Способ выделения неполовозрелых форм трематод из моллюсков Советский патент 1988 года по МПК A01K67/00 A61B10/00 

DO

У1 СП К

Р1зобрете П1е относится к биологии, а именно к зоологии и паразитологии, а также к средствам обучения в качестве наглядного пособия в учебно-методической и научно-исследовательско работе.

Цель изобретения - диагностика заражения моллюсков неполовозрелыми формами трематод с одновременным сохранением жизнеспособности моллюсков

Пример 1. А. Берут 6 (1 - для контроля, остальные - для опытов мерных колб, емкость каждой 500 мл, нумеруют их и в каждую наливают до метки дистиллированную воду На аналитических весах взвепивают навески химических веществ в количествах, указанных в табло1, и вносят в колбы 2-6 поочередно. Получают первые трехкомпонентные растворы, состоящие 13 нитрита и нитрита калия и гидро- ксиламина о

Затем нумеруют 6 стеклянных банок емкостью 250 мл каждая, в первую банку наливают 100 мл дистиллированной воды, а в остальные - по 100 мл соответствующего раствора (табл.1), в каждую банку - по одному половозрелому прудовику. Сосуды закрывают капроновыми крьшжами (в каждой отверстие диаметром 4 мм для доступа воздуха в полость сосуда) и оставляют опять в помещении при 18°С. Ведут наблнэдения в течение 84 ч при помощи лупы. Из табл.1 , что вьщержива ние моллюсков в первых трехкомпонент ных растворах при заданных концентрациях хит шческих веществ в течение 84 ч не сопровождается выделением из их организма церкариев. Появление в растворах опытных сосудов церкариев замечают по их специфической форме тела, похожей на головастиков, и быстрой подвижности в растворах.

Б. Берут 6 мерных колб, емкость каждой 500 ьст, нумеруют их и в каждую наливают до метки дистиллированную воду. Аналогичным образом получают вторые трехкомпонентные растворы (табл.2).

По примеру 1А через 84 ч крьшки с банок снимают, моллюсков временно переносят в другие сосуды, воду и растворы удаляют, в банки наливают по 100 МП воды и растворов, приготовленных в колбах по примеру ТВ (табл.2). В банки на 9 ч помещают

моллюсков, закрьгоают крьшшами и ведут наблюдения.

Количество церкариев, вьделенных одним прудовиком, определяют следующим образом: через 9 ч после помещения моллюсков во вторые трехкомпо нентные растворы последние перемешивают стеклянной палочкой и с каждого опытного сосуда отбирают пипеткой 4 пробы раствора по 1 мл в каждой. Пробы напивают в 4 чашки Петри и при помощи лупы ведут учет количества вьщеленных церкариев По 4 пробам вьгаодят среднее. Среднее количество (содержимое в 1 мп) умножают на 100 (100 МП раствора) и получают среднее количество трематод, виделенное одним моллюском (табл.2).

Из табл„2 следует, что вьщержива- ние моллюсков в первых растворах в течение 84 ч с последующим переносом и выдерживанием их во вторых растворах (за исключением растворов в сосудах 2 и 6) сопровождается выделением из организма моллюсков церкариев.

По примеру 1А и Б растворы готовят из расчета использования нитрата и нитрита калия в возрастающих концентрациях от сосуда 2 до 6, а гидрокси- ламина - в убывающих

В. Последовательность выполнения технических операций аналогична А и Б, за исключением внесения во вторые растворы гидроксиламина в возрастающих концентрациях (табл.3).

Из табЛсЗ видно, что вьдерживание моллюсков 84 ч в первых растворах с последующим их перенесением и ввдер- живанием в течение 9 ч во вторых растворах, приготовленных с добавкой гидрокснламина в возрастающих концентрациях 0,007-0,01%, не сопровождается выделением церкариев из организма моллюсков за исключением сосуда 4, где концентрации всех трех химических веществ аналогичны сосуду 4

табл.2. I

На основании проведенных исследований делают общий вьшод: граничными значениями концентраций нитрата калия в первых растворах являются 0,00025-0,00045%, нитрита калия - 0,00025-0,00045%, гидроксиламина - 0,00045-0,00025%, во вторых растворах - 0,0075-0,0095% для нитрата калия, 0,0045-0,0065% для нитрита калия и 0,0095-0,0075% для подроксиламина.

При таких концентрациях вьщерживание моллюсков в первых растворах в течение 84 ч с последующим перенесением юс во вторые растворы и вьдерживание их на протяжении 9 ч сопровождается выделением церкариев из организма моллюсков. При этом для приготовления сложных трехкомпонентных растворов нитрат и нитрит калия применяют в возврастающих концентрациях, а гидроксиламин - в убывающих по отношению к концентрациям первых двух веществ.

Пример 2. Берут мерную колбу емкостью 500 мп. Наливают дистиллированную воду до метки. Готовят первый трехкомпонентный раствор из вышеназванных веществ при концентрации каждого 0,00035% - табл.4, сосуд 4. Методика проведения опыта аналогична примеру 1 (табло4).

Из табл.4 следует, что граничными значениями времени вьдерживания моллюсков в первом растворе являются 72-96 ч, а во втором растворе 6-12 ч При зтих значениях времени и последовательности из организма моллюсков не вьделяются церкарии.

Вьщерживание моллюсков во втором растворе в течение 5-13 ч без предварительного вьщерживания их в первом растворе не сопровождается вьщеление из их организма церкарии„

Изобретение дает возможность на 100% сохранять моллюсков живыми после получения от них церкариев и использовать их по другому назначению, проводить диагностические исследования на предмет видовой принадлежности заражения моллюсков зародышами фасциол и на этом основании прогнозировать возникнование у животных

0

5

5

0

5

0

фасциолеза и предупреждение его возникновения, получать церкарии в нужном количестве и в нужное время, выделять церкарии из организма моллюсков естественным путем. Изобретение также характеризуется доступностью применяемых химических веществ и сосудов, простотой технического исполнения и гигиеничностью.

Изобретение можно использовать в вивариях для дегельминтизации моллюсков с целью оздоровления их и продления срока жизнеспособности, а также для предупреждения их гибели, и в педагогическом процессе обучения студентов и учащихся в учебных заведениях биологических профилей, а также в лабораторной практике, особенно ветеринарных и медицинских профилей.

Формула изобретения

Способ вьделения неполовозрелых форм трематод из моллюсков, включающий помещение моллюсков в раствор, отличающийся тем, что, с целью обеспечения жизнеспособности моллюсков и предотвращения их травмирования, в качестве раствора используют водные растворы, содержащие нитрат, нитрит калия и гидроксиламин, причем сначала моллюсков помещают на 72-96 ч в раствор, содержащий, мас.%: Нитрат калия Нитрит калия Гидроксиламин Вода

а затем на 6-12 ч вор, содержащий, маСо%:

Нитрат калия 0,0075-0,0095 Нитрит калия 0,0045-0,0065 Гидроксиламин 0,0075-0,0095 ВодаОстальное

0,00025-0,00045 0,00025-0,00045 0,00025-0,00045 Остальное, переносят в рястТаблица 1

Изобретение относится к биоло- гии, а конкретно к зоологии и паразитологии. Цель изобретения - обеспечение жизнеспособности моллюсков и предотвращение их травмирования. Половозрелых моллюсков вьщерживают сначала 72-96 ч в первом трехкомпо- нентном растворе, содержащем нитрат калия, нитрит калия и гидроксиламин, калдого по 0,00025-0,00045 мас.%, остальное вода. Затем моллюсков переносят во второй трехкомпонентный раствор тех же солей при следующем соотношении компонентов, мас.%: 0,0075- 0,0095; 0,0045-0,0065; 0,0075-0,0095, остальное вода. Изобретение позволяет на 100% сохранить жизнеспособность моллюсков. 4 табл.

Нитрат калия О 0,001 0,00125 0,00175 0,00225 0,0025

О 0,0002 0,00025 0,00035 0,00045 0,0005

Нитрит калия Навески нитрита

на 500 мл воды, г О 0,001 0,00125 0,00175 0,00225 0,0025 Концентрации, нитрита в растворах, %О 0,0002 0,00025 0,00035 0,00045 0,0005

Навески нитрата на 500 мл воды, г

Концентрация нитрата в растворах, %

Навески гидро- ксиламина на 500 мл воды, г Концентрации гидроксиламина в растворах, %

Гидроксиламин

О 0,0025 0,00225 0,00175 0,00125 0,001 О 0,0005 0,00045 0,00035 0,00025 0,0002

Показатели

n:i:

Сосуд 3

О 0,035

Нитрат калия 0,0375

О 0,02

О 0,007 0,0075

Нитрит калия 0,0225

О 0,004 0,0045

Гидроксиламин

Навеска гидроксиламина на 500 мл воды. Концентрация

Выделено церкариев, штук

О О

75

Таблица2

I 56

0,04750,05

0,00950,01

0,03250,035

0,00650,007

125

50

Таблица

Первые растворы Нитрат калия