Способ определения гиперлипопротеидемии Советский патент 1986 года по МПК G01N33/49 

Изобретение относится к медицине, а именно к биофизическим методам исследования параметров сыворотки крови человека с целью диагностики Гинерлилопротеидемии: (ГЛП).

Цель изобретения - ускорение способа.

Способ осуществляется следующим образом.

В пробах сьшоротки крови измеряют интегральную интенсивность процессов перекисного окисления липидов и их комплексов с помощью индуци- роваиной хемилюминесценции. Дня; автоматического анализа можно использовать устройство для анализа биохемилюми.несцеяции микроорганизмов

Перед началом анализа сыворотку ;крови объемом 0,5 мл в течение 5, кш:н выдерживают в бане с t 37°С„ Все остальные реактивы нагреты до комнатно температуры, В кювету вносят 8;5 мл 05105М раствора КС I, приготовленного на (фосфатном 6у(ере (рЫ 7,45),

О , 2 мл 1 % -ной гидр опер е к:и с::и го бутила и 1 .№1

1 ретично

раствора ионов двухвалентного железа 10 м К. FeSC.-/H.jO, Затем кювету с внесенными растворами ставят в светонепроницаемую камеру устройства 5 тщательно перемешивают содержимое юоветы и закрывают,камеру. При закрытой створке преры.вателя светового потока темновой камеры измеряют для контроля шумовой сигнал измерительного тракта устройства. Затем створка темновой камеры открывается и происходит измерение интенсивности свечения приготовленного раствора (фон) для учета в по (следующем ан:ализе светового потока хемилюминесцеищп сыворотки крови. Не вынимая кювету из камеры, в специальное отверспге вводят, например шприцем 0,5 мл сьг- воротки крови и измеряют интегральную интенсивность хемилюминесценции липидов и их комплексов в сьюоро-тке крови в течение 1 мин„ При этом полученные результаты автоматически вьшодятся на цифровой .регистра.тор устройства.

После этого из полученного значения интегральной интенснвкости хемилюминесценции вьиитается значение фона за этот отрезок времени и результат фиксируется на регистраторе устройства. Затем полученный результат сргавнивается с параметрами нормы и. если он превьцпает на 10% и более

граничное значение нормы, тс диагностируют наличие ГЛП, если же он лежит в пределах нормы, то диагностируют отсутствие ГЖ1, 5 Пример.У больного М,

45 лет , берут 0,5 мл сыворотки крови, которую затем вьздержршают в течение 5 мин в бане с t , В кювету устройства вносят 8,5 мл 0,05 М раство- К1 ра KCI, приготовленного на фосфатном буфере (рн 7,45), 0,2 мл 1%-ной гидроперекиси третичного бутила, и 1 мл раствора ионов двухвалентного железа 10 М О и тщательно пере- 15 мешивают содержимое кюветы, Затем кювету с внесенными растворб.ми ставят в светот-:епроницаемую камеру устройства и закрьшают створку. Измеряют шумовой сигнал устройства за 1 мин 20 который составляет 780 имп, , затем при открытой створке камеры измеряют интенсивность свечения приготовленного раствора (фон) ,. которая за 1 мин составляет 2100 имг . 25 После этого в кювету шприцем

вводят 0,5 мл сыворотки крови больного М и измеряют 1нтегральнлто интенсивность хемилюминесценции липидов и их комплексов в сьшоротке крови 30 также в течение J мин, которая сос- тазхшет за вычетом фона 1)023 имп. Это значение соответствует норме для зтого возраста, поэтому у больного м диагностировано отсутствие 35 ГЛП,

Пример 2, У больнот о М. (номер истории болезни № 248) берут 0,,5 мл сьшоротки крови. В кювету устройства вносят 8,5 мл 0,105 н, 40 раствора КС1 , приготовленног о на фосфатном буфере (рН 7,15), 0,2 мл 1%-ной гидроперекиси третичного бутила и 1 мл лентного 45 и

раствора ионов двухва- железа М FeSQ,

н - - - тщательно перемешивали содержиг-ioe

кюветы. I

Затем измеряют шумовой сигнал устройства за минуту и интенсивность свечения приготовленного раствора

50 (фон).

В кювету вводят 0,5 мл сьгооротки крови больного и измеряют интеграль- ную интенсивность хемилюминесценции липидов и их компонентов в .сьгооротке

5 крови в течение 1 мин, которая состав,- ляет за вычетом фона 12343 имп. Это соответствует норме, позтому у больного диагностировано отсутствие ГЛП.

П. римерЗ. У больного X. 59 лет, берут 0,5 мл сьшоротки крови. Аналогичным образом в кювету устройства вносят 8,5 MJJ 0,105 М раствора КС1, приготовленного на фосфатном буфере (рН 7,45), 0,2 мл %-ной гидроперекиси третичного бутила и 1 мл раствора ионов двухвалентного железа М FeSO и тщательно перемешивают содержимое кюветы.

Затем измеряют шумовой сигнал устройства в течение 1 мин, который составляет 740 имп, и интенсивность свечения приготовленного раствора (фона), которая составляет 2050 имп,

В кювету вносят шприцем 0,5 мл сьшоротки крови больного X. и измеряют интегральную интенсивность хемилюминесценции липидов и их комплексов в сыворотке крови в течение 1 мин, которая составляет за выче- том фона 13670 имп. Это значение превышает более, чем на 10% значение нормы для этого возраста, поэтом у больного X.диагностировано наличие ГЛП.

Пример 4, У больного К.интегральная интенсивность хемилюминесценции липидов и их комплексов в сыворотке-. крови в течение 1 мин составляет за вычетом фона 27707 имп У него так же диагностировано наличие ГЛП,

Для контроля с помощью известного способа проведено исследование коли- честда ХС и ТГ у больных М.и X,, которое соответственно составляет: для больного М, - ХС 173 мг,%, ТГ 85 мг.% - норма, для больного X. - ХС 300 мг,%, ТГ 180 мг.% - ГЛП. Это подтверждает достоверность

Редактор Н.Рогулич Заказ 4815/43

Составитель И.Кузенкова Техред М.Ходан1«

Корректор

Тираж 778Подписное

ВНИШИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,, д.4/5

; Производственно-полиграф1гческое предприятие, г.Ужгород, ул.Проектная,4

to

15

25

20

30

5

0

диагностики по предлагаемому способу. При этом затраты времени соответ- : ственно составляют по-известному способу 2,5 ч, а по предлагаемому способу 0,25 Ч-.

Таким образом, за счет применения предлагаемого способа достигается существенное ускорение и упрощен ие. диагностики ГЛП при минимальных затратах ручного труда исследователя, что дает возможность эффективно ис- %1ользовать его (совместно с другими методиками) при массовых профилактических обследованиях населения для определения степени риска развития сердечно-сосудистьрс заболеваний.

При этом, предлагаемый способ ориентирован на применение биофизического метода измерения параметров сыворотки крови, для которого создано высокопроизводительное устройство, что обеспечивает высокую автоматизацию способа.

Формула изобретения

гСпособ определения гиперлипопро- теидемии путеь исследования крови с последующим электрофоретическим выявлением гиперлипопротеидемий, о т - личающийс я тем, что,.с целью ускорения способа, исследование крови осуществляют с помощью кемилюминесценции сыворотки, при,, этом хемилююшесценцию инициируют 1%-ным раствором гидроперекиси третичного бутила и lOj М раствором ионов двухвалентного железа и при уровне светосуммы хемилюминесценции от 12340 до 27700 имп/с с учетом электрофоретического исследования липопротеидов определяют гиперлипо- протеидемию.

Корректор В.Синицкая

Изобретение относится к биофи- зическим методам исследования. Цель изобретения - ускорение способа. По предлагаемому способу перед началом анализа сьшоротку крови в течение 5 мин выдерлснвают в бане. В кювету вносят раствор KCi, приготовленный на фосфатном буфере, 1%-ную гидроперекись третичного бутила и 1 мл . 10 м М раствора ионов двухвалентного железа. Содержимое кюветы перемешивают. Последнюю ставят в свето- нспроницаемун) камеру устройства и закрьшают створку. Измеряют шумовой сигнал устройства за 1 мин. При открытой створке камеры измеряют интенсивность свечения приготовленного раствора. В кювету вводят 0,5 мл сыворотки кровн и измеряют интегральную интенсивность хемилюминесценции липидов и их компонентов. При уровне светосуммы хемилюминесценции от 12340 до 27700 имп/с с учетом злектро форетического исследования липопро- теидов определяют гиперлипопротеиде- мию. (Л С