Штамм бактерий @ @ ,предназначенный для детоксикации фосфорорганических пестицидов Советский патент 1986 года по МПК C12N1/20 C02F3/34 C02F3/34 C02F101/30 

Изобретение относится к микробиологии и охране окружающей среды и представляет собой новый штамм бактерий, который может найти применение для детоксикации остатков фос- форорганических пестицидов (ФОП) и их токсичных метаболитов в природных средах.

Цель изобретения - получение штамма, способного активно разрушать широкий круг фосфорорганичес- ких соединений, используемых в сельском хозяйстве в качестве пестицидов, и их токсических метаболитов.

Штамм бактерий Agrobacterium га- diobacter хранится в коллекции ВНИИСХМ за № 57/136.

Штамм имеет следующую морфологическую и физиологическую характеристики.

Морфологические признаки. Бактерии представляют собой мелкие подвижные палочки размерами 0,8x1,5- 3,0 мкм. Жгутики (1-3) латеральные. Спор не образуют. По Граму не окрашиваются. Колонии на МПА бесцветные, гладкие, вьтуклые, с ровными краями. Рост на средах с углеводами обычно сопровождается сильным слизе- образованием.

Физиолого-биохимические признаки. Аэроб. Оптимум роста при 25- . Растет при рН 6,0-9,0. На средах с глюкозой, сахарозой, мальтозой, галактозой, ксилозой образует кислоту. Усваивает глицерин, этанол, маннит, сукцинат. Использует минеральные и органические источники азота. Восстанавливает нитраты до нитритов. На среде с р-глицерофосфатом и маннитом образует коричневый пигмент, диффундирующий в среду. Продуцирует 3-кетолактозу.

Признаки штамма устойчивы. Штамм не патогенен. Хранится и поддерживается ria мяс.о-петонном агаре (МПА) ,

П р и м ер. Использование штамма для детоксикации фосфорорганических пестицидов (ФОП).

KynbTypyAgrobacterium radiobacter 57/136 выращивают на чашках Петри с МПА при , в течение 72 ч. Шпателем снимают с поверхности агара биомассу и растирают с кварцевым пескам в ступке на холоду. Растертую массу разводят 0,15 М фосфатным буфером с рН 7,8-6,0 и добавляют один из исследуемых на деградацию ФОП

(например, параоксон) в концентрации 2x10 М. Вьщерживают в термостате в течение 3 ч при . Затем определяют остаточные количества ФОП по активности холинэстеразы (ХЭ) но- дифицированным методом Элмана. Одновременно в качестве контроля проверяется спонтанное разложение каждого ФОП в буфере (без внесения микроорганизмов) . По соотношению начальной концентрации и остаточного количества ФОП определяют скорость разложения последних в бесклеточном гомоге- нате бактерий штамма 57/136. Аналогично параоксону испытывается действие штамма 57/136 и на другие ФОП, а именно на метоксон, гардону, ма- лаоксон, дихлофос и хлорофос.

Результаты измерений представлены в таблице.

25

ФОП

Скорость разложения в н-моль/мг белка/ч

Параоксон

Метоксон

Гардона

Малаоксон

Дихлофос Хлорофос

47,5+5,36 33,0+5,97

.40,0+9,37 42,5+3,46 58,5+3,81

125,3+1,97

I Таким образом, штамм бактерий Agrobacteriimi radiobacter ВНИИСХМ № 57/136 имеет широкий набор ферментов, способных разрушить различные фосфорорганические пестициды,при этом продукты их распада полностью теряют антихлоинэстеразную активность, а вместе с тем и токсический Эффект.

Гомогенат штамма Agrobacterium radiobacter за 3 ч инкубации разлагают 80-90% параоксона, в то время как культура штамма Flavobacte- rium sp АТСС 27551 за 4 ч инкубации разлагала всего 47% паратиона.

Так, по данным Adhya Т,К. и др. скорость разложения паратиона с помощью штамма Flavobacterium sp АТСС 27551 составляет 13,7 мкг за 1 ч на 20 мл среды.

31250572f

В то же время штамм № 57/136 кой структуре к паратоиону) со разлагает параоксон ( соединение, скоростью 280 мкг за 1ч на 20мл весьма близкое по всей химичес- среды.

Составитель Т.Полянская Редактор Л.Авраменко Техред Н.Бонкало Корректор В.Бутяга

Заказ 4376/20Тираж 430Подписное

ВКШПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113033, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Штамм бактерий Agrobacterium radiobacter ВНИИСХМ № 57/136, предназначенный для детоксикации фосфорорганических пестицидов. ю ел О ел