Способ выделения паразитов из малых прудовиков для лабораторных исследований по Н.Ф.Запорожцу Советский патент 1989 года по МПК A01K67/00 A61B10/00 

1

Изобретение относится к зоологии и паразитологии, а также к медико- биологическим моделям - лаборатор - ным препаратам, и может быть использовано как наглядное лособие в учебно-методической и научно-исследовательской работе.

Цель изобретения - вьщеление церкарий, получение адолескарий и выведение фасциол при сохранении жизнеспособности улиток.

Способ заключается ъ том, что малых прудовиков помещают в двухкомпо- нентный раствор (состоит из уксусной кислоты при концентрациях 0,04-0,06% и нитрита,натрия при концентрациях

0,0002-0,0004%) и вьщерживают в тё- : чение 9-12 ч. Получают церкарий из организма улиток. Улитки с раствора удаляют, а церкарий в растворе выдерживают на протяжении 18-60 ч. После зтого времени получают из церкарий адолескарий на внутренней поверхности сосуда (они прочно приклеиваются к поверхности сосуда). Раствор удаляют . Б сосуд с адолескариями вносят смесь двух биологических жидкостей, вначале после измельчения тканей пе- крупного рогатого скота и последующего отжимания печеночного фарша через 4 слоя марли и фильтрования полученной биологической жидкости

Од 4 СО

3146

через обеззоленный бумажный фильтр - получают сок. К последнему добавляют 4-10% натуральной желчи крупного рогатого скота. В итоге получают смесь двух биологических жидкостей, которую используют согласно способу, помещают в термостат и инкубируют Б течение не менее 1 ч при 35-40 С. После этого живых фасциол из адо- лескарий.

Пример 1. 2 малых прудовика выдерживают в двухкомпонентном растворе, состоящем из 0,04% уксусной кислоты и 0,0002% нитрита натрия, в течение 10,5 ч. Полученные церкарии в 5 чашках Петри в указанном растворе вьщерживают 39 ч при 18, С. В контроле церкарии от улиток не выделено, а в опыте их вьщелено 75. Из этих церкарии получено 62 адолескарии. Улитки остались живыми.

Пример 2. 2 улитки опыта выдерживают в двухкомпонентном раство

вают 12 ч. В опыте выделено 100 церкарии и получено 92 адолескарйи. В контроле О и О соответственно.

Пример 7. Готовят 10 л двух- компонентного раствора, который состоит из 0,05% уксусной кислоты и 0,0003% нитрита натрия. Берут 2 банки, емкость каждой 0,5 л, нумеруют

их. В первую наливают 100 нл дистиллированной воды, а во вторую (опыт) - 100 мл указанного раствора. В оба сосуда помещают по 2 малых прудовика на 10,5 ч при 18°С. Получают церка- рии (улитки после этого из сосудов удаляют), которые выдерживают в двухкомпонентном растворе 18 ч. В контроле от улиток церкарии не выделено, а в опыте их выделено 550. Из этого количества церкарии получено 510 адолескарйи. Улитки остались живыми.

П р и м е р 8. Аналогичен примеру 7, но здесь церкарии в двухкомпонентном растворе вьщерживают 39 ч.

Изобретение относится к зоологии и паразитологии, а также к медико-биологическим моделям - лабораторным препаратам, и может быть использовано как наглядное пбсобие в учебно-методической и научно-исследовательской работе. Целью изобретения является выделение церкарий, ние адолескарий и вьшедение фасциоп при сохранении жизнеспособности ули- .ток. Малых прудовиков помещают в « раствор, содержащий 0,04-0,06% уксусной кислоты и 0,0002-0,0004% нитрита натрия. Вьдерживают в течение 9-12 ч. Получают церкаг ии. Улиток из раствора удаляют. Церкарий в растворе вьщерживают в течение 18-60 ч, Получают из церкарий адсшескарии, Раствор удаляют. В сосуд с адопеска- риями вносят фильтрат тканей печени. К последнему добавляют 4-10% натуральной желчи крупного рогатого скота. Адолескарий инкубируют более 1 ч при температуре 35-40 С. Получают живых фасциол из адолескарий. Малые прудовики остаются жизнеспособными. i (f

ре, состоящем из 0,05% уксусной кисло--25 В опыте выделено от улиток 600 церты и 0,0003% нитрита натрия. 2 малых прудовика вьщерживают в дистиллированной воде (контроль). В контроле от улиток церкарии не получено, а в

карий и получено 530 адолескарйи, а в контроле соответственно О и 0.

П р и м е р 9. Аналогичен примеру 7, но здесь церкарии в двухкомпоопыте их выделено 550. Из этого коли- ЗО нентном растворе выдерживают 60.ч.

чества получено 490 адолескарйи.,.В опыте от 2 малых прудовиков выдеУлитки остались живыми. лено 600 церкарии, из которых полуП р и м е р 3. 2 малых прудовика

(опыт) вьщерживают в дву-хкомпонентном

растворе, который состоит из 0,06%

35

чено 520 адолескарйи, в контроле О и О соответственно.

Пример 10. Адолескарйи в опы те инкубируют при 35°С (а в условном контроле - 34 С) в составе смеси биологических жидкостей (7% желчь, в соке из печени) в течение 1 ч. В опыте из 92 адолескарйи 51 фасциола, что составляет выход фас- цнол 55%, а в контроле соответственно 100,29 и 29.

уксусной кислоты и 0,0004% ш-1трита натрия. В опыте вьщелено 125 церкарии (улитки остались живыми) и получено из них 104 адолескарйи, а в контроле соответственно О и 0.

П р и м е р 4 . Улитки вьщерж 1вают в течение 9 ч при 18°С в двухкомпонентном растворе - 0,05% уксусной кислоты и 0,0003% нитрита натрия (опыт), а в контроле улитки - мальм прудовик - в воде. В опыте от улиток вьщелено 450 церкарии, из которых через 39 ч получено 420 адолескарйи, а в контроле (улитки выдерживают в воде в ,12,5 ч) О и О соответственно.

Пример5(. 2 малых прудовика вьщерживают в двухкомпонентном растворе в течение 10,5 ч, а в контроле- в воде 12,5 ч. В опыте получено 600 церкарии и 530 адолескарйи, а в контроле соответственно О и О,

П р и м е р 6. 2 малых прудовика в двухкомпонентном растворе вьщержи

ено 520 адолескарйи, в контроле О О соответственно.

Пример 10. Адолескарйи в опыте инкубируют при 35°С (а в условном контроле - 34 С) в составе смеси биологических жидкостей (7% желчь, в соке из печени) в течение 1 ч. В опыте из 92 адолескарйи 51 асциола, что составляет выход фас- цнол 55%, а в контроле соответственно 100,29 и 29.

П р и м е р 11. Адолескарйи ин- кубируют при 37,5 С (опыт), а в контроле (согласно примера 10) - при 34 С. Из 106 адолескарйи получено 102 фасциолы, выход которых составляет 96%, а в контроле 100,29 и 29 со- ответственно.

Пример 12. Адолескарйи инку - бируют в опытном сосуде при 40°С, а в контроле (см.пример 10) - при 34°С. В опыте из 94 адолескарйи получено 73 фасциолы, что составляет 78% выхода, а в контроле соответственно 100,29 и 29.

П р и м е р 13. Чашки .Петри с адолескариями в смеси биологических

жидкостей инкубируют 1 ч при 37,5 (опыт), а в контр оле 50 мин. В опыте из 110 адолескарий-получено 108 фас- циол, что равно 98% выхода, а в контроле соответственно 120,0 и Oi

П р и м е р 14. Адолескарии инкубируют в течение 70 мин. а в контроле .50 мин. В контроле из 120 адопескарий получено О фасциол, что состав- ю гие концентрации желчи в соке из

ляет 0% выхода, а в опыте 120,116 и 97 соответственно.

Пример 15. Адолескарии инкубируют при 37, в течение 1 ч в смеси биологических жидкостей - 4% натуральной желчи крупного рогатого скота в соке печени. В контроле 3% желчи. В опыте из 110 адолескирий получено 89 фасциол, выход составляет 81%, а в контроле соответственно 105,0 и 0.

Пример 16. Адолескарии инкубируют в смеси биологических жидкостей - 7% натуральной желчи в соке из

печени, но при этом к соку добавл ют 3 или 10% натуральной желчи со ласно способу.

Применение параметров за преде

15 ми предлагаемых, или применение р воров уксусной кислоты (0,04-0,06 и нитрита натрия (0,0002-0,0004%) сочетанно по два, а раздельно по ному, не сопровоядается получение

20 положительного зффекта.

Предлагаемый способ позволяет 100% сохранить после эксперименто малых прудовиков жизнеспособными, ет возможность получать от улиток

печени. Остальное - аналогично приме- 25 лабораторных условиях неограниченное

ру 15. В опыте из 1.20 адолескарий получено 118 фасциол, что составляет 98% выхода, а в контроле 105,0 и О соответственно.

Пример 17. Адолескарии инкубируют в смеси биологических жидкостей - 10% натуральной желчи в соке из печени. Остальное - аналогично примеру 15. В опьгге из 120 адолеска- рий получено 118 фасциол, выход 98%, а в контроле 105,0 и 0.

Пример 18. Берут 1 кг печени от крупного рогатого скота, при помощи ножа режут ее на мелкие кусочки, которые дополнительно измельчают при помощи мясорубки - получают, фарш из печени. Последний помещают в марлю, состоящую из четырех слоев, и руками тщательно отжимают - получают сок из печени. Далее берут мерный цилиндр, вставляют в него стеклянную воронку, в которую помещают обеззо- ленньщ бумажный фильтр, и наливают сок печени. После фильтрования подучают прозрачный красноватый сок. Беут 93 МП профильтрованного сока и к нему добавляют 7 мл натуральной свежей желчи крупного рогатого скота.

перемешивают стеклянной папочкой. В итоге получают 7% раствор желчи в соке из печени, т.е. получают смесь двух биологических жидкостей. Ее используют для инкубирования адолеска- рий и получения из последних фасциол согласно способу.

Аналогичным образом готовят и друпечени, но при этом к соку добавляют 3 или 10% натуральной желчи согласно способу.

Применение параметров за пределами предлагаемых, или применение растворов уксусной кислоты (0,04-0,06%) и нитрита натрия (0,0002-0,0004%) не сочетанно по два, а раздельно по одному, не сопровоядается получением

положительного зффекта.

Предлагаемый способ позволяет на 100% сохранить после экспериментов малых прудовиков жизнеспособными, дает возможность получать от улиток в

количество церкарий, адап.ескарий и фасциол, причем в нужное время.

Формула изобретения

Способ вьщеления паразитов из малых прудовиков для лабораторных исследований, включаюпщй помещение малы прудовиков в раствор, о т л ичающийся тем, что, с целью вьщеления деркарий, получения адолескарий и выведения фасциол при сохранении жизнеспособности улиток, малых прудовиков помещают в раствор, содержащий 0,04-0,06% уксусной кислоты и 0,0002-0,0004% нитрита натрия, выдерживают в нем в течение 9-12 ч, вьщелившиеся церкарий с раствором переносят в другой сосуд и выдерживают в нем в течение 18-60 ч,после чего раствор удаляют, а вьщелившиеся адолескарий помещают в фильтрат тканей печени крупного рогатого скота, к которому добавляют натуральную желчь крупного рогатого скота при концентрации 4-10%, и термостатируют при 35-40 С в течение одного и более часов получения фасциол.