Штамм гриба РеNIсILLIUм VеRмIсULатUм для получения препарата против белой и серой гнилей подсолнечника Советский патент 1992 года по МПК C12N1/14 A01N63/00 C12N1/14 C12R1/80 

1

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может использоваться для получения биологического препарата в борьбе с болезнями растений, а именно с белой и серой гнилями подсолнечника.

Целью изобретения является получение более активного штамма гриба Penicillium vermiculaturo в борьбе с мицелиальной и споровой формами белой.и серой гнилей подсолнечника.

Штамм гриба Penicillium vartoicula- tum выделен из склероциев белой гнили, собранных с пораженных растений подсолнечника, ему присвоен N РК-1.

Штамм гриба Penicillium vermicular tuns PK-1 депонирован в коллекции культур микроорганизмов Всесоюзного

института защиты растений и ему присвоен коллекционный номер 3. Морфологические признаки. Мицелий бесцветный, с возрастом темнеющий. Конидиеносцы бесцветныея септированные, прямостоящие, отходят от субстратного мицелия, 24-250 х х 1,5-3 мкм. Кисточки двухъярусные, симметрические. Кетули 10-15 х 1,7- -2,4 мкм по 2-3 в мутовке, Фиалиды ланцетовидные, 8-12 х 1,7-2,5 мкм по 2-7 в мутовке. Конидии полуокруглые до эллиптических, 2,2-3,5 х 2,0- -2,5 мкм, гладкие, в масле коричневато-зеленые. Гриб имеет сумчатую стадию. Плодовые тела круглые, 200- 500 мкм в диаметре, желтые. Перидий. состоит из желтых переплетенных инкрустированных гиф до 1-2 мкм толщи-

в

«S3

С Q

Сумки круглые,до широкоэллипти- чес.кнх, 8-12 х 7,5-10 мкм. Сумкоспо- ры шнрокоэллиптические, 3,5-5 х 2,5- 3,5, толстостенные, шиповатые, желтые, иногда с возрастом становятся красноватыми..

Культуральные признаки.

Культуральные признаки штамма изучались на: трёх видах агаризирован- Q .ных питательных сред при t .

На агаризироваиной среде из вытяжки семянок подсолнечника (вытяжка) колонки с лицевой стороны оливкового |цвета, порошистые| мелкие, не слива- ., ются в единую колонию, Конидий образуется много (в массовом.количестве), плодовых тел на этой питательной среде нет. С обратной стороны среда окрашена в оливковый цвет.

На агаризировакной среде Чапека колонии сливаются и образуют единую колонию (за исключением при t 35°C), порошистые,.с лицевой стороны окра- 25 шены р. оливково-желто-бежевый тон. С обратной стороны среда окрашена от светло-зеленого до темно-зеленого тона. Плодовые тела образуются при всех испытанных температурах, в мае- п совом количестве при t 25-30°С,

На картофельно-сахароэном агаре колонии порошистые, при t 15°C срастаются в единую колонию, при 20°С не сливаются, при 25° С растут радиальными кругами. С лицевой стороны колонии окрашены в темно-оливковый тон, с обратной - розово-кремовый. Плодовые тела в массовом количестве- образуются при t 25-30°C,

Морфолого-культуральные признаки штамма на разных средах и при различных температурах приведены в табл, 1,.

Физиологические признаки.

Аэроб. Температурный оптимум роста 25-30°С, Оптимальный р.Н в пределах от 5 до 8 (т.абл.2) Оптимальный рост гриба отмечен на средах, где в качестве источников углерода использовали сахарозу и крахмал (табл.3), в качестве источников азота - хлористый аммоний, азотнокислый висмут, азотнокислый аммоний (табл.4). На этих средах гриб образует интенсивное спороношение. Тиомочевина и мо- 55 чевина как источник азота грибом не используются.

Условия хранения.

35

40

,

5 п

5

5

0

Чистую культуру штамма Penicilli- цга vermiculatum PK-1 сохраняют в биологических пробирках на косой питательной среде (картофельно-сахароз- ный агар), Для поддержания патргенно- сти гриба в пробирки с чистой культурой гриба помещают искусственно выращенные склероции белой гнили, предварительно простерилизованные поверхностно. Температура при хранении 4-5°С.

Пример получения препарата для борьбы с белой и серой гнилями подсолнечника.

Для получения препарата 30-дневную культуру гриба, выращенную на стерилизованной питательной среде, состоящей из семянок и лузги подсолнечника в соотношении 1{3 подсушивают и размалывают на мельнице до мелкодисперсного состояния. Затем определяют титр препарата.

Примеры применения препарата.

Пример 1. Опыты проводили в тепличных условиях.

Здоровые корзинки подсолнечника в фазе зеленой спелости опрыскивали суспензией 30-дневной чистой культуры гриба . Penicilliutn vermiculatum РК-1, Расход суспензии 15-20 мл на одну корзинку.

Другие здоровые корзинки подсолнечника в фазе зеленой спелости опудри- вали порошком, изготовленным на основе, гриба Penicillium vermiculatum PR-1, выращенного на стерилизованных семянках.подсолнечника. Расход порошка 1 г иа одну корзинку подсолнечника. Титр спор порошка 1,7 млрд,/г.

После обработки грибом-антагонистом корзинки заражали белой и серой гнилями путем накладывания на них семянок подсолнечника, зараженных возбудителями гнилей (10-дневная чистая культура грибов белой и серой гнилей, выращенная на стерилизованных семянках подсолнечника).

Для развития и размножения, гриба- антагониста, а также для внедрения и развития возбудителей гнилей в тканях корзинок подсолнечника в теплице создавали условия высокой относительной влажности (90%) и температуры воздуха (18-23°С). Опрыскивание суспензией гриба защитило 90% корзинок от поражения белой и серой гнилью и 60% корзинок - от серой гнили. Опудривание порошком гриба

514

защитило (00% корзинок от белой гнили и 73,4% - от серой гнили (табл.5

Применение суспензий и порошков известных грибов-антагонистов белой гнили Coniothyrium minitans, Glio- cladium catenulatum, Trichocderraa viridal положительных результатов в целях защиты корзинок подсолнечника от поражения белой и серой гни- лями не дало.

Пример 2, Опыт проводили в тепличных условиях, в растильнях с почвой, на фоне искусственного зь- ражения, созданного внесением в почву мицелия белой гнили, выращенного на стерилизованных семенах подсолнечника Перед посевом семена подсолнечника опудривали порошком гриба Pani- cillum vermiculatum. Испытывали два способа применения гриба-антагониста сухое опудривание и олудривание с увлажнением, Норма расхода препарата в первом варианте 10 г порошка гриба на 1 кг семян; во втором 10 г порошка гриба и 200 мл воды на 1 кг семян. Титр спор порошка 1,7 млрд,/г

Контролем служили растильни с внесением в почву инфекции белой гнили без применения гриба-антагониста и растильни с посевом подсолнечника только чистыми семянами, Эталон опудривание семян порошком гриба Coniothyrium minitans, титр 2,5 млрд,/

Растильни помещали в бокс с температурой 20-23°С; почву ежедневно увлажняли.

Установлена высокая эффективность опудривания семян подсолнечника гри бом Penicillium vermiculatura РЮ-1 с

0

89

5

5

0

5

0

16

увлажнением. Всхожесть семян в этом варианте составляет 91,7% при всхожести в контроле с внесением инфекции 4,2% (табл.6).

Пример 3. Опыт проводили в полевых условиях, на делянках площадью 50 мг, в четырех повторностяг, Сорт подсолнечника Передовик.

Исследования проводили на искусственном инфекционном фоне, созданном путем внесения склероциев белой гки- ли в гнезда при посеве. Семена подсолнечника перед посевом обрабатывали порошком гриба Penicillium vermicula- turn PK-1. Норма расхода препарата 10 г порошка гриба и 200 мл воды на ( кг семян. Титр спор 1,7 млрд./г, Контролем служили делянки с внесением склероциев без гриба-антагониста и посев подсолнечника только чистыми семенами. Эталон - обработка семян гриба Coniothyrium minitans (молдавский штамм) с той же нормой расхода препарата. Титр спор 2,5 млрц./г, (табл. 7).

При опудривании семян порошком на основе гриба Penicillium vermiculatum1 РК-1 снижается изреженность всходов по сравнению с контролем на 13 е 2% и снижается поражение растений прикорневой формой белой гнили: в варианте составляет 0,5%j в контроле - 11,8%.

Формула изобретения

Штамм гриба Penicillium vermiculatum ВИЗР № 3 для получения препарата против белой .и серой гнилей под- солнечника.

Вытяжка Средний,колонии мел- киа„ не сливаются, порошистые, рассев

5%

Чапека Средний, колонии срастаются„ поро- шистые, рассев 5%

Оливко- Оливковый 3

вый

0,8x0,8 0,4x1,6

Конидий масса (т.е. массовое количество)„ плодовых тел нет

Розовато- Светло- кремовый зеленый

0,9x1,3 1,4x2,6

Конидий масса, плодовых тел мало, мелкие, по краю колоний

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано для получения биологического препарата против болезней растений, а именно с белой н се рой гнилями подсолнечника. Целью изобретения является получение более активного штамма гриба в борьбе с мицелиальной и споровой формами белой и серой гнилей подсолнечника. Штамм Penicillium vermiculatum выде- лен из склероциев белой гнили, собранных с пораженных растений подсолнечника, присвоен № РК-1. Штамм депонирован в коллекции ВИЗРа под № 3, Обработка растений препаратом, полученным с использованием указанного выше штамма, предохраняет от поражения белой гнилые 90% корзинок подсол- а нечника, а от поражения серой - 60%. S 7 табл.

Чапека

сливаются, порошистые

Средний, колонии сливаются , порошистые

Среднийр колонии не сливаютсяs порошистые

Вытяжка Сильный, колонии мелкие е не сливаются, порошистые

Чапека Сильный, колонии сливаются

оливковый

Светло- Кремово- зеланый, зеленый бежевый

Темно- Кремовый оливковый

1,0x1,1 1,5x2,9 1,4x2,1 0,9x2,3

тел нет

Конидий масса, плодовых тел мало, мелкие, по краю колоний Конидий масса, плодовых тел мало, в центре основной колонии

Оливко- Оливковый вый

Оливково- Розовато- желтый кремовый

1,1x1,5 1,4x3,8

2,4x2,4 1,6x2,4

Конидий масса, плодовых тел нет

Конидий масса, плодовых тел масса, лимонно-жел- тые

Карто- Сильный, колонии рас- Темно- Светло- фельно- тут радиальными круга-опивко- зеленый, сахароз- ми, порошистыевыйжелтый

ная

Вытяжка Сильный, колония мел- Олизко- Светло- кие, порошистые вый зеленый

0

Чапека

Карто- фельно- сахароз- ная

Сильный, колонии ера- Темно- Розовато- стаются, порошистые оливко- зеленьй

вый

Сильный, колонии мел- Оливко- Розовато- кие, порошистые вый кремовый

Вытяжка Слабый, колонии мел- Оливко- Оливковый кие, ограниченные, вый порошистые г,

Чапека Средний, колонии не Оливко- Темно-зеле- сливаются, порошистые во-жел- ный, кретыймовый

Карто- Средний, колонии по

фельно- рошистые

сахарозная

1,3x2,2 29ОхЗ,2

Конидий масса, плодовых тел масса, лимонно-желтые

0,6x1,6 1,7x3,5

2,0x2,0

Конддий масса, плодовых

тел нет

.о - о

да

да

Конидий масса, плодовых

тел масса, лимонно-желтые

Конидий масса плодовых тел масса, желтые

0,3x0,8 097х1,9

Конидий масса, плодовых тел нет

Оливко- Темно-зеле- во-жел- ный, кретыймовый

Темно- Кремовый оливковый

1,0x2,0 1,4x2,2

1,0x2 , 2 1,6x2,4

Конидий масса, плодовых тел мало, мелкие, по краям мккроколоний Конидий масса, плодовые тела единичные, по краям основной колонии

Таблица

Влияние рН среды на развитие штамма Penicillium vermiculatum РК-1, t 23°C

рИ Рост мицелия и образование плоцо

вых теп

3Обильный, плодовых тел мало

4Обильный, плодовых тел мало

5Обильный, плодов. х тел массовое количество

6Обильчый, плодовых тел массовое количество

7Обильный,плодовых тел массовое количество

8Обильный, плодовых тел массовое количестчо

9Средний, плодовых тел массовое количество

10Средний5 плодовых тел нет

Таблица 3

Влияние источников углерода на развитие Penicitlium vermiculafum PK-1 t 23°C

Рост чицелнл и образование пло- Вес сухого | новых телмицелия, мг

30,5

Сгябыи, плодовых тел мало

Обчльнъгй, плодовых, тел массовое количество32„8

Сильный; плодовых тял массовое количество32,6

Сллбый, плодовых тел мало 30.1

Таблица 4

ВПИЯНИР источников азота ка развитие штамма Penlciniuui varmiculatum PK-1, . 22-24°С

Рост мицелия и обраяовакие плодовых тел

Средний, плодовых тел масеорое количество

Слабый, плодовых тел мало

Обильный плодовых тел массовое количество Обильный,, плодовых тел массовое количестве Слабый плодовых тел нет Слабый у плодовых тел нет

Вес сухого мице лия, мг

30,5 30,8

30,9 31,2 31,2 31,0

30,7 30,6

Вес сухого мицелия, мг

31,4 2995

32,4

3298

309б 28„0

Таблица 5

Защитное действие гриба Penicillium vermiculatum PK-1 от поражения белой и серой гниля- ми при нанесении его на корзинки

Таблица 6

Влияние опудривания семян подсолнечника порошком на основе гриба Penicillium vermiculatum РК-1 на поражение белой гнилью

Penicillium vermiculatum PK-1

а)сухое опудривание48

б)с увлажнением48 Эталон; Coniothyrium miniterns (молдавский штамм)

а)сухое опудривание. 48

б)с увлажнением48 Контроль с внесением инфекции

без применения гриба-антагониста 8Контроль без внесения инфекции 48

Таблица 7

Влияние опудривания семян подсолнечника порошком на основе гриба Penicillium vermiculatum PK-1 на поражение белой гнилью

41,7 91,7

25,0 66,7

4,2 100