Способ выделения живых гельминтов из лягушек Советский патент 1986 года по МПК A01K67/02 

.

Изобретение относится к биологии а именно к зоологии, и может быть использовано в учебно-методической и научно-исследовательской работе в период проведения лабораторных занятий студентов и учащихся по курсам биологии, зоологии, физиологии, паразитологии, фармакологии и другим дисциплинам, а также для диагностических целей и в террариумах для дегельминтизации лягушек.

Цель изобретения - сохранение жизнеспособности лягушек.

Сущность изобретения состоит в следующем,

В сосуд емкостью 3 л наливают 1 л дистиллированной воды. В воду после взвешивания добавляют один из химических реагентов; нитрат калия или нитрат натрия, или нитрат кальция, или нитрат аммония (например, О,1 г нитрата калия, что создает концентращио соли 1:10000). Содержимое сосуда перемешивают до растворения соли. Затем взвешивают 0,05 г кристаллической мочевины и ее вносят в только что приготовленный раствор и после перемешивания получают 0,005%-ный раствор мочевины в растворе нитрата калия. В приготовленный двухкомпонентньш раствор помещают лягушек любого вида. Сосуд закрывают крьпикой, в которой предварительно сделаны отверстия диаметром 1 см для доступа воздуха. В растворе лягушки выдерживают 72- 120 ч. После истечения этого времен крышку с сосуда снимают и удаляют лягушки. Содержимое банки сливают в другой сосуд, например кювету; раствору дают отстояться 5 мин, при этом выделенные лягушками гельминты оседают на дно. Их учет и сбор проводят общепринятыми методами, после чего используют на лабораторных занятиях студентов или учащихся или с научными целями. Лягушки возвращаю в террариум.

Для отработки режимов выполнения способа были приготовлены растворы различных концентраций, представленные в таблице.

I

В результате проведенных экспериментальных исследований установили, что наиболее эффективными являются 0,005-0,007%-ные растворы мочевины в растворах нитрата калия (1:8000- 10000) или в растворах нитрата нат5: S532

рия (1:10000-12000), или в раство- pax нитрата кальция (1:12000-14000), или в растворах нитрата аммония (1:13000-15000), причем активное

5 выделение гельминтов наблюдается через 72-120 ч после помещения лягушек в растворы. С концентрациями, вьгкодящими за пределы изложенных вьше, применение растворов мочевины

10 в растворах солей нитратов не сопровождалось по:1ожительным эффектом. Применение растворов мочевины или растворов солей нитратов в указанных пределах,но не сочетанно,

15 а раздельно, также не сопровождается положительным эффектом.

Пример 1. Известными спосо-. бами готовят в стеклянной банке емкостью 3 л раствор нитрата калия

20 при концентрации 1:8000. В этот же раствор добавляют 0,05 г мочевины. В банку помещают 5 прудовых лягушек. В другую банку (контрольную) с 1 л дистиллированной воды указанных

25 химических реагентов не вносят, но помещают 5 таких же лягушек. Банки закрывают капроновыми крышками (в каждой имеется по 1 отверстию диаметром 1 см) и содержат при 18 С.

30 Ведут наблюдения. Через 72 ч от начала опыта лягушки удаляют из банки, раствор сливают в кювету, проводят учет и сбор гельминтов. Затем раствор с кюветы выливают в сосуд и туда же

35 помещают лягушек. Эту процедуру повторяют через 96 и 120 ч. Через 72 ч из кишечника лягушки вьщелился 1 гельминт, через 96 ч - 3 и через 120 ч - 2. В контрольном сосуде гель Q минты не обнаружены.

Пример 2,В стеклянную банку емкостью 3 л наливают 1 л дистиллированной воды, вносят 0,111 г нитрата калия (раствор 1:9000), растворяют, добавляют 0,06 г мочевины, снова пер емедшвают, получают 0,006%-ный раствор мочевины в растворе нитрата калия. В контрольный сосуд наливают такую же воду, реактивов не вносят.

50 в оба сосуда помещают по 5 прудовых лягушек, банки закрывают капроновьп ш крьшжами с отверстием и выдерживают до 144 ч. Через каждые 24 ч ведут учет и сбор гельминтов, как изложено

55 в примере 1. В опытном сосуде через 24 и 48 ч гельминты отсутствовали, через 72 ч их было 2, через 96 ч - 5, через 120 ч - 3 и через 144 ч - О,

45

т.е. за период опыта от 5 лягушек было получено 10 гельминтов, а в контроле 0.

Пример 3. В контрольный и опытный сосуд наливают по 1 л дистил лированной воды. В опытный сосуд вно сят 0,1 г нитрата калия и 0,07 г мочевины, после растворения реагентов (очередность аналогична примеру 1) получают 0,007%-ный раствор мочевины в растворе нитрата калия (1:10000). В контрольный сосуд реагенты не вносят. Затем в оба сосуда помещают по 5 прудовых лягушек. Учет и сбор гельминтов такой же, как и в примере 1. В опытном растворе быпо через 72, 96 и 120 ч соответственно 1,2 и t гельминтов, а в контроле гельминты отсутствовали.

Пример 4. В две стеклянные банки наливают по 1 л дистиллированной воды. В опытную банку добавляют 0,1 г нитрата натрия и 0,05 г мочевины. В контрольный сосуд химические вещества не вносят. В обе банки по- мещают по 5 прудовых лягушек. Банки закрывают капроновыми крышками (в каждой крьшке имеется одно отверстие диаметром 1 см) и содержат при 18 С.

Через 72 ч от начала опыта лягушки из сосудов удаляют и ведут учет и

j 10 f5

20 S

0

сбор гельминтов. Затем ляг-ушек возвращают в соответствующие сосуды и из кювет наливают раствор и воду. Эту операцию повторяют через 96 и 120 ч от начала опыта. Через 72 ч бьшо собрано 2 гельминта, через 96 ч - 2, через 120 ч - 1, через 144 ч - 0. Б контроле гельминты не были обнаружены.

Пример 5. Постановка опыта аналогична примеру 4, однако вместо нитрата натрия используют нитрат кальция в концентрации 1:12000 и 0,005%-ный раствор мочевины. Дальнейший Ход опыта аналогичен изложенному в примере 4. В контрольном сосуде гельминтов не обнаружили, а в опытном растворе получено было 1 через 72 ч, 3 - через 96 ч, 1 через 120 ч и О через 144 ч.

Пример 6. Постановка опыта аналогична примеру 4, однако вместо нитрата натрия используют нитрат аммония при концентрации 1:1300 и 0,005%-ный раствор мочевины. Через 24,48,72,96,120 и 144 ч от начала опыта в опытном сосуде обнаружили соответственно 0,0,1,2,2 и О гельминтов, в контроле гельминты не обнаружены .