Способ определения оплодотворяющей способности спермиев птиц Советский патент 1989 года по МПК A61D7/02 

1

Изобретение относится к биологии размножения животных, криобиологии и предназначено для оценки способности спермы к оплодотворению.

Цель изобретения - повышение точности способа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу, включающему смешивание спермы с питательной средой, содержащей флуорохром, последующий анализ под микроскопом качества спермиев по состоянию их ак- росом, в качестве флуорохрома используют d -нафтиламин в концентрации 5 , а об оплодотворяющей способности спермы судят по проценту спермиев, не имеющих изменений акро- сомы.

Пример. Вначале готовят спиртовой (на этиловом спирте) маточныйраствор флуорохрома, содержаний 5 -10 2-5 с(-нафтпламина. Затем готовят рабочий раствор флуорохрома, состоящий из 1 части маточного раствора и 100 частей питательной среды (физраствор или среды для разбавления, хранения, замораживания спермы). Непосредственно для осуществления способа отмеривают в пробирку в соотношении 1:2-3 сперму и рабочий раствор флуорохрома (к примеру, берут 0,01 мл спермы и 0,03 мл раствора), тщательно перемешивают и наносят на предметное стекло каплю смеси. Затем эту каплю плотно накрывают покровным стеклом так, чтобы движение спермиев было ограничено. После этого препарат помещают под люминесцентный микроскоп, например МЛ-3. При этом используют возбуждающий свет с длиной

Ј 4

СД

е&

Јь

ел

волны 400 нм, а флуоресценцию наблюдают в области 500-700 нм. Препарат рассматривают под имерсией при увеличении не менее 90х15 в отраженном свете. При этом на темном фоне видным светящиеся светло-салатные спермин, у которых четко просматриваются все составные части от акросомы до хвостика, в том числе границы (контуры) этих частей. Повреждения мембран спермиев, отклонения формы акро- сом от нормы хорошо различимы. Для достижения цели достаточно учитывать лишь состояние акросом спермиев. Таким образом, в поле зрения под микроскопом учитывают число (процент) спермиев с акросомами, не имеющими морфологических изменений, т.е. процент нормальных спермиев. К нормальным относят спермин петуха, акросо- ма которых имеет форму конуса с основанием, совпадающим по диаметру с диаметром головки. Все остальные спермин, акросома которых отличается по морфологии (форме) от описанных выше нормальных, относят к поврежденным. Предлагаемый способ позволяет учитывать при необходимости по меньшей мере 3 степени повреждения акросомы спермиев: набухшая (имеет ромбовидную форму; диаметр, особенно в средней части акросомы, существенно превышает диаметр головки) ; шаровидная (сильно набухшая, до приобретения формы шара); стержневидная (шапочка акросомы утеряна, но сохранился еще ствол). Точно также четко различима еще одна, самая сильная степень повреждения, связанная с полной потерей спермиями акросомы. Однако, как уже отмечалось выше, для достижения

10

15

20

j55

30

0

поставленной цели достаточно лишь учесть процент спермиев, имеющих нормальную акросому. Для этого удобно подсчитывать подряд в поле зрения микроскопа 100 спермиев и одновременно отмечать, сколько из них имеют морфологически нормальные акросомы. При этом затраты времени на анализ образца спермы не превышают 3-5 мин.

Данные сравнительного испытания эффективности прогноза оплодотворяющей способности спермы петухов известным и предлагаемым способами представлены в таблице.

Для проведения испытаний вызывали повреждения акросом путем хранения цельной спермы при комнатной температуре. Для этого получали сперму от нескольких петухов в один спермо- приемник, так как собирали объем, необходимый для осеменения 60 кур (5 групп по 12 голов в каждой). Полученную сперму тщательно перемешивали и использовали для осеменения кур I группы после 10 мин хранения, затем оставшуюся сперму хранили еще 70 мин (80 мин общего хранения) и использовали соответствующую ее часть для осеменения кур II группы. Кур III и IV групп осеменяли затем спермой, хранившейся в течение 140 и 200 мин соответственно. Часть спермы (1/5 часть) сразу же после получения замораживали по повреждающему акросомы режиму и использовали для осеменения кур V группы. Непосредственно перед использованием спермы для осеменения кур учитывали в ней число спермиев с нормальными акросомами известным и предлагаемым способами, представленными в таблице.

Данные показывают, что при использовании известного способа для оценки качества спермы, не подвергающейся сильному повреждающему действию (I-IV группы) и поэтому имеющей слабые повреждения акросом, имеется значительное число (от 10% по I группе до 24% по III) спермиев, которые по состоянию акросомы относят к категории сомнительных. В то же время при оценке спермы, подвергавшейся сильному повреждающему действию (V группа, замороженно-оттаянная сперма), сомнительных по состоянию акросом спермиев не обнаружено.

Предложенный способ показал хорошую совпадаемость данных оценки качества спермы с ее фактической оплодотворяющей способностью. Коэффициент корреляции 0,97. Продолжительность анализа одного образца спермы

3-5 мин.

Формула изобретения

Способ определения оплодотворяю- щей способности спермиев птиц,включающий смешивание спермы с питательной средой, содержащей флуорохром, последующий анализ под микроскопом качества спермиев по состоянию их 5 акросом, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, в качестве флуорохрома используют о/ -насЬтиламин в концентрации 5-Ю 4 -5 -10-5К.

Изобретение относится к области биологии размножения животных, криобиологии и предназначено для оценки способности спермы к оплодотворению. Целью изобретения является повышение точности способа. Для осуществления способа отмеривают в пробирку в соотношении 1 : 2-3 сперму и рабочий раствор флуорохрома. В качестве флуорохрома используют α - нафтиламин. Тщательно перемешивают и наносят на предметное стекло каплю смеси. Накрывают покровным стеклом. Исследуют под люминесцентным микроскопом. Повреждения мембран спермиев, отклонения формы акросом от нормы хорошо различимы. 1 табл.