Способ дифференциальной диагностики стволового и полушарного ишемического инсульта при нарушении мозгового кровообращения Советский патент 1989 года по МПК G01N33/53 

1

Изобретение относится к медицине, в частности к неврологии, и может быть использовано для локализации очага поражения (стволовой или полушарный) при ишемическом инсульте.

Цель изобретения - повьшение точности способа и сокращение времени исследования.

Способ осуществляется следующим

образом.

Из периферической крови больного, взятой в количестве Ю мл, вьщеляют

лимфоциты в одноступенчатом градиенте плотности фиколл-верографина (1,077 г/мл) в режиме центрифугирования 400 g, 45 мин, . После дву5 кратного отмывания забуференньм физиологическим раствором готовят исходную концентрацию лимфоцитов, составляющую 10-10 в 1 мл полной питательной среды на основе RPMI-1640,

10 содержащей 12% эмбриональной телячьей сыворотки, глутамин (200 мМ), гента- мицин (40 мкг/мл). В качестве мишеней

используют меченные Н -уридином в дозе 3 мкКи/мл в течение 2 ч клетки эритромиелолейкозной линии К-562, культивируемые in vitro в указанной среде. После отмьшания от изотопа готовят исходную концентрацию мишеней 10-10 3 1 Rn. К мишеням добавляют фермент - панкреатическую РНК-азу в дозе 5 мкг/мл, после чего лимфоциты и мишени закапывают в ячейки 96- луночных круглодонных микропластин по 0,1 мл. Для более точной оценки активности естественных киллеров (ЕКА) путем двукратных разведений суспензии лимфоцитов создают различные соотношения эффекторов и мишеней в системе (Э:М), каждое соотношение

тестируют в 3 микропластин.

параллельных лунках

Лимфоциты и мишени инкубируют в течение 14 ч при 37°С во влажной атмосфере, содержащей 5% COg, после чего содержимое лунок осаждают на стек- ловолоконные фильтры с диаметром пор 2,5 мкм 12-канальным собирателем биологических фракций. Фильтры высушивают, уровень остаточной радиоактивности определяется с помощью сцинтилля- ционного счетчика, счет каждой пробы осуществляется в течение 2 мин.

В качестве меры ЕКА применяется цитотоксический индекс (ЦИ), вычисляемый по формуле:

Изобретение относится к медицине, точнее к неврологии, предназначено для локализации очага поражения (стволовой или полушарный) при ишеми- ческом инсульте. Цель изобретения - повьшение точности способа и сокращение времени исследования. Для этого из периферической крови пациента выделяют лимфоциты в одноступенчатом градиенте плотности фикола-верогра- фина (1,077 г/мл) в режиме центрифугирования 400 g, 45 мин при 20°С. После 2-кратного отмьшания забуферен- ным физраствором готовят исходную концентрацию лимфоцитов 10-10 в 1 мл полной питательной среды, содержащей 12% эмбриональной телячьей сыворотки, глутамин (200 мм), гентами- цин (40 мкг/мл). В качестве мишеней используют меченные Н -уризином в дозе 3 мкКи/мл в течение 2 ч клетки эритромиелолейкозной линии К-562, культивируемые in vitro в указанной среде. Определяют цитотоксическую активность естественных киллеров радиометрически при отношении эффекторов и мишеней 100:1; 50:1; 25:1. Рассчитывают цитотоксический индекс и по его величине делают вывод о стволовом или полушарном ишемическом инсульте . 2 табл. (Л 4 сл СП со

тш d - -22 22 Sf5Z5S 2:S l 2SSI225 ZS5),i007 число импульсов в контроле

: Контролем в лимфоцитотоксическом тесте служат клетки - мишени, инкуби- I руемые в тех же условиях, но без эф- фекторов. Время исследования 24 ч с ; момента забора крови у больного.

Существенное отличие отмечается .;При соотношениях Э:М от 100:1 до 25:1. Выявленные пределы определяются тем, что в более разреженной системе (соотношение Э:М меньше 25:1) регистрируется цйтотоксическая функция отдельных клеток 5 а не популяция мононуклеаров в целом, зшеличивается разброс показателей ЦИ; при увеличении количества -клеток в системе (соотношение Э:М больше 100.4) истощение среды большим числом клеточных элементов затрудняет учет результатов. 1

В оптимальном диапазоне соотношений Э:М при полушарном инсульте отмечается снижение показателей ЦИ, при стволовом они соответствуют норме.

П р и м е р 1. Больная Ч., 62 лет, поступила с диагнозом: атеросклероз, артериальная гипертония, шейньй остеохондроз, хроническая церебральная сосудистая недостаточность в стадии субкомпенсации. В анамнезе; в тече- иие последних 2 лет приступы системного головокружения с тошнотой, рвотой, головные боли непостоянной локализации, снижение слуха слева. Для выбора правильной тактики лечения требовалось локализовать очаг поражения в вертебро-базиллярной системе

30

(стволовой инсульт). Взята кровь для 2g исследования.

Расчет ЦИ проводился следующим образом.

Средние значения остаточной радиоактивности на фильтрах после совместной инкубации лимфоцитов с мишенями составили, имц/мин:

Э:М 100:1 1803

Э:М 50:1 2041

Э:М 25:1 2949

Средняя радиоактивность для 6 кон- 35 трольных лунок равнялась 4764 имц/мин. Подставляя полученные значения в формулу для расчета ЦИ, при соотношении Э:М 100:1 получили

ЦИ (1 1803 4764

О-100% 62%,

при соотношении Э:М 50:1 ЦИ 57%, при соотношении Э:М 25:1 ЦИ 38%.

45 Такие значения свидетельствовали о локализации очага поражения в вертебро-базиллярной системе, т.е. о наличии стволового инсульта. Время исследования составило 24 ч. Дальнейgg шая динамика и эффективность проведенной терапии подтвердили правильность диагноза.

П р и м е р 2. Больная Ж., 56 лет, поступила с неврологическим диагноgg зом: артериальная гипертония, острое нарушение мозгового кровообращения в глубоких ветвях левой задней мозговой артерии. За 2 мес до поступления отметила ухудшение памяти на текущие

и прошлые события. Для контроля правильности проводимой терапии необходимо было установить отсутствие повреждения в вертебро-базиллярной системе. Взята кровь для исследования. Показатели ЦИ при соотношениях Э:М 100:1; 50:1 и 25:1 составили соответственно 25, 24 и 21%. На основании этих данных диагностирован полу- шарный инсульт без повреждения стволовых структур. Время исследования 24 ч. Результаты исследования подтверждены эффективностью проведенной терапии и дальнейшей динамикой про-- цесса.

П р и м е р 3. Больная С., 48 лет, поступила с неврологическим диагнозом: артериальная гипертония, повторное нарушение мозгового кровообращения в корковых ветвях левой задней мозговой артерии. В анамнезе: год назад острое нарушение мозговог о кровообращения с парезом в правой руке. Новое ухудшение состояния наступило остро, в течение 3 дней, сопровождалось речевыми нарушениями. Взята кровь для исследования. Показатели ЦИ при соотношениях Э:М 12:1 и 6:1 составили соответственно 35 и 32%, что свидетельствовало о наличии стволового инсульта. Однако эффективность проведенной терапии и динамика процесса подтвердили правильность диагноза при поступлении.

Таким образом определение ЦИ при соотношениях Э:М меньше 25:1 неинформативно при данной диагностике.

Подобным образом обследов ана группа больных (26 человек) с ишемически- ми инсультами: 16 человек со стволовым инсультом, 10 - с полушарным.

Таблица 1 Показатели ЕКА в группе здоровых доноров

Данные исследования подтверждались клиническими наблюдениями, динамикой процесса и эффективностью терапии. В качестве контрольной обследована группа здоровых (без иммунологических нарушений) доноров в количестве 35 человек.

Данные приведены в табл. 1 и 2.

Таким образом, способ позволяет

локализовать очаг поражения (стволовой или полушарный) при ишемическом инсульте в течение 24 ч с момента забора крови. Способ отличается высокой точностью, воспроизводимостью результатов (п 26, р 0,01), быстротой постановки теста, объективностью оценки. Эффективен при использовании боль-,

ших соотношений эффекторов и мишеней в системе (100:1 - 25:1).

Формула изобретения

Способ дифференциальной диагностики стволового и полушарного ишемичес- кого инсульта при нарушении мозгового кровообращения путем клинического и параклинического исследования больного, отличающийся тем,что, с целью повьшения точности способа и сокращения времени исследования, дополнительно определяют цитотоксичес- кую активность естественных киллеров радиометрическим методом при отношении эффекторов и мишеней 100:1, 50:1,25:1,рассчитывают по полученным показателям цитотоксический индекс и при значении 44% и более диагностиуют стволовый шпемический инсульт, а при значении 43% и менее - полуарный .

Соотношения

Цитотоксический индекс, %

Стволовой

инсульт

Полушарный инсулвт

714553178

Таблица 2 Показатели ЕКА у больных с ишемическим инсультом

12:1 6:1

100:1

50:1

25:1

25:1