Способ тестирования дофаминергической активности химических соединений Советский патент 1986 года по МПК G01N33/15 A61B10/00 

1

Изобретение относится к медицине и касается разработки экспериментальной модели для испытания дофами- нергических химических соедннен1-1й, рюторые могут найти применение для лечения нервных, психических и функциональных заболеваний, связанных с эмоциальным стрессом.

Цель изобретения - сокращение времени и повьшение селективности способа за счет хронического вживления электрода в медиальный гипоталамус кролика и регистрации реакции на однократную электрическую стимуляцию до и после введения тестируемого соединения.

Способ осуществляется следующим образом.

Кроликам стереотаксически хронически вживляют биполярный электрод из нихромового провода в изоляции (диаметр провода 0,15 мм) в область медиального гипоталамуса (вентро- медиальное или дорсомедиальное ядра гипоталамуса). Затем на свободно передвигающемся животном определяют пороговую силу электрического раздражения, при котором в ответ на однократную стимуляцию появ,пяется 1-2 удара задними лапами. В дальнейшем ,цля. вызова тест-реакции использувдт удвоенную пороговую силу раздражения , Экспериментальным кон:тролем служат 10 последовательных раздражений, предъявляемых .с интервалом 3 мин. По результатам этого тестирования находят средние величины количества ударов лапами в ответ на однократное раздражение (Х), латентного периода появления первого удара вслед .за окончанием поддчи раздражения (Ж) и общую продолжительность поведенческой реакции (Т). Дополнительным парам-етром, характеризующим динамику поведенческой реакции, может служить суммарный график количества ударов в зависимости от времени.

Об эффективности фармакологического вещества, в данном случае гормона коры. над;почечников кортизола, судят по изменению количественных показателей каждого из исследуемых параметров ответной двигательной реакции. (X, ЛП, т). Для определения достоверности различий по каждому из параметров поведения используется непараметрический критерий t-Стьюден- та. Все эти операции проводят на од

460022 ,

ном или группе-животных в зависимости от величины наблюдаемого эффекта от введения препарата.

Приме р.Тестирование дофами5 нергической активности гормонального препарата - кортиэола.

Отбирают одного-трех интактных кроликов весом 2,5-4 кг, С поверхности черепа под местной новокаиновой

О анестезией (2%-ньш раствор) удаляют мягкие ткани. В черепной кости просверливают отверстие диаметром 0,5 в точке 5 лежащей на 1 мм сзади и на 1 мм латеральнее от места пересече55 ния медиального черепного щва с брег- мой. в это отверстие в соответствии со стереотаксическими координатами (перпендикулярно к поверхности черепной кости), погружают на глубину 12 мм

20 биполярньй электрод. Конечное положение электрода фиксируют на поверхности черепной кости самотвердеющей зубной :пластмассой Протакрил. Через 3-5 /щ после операции животное

помещ 1ют в экспериментальный бокс, контакты от раздражающих электродов присоединяют с помощью гибкого кабеля к электронному стимулятору. Постепенно увеличивая интенсивность раздра3 3 жения,, производят одноразовые стиму-Л ляции. Во время подачи электрического раздражения (5 с) обычно наблюдается двигательная реакция кролика в виде побежки. При достижении поро35 ГОБОЙ величины раздражения сразу вслед за побежкой кролики начинают производить удары задними лапами по полу. На самопишущем приборе регистрируют число ударов лапами при удво40

енной величине пороговой силы раз

дражения,, Производят 10 последовательных раздражений с интервалом 3 мин. Затем внутрибрюшинно вводят кортизол в дозе 10 мг/кг, разведенный в 1 мл физиологического раствора. Через 5 мин после этого наносят еще 10 раздр;зжений с той же силой и интервалами как и в контроле.

На основании результатов исгытания строят два графика динамики поведенческой реакции и подсчитывают достове-рность различий между данными, по X, ЛП и Т в контроле по сравнению с аналогичными параметрами после Введения препарата. В приведенном примере X для контроля равно 3,4- 2,8 ударов, а после введения кортизола ,7+1 ,3 (). Со-.

ответствующие значения для среднего времени поведенческой реакции (Т) равны 58i:8 с и с (Р 0,05). Для латентных периодов появления первого удара вслед за окончанием по дачи раздражения различия недостоверны (4,6±2,4 с и 4,It,2 с соответственно). Делается заключение об активации эндогенной дофаминергичес- кой системы мозга кортизолом на основании увеличения общего числа ударов и продолжительности реакции, вызванной стимуляцией дофаминерги- ческих путей гипоталамуса.

Формула изобретения

Способ тестирования дофаминерги- ческой активности химических соедиРедактор Н.Яцола

Составитель Н.Гуляева

Техред О.Сопко Корректор И.Эрдейи

Заказ 3993/37Тираж 778Подписное

ВНИИ11И Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Про изводе твенно-полиграфиче ское предприя тие,г.Ужгород,ул.Проек тная,4

2460024

нений путем определения числа ударов задних конечностей кролика до и после введения тестируемого соединения с последующей оценкой дофами- 5 нергической активности по изменению изме1 яемых параметров, отличающийся тем, что, с целью сокращения времени и повьшения селективности способа, в область медиальfO ного гипоталамуса мозгi кролика хронически вжиЕляют электрод, проводят электрическую стимуляцию, регистрируют количество ударов задними ко- нечнсгстями, время продолжительности

15 реакции после однократной стим -ля- ; ции и латентный период появления ударов, затем вводят тестируемое соединение и снимают те же показатели.

Изобретение относится к медицине и предназначено для испытания дофаминергических химических соединений. Цель изобретения - сокращение времени и повьшение селективности способа за счет хронического вживления электрода в медици.альный гипоталамус кролика и регистрации реакции на однократную электрическую стимуляцию до и лосле введения тестируемого соединения. Кроликам в область медиального гипоталамуса вживляют электрод. Проводят однократную электрическую стимуляцию. Регистрируют количество ударов задними конечностями, время продолжительности реакции и латентный период появления ударов. Затем вводят тестируемое соединение и снимают те же показатели. Об эффективности исследуемого : вещества судят по изменению количественных показателей каждого парамет- ра. I (Л § Од