Способ определения резистентности эритроцитов Советский патент 1988 года по МПК G01N33/48 

О5

Изобретейие относится к области медицины, преимущественно к гематологии и экспериментальной медицине, и может использоваться для выявления распределения эритроцитов по резис- тентности.

Цель изобретения - упрощение и ускорение способа при более точном выявлении распределения эритроцитов по резистентности.

На фиг.1 показана блок-схема установки для осуществления способа; на фиг.2 кривая распределения эриг троцитов.

Схема СОСТРОИТ из кюветы 1 измере - ния, которая расположена между фотоприемником 2 и монохроматором 3 спектрофотометра А на пути проходяще го света от источника 5 света. Кювет 1 измерения снабжена термостатом 6 и магнитной мешалкой 7. Блок 8 подач гемолизирующего агента соединен с кюветой 1 измерения капиллярной линией 9. Графопостроитель 10 подключе к выходу блока 8 подачи и через дифференциатор 11 - к выходу фотоприем- инка 2.

Блок 8 подачи гемолизирующего аге та выполнен на основе промьшшенного дозатора ДАЖ-115-1.

Для получения желаемой скорости подачи гемолизирующих агентов в консрукцию дозатора внесены следующие изменения:

используют синхронньй двигатель РД-09 с редуктором, который имеет 1,75 об/мин;

на корпусе дозатора закреплен кронштейн с .держателем шприца от дозатора да-10;

на ведущем валу подъемника поршня (на который подается усиление от двигателя) закреплены дополнительные валики для ременной передачи с диа- метром 35 и 20 мм;

с подъемником поршня шприца состыкован реохорд типа ППМЛ-ИЗ (связан с самописцем).

В результате модификаций блок по- дачи гемолизирующих агентов позволяет дозировать гемолизирующее веществ с малыми скоростями подачи (0,05, 0,10, 0,22, 0,45, 0,90, 1,35, 1,80 мл/мин), легко и быстро заменят гемолизирующий агент путем замены шприца с гемолитиком, регистрировать израсходованный объем гемолитика на самописце.

Для дифференцирования сигнала, полученного от ФЭУ, используют лабораторный прибор настольного типа для дифференцирования сигналов со следующими основными параметрами прибора: входной сигнал 0-2В, выходной сигнал 0-100 нВ, максимальное время дифференцирования 360 с.

Приме р. Берут кровь в количег стве 0,1 мл из пальца больного с дефицитом B,j на антикоагуляторе (гепарин 25 Ед/мл). Из цельной крови выделяют эритроциты путем центрифугирования (3000 об/мин, 5 мин на центрифуге ОПН-3) и промывают три раза физраствором. Разбавляют суспензию эритроцитов до оптической плотности D 0,7 при длине волны 71 670 нм. Помещают суспензию в кювету 1 измерения (длина оптического пути 20 мм) в количестве А мл и включают термостат 6 и магнитную мешалку 7 j вьшодят стрелку измерительного пишущего графопостроителя 10 на нулевую отметку и при постоянной температуре t , непрерьшно перемешивая, в кювету 1 измерения блоком 8 подачи добавляют 0,01 М HCt, приготовленный на физиологическом растворе с постоянной скоростью 0,625 мл/мин, В результате воздействия гемолизирующего агента эритроциты разрзтпаются, рассеяние света на эритроцитах умень - шается, вследствие чего увеличивается коэффициент пропускания суспензии на Я 670 нм, что отражается в увеличении сигнала, снятого с фотоприемника 2. Этот сигнал дифференцируется дифференциатором 11 и подается на Y координате графопостроителя 10. Дифференциал (прирост) сигнала пропорционален числу разрушенных эритроцитов в единицу времени, т.е. скорости разрушения эритроцитов

,dU dN

at - dt «

N - число разрушенных эритроцитов; и - сигнал, поступающий в дифференциатор от фотоумножителя) ..|Одновременно на X координате графопостроителя 10 регистрируется объем гемолизирующего агента, поступающего в суспензию эритроцитов. Таким образом, на графопостроителе происходит запись дифференциальной кривой гемолиза в

.-dN „V dN координатах Js Д 7Г -.число

разрушенных эритроцитов, за единицу времени, измеренное в произвольных

единицах; V - объей гемолизирующего агента, мл. Завершению процесса гемолиза соответствует возвращение стрелки графопостроителя на нулевую линию,

Как видно из кривой, на фиг.2 разрушение эритроцитов происходит по группам. На графике отчетливо выделяются 3 группы эритроцитов, раз- личных по резистентности. Группа I составлена из самых нестойких эритроцитов, которые с постоянной скоростью разрушаются в области 0,7-1,8 мл; II - эритроциты, разрушаемые в облас- ;ти 1,8-3,1 мл; III - эритроциты, разрушаемые в области 3,2-3,6 мл.

Та же суспензия эритроцитов была i исследована известным способом. По графику, имеющему вид одиночного пика, нельзя выделить группы эритроцитов, различные по резистентности, что доказьшает большую разрешающую способность предлагаемого способа.

Предлагаемый способ позволяет сократить время определения до - 3- 5 мин против /v 60-70 мин в известном способе. Формула изобретения

Способ определения резистентности эритроцитов путем добавления к суспензии эритроцитов гемолизирующего агента, перемешивания смеси, фотометрйро- вания, преобразования светового излучения в электрический ток. и его регистрации, о тличающийся тем, что, с целью упрощения и ускорения способа при более точном выявлении распределения эритроцитов по ре- зистентности, гемолизирующий агент добавляют непрерывно с постоянной скоростью в соответствии с концентрацией и видом гемолитика, электрический ток дифференцируют, а резистент- ность определяют в координатах объем гемолитика - дифференцированный электрический ток.

Изобретение относится к медицине, точнее к гематологии и экспериментальной медицине, предназначено для выявления распределения эритроцитов по резистентности. Цель изобретения - упрощение и ускорение способа при более точном выявлении распределения эритроцитов по резистентности. Способ осуществляют на установке, состоящей из кюветы 1 измерения, расположенной между фотоприемником 2 и монохромато- ром 3. Устройство имеет спектрофотометр 4 на пути проходящего света от :источника 5 света. Кювета измерения имеет термостат в и магнитную мешал- ку 7. Блок 8 подачи гемолизирующего агента соединен с кюветой измерения капиллярной линией 9. Графопостроитель 10 подключен к выходу блока 8 подачи и через дифференциатор 11 к ВЫХОДУ фотоприемника 2. К суспензии эритроцитов добавляют гемолизирую- щий агент непрерьшно с постоянной скоростью в соответствии с концентрацией и видом гемолитика, смесь перемешивают и фотометрируют, преобразуют световое излучение в электрический ток, который дифференцируют и регистрируют. Определение резистентности ведут в координатах объем гемолити ка - дифференцированный электрический ток. 2 ил. (Л

Д24 К

Фиг.1