Способ получения липидов,обладающих хемотаксическим действием Советский патент 1985 года по МПК C12P7/64 C12R1/77 

СО

| Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к микробиологическому способу получения липидов, обладающих хемотаксическим действием. SlvmHflfA, содержащие эпокси-оксипроизводные полиненасышенных жирных кислот, обладающие хемотаксическим действием для полиморфноядернык . лейкоцитов, могут быть использованы как средство для усиления иммунного ответа организма при онкологических и почечных заболеваниях. Известен способ получения липидов, предусматривающий культивирование грибов l . Полученные при этом липиды не обладают хемотаксическим действием. Известен способ получения липидов обладающих хемотаксическим действием согласно которому аракидоновую кисл оту инкубируют с тромбоцитами, выделенньми из крови животных с последующим вьщелением 10-окси-11,12эпокси-5,8,14-эйкозатриеновой кислоты, обладающей хемотаксическим действием 2 . Недостатком способа является его сложность, связанная с трудностью получения тромбоцитов и арахидоновой кислоты высокой степени чист.оты. Цель изобретения - повышение выхода липидов. Указанная цель достигается тем, что согласно способу получения липидов, обладающей хемотаксическим действием, выращиванию подвергают штамм грибов Fusarium sainbucinum ВК F-842 на питательной среде, содержа щей источники углерода, азота и фос фора, при азрации воздухом, составляющей 0,8-1,2 л/л/мин, с последующим отделением биомассы и выделением целевого продукта. Способ осуществляют следующим об разом. Гриб Fusarium sambucinum БКМ F-8 выращивают на жидкой питательной ср де при аэрации 0,8-1,2 л/л/мин. Изм неине аэрации в сторону уменьшения или увеличения указанного интервала при водит к уменьшению выхода липидов. После завершения ферментации био массу отделяют, высушивают на возду хе и измельчают До порошкообразного состояния. Липиды экстрагируют органическими растворителями и анал зируют с помощью газовой хроматографии. Пример 1. Мицелий гриба Fusarium sainbucinum ВКМ F-842 вырапщвают в ферментационном аппарате объемом 250 л (рабочий объем 125 л) на питательной .среде, содержащей 0,25% картофельного крахмала, 2% сахарозы, 0,15% однозамещенногй фосфорнокислого калия, 0,3% азотнокислого аммония, в периодическом режиме в течение 36 ч при , скорости аэрирования 1,0 л/л/мин и постоянном перемешивании (скорость оборотов мешалки 126 об/мин). После завершения ферментации мицелиальную биомассу отделяют от культуральной жидкости на вакуумном фильтре и получают 6375 г прессованной биомассы, которую далее высушивают на воздухе при 28-30 С в течение 24 ч и измельчают в измельчителе тканей при 700 об/мин до порошкообразного состояния. К 630 г полученной сухой биомассы добавляют 150 мп 2%-ного раствора додецилсульфата натрия, перемешивают в течение 10 мин, добавляют 36 л смеси этанол-эфир (1:1) и экстрагируют липиды при перемешивании в реакторе в течение 6 ч при 26-28 С. Остаток отделяют фильтрованием и фильтрат упаривают сначала в вакуумном испарителе типа Simax до объема 600 мл затем на роторном испарителе в вакууме при 35 С до сухого остатка. Получают 99,5 г липидов (15,0 г в 100 г сухой биомассы) . Для определения содержания жирных кислот в липидах проводят гидролиз полученного экстракта. Образец обезвоженньк липидов (1г) гидролизуют 10 мл 1 н. J аОН в метаноле в течение 1 ч при 30 С. По окончании гидролиза добавляют к смеси 10 мл натрий-фосфатного буфера (,0) и экстрагируют смесь 3 раза порциями по 15 мл гептаном, подкисляют водно-метанольный остаток 2 н. НС до ,8-4,0 и экстрагируют 3 раза порциями по 15 мл хлороформом. Хлороформенные экстракты объединяют и упаривают на роторном испарителе в вакууме досуха. Получают смесь жирных кислот в количестве 0,29 г. Жирные кислоты в виде метиловых эфиров анализируют газохроматографИ чески (ГЖХ) на хроматографе марки

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ШПИДОВ, ОБЛАДАЮЩИХ ХЕМОТАКСИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода липидов, вь ращиванию подвергают штамм грибов Fusarium sambucinum ВКМ F-842 на питательной среде, содержащей источники углерода, азота .и фосфора, при аэрации воздухом, составляющей 0,81,2 л/л/мин, с последующим отделением биомассы и выделением целевого продукта.