Набор штаммов бактерий для обучения вопросам микробиологии и методам лабораторной диагностики холеры Российский патент 2021 года по МПК C12N1/20 C12Q1/04 C12R1/63 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для подготовки специалистов в области лабораторной диагностики холеры и повышения уровня биологической безопасности при проведении практических занятий за счет минимизации риска лабораторного инфицирования обучающихся и контаминации помещений и оборудования.

Холера остается актуальным для мирового здравоохранения инфекционным заболеванием. Заболеваемость холерой регистрируется в существующих очагах инфекции в Азии, Африке, странах Карибского бассейна; в 2017 году сформировались новые эндемичные территории в странах Африканского континента (Кения, Танзания, Малави, Демократическая Республика Конго, Южный Судан). С 2008 по 2017 гг. в мире зарегистрировано около 2,5 млн. больных в разных странах, что указывает на продолжающееся, характерное для пандемии, распространение холеры с вовлечением новых территорий и делает прогноз по холере неблагоприятным [1]. Усугубляет возможность завоза холеры на территорию Российской Федерации увеличение числа международных поездок иностранных граждан и соотечественников, интенсивность миграционных процессов [1, 2]. Возможным риском заноса возбудителя холеры могут служить контаминированные холерными вибрионами балластные воды судов и формирующиеся на разнообразных плотных поверхностях биопленки [3]. Помимо занесенных из эндемичных по холере регионов токсигенных штаммов возбудителя холеры, на территории РФ ежегодно от людей и из поверхностных водоемов выделяют большое количество нетоксигенных штаммов холерного вибриона, которые могут служить причиной острых кишечных инфекций. Исследователями выявлена группа нетоксигенных штаммов холерного вибриона, представляющая эпидемиологическую опасность в связи с возможностью их реверсии в токсигенные путем фаговой конверсии [4].

Все перечисленное делает необходимым совершенствование системы эпидемиологического надзора, одной из важных составляющих которого является подготовка специалистов для обеспечения комплекса мероприятий по диагностике и профилактике холеры [5, 6].

Обучение вопросам микробиологии и лабораторной диагностики холеры является одним из основных разделов программ дополнительного профессионального образования специалистов, работающих с возбудителями особо опасных инфекционных болезней, и включает теоретические и практические занятия.

На практических занятиях специалисты изучают микробиологию холерного вибриона: морфологические, культуральные, биохимические, антигенные свойства возбудителя холеры, биологические особенности биоваров Vibrio cholerae, дифференциальные признаки рода Vibrio [7]; осваивают бактериологические, иммунологические и молекулярно-генетические методы лабораторной диагностики холеры, применяемые для индикации и идентификации [7], а также принципы дифференциальной диагностики возбудителя холеры от бактерий, вызывающих заболевания человека с явлениями гастроэнтеита.

Для проведения практических занятий по освоению регламентированных методов диагностики холеры традиционно используют штаммы Vibrio cholerae O1 серогруппы биоваров классического и Эль Top, Vibrio cholerae 0139 серогруппы II группы патогенности. Актуальным и приоритетным направлением снижения риска обучающих технологий является замена вирулентных штаммов на авирулентные или на штаммы с более низкой вирулентностью при условии выполнения учебного плана в полном объеме и приобретения навыков работы с возбудителем холеры в соответствии с требованиями безопасной работы с патогенными биологическими агентами (ПБА) [8, 9].

Известна дополнительная профессиональная программа повышения квалификации врачей по специальности 32.08.14 «Бактериология» со сроком освоения 36 часов «Лабораторная диагностика холеры» [10], в которой указаны профессиональные навыки, приобретаемые в процессе обучения слушателями, и методы диагностики холеры, но не обозначены штаммы бактерий, с использованием которых проводится освоение программы специалистами.

Проведенный заявителем анализ уровня техники, включающий поиск по патентам и научно-техническим истоникам информации, не выявил сведения о штаммах, регламентированных для использования в целях обучения лабораторной диагностике холеры.

Задача изобретения - разработка способа обучения регламентированным методам лабораторной диагностики холеры с минимизацией возможности инфицирования обучающихся возбудителем холеры с использованием набора учебных штаммов бактерий.

Технический результат изобретения заключается в повышении биологической безопасности учебного процесса и в снижении рисков инфицирования обучающихся возбудителем холеры при освоении регламентированных методов лабораторной диагностики холеры на практических занятиях, а также минимизации риска контаминации помещений и оборудования в процессе обучения.

Для достижения технического результата разработан способ обучения регламентированным методам лабораторной диагностики холеры с использованием набора учебных штаммов бактерий. Набор включает 15 штаммов:

- холерные вибрионы O1 и O139 серогрупп: Vibrio cholerae 569 В серогруппа O1 биовар классический серовар Инаба, Vibrio cholerae КМ26 серогруппа O1 биовар El Tor серовар Огава, Vibrio cholerae М-375 (170) серогруппа O139 (II группа патогенности);

- возбудители гастроэнтеритов и системных инфекций - Vibrio cholerae поп О1/O139 М-266 (III группа патогенности);

- представители рода Vibrio: Vibrio albensis 220, Vibrio alginolyticus 143, Vibrio parahaemolyticus 616 (IV группа патогенности);

- возбудители острых кишечных инфекций у человека: Shigella sonnei 714; Salmonella paratyphi «В» M-53 (625) (III группа патогенности); Aeromonas hydrophila Р-4499; Plesiomonas shigelloides 101; Escherichia coli О 151 1027 (IV группа патогенности);

- штаммы микроорганизмов, необходимые для дифференциальной диагностики возбудителя холеры: Pseudomonas pseudoalcaligenes ВКМВ-1300, Pseudomonas aeruginosa АТТС 27853 (IV группа патогенности);

- Staphylococcus aureus АТСС 6538 (209-Р) (IV группа патогенности)

и позволяет в полном объеме изучить вопросы микробиологии возбудителя холеры, освоить регламентированные методы лабораторной диагностики холеры - индикацию, идентификацию, дифференциальную диагностику; снизить вероятность лабораторного инфицирования возбудителем холеры обучающихся на практических занятиях, а также приобрести навыки работы с возбудителем холеры в соответствии с требованиями безопасной работы с ПБА.

Для формирования набора штаммов заявителем предварительно были отобраны из Государственной коллекции патогенных бактерий (ФКУЗ РосНИПЧИ «Микроб») 19 штаммов V. cholerae, 5 штаммов других представителей рода Vibrio, 6 штаммов бактерий, принадлежащих к родам Aeromonas, Plesiomonas, Pseudomonas, 6 штаммов бактерий семейства Enterobacteriaceae родов Shigella, Salmonella, Escherichia; 2 штамма возбудителя острых токсикоинфекций у человека - Staphylococcus aures. У данных штаммов были изучены фенотипические (морфологические, культуральные, биохимические, антигенные) свойства, являющихся основой для регламентированных методов индикации и идентификации холерного вибриона [7]. С учетом полученных результатов и имеющихся паспортных данных осуществлена комплексная оценка патогенных, фено- и генотипических особенностей штаммов. На основании полученных показателей и с учетом разработанными заявителем критериев было отобрано-15 штаммов бактерий с низкой вирулентностью, которые ранее не применялись в учебном процессе при подготовке специалистов по вопросам микробиологии и лабораторной диагностики холеры. При использовании даных штаммов слушатели курсов могут освоить весь спектр регламентированных методов индикации, идентификации возбудителя холеры и дифференциации его от других представителей рода Vibrio и других родов, способных вызывать заболевания у человека с явлениями гастроэнтерита.

С учетом биологических свойств и вирулентности микроорганизмов, включенных в набор учебных штаммов, разработан регламент использования каждого штамма для изучения микробиологии холерного вибриона и методов индикации и идентификации возбудителя холеры в полном объеме.

Характеристика и использование учебных штаммов набора.

1. Штамм Vibrio cholerae 569 В серогруппа O1 биовар классический серовар Инаба.

Выделен из клинического материала от больного холерой в Индии. Депонирован в Государственной коллекции патогенных бактерий «Микроб» в 1950 г. под номером 569 В.

Обладает типичными для Vibrio cholerae classical морфологическими, культуральными, биохимическими, антигенными свойствами [7, 11].

На щелочном агаре в S-форме образует круглые, прозрачные, голубоватые колонии с ровным краем, мягкой консистенции, легко снимаются петлей и растираются. Через 12 часов инкубации при 37°С колонии достигают до 1 мм в диаметре, через 14-18 часов - 2-3 мм. При культивировании в жидкой питательной среде при 37°С через 6 часов на поверхности среды начинает формироваться тонкая голубоватая пленка, которая впоследствии уплотняется. В толще среды отмечается легкое равномерное помутнение.

На дифференциально-диагностических средах типа TCBS через 18-20 часов инкубации при 37°С формируются колонии холерного вибриона ярко-желтой окраски на зеленом или голубом фоне среды, крупные, полупрозрачные, диаметром 2-3 мм.

На среде Эндо через 12 часов инкубации при 37°С колонии возбудителя холеры прозрачные с голубоватым оттенком, могут быть крупнее, чем на ЩА. Позднее, вследствие замедленной ферментации холерным вибрионом лактозы, центр колоний окрашивается в ярко-розовый цвет, а периферия остается прозрачной.

На агаре Хоттингера рН 7,6 с добавлением 5% дефибринированной крови барана через 12 часов инкубации при 37°С колонии возбудителя холеры прозрачные, с течением времени мутнеют и становятся сероватыми. Гемолитическая активность отсутствует.

Культура агглютинируется холерными диагностическими сыворотками O1 и Инаба до диагностического титра 1:800, не агглютинируется холерными диагностическими сыворотками Огава и RO.

Не лизирует эритроциты барана в пробе Грейга. Чувствителен к полимиксину В (50 ед./мл). Лизируется холерным диагностическим бактериофагом С до титра 10^-3 (ДРТ 10^-3); бактериофагом Эль Тор не лизируется.

Продуцент холерного энтеротоксина. Токсигенный для модели кроликов-сосунков. Генетические характеристики: ctxA⁺ tcpA⁺.

Штамм используется исключительно для демонстрации морфологии клеток в мазках, окрашенных по Граму, морфологии колоний на ЩА, дифференциально-диагностической среде типа TCBS, среде Эндо, ЩА с добавлением 5% дефибринированной крови барана. Для изучения указанных свойств слушателям курсов выдают заранее подготовленные преподавателями курсов мазки, посевы на питательных средах.

2. Штамм Vibrio cholerae KM 26 серогруппа O1 биовар El Tor серовар Огава.

Выделен из воды открытого водоема в 1982 г. Депонирован Д.Л. Шмеркевич, Н.А. Моториной с соавт. в Государственной коллекции патогенных бактерий «Микроб» в 1988 г. под наименованием КМ 26.

Обладает типичными для Vibrio cholerae морфологическими, культуральными, биохимическими свойствами [7, 11].

На ЩА через 12-16 часов инкубации при 37°С образует в S-форме круглые, прозрачные, голубоватые колонии с ровным краем, мягкой консистенции. С течением времени центр колоний уплотняется, размеры увеличиваются. Колонии становятся более мутными.

Агглютинируется холерными диагностическими сыворотками O1 и Огава до титра, не агглютинируется холерными диагностическими сыворотками Инаба и RO.

Лизирует эритроциты барана в пробе Грейга. Не чувствителен к полимиксину В (50 мкг/мл).

Штамм авирулентен на модели кроликов-сосунков, не продуцирует токсины. Генетические характеристики: ctxA^- zot^- tcpA- toxR^-.

Штамм выдается слушателям курсов для работы на практических занятиях в боксах микробиологической безопасности (БМБ) II типа. Используется для изучения морфологических, культуральных, биохимических свойств холерных вибрионов; для освоения алгоритма лабораторной диагностики холеры, методов специфической индикации (МФА), идентификации.

Для демонстрации культуральных, биологических, биохимических свойств данного штамма холерного вибриона слушателям курсов выдают посевы культуры Vibrio cholerae на ЩА, посевы смеси 2-х культур: Vibrio cholerae и Escherichia coli communis на ЩА (демонстрация морфологии колоний в падающем, проходящем свете, при освещении в косопроходящем световом пучке под углом в 45°), посевы вышеуказанных микроорганизмов на дифференциально-диагностической среде типа TCBS, среде Эндо, ЩА с добавлением 5% дефибринированной крови барана.

При изучении посевов смеси культур холерного вибриона и кишечной палочки на ЩА в проходящем свете выявляется разница в плотности и окраске колоний: колонии холерных вибрионов прозрачные, голубоватые, тогда как колонии Escherichia coli плотные, кремового оттенка. При изучении этих посевов под микроскопом биологическим стереоскопическим в косопроходящем свете с использованием специального устройства выявляется разница в цвете и морфологии колоний: колонии Vibrio cholerae приобретают серовато-голубоватые оттенки, в S-форме они прозрачные с четким краем. С течением времени колонии становятся менее прозрачными, и отличить их от колоний других микроорганизмов труднее. При наличии диссоциации культуры появляются мутность, непрозрачный центр.

Колонии кишечной палочки яркие, блестящие, оранжевых или голубоватых оттенков. Использование этого методического приема позволяет отобрать колонии возбудителя холеры среди колоний кишечной палочки и других микроорганизмов в посевах клинического материала (испражнений). Следует учитывать, что цвет колоний микроорганизмов зависит от настройки прибора.

Для изучения подвижности Vibrio cholerae предоставляют посев культуры в 0,3% агаре Хоттингера рН 7,6, а также демонстрируют препарат «висячая капля» под световым микроскопом под увеличением ×400-600: холерный вибрион обладает активной подвижностью.

Для изучения биохимической активности холерных вибрионов слушателям курсов демонстрируют посевы на комплексе питательных сред: среду Клиглера (холерный вибрион ферментирует глюкозу до кислоты без газообразования; не образует сероводород, так как не обладает ферментом тиосульфатредуктазой); на средах Гисса в 0,4% агаре Хоттингера рН 7,6 с глюкозой, лактозой, маннитом, маннозой, сахарозой, арабинозой, инозитом, салицином; в среде Хью-Лейфсона с глюкозой (тест O/F); на среде Меллера с аминокислотами (лизином, орнитином, аргинином, контроль - без аминокислоты). Протеолитическую активность холерного вибриона демонстрируют посевом в столбик желатина: на поверхности среды формируется воронка, иногда с пузырьком газа.

3. Штамм Vibrio cholerae 170 серогруппа O139.

Выделен из воды реки Москва в г. Жуковский (Московская область) в 1999 г.

Морфология в мазках: полиморфная изогнутая палочка, грамотрицательная. Активно подвижная. При высеве после хранения из 0,3% агара рН 7,6 на ЩА образует колонии в S-, R- и промежуточной формах.

Биохимическая активность: ферментирует и окисляет глюкозу, ферментирует сахарозу, маннит до кислоты без газа, не ферментирует арабинозу, инозит, лактозу, образует индол, желатиназу, оксидазу, амилазу, не имеет уреазы, декарбоксилирует лизин и орнитин, не имеет дигидролазы аргинина.

Дает положительную слайд-агглютинацию с холерной диагностической сывороткой O139 в разведении 1:5 +++, цельной ++++. Реакция агглютинации с холерными диагностическими сыворотками O1, Инаба, Огава отрицательная.

Не лизируется холерными диагностическими бактериофагами классическим и Эль Тор. Дает рост на агаре Хоттингера рН 7,6 с добавление 50 ед./мл полимиксина В.

Обладает гемолитической активностью по отношению к эритроцитам барана. Реакция Фогес-Проскауэра положительная. Феномен тяжа положителен.

Генетические характеристики: ctxA^-. Авирулентный для кроликов-сосунков.

Штамм можно использовать для работы слушателей курсов на практических занятиях в боксах микробиологической безопасности II типа для изучения морфологических, культуральных, биохимических, антигенных свойств холерных вибрионов O139 серогруппы; для освоения алгоритма лабораторной диагностики холеры, методов специфической индикации (МФА), идентификации.

4. Штамм Vibrio cholerae non O1/O139 №4656 (М-266).

Выделен из клинического материала больного острой кишечной инфекцией сотрудниками Астраханской противочумной станции в г. Астрахань в 1981 г.

На агаре образует колонии среднего размера, круглые с ровным краем, полупрозрачные, голубовато-серого цвета. В питательном бульоне дает рост в виде равномерно помутнения с пленкой на поверхности среды.

Биохимические свойства типичные для Vibrio cholerae [7, 11]. Гемолитическая активность в пробе Грейга положительная. Не агглютинируется холерными диагностическими сыворотками O1, O139, Инаба, Огава, RO. Не лизируется холерными диагностическими бактериофагами классическим и Эль Тор. Не чувствителен к действию поимиксина в концентрации 50 ед./мл питательной среды. Реакция Фогес-Проскауэра положительная.

Штамм обладает энтеропатогенностью по отношению к кроликам-сосункам. Не дает рост при 5°С.

Используется на практических занятиях слушателей курсов для изучения морфологических, культуральных, биохимических свойств Vibrio cholerae; для изучения дифференциальных биохимических тестов представителей рода Vibrio, а также для дифференциации Vibrio cholerae с микроорганизмами, сходными по морфологическим свойствам и выделяемыми из клинического материала от больных с явлениями гастроэнтерита и из внешней среды.

Данный штамм используется на курсах повышения квалификации для слушателей курсов, не имеющих навыков работы с ПБА I-II групп патогенности.

5. Штамм Vibrio albensis 220. Особое название: 261-320.

Выделен из воды реки Дон в районе города Ростова сотрудниками Ростовского противочумного института в 1955 г.

Морфология в мазках: короткая изогнутая палочка, грамотрицательная. Обладает активной подвижностью. На агаре растет в виде круглых прозрачных гладких колоний с ровным краем. В питательном бульоне образует гомогенную муть, на поверхности среды - нежную пленку.

Биохимические свойства: ферментирует глюкозу, мальтозу, маннит, сахарозу до кислоты без газа, не ферментирует лактозу, арабинозу, не образует сероводород на среде Клиглера, продуцирует индол, разжижает желатин.

Лизирует эритроциты барана в пробе Грейга. Агглютинируется холерной сывороткой 04 в разведении 1:80 (титр 4000). Не лизируется холерными диагностическими бактериофагами классическим и Эль Тор.

Молодые культуры V. phosphorescens (18-20 часовые) обладают способностью к флюоресценции в темноте. Это свойство используется при изучении внутривидовых дифференциальных признаков рода Vibrio. Слушателям курсов демонстрируют посевы V. phosphorescens на ЩА в темном помещении.

6. Штамм Vibrio alginolyticus 143.

Выделен из испражнений больного с пищевым отравлением сотрудниками Новороссийской противочумной станции в 1975 г.

Морфология в мазках: полиморфные палочки, грамотрицательные. На агаре образует полупрозрачные колонии с голубоватым оттенком и ровным краем, в жидких питательных средах - равномерное помутнение. Дает «феномен роения» на 1,5% агаре.

Биохимические свойства: окисляет и ферментирует глюкозу на среде Хью-Лейфсона, ферментирует мальтозу, маннит, арабинозу, сахарозу до кислоты без газа, не ферментирует лактозу, не образует сероводород на среде Клиглера, продуцирует индол, разжижает желатин, декарбоксилирует лизин и орнитин, не имеет дигидролазы аргинина. Реакция Фогес-Проскауэра положительная.

Не агглютинируется холерными диагностическими сыворотками O1, O139, Инаба, Огава, RO. Не лизируется холерными диагностическими бактериофагами классическим и Эль Тор.

Не дает рост в 1% пептонной воде без хлорида натрия, растет в 1% пептонной воде с добавлением 7% и 10% хлорида натрия (является галофильным вибрионом).

Штамм применяется на практических занятиях слушателей курсов для изучения дифференциальных биохимических тестов представителей рода Vibrio.

Отдельно демонстрируются диагностические тесты: «феномен роения» в 1,5% агаре с 3% хлорида натрия, и изучается характер роста культуры в 1% пептонной воде с различными концентрациями хлорида натрия (0%, 3%, 7%, 10%).

7. Штамм Vibrio parahaemolyticus 616.

Выделен из испражнений больного сотрудниками Новороссийской противочумной станции в 1976 г.

Морфология в мазках: полиморфные палочки, грамотрицательные. На агаре образует полупрозрачные колонии с голубоватым оттенком и ровным краем, в жидких питательных средах - равномерное помутнение. Не обладает «феноменом роения» на 1,5% агаре.

Биохимические свойства: окисляет и ферментирует глюкозу на среде Хью-Лейфсона, ферментирует маннозу, маннит, арабинозу до кислоты без газа, не ферментирует лактозу, сахарозу, инозит, не образует сероводород на среде Клиглера, продуцирует индол, разжижает желатин. Декарбоксилирует лизин и орнитин (+/-), не имеет дигидролазы аргинина. Не имеет уреазы. Реакция Фогес-Проскауэра отрицательная. Гемолитическая активность отрицательная.

Не агглютинируется холерными диагностическими сыворотками O1, O139, Инаба, Огава, RO. Не лизируется холерными диагностическими бактериофагами классическим и Эль Тор.

Не дает рост в 1% пептонной воде без хлорида натрия, с 10% хлорида натрия; растет в 1% пептонной воде с добавлением 3% и 7% хлорида натрия (является галофильным вибрионом).

Штамм используется на практических занятиях для изучения дифференциальных биохимических тестов представителей рода Vibrio, дифференциации возбудителя холеры от других вибрионов, вызывающих у людей пищевые токсикоинфекции и острые кишечные инфекции при употреблении в пищу морепродуктов, подвергнутых недостаточной кулинарной обработке.

8. Штамм Aeromonas hydrophila Р-4499.

Выделен из испражнений больного сотрудниками Ростовской городской СЭС в 1973 г. Морфология в мазках: слегка изогнутые палочки, грамотрицательные. Обладает подвижностью. На агаре Хоттингера рН 7,6 в первые сутки роста образует прозрачные голубоватые колонии, в жидких питательных средах - равномерное помутнение, пленку на поверхности среды.

Биохимические свойства: оксидазоположителен, ферментирует глюкозу, маннозу, маннит, арабинозу, мальтозу; не ферментирует лактозу, инозит, ксилозу, не образует сероводород на среде Клиглера, не декарбоксилирует лизин и орнитин, продуцирует аргининдигидролазу. Не имеет уреазы. Гемолитическая активность отрицательная.

Не агглютинируется холерными диагностическими сыворотками O1, O139, Инаба, Огава, RO.

Штамм используется на практических занятиях для изучения алгоритма дифференциации возбудителя холеры от микроорганизмов, сходных по морфологическим, культуральным и некоторым биохимическим свойствам и выделяемых из клинического материала от больных с острыми кишечными инфекциями и из объектов внешней среды.

9. Штамм Plesiomonas shigelloides 101.

Морфология в мазках: изогнутые палочки, грамотрицательные. Обладает подвижностью. На МПА образует нежные, прозрачные, гладкие округлые колонии с ровными краями; в жидких питательных средах - равномерное помутнение без пленки на поверхности среды.

Биохимические свойства: оксидазоположителен, ферментирует глюкозу, инозит; не ферментирует сахарозу, арабинозу, маннозу, маннит, декарбоксилирует лизин и орнитин, имеет аргининдигидролазу. Продуцирует индол. Не образует сероводород на среде Клиглера. Не разжижает желатин. Не имеет уреазы. Восстанавливает нитраты в нитриты. Гемолитическая активность отрицательная.

Не агглютинируется холерными диагностическими сыворотками O1, O139, Инаба, Огава, RO. Агглютинируется диагностической дизентерийной сывороткой к шигеллам Sonnei.

Штамм используется на практических занятиях для изучения алгоритма дифференциации возбудителя холеры от микроорганизмов, сходных по морфологическим, культуральным и некоторым биохимическим свойствам и выделяемых из клинического материала от больных с острыми кишечными инфекциями и из объектов внешней среды.

10. Штамм Pseudomonas pseudoalcaligenes ВКМВ-1300.

Морфология в мазках: прямые или слегка изогнутые толстые палочки, грамотрицательные. Обладает подвижностью. На агаре Хоттингера в первые сутки образует мутные круглые колонии с фестончатым краем, пигмент отсутствует; в жидких питательных средах - при 30°С - легкое помутнение, осадок, при 42°С - на поверхности среды формируется грубая пленка, на дне пробирки - осадок, среда остается прозрачной.

Биохимические свойства: оксидазоположителен, в среде Хью-Лейфсона тест O/F отрицательный, окисляет глюкозу, не окисляет лактозу, ксилозу, мальтозу. Не имеет аргининдигидролазу, не декарбоксилирует лизин и орнитин, не образует индол и сероводород на среде Клиглера, не гидролизует желатин, имеет каталазу.

Штамм используется на практических занятиях для изучения алгоритма дифференциации возбудителя холеры от микроорганизмов, сходных по морфологическим, культуральным и некоторым биохимическим свойствам (оксидазоположителен) и выделяемых из клинического материала от больных и из объектов внешней среды.

11. Штамм Pseudomonas aeruginosa АТТС 27853.

Морфология в мазках: прямые или слегка изогнутые толстые палочки, грамотрицательные. Обладает подвижностью. На агаре Хоттингера в первые сутки образует мутные круглые колонии с фестончатым краем, в жидких питательных средах -равномерное помутнение, нежная пленка. На питательной среде №9 ГРМ и среде Кинга продуцирует пигмент пиоцианин сине-зеленого цвета.

Биохимические свойства: оксидазоположителен, в среде Хью-Лейфсона тест O/F отрицательный, окисляет глюкозу, не окисляет лактозу, ксилозу, мальтозу, сорбит, инозит. Продуцирует аргининдигидролазу, не декарбоксилирует лизин и орнитин, не образует индол и сероводород на среде Клиглера, не гидролизует желатин, имеет каталазу. Лизирует эритроциты барана через 48 часов.

Штамм используется на практических занятиях для изучения алгоритма дифференциации возбудителя холеры от микроорганизмов, сходных по морфологическим, культуральным и некоторым биохимическим свойствам (оксидазоположителен) и выделяемых из клинического материала от больных и из объектов внешней среды.

12. Штамм Shigella sonnei М-88. (Особое обозначение штамма 714).

Морфология в мазках: короткие палочки с закругленными концами, грамотрицательные. Неподвижны. На агаре Хоттингера образует крупные круглые непрозрачные колонии с фестончатым краем; в жидких питательных средах - равномерное помутнение. На среде Эндо - колонии бледно-розовые, полупрозрачные, на среде Плоскирева - бесцветные, непрозрачные. На ВСА культура роста не дает.

Биохимические свойства: оксидазоотрицателен, ферментирует глюкозу, маннит, рамнозу, арабинозу; не ферментирует лактозу, сахарозу, мелибиозу, амигдалин, инозит. Не продуцирует аргининдигидролазу, не декарбоксилирует лизин, расщепляет орнитин, не образует индол и сероводород на среде Клиглера, не утилизирует цитрат в среде Симмонса, восстанавливает нитраты в нитриты.

Агглютинируется диагностической дизентерийной сывороткой к шигеллам Sonnei.

Штамм используется на практических занятиях для изучения алгоритма дифференциации возбудителя холеры с возбудителями токсикоинфекций и острых кишечных инфекций семейства Enterobacteriaceae.

13. Штамм Salmonella enterica spp.enterica ser. paratyphi «В» M-53. (Особое обозначение штамма 625).

Морфология в мазках: короткие палочки с закругленными концами, грамотрицательные. Подвижны. На агаре Хоттингера образует колонии выпуклые мелкозернистые с ровным краем светло-желтого цвета в проходящем свете; в жидких питательных средах - равномерное помутнение. На среде Эндо - колонии бледно-розовые, прозрачные, на среде Плоскирева - бесцветные и выглядят более плотными и мутноватыми. На ВСА - колонии черные с металлическим блеском, участок среды под колонией прокрашивается в черный цвет.

Биохимические свойства: оксидазоотрицателен, ферментирует глюкозу до кислоты и газа, также маннит, рамнозу, арабинозу; не ферментирует лактозу, сахарозу, салицин и адонит, не образует индол. Продуцирует сероводород на среде Клиглера, синтезирует аргининдигидролазу, лизин- и орнитиндекарбоксилазы, утилизирует цитрат в среде Симмонса, восстанавливает нитраты в нитриты. Не имеет уреазы. Дает положительную реакцию с метиловым красным и отрицательную Фогес-Проскауэра.

Агглютинируется диагностической сальмонеллезной поливалентной сывороткой АВСДЕ.

Штамм используется на практических занятиях для изучения алгоритма дифференциации возбудителя холеры с возбудителями токсикоинфекций и острых кишечных инфекций семейства Enterobacteriaceae.

14. Штамм Escherichia coli О 151 1027. Выделен из клинического материала от больного.

Морфология в мазках: прямые единичные палочки или расположены попарно, грамотрицательные. Подвижны. На агаре Хоттингера образует полупрозрачные, круглые, выпуклые колонии; в питательном бульоне - равномерное помутнение, рыхлый осадок на дне пробирки. На среде Эндо - колонии бледно-розовые, прозрачные, на среде Плоскирева - более плотные, бесцветные, на ВСА образует колонии коричневого цвета.

Биохимические свойства: оксидазоотрицателен, ферментирует глюкозу до кислоты и газа, также сахарозу, маннит, рамнозу, арабинозу; не ферментирует лактозу, инозит, не образует индол, не продуцирует сероводород на среде Клиглера, синтезирует лизин- и орнитиндекарбоксилазы, не имеет аргининдигидролазу, не утилизирует цитрат в среде Симмонса, восстанавливает нитраты в нитриты. Не имеет уреазы. Дает положительную реакцию с метиловым красным и отрицательную Фогес-Проскауэра.

Агглютинируется диагностической эшерихиозной поливалентной сывороткой ОКА.

Штамм используется на практических занятиях для изучения алгоритма дифференциации возбудителя холеры с возбудителями токсикоинфекций и острых кишечных инфекций семейства Enterobacteriaceae.

15. Штамм Staphylococcus aureus АТСС 6538 (209-Р).

Морфология в мазках: грамположительные кокки; неподвижны. На агаре образует круглые желтые колонии в виде дисков, с ровным краем, непрозрачные; на среде с добавлением 5% дефибринированной крови барана дает β-гемолиз, на желточно-солевом агаре вокруг колоний отмечается зона помутнения. В питательном бульоне дает равномерное помутнение, на поверхности среды - пленку и пристеночное кольцо.

Биохимические свойства: ферментирует глюкозу, сахарозу, лактозу, маннозу, маннит, мальтозу, трегалозу до кислоты, образует индол, синтезирует аргининдигидролазу, восстанавливает нитраты в нитриты. Имеет уреазу, лецитиназу, плазмокоагулазу (проявляется через 24 часа).

Штамм используется при формировании бактериологической задачи для освоения принципов дифференциальной диагностики возбудителя холеры с возбудителями токсикоинфекций.

Все вышеперечисленные штаммы бактерий обладают стабильными типичными морфологическими, культуральными, биохимическими, антигенными свойствами, хорошо сохраняются на искусственных питательных средах.

Использование учебных штаммов из набора при изучении лабораторной диагностики демонстрирует следующая таблица:

Заявляемый способ обучения регламентированным методам лабораторной диагностики холеры с использованием набора учебных штаммов иллюстрируется следующими примерами:

Пример 1. Использование учебных штаммов набора при изучении морфологии клеток Vibrio cholerae.

На первом этапе лабораторной диагностики холеры исследование проводят методами индикации, одним из которых является анализ морфологии микробных клеток. Метод включает приготовление мазков из исследуемого материала и окраску их стандартным методом по Граму.

Для изучения морфологии клеток возбудителя холеры на практических занятиях используют культуры авирулентного штамма Vibrio cholerae El Tor KM26 или Vibrio cholerae поп О1/O139 M-266 III группы патогенности, которые выдают обучающимся на плотных и жидких питательных средах: 18-20 ч культуру, выращенную при 37°С на скошенном агаре Хоттингера рН 7,6 и культуру, выращенную в течение 6 ч при 37°С в 1% пептонной воде рН 8,4. Использование данных штаммов позволяет обучающимся ознакомиться с морфологическими характеристиками клетки, типичными для Vibrio cholerae. В мазках, окрашенных по Граму, Vibrio cholerae имеет вид слегка изогнутых или прямых грамотрицательных палочек длиной 1-3 мкм, расположенных единично или попарно.

Пример 2. Использование учебных штаммов набора при изучении типичной морфологии роста Vibrio cholerae на питательных средах.

Для изучения культуральных свойств возбудителя холеры на жидких и плотных питательных средах используются штаммы Vibrio cholerae El Tor KM26 и Vibrio cholerae non O1/O139 M-266.

Характерными признаками роста возбудителя холеры в жидкой питательной среде являются образование тонкой голубоватой пленки на поверхности среды через 6 ч инкубации при 37°С, прозрачный бульон или легкая опалесценция среды. Через 24 ч инкубации при температуре 37°С холерные вибрионы вызывают равномерное, не сильно выраженное помутнение среды с образованием на ее поверхности рыхлой беловато-сероватого цвета пленки и легкого крошковидного осадка на дне пробирки.

На щелочном агаре (ЩА) Vibrio cholerae в S-форме образует круглые, плоские, прозрачные, голубоватые колонии с ровным краем, мягкой консистенции, они легко снимаются петлей и растираются. Через 12 ч инкубации при 37°С колонии достигают до 1 мм в диаметре, через 18-24 ч инкубации - 2-3 мм. На дифференциально-диагностических средах типа TCBS через 18-20 ч инкубации при 37°С формируются колонии холерного вибриона ярко-желтой окраски на зеленом или голубом фоне среды, крупные, плоские, полупрозрачные, диаметром 2-3 мм.

На среде Эндо через 12 ч инкубации при 37°С колонии возбудителя холеры прозрачные с голубоватым оттенком, могут быть крупнее, чем на ЩА. Позднее, вследствие замедленной ферментации холерным вибрионом лактозы, центр колоний окрашивается в ярко-розовый цвет, а периферия остается прозрачной.

На агаре Хоттингера рН 7,6 с добавлением 5% дефибринированной крови барана через 12 ч инкубации при 37°С колонии возбудителя холеры прозрачные, с течением времени мутнеют и становятся сероватыми. Гемолитическая активность выявляется у нетоксигенных штаммов возбудителя холеры, в в данном случае у Vibrio cholerae El Tor KM26 и Vibrio cholerae non O1/O139 M-266 в виде полного просветления среды вокруг колоний.

Для изучения характера роста Vibrio cholerae на питательных средах обучающимся выдают культуры авирулентного штамма Vibrio cholerae El Tor KM26 или Vibrio cholerae поп 01/0139 M-266 (III группы патогенности), выращенные в жидкой питательной среде (в 1% пептонной воде рН 8,4 или в бульоне Хоттингера рН 7,6) для посевов на плотные питательные среды.

Пример 3. Использование учебных штаммов набора при изучении морфологических и культуральных свойств Vibrio cholerae различных серогрупп и биоваров на питательных средах.

Для изучения морфологии клеток и культуральных особенностей холерных вибрионов различных серогрупп и биоваров на питательных средах на практических занятиях используют авирулентные штаммы Vibrio cholerae El Tor KM26, Vibrio cholerae M-375 (170) серогруппа O139 и Vibrio cholerae non О1/O139 M-266 (III группы патогенности), посевы которых выдают обучающимся на плотных и жидких питательных средах.

Морфологию клеток изучают приготовлением мазков из выданных культур и их окраской по Граму. В мазках, окрашенных по Граму, клетки изучаемых штаммов Vibrio cholerae имеет вид слегка изогнутых или прямых грамотрицательных палочек длиной 1-3 мкм, расположенных единично или попарно.

Для всех штаммов характерен типичный рост в жидкой питательной среде.

Колонии Vibrio cholerae El Tor KM26 на ЩА при культивировании в течение 12 ч при 37°С прозрачные, голубоватые, с ровным краем; через 24 ч центр их уплотняется, становится более мутным, величиной достигают 2-3 мм.

Штамм Vibrio cholerae M-375 (170) серогруппа O139 при высеве после длительного хранения из 0,3% агара образует на ЩА колонии в S-, R- и промежуточных формах, что дает возможность обучающимся оценить формы колоний возбудителя холеры различной степени диссоциации. Шероховатые R-формы холерного вибриона являются конечным этапом диссоциации [11]. Колонии R-форм мутные, белесоватые, зернистые или складчатые с неровными краями.

Штамм Vibrio cholerae поп О1/O139 М-266 на ЩА через 12 ч инкубации при 37°С образует типичные колонии в S-форме - прозрачные, голубоватые, с ровным краем, которые через 24 ч инкубации становятся более мутными, исчерченными.

Для изучения характера роста Vibrio cholerae различных серогрупп и биоваров на питательных средах обучающимся выдают культуры Vibrio cholerae El Tor KM26, Vibrio cholerae M-375 (170) серогруппа 0139 и Vibrio cholerae non O1/O139 M-266, выращенные в жидкой питательной среде (в 1% пептонной воде рН 8,4 или в бульоне Хоттингера рН 7,6) при инкубации при 37°С в течение 6 ч для посевов на плотные питательные среды.

Для изучения морфологии колоний Vibrio cholerae классического биовара обучающимся демонстрируют посевы на плотных питательных средах штамма Vibrio cholerae cholerae 569 В (II группы патогенности), подготовленные преподавателями. На ЩА колонии данного штамма классического биовара в S-форме после инкубации при 37°С через 12 ч мелкие, до 1 мм в диаметре, голубоватые, прозрачные, через 24 ч инкубации колонии несколько уплотняются.

Пример 4. Освоение определения подвижности холерного вибриона методами «висячей» и «раздавленной» капли.

Для постановки этого метода слушателям курсов выдают бульонную культуру Vibrio cholerae non O1/O139 M-266 (III группы патогенности), выращенную в жидкой питательной среде (в 1% пептонной воде рН 8,4 или в бульоне Хоттингера рН 7,6) при инкубации при 37°С в течение 6 ч. Из выданной культуры обучающиеся готовят препарат «висячей» или «раздавленной» капли и просматривают через световой микроскоп при увеличении × 400-600, используя конденсор темного поля. Холерные вибрионы активно подвижны.

Пример 5. Использование учебных штаммов набора при изучении биохимических свойств холерного вибриона.

Для изучения биохимических свойств возбудителя холеры на практических занятиях используют культуры авирулентного штамма Vibrio cholerae El Tor KM26 или Vibrio cholerae поп О1/O139 M-266 (III группы патогенности), выращенные при 37°С в течение 18-24 ч, которые выдают обучающимся на скошенном ЩА.

Слушатели курсов делают посевы на среды Гисса для определения ферментации углеводов и спиртов, комбинированную среду Клиглера, среду Хью-Лейфсона (О/Fтест), на среду Кристенсена для определения образования уреазы, в среды Меллера, содержащие аминокислоты лизин, орнитин, аргинин, в бульон Хоттингера рН 7,6 для определения образования индола и сероводорода с помощью индикаторных полосок; определяют продукцию оксидазы с использованием индикаторной полоски окси-теста. Для определения биохимической активности холерного вибриона далее в процессе обучения используют набор «Системы индикаторные бумажные для идентификации микроорганизмов (СИБ) №1 для идентификации вибрионов.

Пример 6. Использование штаммов набора при освоении методов специфической индикации возбудителя холеры (метода флюоресцирующих антител (МФА).

Для освоения этого метода слушатели курсов используют агаровую 18-24 ч культуру авирулентного штамма Vibrio cholerae El Tor KM26 O1 серогруппы, выращенную на ЩА при 37°С. Порядок приготовления мазков, окрашивание их препаратом диагностических флюоресцирующих холерных иммуноглобулинов O1, микроскопию и оценку результатов выполняют в соотвествии с инструкцией к препарату. Результаты МФА со штаммом Vibrio cholerae El Tor KM26 O1 оценивают как специфическое свечение с яркостью 4+ - 3+ у 3-5 клеток в каждом поле зрения.

Пример 7. Изучение агглютинабельности культур Vibrio cholerae холерными диагностическими сыворотками O1 и O139 в реакции агглютинации (РА) - слайд-агглютинации и объемным методом для идентификации возбудителя холеры, определения серогруппы и серовара.

Для определения серогруппы и серовара возбудителя холеры используют РА на стекле (слайд-агглютинацию) и объемную РА в рядах пробирок.

Для постановки РА обучающимся выдают агаровую 18-24 ч культуру авирулентного штамма Vibrio cholerae El Tor KM26 O1 серогруппы, выращенную на ЩА при 37°С или изучают агглютинабельность культуры из подозрительных на возбудитель холеры колоний с посевов на плотных питательных средах, полученных в ходе учебного анализа.

Слайд-агглютинация и объемная РА ставятся с препаратами диагностических холерных сывороток для РА согласно инструкции производителя. Используются диагностическая холерная O1 сыворотка, диагностическая холерная O139 сыворотка для определения серогруппы холерного вибриона, сыворотки диагностические холерные Инаба и Огава для определения серовара, диагностическая холерная сыворотка RO для выявления R-форм возбудителя. Результаты РА со штаммом Vibrio cholerae El Tor KM26 O1 с холерной диагностической сывороткой O1 оценивают в слайд-агглютинации как 4+, в объемной РА как 3+ - 4+ до диагностического титра; как 3+ - 4+ с сывороткой Огава и отрицательный с своротками O130 и RO.

Культура Vibrio cholerae M-375 (170) серогруппа O139 дает положительную РА в слайд-агглютинации с холерной диагностической сывороткой O139 с результатом на 3+ - 4+. Согласно инструкции производителя объемную РА с сывороткой O139 не ставят.

Пример 8. Освоение лабораторной диагностики холеры бактериологическим методом.

Для изучения алгоритмов лабораторной диагностики возбудителя холеры используются штаммы Vibrio cholerae El Tor KM26 O1 серогруппы и Vibrio cholerae M-375 (170) серогруппа O139, Vibrio cholerae поп O1/O139 M-266 обладающие типичными видовыми биологическими свойствами. Для этого обучающимся выдают стандартные учебные образцы проб (клинического материала: испражнений, рвотных масс; объектов окружающей среды: пробы воды поверхностных водоемов, сточных вод, смывы и др., контаминированные данными штаммов холерного вибриона в определенных концентрациях. Слушатели курсов исследуют полученные пробы с использованием регламентированных методов лабораторной диагностики: готовят мазки с окраской по Граму и холерными флюоресцирующими иммуноглобулинами с последующим просмотром и оценкой результатов, делают посевы на плотные и жидкие питательные среды; ставят РА, пробу на продукцию индофенолоксидазы с культурой из подозрительных на холерный вибрион колоний, выделяют культуру холерного вибриона и изучают ее биохимические, антигенные свойства, проводят ее идентификацию с использованием соответствующих тестов, чтобы на основании полученных результатов дать заключительный ответ о выделении культуры Vibrio cholerae соответствующей серогруппы, биовара и серовара. Добавление определенного штамма в выдаваемые образцы для изучения определяют программой конкретных курсов.

Пример 9. Освоение тестов дифференциальной диагностики Vibrio cholerae с другими представителями рода Vibrio, родов Aeromonas, Plesiomonas, Pseudomonas, вызывающими у человека пищевые и острые кишечные инфекции и выделяющихся из клинического материала, воды открытых водоемов, сточных вод.

Поскольку заболевания с явлениями гастроэнтерита у человека, кроме возбудителя холеры, способны вызывать другие представители рода Vibrio, а также бактерии родов Aeromonas, Plesiomonas, морфологически представляющие собой грамотрицательные палочки, обладающие способностью продуцировать фермент индофенолоксидазу, для изучения алгоритмов лабораторной дифференциальной диагностики возбудителя холеры с этими патогенными для человека микроорганизмами, выделяющихся из клинического материала, воды морей и открытых водоемов, сточных вод, в состав набора включены следующие штаммы: Vibrio parahaemolyticus 616, Vibrio alginolyticus 143, Aeromonas hydrophila P-4499, Plesiomonas shigelloides 101, Pseudomonas pseudoalcaligenes BKMB-1300, Pseudomonas aeruginosa ATTC 27853. Эти микроорганизмы обладают определенными определенными биологическими, биохимическими, антигенными свойствами, которые определяют с использованием регламентированных тестов. Для их освоения слушателям курсов выдают культуры вышеперечисленных микроорганизмов на скошенном питательном агаре рН 7,6-8,0 для изучения их культуральных свойств -характера роста на плотных и жидких питательных средах - на ЩА и в 1% пептонной воде рН 8,4; подвижности посевом в столбик 0,3% питательного агара рН 8,0; биохимической активности с помощью набора диагностических питательных сред (Хью-Лейфсона, Гисса, Кристенсена, Меллера и других). Параллельно обучающиеся ставят аналогичные тесты с культурой холерного вибриона с типичными видовыми и биологическими свойствами (Vibrio cholerae поп O1/O139 M-266 III группы патогенности). Эти тесты обучающиеся проводят самостоятельно; для лучшего усвоения учебного материала преподаватели демонстрируют вышеприведенные тесты с использованием подготовленных ими посевов всех выданных культур в сравнении.

Пример 10. Освоение принципов дифференциальной диагностики Vibrio cholerae с возбудителями токсикоинфекций и острых кишечных инфекций семейства Enterobacteriaceae и Staphylococcus aureus у человека.

Бактерии семейства Enterobacteriaceae и Staphylococcus aureus, распространенные повсеместно в на территории Российской Федерации, способны вызывать заболевания с явлениями гастроэнтерита и токсикоинфекций у людей. Это определяет необходимость проведения дифференциации возбудителя холеры от данной группы микроорганизмов на основании морфологических, культуральных, биохимических, иммунологических признаков.

Для решения поставленной задачи обучающимся выдают пробы, имитирующие образцы клинического материала больных гастроэнтеритом (испражнений), контаминированные бактериями - представителями семейства Enterobacteriaceae: Shigella sonnei 714, Salmonella paratyphi «В» M-53B (625), Escherichia coli 1027 О 151, а также Staphylococcus aureus ATCC 6538 (209-P) и Vibrio cholerae El Tor KM26 O1 серогруппы. Слушатели курсов проводят посевы исследуемого материала на комплекс питательных сред: чашки ЩА, дифференциально-диагностической среды TCBS, в 1% пептонную воду для выявления холерного вибриона; на среды Эндо, Плоскирева, висмут-сульфит агар для выделения бактерий семейства Enterobacteriaceae; на желточно-солевой агар для выделения Staphylococcus aureus. После инкубации при 37°С посевы нативного материала просматривают (посевы на ЩА - через 14-16 ч, остальные посевы на плотных питательных средах - через 24 ч), отбирают подозрительные колонии, изучают морфологию микроорганизмов в мазках по Граму из подозрительных колоний, агглютинабельность культуры с поливалентными сыворотками для бактерий кишечной группы и холерными диагностическими сыворотками для предполагаемой культуры холерного вибриона и его оксидазную активность; накапливают культуры из отобранных подозрительных колоний, с которыми впоследствии проводят идентификацию с использованием соответствующих регламентированных тестов.

Пример 11. Решение задачи по теме «Комплексное исследование материала, подозрительного на наличие возбудителя холеры. Контрольная бактериологическая задача».

Для решения контрольной бактериологической задачи, проводимой для проверки качества усвоения пройденного материала, обучающимся выдают стандартные учебные образцы для исследования, имитирующие пробы клинического материала (испражнения больного гастроэнтеритом), объектов окружающей среды (воды из поверхностных водоемов, сточных вод, смыва с поверхности), пищевых продуктов, контаминированных следующими микроорганизмами: Vibrio cholerae El Tor KM26, Vibrio cholerae M-375 (170) серогруппа O139, Vibrio cholerae non O1/O139 M-266, Aeromonas hydrophila P-4499, Pseudomonas pseudoalcaligenes BKMB-1300, Shigella sonnei 714, Salmonella paratyphi «B» M-53 (625), Escherichia coli 1027 О 151, Staphylococcus aureus ATCC 6538 (209-P). Каждому обучающемуся выдают по 2-3 пробы. Заранее слушателей курсов знакомят с предполагаемой «легендой», согласно которой они составляют заявки на питательные среды, бакпрепараты и расходные материалы, необходимые для проведения исследований, которые и получают для решения предложенной задачи. Процесс решения задачи сопровождается контролем и консультациями преподавателей. В итоге обучающиеся выдают ответ (письменно с заполнением соответствующих форм) о выделении микроорганизма с указанием рода и вида.

Таким образом, заявляемый способ обучения регламентированым методам лабораторной диагностики холеры с использованием набора учебных штаммов бактерий позволяет освоить в полном объеме регламентированные методы индикации, идентификации, дифференциации возбудителя холеры; снизить вероятность лабораторного инфицирования возбудителем холеры обучающихся на практических занятиях; приобрести навыки работы с возбудителем холеры в соответствии с требованиями безопасной работы с ПБА.

Список литературы:

1. Москвитина Э.А., Тюленева Е.Г., Кругликов В.Д., Титова С.В., Водопьянов А.С., Куриленко М.Л., Пакскина Н.Д., Иванова С.М., Анисимова Г.Б., Водопьянов С.О., Олейников И.П. Холера: оценка эпидемиологической обстановки в мире и России в 2008-2017 гг. Прогноз на 2018 г. Проблемы особо опасных инфекций. 2018; 1: с. 36-43

2. Еровиченков А.А., Зверева Н.Н., Сайфуллин М.А., Околот Н.В. Профилактика завозных инфекционных заболеваний у путешественников./Эпидемиология. Вакцинопрофилактика. 2018; 17(5): с. 89-94

3. Чемисова О.С., Сагакянц М.М., Голенищева Е.Н., Санамянц Е.М. Оценка бактерицидной активности дезинфекционных средств в отношении возбудителя холеры для деконтаминации судовых балластных вод./Инфекционные болезни: новости, мнения, обучение. 2018; 3 (Том 7): с. 15-19

4. Смирнова Н.И., Агафонова Е.Ю., Щелканова Е.Ю., Агафонов Д.А., Краснов Я.М., Ливанова Л.Ф., Кутырев В.В. Геномное разнообразие нетоксигенных штаммов Vibrio cholerae O1, выделенных на территории России и сопредельных стран./Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 2018; 2: с. 76-86

5. Санитарно-эпидемиологические правила «Профилактика холеры. Общие требования к эпидемиологическому надзору за холерой на территории Российской Федерации». СП 3.1.1.2521-09

6. Методические указания «Порядок организации и проведения лабораторной диагностики холеры для лабораторий территориального, регионального и федерального уровней». МУК 4.2.2870-11

7. Методические указания «Лабораторная диагностика холеры». МУК 4.2.2218-07

8. Санитарно-эпидемиологические правила «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)». СП 1.3.3118-13

9. Санитарно-эпидемиологические правила «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». СП 1.3.2322-08

10. Дополнительная профессиональная программа повышения квалификации врачей по специальности 32.08.14 «Бактериология» со сроком освоения 36 часов по теме: «Лабораторная диагностика холеры».- Самара, 2016.

http://www.samsmu.ru/files/news/2016/011116/bacteriology/ bacteriology2.pdf. Просмотрено 08.08.2019 г.

11. Адамов А.К., Наумшина М.С. Холерные вибрионы. - 1984. - Изд-во Саратовского унта. - 328 с.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для подготовки специалистов в области лабораторной диагностики холеры. Изобретение представляет собой набор учебных штаммов возбудителей холеры, применяемый при обучении специалистов-микробиологов. Разработан способ обучения регламентированным методам лабораторной диагностики холеры с использованием данного набора учебных штаммов бактерий. Набор включает 15 штаммов бактерий с низкой вирулентностью, при использовании которых обучающиеся могут освоить методы индикации, идентификации возбудителя холеры и дифференциации его от других представителей рода Vibrio и других родов. Преимущество изобретения заключается в повышении биологической безопасности учебного процесса и в снижении рисков инфицирования обучающихся возбудителем холеры при освоении ими регламентированных методов лабораторной диагностики холеры на практических занятиях. 11 пр., 1 табл.

Набор штаммов бактерий для обучения вопросам микробиологии и методам лабораторной диагностики холеры, содержащий авирулентные и низковирулентные штаммы: Vibrio cholerae 569В серогруппа O1 биовар классический серовар Инаба, Vibrio cholerae КМ26 серогруппа O1 биовар El Tor серовар Огава, Vibrio cholerae М-375 (170) серогруппа O139,Vibrio cholerae non O1/O139 М-266, Vibrio albensis 220, Vibrio alginolyticus 143, Vibrio parahaemolyticus 616, Shigella sonnei 714, Salmonella paratyphi «В» M-53 (625), Aeromonas hydrophila P-4499, Plesiomonas shigelloides 101, Escherichia coli О 151 1027, Pseudomonas pseudoalcaligenes ВКМВ 1300, Pseudomonas aeruginosa ATTC 27853, Staphylococcus aureus ATCC 6538 (209-P), депонированные в Государственной коллекции патогенных бактерий ФКУЗ «РосНИПЧИ» «Микроб».