Способ определения окисления и ферментации глюкозы грамотрицательными микроорганизмами Советский патент 1989 года по МПК C12Q1/04 

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для идентификации бактерий при бактериологических исследованиях.

Цель изобретения - ускорение способа.

Пример 1. Приготовление питательных сред,

К 170 мл раствора, содержащего 11,876 г/л ,- 1., добавляют 30 мл раствора, содержащего 9,078 г/л KHjPO4, устанавливают рН 7,6, К 200 мл буферного раствора добавляют 6 г хлористого натрия, 4 мл 0,4%-но- го водно-щелочного раствора фенолового красного, (0,016 г сухого вещества), дистиллированную воду до 1 л, рН среды 7,6, Полученный раствор разливают в колбы по 100 мл, стерилизуют при 30 мин. Буферная основа среды имеет красную окраску,

В стерильную буферную среду добавляют 3 г порощка Д-глюкозы и перемешивают. Среда готова к использованию для определения ферментации глюкозы,

Для получения среды, необходимой для определения окисления глюкозы, к описанной среде добавляют 0,7% пероксида водорода. Исследуемую агаровую культуру грамотрицательных бактерий вносят по одной полной петле в две лунки штаншета, содержащее по О,1 мл питательных сред, В одной лунке находится среда для ферментации глюкозы, содержащая 3% Д-глюкозы в буферной основе, в другой - среда для окисления глюкозы, содержащая 3% Д- глюкозы и 0,7% перекиси водорода в

сл

00 СА9

4

буферной основе Культуры перемешивают, планшет помещают в термостат при 37°С на 60 мин, после чего учитьгаают результаты В лунке со средой для ферментации глюкозы сохраняется исходная красная окраска, а в лунке со средой для окисления глюкозы имеются пузырьки газа и исходная красная окраска. Результаты указьшают на то, что по OF-тесту исследуемые бактерии относятся к группе неферментирующих и неокисляющих глюкозу бактерий

П р и м е р 2., Готовят среды в соответствии с примером 1, но компо- ненты берут в следующих соотношениях

Фосфатный буфер 0,2 л

Д-глюкоза 0 г

Хлористый натрий4 г

Феноловый красный0,012 г

Дистиллированная

водаДо I л

В среду для определения окисления добавляют 0,1% пероксида водорода.

Исследуемую агаровую культуру грамотрицательных бактерий вносят по одной полной петле в две лунки планшета, содержащие по 0,1 мл питатель- них сред В одной лунке находится среда для ферментации глюкозы,содер- жащай 1% Д-глюкозы в буферной основе в другой - среда для окисления глю- к озы, содержащая 1% Д-глюкозы и 0,1% перекиси водорода в буферной основе Культуры перемешивают, планшет помещают в термостат при 37°С на 60 мин, после чего учитьгаают результаты В лунке со средой для ферментации глюкозы исходный красный цвет изменился в желтый, в лунке со средой для окисления глюкозы среда имеет пузьфьки газа и желтую окраску Результаты указьгоают на то, что по OF-тесту исследуемые бактерии относятся к груп- пе ферментирующих глюкозу бактерий

П р и м е р Зе Готовят среды и соответствии с примером 1, но компоненты берут в следующем соотношении: Фосфатный буфер 0,2 л Д-глюкоза20 г

Хлористый натрий 5 г Феноловый красный 0,014 г Дистиллиров анная вода. До 1 л

В среду для определения окисления глюкозы дополнительно вводят 0,5% пероксида водорода.

0 5

0

5

Исследуемую агаровую культуру I рамотрпцательных бактерий вносят по одной полной петле в две лунки планшета, содержащего по 0,1 мл питательных сред. В одной лунке находится среда для ферментации глюкозы,содержащая 2% Д-глюкозы в буферной основе, в другой - среда для окисления глюкозы, содержащая 2% Д-глюкозы и 0,5% перекиси водорода в буферной основе Культуры перемешивают, планшет помещают в термостат при на 60 мин, после чего учитывают результаты В лунке со средой для ферментации глюкозы сохранилась исходная красная окраска среды, а в лунке со средой для окисления глюкозы имеются пузырьки газа и желтая окраска. Результаты свидетельствуют о том,что по OF-тесту исследуемые бактерии относятся к группе окисляющих (но неферментирующих) глюкозу бактерий

Результаты определения OF-теста по данному способу показывают, что все ферментирующие глюкозу штаммы бактерий (энтеробактерии, вибрионы) завершают ее ферментацию в сроки 20 50 мин, все окисляющие глюкозу штаммы (псевдомонас, ацинетобактер и другие) завершают ее окисление в сроки 10-80 мин, при этом в течение до 60 мин - 95,84± 1,83% бактерий Pseudomonas aeruginosa и 100% штаммоя прочих видов, а в течение 80 мин - 100% штаммов всех видов. В эти же сроки все штаммы неферментирующих и неокисляющих глюкозу бактерий дают четкие отрицательные результаты Сопоставление результатов определения OF-теста по данному способу и способу-прототипу Хью-Лейфсона.показывает полное совпадение результатов у всех штаммов, но результаты получают в более короткий промежуток времени

Формула изобретения

Способ определения окисления и ферментации глюкозы грамотрицатель- ными микроорганизмами путем посева исследуемого микроорганизма параллельно в две среды, содержащей фосфатный буфер, хлористый натрий, Д-глюкозу, индикатор и дистиллированную воду, с последующим инкубированием посевов и оценкой результатов по изменению окраски сред, отличающийся тем, что, с целью ускорения способа.

515Г8374,(i

инкубирование проводят в течение 60 - Дистиллированная 80 мин, при этом ферментацию глюкозы водаДо 1 л определяют на среде, содержащей в ка-окисление глюкозы определяют на той честве индикатора феноловый красный .же среде в присутствии пероксида вопри следующем количественном соотно- дорода в концентрации 0,1-0,7% к шении компонентов:объему среды и при изменении цвета ФосфатньЕй буфер рН 7,6 0,2 лсред на желтый определяют ферментацию Д-глюкоза 10-30 гглюкозы, а при изменении цвета и нали- Хлористый натрий 4-6 г Qчии газообразования только в среде. Феноловый красный 0,012 -содержащей пероксид водорода,определя0,016 гют окисление глюкозы.

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для идентификации бактерий при бактериологических исследованиях. Цель изобретения - ускорение способа. Способ осуществляют параллельно в двух средах, при этом среда для определения ферментации глюкозы содержит 0,2 л фосфатного буфера рН 7,6

10-30г Д-глюкозы

4-6г хлористого натрия

0,012-0,016г фенолового красного и дистиллированную воду до 1 л. В среду для определения окисления глюкозы дополнительно вводят 0,1-0,7% пероксида водорода. Исследуемые организмы вносят в обе среды и инкубируют 60-80 мин. При изменении красного цвета сред на желтый определяют ферментацию глюкозы, а при изменении цвета и наличии газообразования только в среде с пероксидом водорода определяют окисление глюкозы.