Питательная среда для глубинного культивирования бактерий рода @ Советский патент 1987 года по МПК C12N1/20 C12N1/20 C12R1/21 

. . 1 .

Изобретение относится к микробиологии, в частности к получению питательных сред, предназначенных для культивирования бактерий рода гемо- филов, биомасса которых используется р,ля выделения ферментов, таких как эндонуклеазы.

Цель изобретения - повьппение выхода биомассы и упрощение состава среды.

Сущность изобретения заключается в том, что питательная среда в качестве питательного субстрата содержит ферментолизат биомассы микроорганизмов и автолизат (экстракт) дрожжей. Предлагаемая среда содержит следующие компоненты, г/л: Ферментолизат биомассы микроорганизмов 18,0-20,0 Автолизат дрояжей 9,0-10,0 Глюкоза ,4,5-5,0

Натрий хлористый 4,5-5,0 Гемин0,009-0,01

Никотинамидаденин- динуклеотид . 0,0019-0,002 Вода дистиллированнаяОстальноевыход биомассы бактерий составляет 2,4-3,7 г влажных клеток .с 1 л,

Использование белковых компонентов с различной степенью гидролиза (дрожжевой автолизат (экстракт) - низкая степень гидролиза, ферменто- . лизат - высокая степень гидролиза) позволяет наиболее, полно удовлетворить, потребности бактерий рода Нае- mophilus в белковом питании и росто- вьге факторах, что приводит к значительному повьшению выхода биомассы.

В таблице приведены эксперимен- .тальные данные, иллюстрирующие существенность признака, относящегося к количеству глюкозы в .среде, а также эффективность .совместного использования ферментолизата биомассы микроорганизмов и автолизата экстракта дрожжей.

Как видно из приведенных в таблице дан1лпс, увеличение в питательной среде суммарного содержания ферментолизата биомассы микроорганизмов и дрожжевого автолизата сверх максимального значения. 28-30 г/л и неизменной концентрации глюкозы 5 г/л приводит к заметному снижению выхода биомассы На emophilus с 3,7 до 3,1 г/л. Использование такого же количества только дрожжевого автолизата, либо

to

f5

20

170202

только ферментолизата биомассы микроорганизмов при неизменной концентра- :ции глюкозы уменьшает выход биомас-.

сы Haemophilus соответственно до 5 , либо 2,0 г/л.

Таким образом, лищь совместное введение в питательную среду ферментолизата биомассы микроорганизмов и дрожжевого экстракта (как ростовых факторов и белкового питания) обеспечивает необ::одимый несуммарный эффект существенного увеличения выхода биомассы (при оптимальном содержании глюкозы 5 г/л).

Концентрация глюкозы ниже 4,5 г/л не обеспечивает достаточного повьше- ния выхода биомассы, а концентрация глюкозы выше 5,0 г/л не приводит к дальнейшему росту выхода биомассы и целесообразна.по экономическим со ображениям.

П. р и м е р 1. Для приготовления 4000 г питательной среды берут

25 2000 мл дистиллированной воды, вносят в нее 80,0 г ферментолизата биомассы микроорганизмов и 40,0 г автолизата дрожжей, нагревают до кипения, устанавливают рИ 7,1-7,2, кипятят 5 мин,

30 охлаждают, центрифугируют при 3500- 4000 об/мин в течение 35-40 мин. Полученньш супернатант доводят до 2000,0 г. Затем растворяют в 2000,0 мл дистиллированной водьь

г 20,0 г хлористого натрия и 20,0 г глюкозы. При необходимости раствор фильтрузот.. Полученные растворы смешивают, стерилизуют в автоклаве при 0,8±0,15 кгс/см. Перед культиви Q рованием в него добавляют стерильные растворы гемина до конечной концентрации 0,01 г/л и НАД - до 0,002 г/л. В ферментер с предлагаемой средой вносят инокулят бактерий

45 Haemophilus influenzae и культивируют при 37°С с хорошей аэрацией до конца логарифмической фазы, .Урожай составляет 3,7 г/л влажньпс клеток пригодных для выделения фрементов

5Q эндонуклеаз рестрикции.

П р и м е р 2, Для приготовления 4000т питательно-й среды берут 2000 мл дистиллированной воды-, вносят в нее 72,0 г ферментолизата биогс массы микроорганизмов и 36,0 г автолизата дрожжей, обрабатывают так, как в примере 1. Затем растворяют в 2000,0 мл дистиллированной воды 18jO г глюкозы и 18,0 г хлористого

натрия. Оба раствора смешивают, стерилизуют. Перед использованием в среду добавляют НАД и гении до конечных концентраций последних 0,0019 и 0,009 г/л. В ферментер с данной средой вносят инокулят бактерий Haemophilus influenzae и культивируют при 37°С. Выход биомассы 2,4 г/л влажных клеток.

П р и м е р 3. Для приготовления 4000,0 г питательной среды берут 2000,0 мл дистиллированной воды и :вносят в нее 48,0 г фермёнтолизата биомассы микроорганизмов и 16,0 г дрожжевого экстракта, обрабатьшают так.как в примере 1. Затем растворяют в 2000,0 мл дистиллированной воды 18,0 г глюкозы и 18,0 г хлористого натрия. Оба раствора смешивают, стерилизуют. использованием в среду добавляют НАД и гемин до конечной концентрации последних 0,0019 и 0,0009 г/л. При ферментации в этой среде по описанным условиям выход клеток Н.influenzae 1,3 г/л.

П р и м е р 4. Для приготовления 4000,0 г питательной среды берут 2000,0 мл дистиллированной воды, вносят в нее 80,0 г фермёнтолизата биомассы микроорганизмов и 40,0 г .автолизата дрожжей, обрабатьшают такJ как в примере 1 .За.тем растворяют в 2000,0 мл дистиллированной воды 20,0 г хлористого натрия и 20,0 г глюкозы. Оба раствора смешивают, стерилизуют. Перед использованием в среду добавляют НАД и гемин, до конечной концентрации последних 0,002 и 0,01 г/л. В ферментер с предлагае- мой средой вносят инокулят бактерий Haemophilus aegyptius и культи- .вируют при с хорошей аэрацией до конца логарифмической фазы. Выход

3.6г/л влажных клеток, пригодных для вьщеления ферментов эндонуклеаз рестрикции.

Предлагаемая питательная среда . для глубинного культивирования бактерий рода гемофилов обладает рядом преимуществ перед известной. Использование среды позволяет увеличить выход клеточной биомассы с 2,0 до

3.7г/л среды. Упрощен состав среды: вместо восьми компонентов в известной среде предлагаемая содержит шесть, причем исключены такие дорогие дефицитные компоненты, как свежи мозги, сердце, пептон, в связи с чем отпадает необходимость закупки импортных питательных сред. Упрощен и сокращен процесс приготовления среды Снижена стоимость питательной среды.

Формула изобретения

Питательная среда для глубинного культивирования бактерий рода Haemophilus, содержащая питательный субстрат, хлористый натрий, глюкозу, гемин, никотинамидалениндинуклео тид и воду, отличающаяся тем, что, с целью повьшения выхода биомассы и упрощения состава среды, она включает в качестве питательного субстрата ферментолизат биомассы микроорганизмов и автолизат дрожжей в соотношении 2:1 при следующем coioT- ношении компонентов, г/л: Ферментолизат биомассы микроррганизмов 8,0-20,0 Автолизат дрожжей . 9,0-10,0 Глюкоза4,5-5,0

Хлористый натрий 4,5-5,0 Гемин0,009-0,01/

Никотинамидаденин- динуклеотид . 0,0019-0,002 Вода дистиллированная Остальное

О О

Sйч

1Л о

см

о

о

со

т g

см

о см

о о

о см о о

о см о о

00I

I I

со

о см о

о

со

0%

о о

го

00

о

о

со

п см

§

о

о о

су.

Изобретение относится к области микробиологии. Цель - повышение выхода биомассы и упрощение состава среды. Среда в качестве питательного субстрата содержит ферментоли- зат биомассы микроорганизмов и авто- лизат (экстракт дрожжей в количествах, соответственно равных (в г/л) 18,0-20,0 и 9,0-10,0. Использование предлагаемой среды позволяет увеличить выход клеточной биомассы с 2,0 до 3,7 г/л. 1 табл. (Л