Способ определения диуретической активности вещества Советский патент 1984 года по МПК G01N33/48 

00 со

00 1n Изобретение относится к технике отбора фармакологических препаратов и может быть использовано в фармакологической промьпшхенности для отбора диуретических препаратов, широко используемых в медицине. Известен способ испытания диуретиков путем перорального или внутривен ного введения их животным (собакам, кроликам, крысам) и человеку с последукмцим анализом суточного диуреза и электролитного состава мочи (калий и натрий определяют методом пламенной фотометрии, хлор-потенциометрическим титрованием) 13 . Недостатком известного способа является невысокая специфичность отбора, так как введенный per os препарат действует на весь организм в целом и действие его на поперечные канальцы может быть опосредованный. Кроме того, способ характеризуется большой длительностью опытов, измерякяцейся сутками, и большим расходом испытуемого вещества, вводимого из расчета на килограмм веса животного . Известен также способ отбора диуретиков, включакяций действие диуретика на мембранную систему перфузированных почечных канальцев с последующим анализом солев1ого состава пропущенной через каналец жидкости без диуретика, а затем с ибпытуемым диуретиком. Почечные канальцы выделяют из изолированной почки животного. Через просвет канальца с определенной скоростью прогоняют со левой раствор, который вводят в канал между двумя каплями масла без диуретику и с испытуемым веществом. После продвижения раствора через ка налец на выходе последнего собирают его содержимое, находящееся межд двумя каплями масла в микропицетку и определяют злектролитный состав на пламенном фотометре, содержание хлора - электрометрическим титрованием или же с помощью радиоактивных изотопов. Потерю воды из просвета канальца определяют по изменению ко центрации введенного в перфуэируемый раствор инертного вещест1за - ин лина. Способ является более специ4в{чным, так как действие испытуемого вещества направлено непосредстве но на функцию почечных канальцев 2 Недостатки указанного способа - трудоемкость, техническая сложность выполнения опытов и анализа состава внутриканальцевой жидкости, большая длительность. В данном случае также необходимо использование животных. Целью изобретения является ускорение способа определения диуретической активности веществ. Поставленная . цель достигается тем, что по способу определения диуретической активности вещества,включающему воздействие препарата на биологическую мембрану с последующей регистрацией электрической характеристики, воздействуют на мембраны клеток харовых водорослей, фиксируют потенциал на мембране, измеряют амплитуду переходного тока мембраны и по уменьшению амплитуды тока определяют диуретическую активность вещества. Способ осуществляется следующим образом. .В камеру из оргстекла, состоящую из 4-х отсеков «,5, в, г, соединенных между собой желобками, помещают клетку и отсеки зап9лняют вазелином для изоляции рабочего участка клетки (дайной 1,5-2 мм), находящегося в отсеке 5, Отсек 8 служит для улучшения изоляции и раствором не заполняется. Отсеки о и 1. заполняют раствором следующего состава: 0,1 j KCL; 10 N«M NaCl; рН 7,0; отсек S- солевым раствором: 0,1 bdi KClIO мМ NaCl; 1 мМ CaCl,; 100 мМ сахарозы.Трис-буфер рН 7,6-7,8. Исходный раствор в отсеке б заменяют в ходе опыта раствором, в который добавлено испытуемое вещество. В камеру вводят измерительные потенциальные злектроды. Электроды подключают к системе фиксации потенциала на мембране клетки. Пример I. Определение специфического воздействия лазикса в концентрации 1,5 « на хлорные каналы мембраны. Испытания проводят на интериодальных клетках харовых водорослей,предварительно вьздержанных 2-3 сут в солевом растворе следующего состава: 0,1 мМ КС1; 10 мМ NaCl; 1 мМ СаСХг. Трас-буфер рН 7,6-7,8. Берут клетку, слегка ее подсушивают фильтровальной бумагой и переносят в экспериментальную камеру, желобки которой предварительно запол ны вазелином для изоля

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДИУРЕТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ВЕЩЕСТВА, включающий воздействие препарата иа биологическую мембрану с последующей регистрацией электрической характеристики, отличающийся тем, что, с целью ускорения способа, воздействуют на мембраны клеток харовых водорослей, фиксируют потенциал на мембране, измеряют амплитуду переходно-. го тока мембраны и по уменьшению амплитуды тока определяют диуретическую активность вещества. (Л