Штамм бактерий ЕSснеRIснIа coLI, используемый для изготовления антигена для диагностики колибактериоза птиц Советский патент 1991 года по МПК C12N1/20 A61K39/108 C12N1/20 C12R1/19 

Изобретен1-1е откосится к ветеринарной микробиологии;, в частности к получению 1лга.ъта.. использует-юго дагя даагностикн копи6актериоз«з птнд-и выявления скрытых бактерионосвтелей, Целью изобретения язляется штаг-(М Escherichia coli обладаюаснй высокой агглютииабепьностью и широким набором О-антигеноз позволяювдй получить эффективные диагностические биопрепараты,

Escherichia coll N 380 АЛК получен методом направленной селекции и последующего отбора по набеяьностио

Escherichia coli № 380 .М1К депонирован в коллекции ьшкроорганиз- мов Всесоюзного rocyyT;apctBeHHoro научно-контрольного института ветеринарных препаратов и имеет регистрационный номер 37-387-а/14в

Штамм Escherichia coli ВШКИ 9 37 387-а/ 4 карактеризуется следующими пpизнaкa iи,

Морфологические признаки Микробные клетки полиморфные j подвижные палочки с закругленными кондами, размером ()(,0) Спор и капсул не образуетj по методу Грама окрашивсгется отрицательно,

Культуральные свойствйа Культивируется на различных пит 1тельных средах, а частности на ЯЛА - мясопеп- тонном агаре, МПБ - мясопептонном бульоне,, полужидком МПА - мясопептох-г ном агаре, агаре Эндо при рН 6,

На скошенном МПА растет в виде полупрозрачных сероватых колоний с голубоватым оттенкомэ на среде Эндо - в виде мелких и крупных выпуклых колоний круглой формы красного цвета с металлическим блескоьз8 Пйтательньш агар вокруг колоний приобретает красное окрашивание в

В МПБ образует равномерное помут™ некие питательной среда; без образования пленки 5 иногда нежное пристеночное кольцо Факультативной аэроб. Оптимальная температург роста 37-42 С при рН

Биохимические свойства Обладает редуцирующей способностью - зосста- навливает нитраты в нитриты, образует индол 5 створажива€;т моло кОе Да ет положительную реакцию с ме галовым краснымо Не разжижает желатину, не ферментирует мочевину не усваивает

днтратаммонийные солИц н,е образует сероводорода

Отношение к спиртам. Усваивает MaHHHTj глицерин,

Отноше ше к углеводам. Расщепляет арабинозур глюкозу нэниите рамнозу, ксилоэУ| мальтозу5 сирбнт с образованием газа. Сахарозу расщепляет слабо, Не ферметинтирует дульцит и инозит.

Чувствителен к несмицину левоми- aeTHRS -j мономмлину, стрептомицт у, формалину,

Антигемные свойства. Штамм имеет антигенное родство по отношению к С-антигену к 22 серозарам эшерихий (015, 018д 026, , 046j 050, 086 0112, OnSs ОИ7, 0118, 01 19, 0120,.

0126. 0137, 0143, 0147i

0138, 0139„ 0148).

0141, 0142

5

0

5

. Культура штамма завешенная в физиологическом растворе хлорида нат™ рия и прогретая при температуре.. 3 течение 2ч, агглютинируется диагностическими 0-колисыворотками и указанным вьппе серогруппам кишечной палочки в титрах от 1;200 до 1;3200 с оценкой от -«--s- до -f-f- -, в реакции агглютинации РА на стекле агглзотинк- руется указанным сыворотками в разве- .деняях 1 :2 - i ; 10 в виде мелких и крупных зерен 5 взвешенных в капле исследуемой смеси жидкостей.

Антиген Escherichia coli из штам ма ВгаКИ № 37-387--а/14 на выявляет антител в антисыворотках сальмонеллj цитробактер, протея в пластинчатой реакции агглютинации РА,

Пример I, Культуру Escheri chia coli вгаШ 37-387-а/14 засевают на. поверкность мясопептонЯого агара с содержанием а мнногр азота от 250 до 300 мг/ . Инкубируют при 40°С 48 ч. Для посева использунп- 24 часову1о агаровую культуруj взвешенную в физиологическом растворе хлорида натрия 9 -6 концентрация 0 млрд/мл, из расчета 0,01 мл взвеси на 1 см поверхности питательной ере

SO ДЬ

Через 48 ч выроспгую бактериальную массу смывают fe предварительно взве- meHin- e центриф ужные стакань и дважда отмывают физиологическз- м раствором эшорида натрия в течение 15 мин при 5000 об/миНб После второго центрифугирования сливают надосадочную жидкость, взвешивают центрифужные стаканы с оставшейся в осадке бакте3 З

риальной массой. Определяют вес биомассы культуры по разности яесов стаканов с биомассой и пустых. Декантируют осадок буферным раствором с рН 6j9-7,l пэ расчета получения 3% нэве си сырой массы бактерий. Прн этом концентрация бактерий в препарате находилась в пределах 18-20 млрд/мл микробных тел. Приготовленную взвесь нагревают в течение 2 ч при ЮО С. При прогревании биомассы бактерий учет времени производился с момента достижения температуры кипення. К полученному антигену добавляют по

} мл 20%-ного раствора фенола и 40%- ного раствора лимонно-кнслого натрия на 00 Kft ш-1тигена,

П р и м е р 2, Антиген, получен- ньй по примеру i, используют для по- становки РА с целью диагностики полибактериоза птиц.

Для постановки кровскапелыюй агглютинации на предметное стекло при температлэе его поверхности плюс 41-А2°С5 наносят каплю, крови подопытных цыплят, взятой из подкрьтьцовой вены с помоп(ью скарификатора, и две капли испь1туемого антигена,

ПРи работе используют грелку-ка- чалку.

Каплю крови и две капли антигена смешивают и при покачивании столика качалки учитывают результаты чере з 60 с.

В результате исследований 500 про крови от 500 цыплят 35-дневного возраста ни в одном случае не быпо зафиксировано положительных или сомнительных результатов агглютинации антигена.

При клиническом осмотре 500 цьш- лят этой группы не быпо обнаружено цыплят с поносами или больных с приз характерными для колибакте- риоза,

В процессе постановки реакции агглютинации с кровью 500 цыплят 75- дневного возраста бьти выявлены в 25 случаях положительные результаты ККРА, Прн этом отмечались некоторые различия в характере реакций, которые были крупнозернистыми} четкими или мелкозернистыми.образование агглютината наблюдалось или через

10-15 Cs или через 35-60 с с момента смешивания капли крови с антигеном на подогретой поверхности предметного стекла. Однако во всех случаях

6

реакция агглютинации легко улавливалась испытателями,

Все 25 положительно- н отрицательно реагировавших цыплят были подвергнуты убою на санитарной бойне

Патологический материал (сердце, печень, селезенка, легкое и отрезок 2-перстной кишки) от каждой птицы в отдельности повергнуты бактериологическим исследованиям, С целью сокращения объема работ от каждого органа отдельно взятого цыпленка сте- риально вырезают участок весом 0,6- 1,0 г объединяют и растирают в ступке, готовят эмульсию 1:10, 0,5 мл ее засевают в пробирку с МПБ,

ерез 2Д ч проверяют наличие рост и проводят дробный посев Сульонных культур на поверхность агара Эндо в чашках Петри,

Из числа 25 положительно реагировавших птиц с антигеном в 20 случаях или 80%, из патологического материала выделены патогенные бактерии Е, coll, а у птиц имели место признаки воспаления кишечного тракта и поносы.

Антиген не реагирует с кровью птиц, не являющихся носителями патогенных бактерий других видов кишечной группы.

Дня сравнения исследовали антиген полученный из эталонного штамма Escherichia coli 04. Результаты исследования представлены в табл, 1 и

Таким образом, антиген из штамма Escherichia coii ВГНКИ № 37-387-а/14 обладает высокой активностью и спе- цифичпостью,.

Штамм Escherichia qoli ВГНКИ № 37-387-а/14 обладает 22 перекрестными 0-антигенными связями при наличии 12 О-антигенных связей у известного штамма Escherichia coli 04 и содержит в своей генетической основе О- детерминанты наиболее распространенных серогрупп кишечной палочки, выделяемых от больных колибакте- риозом птиц, .

Поливалентность штамма и его выраженная агглютинабельность позволят использовать его в качестве высокоэффективного диагностического препарата для выявления больных колибакте риозом птиц, сократить сроки диагностических исследований от 2-3 сут до 3-5 мин.

Формула изобретения

Штамм бактерий Eischerichin. coJi ВГНКИ fr 37-387-a/IA, используемый

Эффективность антигенов, приготовленных из штамма BPHKIi № 37-387-Я/14 и 04 при диагностике колибактериоэа у птиц

Результаты сравнительной проверки агглютинаВнльяой активности антигенон из итамма ВГНКИ If 37-38 -а/14 и эталонного в реакции агглютинации (РА) с сыворотками крови больных кур

Заказ,893Тираж 392 /Подписное

БНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,, д, 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г Ужгород, ул. Проектная, А

для изг отоплопип aiiiMironn д.пя днягног- тики колибактерио; а птиц.

Т а б л и ц а 1

ТаОлииа2