Способ оценки качества спермы птиц Советский патент 1989 года по МПК A61D7/02 

1

Изобретение относится к области биологии размножения животных и предназначено для лабораторных клинических исследований в сельском хозяйстве, медицине, ветеринарии, а также может быть использовано в криобиологии.

Целью изобретения является повышение точности оценки качества спермы птиц.

Пример. В питательную среду (фосфатный буфер, 0,05 М с рН 6,6-7,2) вводят родамин С и малахитовый зеленый в количествах 1% родамина С в 1-й раствор и 1% малахитового зеленого во 2-й раствор соответственно. Это два основных маточных раствора, которые могут сохраняться продолжительное время (в нашем опыте хранились более 6 мес). Непосредственно перед проведением исследований набирают 0,2 мл маточного раствора родамина С и вносят в чистый флакон, сюда же добавляют 0,3 мл маточного раствора малахитового зеленого и 0,5 мл фосфатного буфера.

На предварительно обезжиренное предметное стекло наносят каплю изучаемого

(Л

d

образца спермы, добавляют каплю рабочего раствора красителей, аккуратно перемешивают, выдерживают 10-15 с и делают мазок. Препарат сушат в потоке теплого (40°С) воздуха. Он может храниться в таком состоянии до микроскопирования несколько недель, а при необходимости долговременного хранения образец можно заключить в полистирол и хранить в течение нескольких лет.

Препарат рассматривают в микроскопе под иммерсией при увеличении 90Х 5 в про- ходяшем свете (1250 раз). В поле зрения учитывают число -(процент) нормальных спермиев без нарушений головок, хвостов и акросом, а также процент спермиев с различными нарушениями морфологии. При этом нормальные спермии имеют зеленовато- синюю головку и малиново-красные акро- сому и хвост.

При различного рода нарушениях отчетливо можно диагностировать отсутствие акросом ы, ее излом, разбухшие головки, бесформенные головки,гигантские и карликовые

N

to со

05

формы спермиев, отсутствие хвоста, надлом хвоста, изгиб спермиев в шейке.

Таким образом, окраска спермиев по предлагаемому способу дает возможность диагностировать различные морфологические аномалии спермиев, что значительно повышает точность прогноза оплодотворяющей способности половых клеток. Этот способ удобно использовать при разработке синтетических сред для хранения и криоконсервации спермы, при уточнении режимов эксплуатации самцов, при изучении токсичности различных разбавителей для спермы птиц и др.

Оптимальное соотношение в смеси родамина С и малахитового зеленого определяли следующим образом: в питательную среду вводили различные количества красителей, проводили окраску спермы и оценку ее под микроскопом. Псупучеиные результаты представлены в габл. I.

Данные, представленные в табл. 1, сви- детельствуют о том, что родамин С и малахитовый зеленый можно использовать в пределах 0,05-0,20% и 0,15-0,35% соответственно. При этом оптимальная концентрация родамина С в данной смеси состав- ляет 0,15%, а малахитового зеленого 0,25%. Недостаточная концентрация красителей не обеспечивает четкой дифференциации структур спермиев, а избыток того или иного красителя приводит к появлению доминирующей окраски того же цвета, т. е. приво- дит к потере дифференциации органелл спермиев.

Для сравнительного испытания предлагаемого способа с известным на индейко- ферме опытного хозяйства УНИИП «Бор- ки Харьковской области было сформирова- но 3 группы индюков по 5 голов, аналогов по живой массе и спермопродукции, с одинаковым процентом окрашенных спермиев по известному методу, находящемуся в пределах 10-13%, но различающихся по количеству поврежденных акросом, определенному по предлагаемому способу.

В первой группе были индюки с минимальным количеством поврежденных акросом 1-3% (в среднем 2,25%).

Во второй группе индюков процент поврежденных акросом находился в пределах 4-6% (в среднем 5,62%).

В третьей группе были индюки, в сперме которых количество поврежденных акросом было наибольшим - 10-13% (в среднем 11,43%).

Результаты испытаний представлены в табл. 2.

При сравнительном испытании способов сперму от самцов получали асканийским спо

собом и для осеменения индеек использовали объединенный эякулят от 5 самцов из каждой группы. Индеек осеменяли цельной спермой, доза осеменения 0,015 мл, интервал искусственного осеменения -- один раз в

7 дней.

Полученные результаты (табл. 2) свидетельствуют о том, что предлагаемый способ позволяет существенно повысить точность оценки качества спермы птиц. Так, во всех

трех группах индюков количество окрашенных спермиев по известному методу находилось на одном уровне (10-13%), но оплодотворяющая способность таких эякуля- тов значительно отличалась и прямым образом была связана с процентом поврежденных акросом, определенных предлагаемым способом.

0 0

5

50

0

5

Таким образом, предлагаемый способ дает возможность отобрать и выбраковать из стада индюков с повышенным процентом поврежденных акросом спермиев, тем самым повысить оплодотворяющую способность полиспермных эякулятов оставщихся в стаде самцов.

Окрашивание спермиев по предлагаемому способу позволяет четко дифференцировать все органеллы спермиев. Так, акросомы окрашиваются в малиново-красный цвет, головки, следующие за ними, - в зеленовато-синий цвет, а хвосты спермиев - в малиново-красный цвет. Время, затрачиваемое на приготовление одного мазка, составляет 45-55 с. Окраска препарата стабильна и не изменяется при их хранении в течение 1-2 мес, а при заключении препарата в полистирол - более года. Кроме того, экспериментально было установлено, что аналогичным способом окрашиваются спермии петухов, гусаков и селезней, т. е. способ применим для всех 4-х основных видов самцов птиц.

Формула изобретения

Способ оценки качества спермы птиц, включающий смешивание спермы со средой, содержащей красители, изготовление мазка, анализ окрашенных спермиев под микроскопом и оценку качества спермы по морфологическому состоянию спермиев, отличающийся тем, что, с целью повышения точности оценки, в качестве красителей используют смесь родамина С и малахитового зеленого при следующем соотношении ингредиентов, мас.%:

Родамине0,05-0,20

Малахитовый зеленый0,15-0,35

СредаОстальное.

Таблица 1

Изобретение относится к области биологии размножения животных и предназначено для лабораторных и клинических исследований в сельском хозяйстве, медицине и ветеринарии.Целью изобретения является повышение точности оценки качества спермы птиц. Способ заключается в окрашивании спермы в среде, содержащей, мас.%:родамин С 0,05-0,20 и малахитовый зеленый 0,15-0,35, анализе мазка под микроскопом и оценке качества спермы по морфологическому состоянию спермиев. Способ позволяет повысить точность оценки за счет дифференциального окрашивания органелл спермиев:акросомы, головки, хвоста. 2 табл.