авирулентных штаммов чумного микроба (см. табл. 3). Сравнительные данные по точности определения при наличии ускорения способа приведены в табл. 4. Использование предлагаемого способа позволяет сократить время изучения иммуногенности в два раза, тем самым создает экономию средства для содержания зараженньйс животных в специальных помещениях; совмещение вакцинации и заражения в одной операции исключает двухэтапноеть иселедования.

Таблица 1

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕПЕНИ ИММУНОГЕННОСТИ АВИРУЛЕНТНЫХ ШТАМШВ ЧУМНОРО МИКРОБА путем подкожного лз; ВйЕН:.. заражения белых мьшей культурами испытуемого и вирулентного штаммов чумного микроба, отличаю щийс я тем, что, с целью ускорения способа, культуры испытуемого и вирулентного штаммов вводят совместнр, при этом культуру вирулентного штамма используют в дозе 10-10 Del и иммуногенность штаммов определяют по показателю LDуд , выраженному числом Del вирулентного штамма, при этом при LD50 равном 200 Del и выше - штаьм иммуногенн, при менее 200 Del и более 10 Del - штамм с ослабленной иммуногенностью, а i при LD равном 10 Del и меньше (Л штамм неиммуногенный.

10 10 10 10

to

т а б л и ц а 2

316,3

EVВакщ нный

Получен из вирулентного штамма 1300 на среде Лжексона-Берроуза

Потерявший иммуКультура

233,8

171,4-318,4 ,

:0,0t

3,3

2,5-4,4

и,01

4,5-8,4

Таблица 3

7,478-10 Иммуно208,3 генный

1,994-10То же 237,1

НеиммуноТаОлица 4

Проводили сравнение показателей LD , так как по результатам опыта сравнение покааателей tDj, возиожно.

Проводили сравнение показателей ED,,, так как по результатам сравнение показателей Е0„ нввояможяо