Способ определения церебральных нарушений у доношенных новорожденных детей,родившихся в тяжелой асфиксии Советский патент 1987 года по МПК G01N33/48 

1

Изобретение относится к медицине/, а именно к способам ранней диагностики заболеваний-у детей.

Цель изобретения - ранняя диагностика глубоких церебральных нарушений у новорожденных детей, родившихся в тяжелой асфиксии, путем определения содержания общих липидов в эритроцитах пуповинной крови.

Способ осуществляют образом.

Реактивы: физиологи-ческий раствор хлористого натрия (9 г/л)| концентрированная серная кислота (х.ч.); концентрированная ортофосфорная кислота (х.ч.)| водный раствор ванилина (6. г/л), для приготовления которого г ванилина растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды при нагревании на водяной бане, после охлаждения объем доводят водой до 100 мл, раствор стабилен при комнатной температуре фосфорно-ванили новая смесь: раствор ванилина (6 г/л) смешивают с концентрированной орто- фосфорной кислотой в соотношении 1:4; хранится при комнатной температуре в темной посуде не более 2 недель; стандартный раствор триолеина (8 г/л триолеина в хлороформе); хлороформ; метанол.

Ход определения. В, центрифужную пробирку, содержащую 0,5 мп физиологического раствора, вносят 0,05 мл цельной крови, перемешивают и центри- фугируют в течение 15 мин при 300 об/мин. Падосадочную жидкость

3340822

ды, пробирку закрывают полиэтиленовой пробкой осторожно встряхивают в течение 5 мин и центрифугируют в течение 10 мин при 1500 об/мин. Содержимое пробирки расслаивается на 2 фазы: нижняя содержит липиды, верхняя - нелипидные компоненты. Всю нижнюю фазу аккуратно отсасывают и переносят в

-jQ чистую пробирку. Эту пробирку ставят в водяную баню и выпаривают досуха при 75-85 С, В сухому липидному экстракту приливают мл хлороформа и 0,5 мл концентрированной серной кис15 лоты, тщательно перемешивают, ставят на водяную баню при 100°С на 20 мин, а затем сразу же охлаждают водопроводной водой до комнатной температуры,, После о-хлаждения прибавляют

20 1,5 мл фосфорно-ванилиновой смеси, тщательно перемешивают и пробу оставляют на 45 мин в темноте при комнатной температуре, после чего ее коло- риметрируют на фотоэлектроколориметре 25 с зеленым светофильтром (длина волны 500-560 нм) в кювете с толщиной слоя 3 мм против контроля на реактивы. Расчет содержания липидов в пробе производят на, основании сопоставления ЭКСТИНК1ДИИ опытной и эталонной проб против контрольной пробы. Контрольную и эталонн г-ю пробы готовят так же, как и опытную, но вместо эритро- дитарной массы берут соответственно по 0,01 мл дистиллированной воды и стандартного раствора тииолеина с концентрахщей 8 г/л.

Расчет ведув, по формуле

30

35

с верхним слоем эритроцитов отсасывают, а к оставшейся на дне зритроци- 40 пя , , / / Экстннкция опыта

иощйе липиды vr/л/---------

тарной массе добавляют 1,0 мл физиологического раствора. Проводят повторное центрифугирование в течение 15 мин при 3000 об/мин, надосадочную жидкость осторожно ,полностьЕо отсасывают.. Микропипеткой набирают OjOl мл эритроцитарной массы и вносят в пробирку, в которую предва)рительно наливают 0,1 мл дистиллиров.анной водьи К образовавшемуся гемолизату добавляют 5 МП хлороформ-метанолоБОЙ смеси (2:1 по объему), содержимое пробирки осторожно встряхивают в течение 15 мин и фильтруют в чистую центри45

50

Экстинкция эталон

где 8 -- концентрация липидов в эталонной пробе, г/л. Пример 1„ Ребенок И,5 мужского пола, масса тел:а при рождении 3350 г, длина тела 52 см. Родился в тяжелой асф1 ксии5 с оценкой по шкале Апгар 2/6 б алпов (первая оценка - через 1 мин, вторая - через 5 мин после рождения), Сразу же после рождения проводились реанима1.щонные мероприятия. Во время пребывания в родильном доме состояние ребенка остафужную пробирку .Пробирку и осадок на gg валось тяжелым, развились клинические фильтре промывают дважды хлороформ-явления нарушения мозгового кровообмл

метаноловой смесью по 1 мл. К объединенному фильтрату в опытной пробирке добавляют 1,5 МП дистиллированной воращ.ения II-III степени, по поводу чего он получал соответствующее лечение, а на. 11-е сутки жизни был переной температуре, после чего ее коло- риметрируют на фотоэлектроколориметр 25 с зеленым светофильтром (длина волны 500-560 нм) в кювете с толщиной слоя 3 мм против контроля на реактивы. Расчет содержания липидов в пробе производят на, основании сопоставления ЭКСТИНК1ДИИ опытной и эталонной проб против контрольной пробы. Контрольную и эталонн г-ю пробы готовят та же, как и опытную, но вместо эритро- дитарной массы берут соответственно по 0,01 мл дистиллированной воды и стандартного раствора тииолеина с концентрахщей 8 г/л.

Расчет ведув, по формуле

30

35

иощйе липиды vr/л/---------

5

0

Экстинкция эталона

где 8 -- концентрация липидов в эталонной пробе, г/л. Пример 1„ Ребенок И,5 мужского пола, масса тел:а при рождении 3350 г, длина тела 52 см. Родился в тяжелой асф1 ксии5 с оценкой по шкале Апгар 2/6 б алпов (первая оценка - через 1 мин, вторая - через 5 мин после рождения), Сразу же после рождения проводились реанима1.щонные мероприятия. Во время пребывания в родильном доме состояние ребенка остаращ.ения II-III степени, по поводу чего он получал соответствующее лечение, а на. 11-е сутки жизни был переведен для продолжения лечения в рологическое отделение для новорожденных. .

Содержание общих липидов в эритроцитах пуповинной крови 6,2 г/л.

Пример 2, Ребенок Ж,, мужского пола, родился в тяжелой асфиксии, с оценкой по шкале Апгар 4/7

нев-

баллов. Масса тела при рождении 4000 г, длина 56 с;м. Оживлен с использованием комплекса реанимационных мероприятий. В связи с развившимися глубокими неврологическими на- рушениями, свидетельствующими о нару- шении мозгового кровообращения II-III степени, получил необходимое лечение, а на 13-е сутки жизни бып переведен в неврологическое отделение для ново- рожденных детей.

Содержание общих липидов в эритроцитах пуповинной крови 7,85 г/л.

Пример 3. Ребенок Л., муже- кого пола, родился с массой тела

4000 г, длиной 58 см. Извлечен в

состоянии тяжелой асфиксии, с оценкой по шкале Апгар 3/6 баллов, реанимирован. Тяжелое состояние ребенка в родильном доме бьшо обусловлено явлениями нарушения мозгового кровооб- ращения II-III степени, Проводимое лечение не привело к исчезновению неврологической симптоматики и на 11-ё сутки жизни ребенок был переведен в неврологическое отделение для новорожденных.

Содержание общих липидов в эритроцитах пуповинной крови 9,8-5 г/л.

Таким образом, .определение уровня общих липидов в эритроцитах пуповин- ной крови детей, родившихся в тяжелой асфиксии, позволяет осуществлять раннее выявление глубоких церебральных нарушений до появления их клинических признаков и своевременно назначать необходимое лечение.

В процессе испытаний определено содержание общих липидов в эритроцитах пуповинной крови у новорожденных следующих трех групп (по 10 детей в каждой группе): I - здоровые новорожденные; II - дети, родившиеся в тяжелой асфиксии с минимальными церебральными нарушениями, исчезавшими к 10-12 суткам жизни, что позволило вьшисать этих детей домой; III - де- ти, родившиеся в тяжелой асфиксии с глубокими церебральными нарушениями, требовавшими раннего назначения ле

10

15 Здоровые новорожденные 20

4082

чебных мероприятий в родильном доме и дополнительного лечения в условиях специализированного неврологического отделения для новорожденных детей.

. Результаты определения содержания общих липидов в эритроцитах пуповинной крови у новорожденных всех трех групп приведены в таблице.

Содержание общих липидов (г/л) в пуповинной крови в зависимости от тяжести церебральных нарушений

Дети, родившиеся в тяжелой асфиксии

с глубокими цереб- I ральными нарушениями

5

0 5

0

3,54

4,74

3,69

3,87

4,27

3,79

3,12

4,712

5,28

5,81

3,79 5,31 3,47 4,17 4,36 3,10 5,89 6,38 3,79 5,50

6,25 9,54 7,58 7,20 7,37 7,67 9,80 6,96 6,86 8,04

40

45 М±ш 4,28+0,266 4,48+0,308 7,72+0,356

50

Как свидетельствуют результаты статистической обработки полученных данных, уровни общих липидов в эритроцитах пуповинной крови здоровых .J новорожденных и детей , родившихся в тяжелой асфиксии с минимальными це- 55 ребральными нарушениями, достоверно не отличились один от другого. В то же время содержимое общих липидов в эритроцитах пуповинной кровищу детей третьей группы (родившихся в тяжелой

. 5 133А0826

асфиксии с глубокими церебральнымиФормула изобретения

нарушениями) были с высокой степенЬюСпособ определения церебральных

достоверности (,001) вьше, чем унарушений у доношенных новорожденных

детей двух предьщущих групп.- Данные, детей, родившихся в тяжелой асфиксии

характеризу1ощие содержание общих ли-путем биохимического исследования

пидов в эритроцитах «йпувинной кровиэритроцитов пуповинной крови, о т детей, родившихся в тяжелой асфиксиили чающийся тем, что, с цес глубокими церебральными нарушения-лью ранней диагностики глубоких цеми, находятся в пределах, при которых ребральных нарушений, измеряют уроопределяют церебральные нарушения увень общих липидов и при их показановорожденньйс детей предлагаемымтеле, равном 6,2 г/л-9,85 г/л, опреспособом.деляют церебральные нарушения.

Изобретение относится к педиатрии. Цель изобретения - ранняя диагностика глубоких церебральных нарушений у новорожденных детей. В эритроцитах пуповинной крови определяют содержание общих липидов. Расчет содержания липидов в пробе производят на основании сопоставления экстинк- ции опытной и эталонной проб против контрольной пробы. Церебральные нарушения диагностируют при уровне общих липидов, равном 6,2-9,85 г/л. 00 со 4 00 ю