Способ определения антиокислительной активности химических соединений Советский патент 1989 года по МПК G01N33/52 

Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к биофизическим методам исследования параметров сы- воротки крови с целью определения антиокислительной активности химических соединений (фармакологических препаратов).

Цель изобретения - упрощение способа за счет сокращения числа трудоемких операций.

Способ осуществляется следующим образом.

У лабораторного животного под наркозом забирается гепаринизирован- ная (0,1 мг/кг массы животного) кровь. 50 мл свежегепаринизированной крови помещают в стеклянный оксигенератор, который термостатируют при 3 /°С. Производят перфузию образца крови в оксигенератор озоном с концентрацией 0,260-0,350 мг/л при экспозиции 5 - 7 мин и скорости 1 л/1 мин. После этого к аналогичному образцу крови добавляют исследуемое вещество и производят обработку образца крови озоном описанным способом. В сыворотке свежех епаринизированной крови, крови подвергнутой озонированию без добавления исследуемого вещества и с добавлением его индуцируют хемилюминеС- ценцию. Дпя этого перед началом анализа сыворотку крови объемом 0,5 мл в течение 5 мин вьщерживают в бане с температурой 37°С. Затем в кювету вносят 8,5 МП 0,105 М-раствора КС1, приготовленного на фосфатном буфере

У1

9

4 CD СП

31513405

(рН 7i45) О;,, 2 мл г ицроперекиси третичного бутила к 7 мл растаэра

FeSO 71-1 0 Затем кювету с несенпьэя1 j- растворами ставят в сзетонепроиицаемук камеру устройства 5 тщательно перемешивают ссдг.ержимое кюветы и закрывают камеру При закрытой створке прерывателя светового потока темповол камеры ю измеряют для контроля шумовой сигнал измерительного тракта устройства. Затем створка темновой камеры открывается и происходит измерение интенсивности свечения прИ1 Отовлен -Ю1 О раство- 5 ра (фон) для учета в последующем анализе световот О потока хемилюминесцен- iivi -i с: 4Р01 07 : ; )сви„ H ;ч.( AIOBC--- ту из кг:., в ciiermajtbHoe VCTDOHCT-крови и ;1змеря ат игтст ральную чнтеп - сивность хемилюг-п1песдеп, лип;и1;ов их комплексов в сывсротке KpOBvi в течение 1 , При этом полученные ре зультаты автоматически вьшодятся на цифрово ; 1)г:гистратор устройства. Степень вь раженности ант1- ск1-сл Г1 ельньп свойств исследуемого вепгества одени- вают по разниде хемилюьмнесцен;:.|Ии ме}кду О гь;т1гы 1 и кoнтpcлы ы И оОра: -- цами л;,они ,

П г; и ь . ер 1 о У лабораторког о хшвотнот о (собака) под HapKoaoNj забр;- раетог- кровь, Затем по 50 мл свеже- г еларин;;зирова и- ой крови помещается в стеклянный оксиг енератор, где первый образед озо Шруют озоном с кон- центрацией 0,26 мг/л в течение 5 iHHj к второму обпазцу добавляют витамин Е в кондентрадии 50 мг/кг веса, подвергают Г1ерфузии озоном так же, как пер- образец. В дентрифужные пробирки помещают но 2 мл крови, не подвергнутой перфузии и образды первый и вто- роЙ5 получают сыворотку крови п.ентри- фугированием при 1500 об/мин в тече- 10 мин. Затем по 0,5 мл каждой пробы выдерживают в бане при 37 С в течеггие 5 мин в епедиальном кюветном устройстве кеми:номин1ометра. К каждой пробе добаь.чяют мп 0,105 М раствора KCl, Oji мл 1%-ной гидроперекиси третичного бутила и 1 мл раствора ионов двут ;валентного железа FeSO

X71L О и тщательно перемешивают со4

емую камеру и измеряют интегральную интенсивность хемилюминесценции.

.XeмиJнoминecдeнция исходной крови 1 5 1 J 2 имп о/с,сыворотки крови,подвергнутой перфузии озоном -454,4 имп./С} озртгированной сь воротки и с витамином Е 134,2 имп./с.

Пример 2, Свежегепаринизи- рованную кровь помещали в стеклянный оксигенератор5 где первый образе озонировали с кондентрацией озона 0,35 мг/л в течение 5 мин, к после- трем образцам, той же крови добавляли витамин Е в концентрации 25, зО и 75 кг/кг и подверх али действию озоном как первый образец, после чего определяли и:птенсив1:ость хемилю- м 1чесден1пп,и Получали следую1сие ре- зу1:ьтать : хемилюминесценция сыворот- , крови после озонирования с оста в- л-яла 580,6 имп,/с 5 хемил оминесценция cыJзopoтки крови с витамином Е в кон- це; традии 25 мг/кг снизила интенсивд о

-з табл. 1 и 2 представлены данные хемилюминесценн,ии при разных режимах способа.

Изобретение позволяет существенно упростить процедуру опредеотения анти- гжислительной активности,

о р м у л а

обретения

-50

5

Способ определения антиокислитель- я:ой активнос Т И химических соединений i 1 у т е ь и н д у к и,и и с в о б од ь: о р ад и к ал ь н о т о ок;1сления липидов в тест-системе в присутствии и отсутствии исследуемого соеди - ения с послед зто цим измерением быстрой вспышки хемилюминесценции и определением антиокислительной актив- .ности по степени тушения хемилюминес- лденици в образцах, содержащих исследуемое соединение5 отличаю- :ji и и с я тем, что, с целью упроше- }1ия способа за счет сокращения числа трудоемких операций, в качестве Ч ее т-си с темы используют цельную кровь, свободнорадикальное окисление индуцируют, пропуская через образец крови озон в концентра1щи 0526-0,35 мг/л в тe teниe 5-7 мин, а перед измерением - xe шлюминecцeнции дополнительно усиливают ее Бведе1шем в образед ионов 11,вухвалентного железа.

Таблица 1

Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к биофизическим методам исследования параметров сыворотки крови. Способ может быть применен в биологии при исследовании антиокислительных свойств веществ и в фармакологии при испытании фармакокинетики и фармакодинамики лекарственных препаратов, используемых для коррекции процессов перекисного окисления липидов при различных патологических состояниях. Для этого в крови, подвергнутой озонированию без добавления исследуемого вещества и с добавлением его методом индуцированной ионами железа хемилюминесценции, определяют интенсивность свободно-радикального окисления. При этом концентрация озона составляет 0,26-0,35 мг/л, время озонирования 5-7 мин. Способ отличается простотой и малой трудоемкостью. 2 табл.

Хемилюминес- ценция5 имп,/с

105+15 407+20

Редактор Н„ Бобкова

Составитель Н. Гуляева

Техред Л.ОлийныкКорректор Л, Бескид.

Заказ 6076/46

Тираж 789

ВНИИПР Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

.„.„-..,....«..., «.«..«.м«.«. i..i«.«...i.w..

Производствен ю-издательский комбинат Патент, г.Ужгород, ул. Гагарина,101

Таблица2

411+17

Подписное