Среда для разбавления криоконсервированной спермы хряков Советский патент 1985 года по МПК A61D7/02 

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к искусственному осеменению сельскохозяйственных животных, преимущественно к средам для разбавления криоконсервированной ,спермь хряков.

Целью изобретения является повышение подвижности, времени переживания и оплодотворяющей способности сперматозоидов. .

П р и м е р. 1. Предлагаемую сред готовят следующим образом. 1 литр бидистиллированной воды нагревают до кипения и в горячей воде растворяют, г; фруктоза 25, инозитол 15, цитрат натрия 2,76, цитрат калия 0, сернокислый магний 0,24, хлористый кальций 0,1, остужают до 40° и добавляют пируват натрия 2,20, унитиол 0,21. Депрессия точки замерзания среды 0,62-0,65, рН 7,47,8.

Приготовленной средой разбавляют оттаянную концентрированную сперму в отношении 1:3 или 1:4 при температуре среды 37°С.

Пример2. В табл.. представлены результаты подбора оптимального соотношения компонентов новой среды, согласно которым наиболее высокая переживаемость сперматозоидов хряков {7,2-7,7 ч) наблюдается при соотношении компонентов, перечисленных в колонках 10 и И.

Необходимость введения дополнительных ингредиентов в известную среду обоснована следующим. Пируват натрия - субстрат дыхания, концентрация которого является лимитирующим фактором, регулирующим энергетический обмен. Пируват натрия в сочетании с ионами Са и Mg учасвует в регуляции проницаемости и транспортной функгши мембран сперниев, АТФ-азной активности, акросом ной реакции, в процессе оплодотворения. Введение пирувата натрия в среду позволяет увеличить время переживания спермиев на 19% (табл. l колонка 2). Увеличение концентрации пирувата натрия в среде до 2,203,30 г/л и одновременное введение в среду сернокислого магния 0,2 г/ и хлористого кальция 0,10 г/л позволяет увеличить пережиааемость сперматозоидов на 20% в сравнении с известно средой (5,8 ч против 4,5 прототип. Дальнейшее увеличение

концентрации этих компонентов снижа т переживаемость сперматозоидов.

Фруктоза и инозитол - основные неэлектролитные компоненты плазмы спермы хряка, служат энергетическим материалом для гликолиза. Инозитол, кроме того, выполняет роль осмотического регулятора в сперме. Замена глюкозы в среде на сочетание фруктозы и инозитола увеличивает переживаемость сперматозоидов на 33% (7,7 ч против 5,8 ч в среде с глюкозой) и на 71% по сравнению с временем переживания в известной среде Допустимые пределы концентрации фруктозы и инозитола 15-25 г/л. Увеличение и уменьшение концентрации / инозитола и. фруктозы снижает переживаемо сть спермы.

ПримерЗ.. Было проведено сравнительное испытание контрольной среды (прототип), среды-ХЗЛЕП (анало.г и новой среды, содержащей оптимальные количества компонентов в г на 1л фруктоза 25, инозитол 15, цитрат натрия 2,76, цитрат калия 0,65, пируват натрия 2,20, сернокислый магний 0,24 хлористый кальций 0,10, унитиол 0,21 (среда ФИП).

Концентрированный эякулят после oтVaивaния делили на части, разбавляли исследуемыми средами в отношении 1:3. и Уценивали по физиологическим и биохимическим показателям и оплодотворякяцей способности. Результаты сравнительного испытания новой и известной сред, п 20 представлены в табл. 2.

Как видно из табл. 2, новая среда ФИП превосходит известную (прототип) и СЛЕП по проценту подвижных сперматозоидов через 3 ч хранения в ней в 6 и 11 раз соответственно, по времени переживания на 71 и 100% и сохранности акросом на 4 и 6% соответственно . Величина стимуляции дыхания спермиев 2,4-динитрофенолом (ДНФ), характеризующая функциональное состояние энергетической системы, в новой среде равна 2,5 против 1,8 и 1,6 в контрольной среде и среде СЛЕП.

Оплодотворяемость свиноматок при использовании замороженнр-оттаянноя спермы, разбавленной предлагаемой средой, составляет 64,1%,что на 29 выше, чем в контроле ( Р 0,05).

«о еч

СЧ

1Л

ю сч

ч

k

г

СП

ш

А

,

+1

in

1

СЧ

г

«г

(.

1Л CNI.

-

п

vO

ю еч

о

k

чО

ш

00

(М

- А

-

п

СЧ

CS

М

(Г,

ю «ч

со

ь

1Л

ш

t

СЧ

ft

м

to

g

о

а

ю «ч

00 |

ъ

ш

I

ш

СЧ

и

М

- со

« я

tr (Ч

п

ъ

п

О) у

л

О) «

ng

g а.

и п

й

m

Таблиц а2

СРЕДА. ДЛЯ РАЗБАВЛЕНИЯ КРИОКОНСЕРВИРОВАННОЙ СПЕРМЫ ХРЯКОВ, содержащая цитрат натрия, цитрат калия, пируват натрия, унитиол и бидистшшированную воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения подвижности продления времени переживания и повышения оплодотворяющей способности сперматозоидов, она дополнительно содержит фруктозу, инозитол, сернокислый магний и хлористый кальций при следующем соотношении ингредиентов (в г на I л биднстшшированной воды).: 15,00-25,00 Фруктоза 15,00-25,00 Инозитол Цитрат нат2,65-2,80 рия 0,60-0,85 Цитрат калия Пируват 2,00-3,00 натрия Хлорисгый (Л 0,10-0,20 кальций Сернокислый 0,12-0,36 магний 0,20-0,30 Унктиол БидистиллироОстальное ванная вода

Контрольная О, U4,51,8 ГХЦКУ .- ,«.„ 0,807,72,5 Новая ФИЛ 0,66±0,039 3,2±0,88 0,7±0, 0,07. 3,81,6 ОЛЕП аналог

- различия достоверны при Р с 0,05 - различия достоверны при Р 0,01 - по литературным данным 34,334,8+9,90 30,00 64,1+7,70 4 4,3+1,41 36,0 53-57