Питательная среда для культивирования инфузорий Советский патент 1989 года по МПК C12N1/00 

4 СП

Изобретение относится к прикладной биологии и может быть использовано для культивирования простейших при токсико-биологических исследованиях в условиях сельскохозяйственного производства.

Цель изобретения - повышение выхода биомассы инфузорий.

Питательная среда для культивирования инфузорий содержит глюкозу, морскую соль, лиофилизат куколок дубового шелкопряда и воду при следующем соотношении компонентов, 1 г на 100 мл среды: глюкоза 0,49-1,50, морская соль 0,09-0,70, лиофилизат куколок дубового шелкопряда 0,3- 1,50, вода до 100 мл, рН среды составляет 7,1-7,5.

Используемые куколки дубового шелкопряда являются отходами шелкомотального производства и образуются на стадии размотки или расчески коконного сырья.

Лиофилизат куколок готовят следующим образом.

Куколки моновольтинной породы дубового шелкопряда гомогенизируют, гомогенат пропускают через несколько слоев марли, разливают во флаконы и сублимируют.

Промораживают гомогенаты в течение 3,5-4 ч при -43-45 С, высушивают Изобретение иллюстрируется приведенными примерами.

Пример 1. В мерную колбу на 100 мл вносят 1,0 г лиофилизата куколок дубового шелкопряда, 0,1 г морской соли и 1,5 г глюкозы, доливают до 100 мл дистиллированную воду, до- водя фН среды до 7,1. Смесь переносят в пробирки по 1,5 мл, а в плос- кодоцные колбы по 10-20 мл с тем, чтобы слой не превышал 1 см. Стерилизуют в течение 20 мин при давлении 0,5 атм. Затем культуру инфузорий в количестве 0,2 мл высевают в среду и выращивают в течение 24 ч при комнатной температура (18-20 С). В последующем сррды с культурой инфузорий переносят в холодильник при 4 С,

Через 6 мес. хранения количество .клеток в среде составляет А1-63 10 в 1 мл и наблюдается их высокая биологическая активность (за 1 мин пересекают одну сторону малого квадрата камеры Фукса-Розенталя 50-60 особей) в то времр как на известной (пёп- тонной) среде наблюдается снижение

активности (до 20-30 особей) и разложение клеток через 7 дней хранения.

Лиофилизат куколок шелкопряда обладает более высокой биологической ценностью по сравнению со стандартом - белком цельного куриного яйца (табл.1). .

Рост клеток инфузорий на известном и предлагаемом белковом компоненте показан в табл.1.

Таблица 1

При визуальных наблюдениях отмечается бурньй рост и высокая активность инфузорий через 24 ч роста.

Как видно из табл.1, при внесении равного количества сравниваемых лио- филизатов - куриноТо яйца и куколок - количество выросших клеток инфузорий на субстрате куколок значительно выше, чем на субстрате куриного яйца. Полученные результаты свидетельствуют о высокой питательной ценности и биологической активности предлагаемого компонента среды.

Количество вьфосших клеток инфузорий в зависимости от концентрации лиофилизата представлено в табл.2.

Таблиц 2

Изобретение относится к области прикладной биологии и может быть использовано для культивирования простейших при токсико-биологических исследованиях в условиях сельскохозяйственного производства. Целью изобретения является повышение выхода биомассы инфузорий. Питательная среда для культивирования инфузорий содержит глюкозу, морскую соль, лио- филизат куколок дубового щелкопряда и воду при следующем соотношении компонентов (1 г на 100 мл среды): глюкоза 0,49-1,50; морская соль 0,09- 0,76, лиофилизат куколок дубового шелкопряда 0,3-1,50; вода до 100 мл, рН среды составляет 7,1-7,5. Среда позволяет увеличить рост клеток инфузорий с 45,6 до 93,4%, сохранить их высокую подвижность без функциональных и морфологических изменений. 4 табл. (Л

Установлено, что наибольший рост инфузорий наблюдается при содержании в среде лиофшшзата куколок в количестве 0,3-1,50 г на 100 мл среды.

0,250,49

0,040,09

0,0150,3

100100

17,862,9

Активность особей 22

Примечание: активность особей вьфажена количеством особей, пересекающих одну сторону малого квадрата камеры Фукса-Розенталя.

При соотношении компонентов рону квадрата камеры Фукса-Розенталя. (г/100 мл) глюкозы 0,49-1,50, морс- Уменьшение компонентов приводит к кой соли 0,09-0,7, лиофилизата куко- снижению роста и активности клеток, лок 0,3-1,50 количество выросших в увеличение заграничных параметров течение 3 сут инкубации клеток сое- вызывает атаксию (неподвижность) тавляет 62,9-39,3, активность 51-45 и гибель клеток, особей пересекает за 1 кин малую стоРост клеток культуры инфузорий и активность особей зависят от состава среды (табл.3).

Таблица 3

1,001,503,00

0.30,701,00

1,001,503,00

100100100

74,1 39,3 Единичныеклетки

60 45 Атаксия

Пример 2. В мерную колбу на 100 мл вносят 0,4 г глюкозы и 0,09 г морской соли, затем добавляют 0,3 г лиофилизата куколок дубового шелкопряда, доливают до 100 мл дистиллированную воду, доводя среды до 7,1. Смесь переносят в пробирки по 1,5 мл, а в плоскодонные колбы по

10-20 мл с тем, чтобы слой не превы- ю высокопитательная добавка в среде.

шал 1 см. Стерилизуют в течение

20 мин при добавлении 0,5 атм. Затем

культуру инфузорий в количестве

0,2 мл высевают в среду и выращивают

в течение 24 ч при комнатной темпера- 15 ет увеличить выход и биологическую

туре (18-20 С).

В последующем среды с культурой инфузорий переносят в холодильник и хранят при 4°С. Как свидетельствуют результаты наблюдений, при использовании данного соотношения компонентов среды наблюдается интенсивный рост клеток инфузорий (их количество составляет 62,9 шт). и максимальная их

активность инфузорий.

Пример 3. Культивирование инфузорий осуществляют по способу, приведенному в примере 1, но в ка- 20 честве белковой основы используют в одном случае лиофилизат куколок дубового щелкопряда в другом - экстракт куколок тутового шелкопряда. (табл.4),

Лиофилизат куколок дубового шелкопряда 1,5 г/мл

Экстракт куколок тутового шелкопряда 1,5 МЛ/Ш1

Таким образом, предлагаемый состав среды с использованием дубового шелкопряда является более эффективным для культивирования инфузорий тетрахимена периформис, используемых при токсико-биохимических исследованиях.

Формула изобретения

Питательная среда для культивирования инфузорий, содержащая глюкозу, морскую соль и воду, отлиактивность (за 1 мин пересекают одну сторону малого квадрата камеры Фукса- Розенталя 51 особь, табл.3). Приведенные данные примера показывают, что данное соотношение компонентов среды позволяет максимально увеличить рост клеток инфузорий и их активность. Таким образом, установлено, что

состоящая из глюкозы, морской соли и лиофилизата куколок дубового шелкопряда в количестве 0,1-1,5 г, обладает высокой эффективностью,позволяактивность инфузорий.

Пример 3. Культивирование инфузорий осуществляют по способу, приведенному в примере 1, но в ка- 0 честве белковой основы используют в одном случае лиофилизат куколок дубового щелкопряда в другом - экстракт куколок тутового шелкопряда. (табл.4),

Таблица 4

61,1 101,5

100,8

8,0

3,2

чающаяся тем, что, с целью повьщ1ения выхода целевого продукта, она дополнительно содержит лиофилиэат куколок дубового .шелкопряда при следующем соотношении компонентов, 1.г на 100 мл среды:

Тлюко за .0,49-1,50

Морская соль 0,09-0,70

Лиофилизат

куколок ду

бового шелкопрядаВода

0,3-1,5р Остальное