СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИМУТАГЕННЫХ ВОЗДЕЙСТВИЙ Советский патент 1994 года по МПК C12N15/01 

Изобретение относится к экспериментальной генетике и прикладной медицине, в частности онкологии, и может быть использовано в качестве тест-системы для выявления и оценки антимутагенных воздействий различных физических, химических и биологических факторов.

Целью изобретения является упрощение и повышение разрешающей способности метода тестирования антимутагенных свойств различных агентов.

Основу изобретения составляет скрещивание двух маркированных линий дрозофилы вида D. sumulans, в одной из которых активирован фактор нестабильности генома (Н-фактор). За счет этого достигается высокий уровень спонтанного мутирования, служащий естественным контролем при анализе антимутагенных эффектов. Благодаря высокому уровню спонтанных мутаций при данной системе скрещиваний, для получения статистически достоверных результатов достаточно проанализировать не более 1000-1500 самок F₁, в то время как при использовании известного способа необходимо просмотреть 10-15 тыс. индивидуальных культур. Кроме того, высокая частота спонтанных мутаций позволяет отказаться от часто применяемого при исследовании антимутагенных факторов искусственного повышения уровня мутагенеза при помощи физических и химических агентов, что значительно уменьшает вероятность артефактов и делает метод более простым и безопасным для работающего.

Вследствие того, что Н-фактор активен в соматических тканях, мутагенные и антимутагенные эффекты проявляются у самок первого поколения (вместо F₂ и F₃ - в известном способе), что сокращает время анализа от 1,5-2 мес. до 15-18 дн.

Виргинных самок линии YW⁺H^-D. simulans скрещивают массово с самцами линии ++VH⁺/Y (10 самок х 4-5 самцов) в пробирках диаметром 30 мм, содержащих 15 мл стандартной питательной среды. На вторые сутки (в других опытах на 3-и сутки) родителей удаляют, перетряхивают на свежую среду, а в пробирки с 2- либо 3-суточными личинками добавляют испытуемый на антимутагенные свойства агент.

По мере вылета (начиная с 9-10-го дня) самок F₁ просматривают под бионокулярным стереоскопическим микроскопом МБС-9 в падающем свете, регистрируя случаи появления у них областей тела, содержащих мутагенные щетинки (желтого цвета) в окружении нормальных черных щетинок.

Учет ведут по макрохетам в производных глазо-антенного комплекса и дорзального мезотракального диска (голова, торакс и скутеллюм) и по сумме макро- и микрохет в гумеральной области, развивающейся из дорзального проторакального диска.

Просмотр заканчивают после полного вылета мух из культуры через 7-8 дн. от момента его начала).

Для оценки полученных данных применяют критерий Фишера: ϕ = 2arcsin; σ = , где Р - частота мозаичных пятен в расчете на 100 особей; n - число просмотренных самок F₁ (см. таблицу). Для оценки статистической значимости различий между частотами пользовались t-критерием.

Для всех проанализированных агентов с известными антимутагенными свойствами предлагаемый способ тестирования позволяет выявить значительное (в 2-3 раза) снижение уровня мутагенеза, что свидетельствует о его работоспособности и высокой чувствительности.

Использование изобретения позволит значительно сократить время анализа, количество операций и трудозатрат, а также повысить разрешающую способность и надежность процесса тестирования различных агентов на антимутагенную активность. Скорость, простота, надежность, безопасность и высокая разрешающая способность предполагают возможность применения изобретения в качестве скринингового метода при анализе антимутагенных свойств. (56) С. Beckman, R. M. Roy, A. Sproule Modification of radiation induced sex-linked recessive lethal mutation freguency by tocopherol. Mut. Res. , 105, 1982, p. 73-77.

Изобретение относится к экспериментальной генетике и прикладной медицине, в частности онкологии, и может быть использовано как тест-система для выявления и оценки антимутагенных воздействий различных физических, химических и биологических факторов. Цель изобретения состоит в упрощении метода тестирования антимутагенных свойств различных агентов и в повышении его разрешающей способности. В основе предложенного способа - скрещивание двух маркированных линий дрозофилы вида D. simulans, в одной из которых (VH⁺) активирован фактор нестабильности генома (Н-фактор), обеспечивающий высокий уровень спонтанного мутагенеза в соматических тканях. Благодаря достигаемой в данной системе скрещивания высокой частоте спонтанных мутаций для получения статистически достоверных результатов достаточно проанализировать 2000 - 2500 самок E₁ (вместо 10 - 15 тыс. индивидуальных культур в известном способе). Высокий уровень спонтанного мутагенеза позволяет отказаться от искусственного повышения частоты мутаций при помощи различных физических и химических агентов, что существенно уменьшает вероятность артефактов и делает метод более простым и безопасным для работающего. Функциональная активность Н-фактора в соматических тканях позволяет регистрировать мутагенные и антимутагенные эффекты у самок первого поколения (вместо E₂ и E₃) и тем самым сократить время анализа от 1,5 - 2 мес до 15 - 18 дн. 1 табл.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИМУТАГЕННЫХ ВОЗДЕЙСТВИЙ, включающий скрещивание маркерных линий дрозофилы, последующую обработку личинок антимутагеном и анализ потомства, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа и повышения его разрешающей способности, скрещивание проводят между двумя линиями вида Drosophila simulans YWH^- и VH⁺, причем в линии ++VH⁺ активирован фактор нестабильности генома - Н-фактор, действующий в соматических тканях, а антимутагенную активность оценивают по снижению частоты образования мутантных щетинок yelloW у самок первого поколения.