Способ определения аллергических реакций на лекарственный препарат Советский патент 1989 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, в частности к аллергологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики атонических и псев- доаллергических реакций на нестероидные противовоспалительные препараты и ненаркотические аналгетики (в дг1льнейшем НСПП) .

Целью изобретения является повышение точности определения аллергических реакций на нестеронцные противовоспалительные препараты и ненаркотические аналгетики за счет дифференциального определения атопических и псевдоаллергических реакций.

Цель достигается тем, что у больных в богатой тромбоцитами плазме определяют содержание циклического аде- нозинмонофосфата (ЦАМФ) до и после действия индуктора агрегации (АДФ),

при этом одну порцию плазмы инкубируют с физиологическим раствором (контрольный образец), а другие порции с равным количеством исследуемых ле- карственных препаратов в конечной концентрации (опытные образцы), и при уменьшении содержания ЩМФ после действия индуктора по сравнению с исходным содержанием в контрольных и опытных образцах диагностируют IgE- зависимые реакции на НСПП, а при увеличении содержания ПАМФ в контрольных и опытных образцах после действия индуктора диагностируют псевдоаллерги- ческие реакции.

Способ осуществляют следующим образом.

У больного из локтевой вены берут кровь в 3,8%-ный раствор цитрата натрия (10:1), ив которой путем центрифугирования в течение 10 мин при 150g получают богатую тромбоцитами плазму, а путем дальнейшего центрифугирования при 1200g - бестромбоцитарную плазму. После подсчета клеток равные объемы богатой тромбоцитами плазмы (БТП) инкубируют в течение 15-20 мин с 20- 40 мкл физиологического раствора или с 20-40 мкл отдельных НСПП (в конеч- ной концентрации 10 М). В указанном интервале времени достигается инактивация фермента PGH-синтетазы при действии НСПП. После инкубации к боцитам добавляют индуктор агрегации АДФ в концентрации О,1-0,, через 60-80 с (время максимально достигаемой агрегации) осуществляют экстракцию циклических нуклеотидов (эта- нольная экстракция подкисленным эта- НОЛОМ - 1 мл 1 и. неб на 100 мл этанола) и определяют концентраци ЦА11Ф.

В основу предлагаемого способа диагностики IgE-зависимых реакций на НСПП легло обнаруженное явление уси- ления агрегационной способности тромбоцитов у больных атопией. Нестеро- 1здные противовоспалительные препараты и ненаркотичесмие аналгетики являются классическими фармакологичес- кими агентами, которые угнетают ак- .TJteHocTb трЬмбоцитов. При неиммунологических реакциях НСПП проявляют себя как ингибиторы функции тромбоцитов, при IgE-зависимых феноменах наблюдается парадоксальный эффект,при инкубации с НСПП - активация функции тромбоцитов. Такой необычный ответ вызван тем, что при наличии атопии

ИСПП, как и другие истинные аллергены, активируют IgE-зависимое высвобождение фактора, активирующего тромбоциты.

Повьшение уровня ЦАМФ происходит только у больных с псевдоаллергией, а у здоровых и больньк атопией (при любом виде сенсибилизации) определяется уменьщение концентрации циклического нуклеотида после действия индуктора агрегации.

Разграничение нормального ответа от атопии и наличие атопии к конкретному НСПП устанавливают при уменьшении НАМФ в БТП после действия индуктора агрегации на преинкубиро- ванную с НСПП плазму, богатую тромбоцитами. У здоровых или больных с атопней, обусловленной сенсибилизацией к другим видам аллергенов но не к ПСПп), отсутствует однонаправ- /генный характер изменений в контрольном и опытном образцах.

Сравнительные исследования по известному и предлагаемому способам проведены у 29 больных с различными клиническими проявлениями непереносимости НСПП. Из 20 больных низкий уровень IgE (ниже 20 кЕ/л) определен у 8 пациентов (27,5%), высокий уровень (выше 100 кЕ/л) - у 13 (44,8%), промежуточный, диагностически незначимый (от 20 до 100 кКУл) - у 8 (27,5%). Число больных с трудно дифференцируемым значением IgE приближается к тем цифрам, которые указаны в литературе, - от 30 до 37%.

С помощью предлагаемого способа установлено, что псевдоаллергические реакции имеют место у 17 больных (58,6%), атонические -у 11 (37,9%), не удалось диагностировать тип реакции только у 1 больного (3,4%). Таки образом, точность предлагаемого способа составила 96%, что значительно превышает точность известного спосо- ба. Проверка диагноза проводилась пу тем постановки провокационных тестов и клиническим наблюдением за больными,.

Пример 1. Больной М., 25 лет обратился в аллергологический центр с жалобами на повышение температуры, головную боль и боль в суставах, появление сыпи на коже кистей, стоп, голеней, предплечий, туловища. В течение двух предшествующих дней принимал амидопирин, цитрамон и другно лекарственные препараты. Диагностирована многоформная экссудатинная эритема. Определено содержание IgE 1200 кЕ/л.

Полученные данные говорят об ато- пии, но не представляется возможным судить, чем обусловлено повышение уровня tgE - лекарственными препаратами или другими причинами. Известт что к временному увеличению уровня IgE приводят вирусные инфекции, а у больного были клинические симптомы, напоминающие респираторную инфекцию. С целью дифференциальной диагностики проведено исследование уровня ЦАМФ в БТП. Результаты исследования следующие. Исходное содержание ЦДМФ

в БТП 17,1 pmol/IO тромбоцитов, пос- 20 шок. После выведения больной из шо- ле действия индуктора на БТП, проин-ка через 2 недели проведено исследокубированную с физиологическим ра- вание общего IgE. Содержание IgE

створом, содержание ПАМФ 6,0 pmol/10

(тромбоцитов (контрольный образец), в БТП, проинкубированной с амидопирином, содержание ЦДМФ после действия индуктора 9,4 pmol/10 клеток опытный образец), т.е. произошло уменьшение содержания ПДМФ после действия индуктора в контрольном и опытном об- зо ствия индуктора - 7,1 pmol/lO кле-

разцах. Установлен IgE-зависимый ва-ток. Диагностирована IgE-зависимая

составило 240 кЕ/л. Количество в исходном образце БТП 10,6 pmol/10 25 тромбоцитов, после индукции агрегации АДФ в БТП, проинкубированной с физиологическим раствором, - 8,2 pmol, в опытном образце (БТП, проинкубированная с анальгином) после дейриант непереносимости ПСПП. Через год после случайного приема таблетки от головной боли, содержащей пиразо- лоновые произв одные, развился рецидив многоформной экссудативной эритемы с повышением уровня Ig до 10000 кЕ/л, что подтверждается диагнозом IgE-зависимого механизма непереносимости НСПП.

Пример 2. Больной У., 23 года, направлен на консультацию из госпиталя, где находился в связи с развившимся у него после приема ряда лекарств, в том числе аспирина (АЦСК), синдрома Стивенса - Джонсона. Содержание IgE в сыворотке 33 кЕ/л. Для выявления непереносимого лекарственного препарата проведено исследование ПАМФ в БТП. Исходньй уровень ЦАМФ 22,0 pmol/10 тромбоцитов. После индукции агрегации АДФ содержание UAMO в контрольном образце 38,0 pmol/10 тромбоцитов, в опытном (БТП, проинкубированная с АЦСК) содержание 24 pmol/10 клеток. Таким образом, по увеличению содержания ЦАМФ в контрольном и опытном образцах по сравнению с исходньм уровнем диагности35

реакция на анальгин. Наличие аллергии к пенициллину проведено радиоал- лергосорбентным тестом (RAST) с пе- нициллоилами G и V. Результаты RAST отрицательны. Таким образом, диагностика предлагаемым способом позволила дифференцировать непереносимость ИСПП от лекарственной аллергии к пе- дО нициллину у больной с высоким уров- нем неспецифического IgE пр одновременном приеме нескольких лекарств.

45

50

55

Пример 4. Больная А.,33 лет, находилась по поводу инфекционно-аллергической бронхиальной астмы 1 степени, поливалентной лекарственной непереносимости. Б анамнезе развитие приступов удушья после приема анальгина, цитрамона, пиркофена. В июне 1984 года были получены положительные кожные пробы с аллергеном березы. Определено содержание IgE 68 кЕ/л. Уровень IgE находится в так называемой промежуточной зоне, которая является недиагностической,и не позволяет четко дифференцировать атопии от неатопических феноменов. Больной для уточнения данных анамнеза npqBeрована псевдоаллергическая реакция на АЦСК (аспирина). В дальнейшем пос- ле приема парацетамола, который не является ингибитором PGH-синтетазы и, следовательно, не может вызьюать, псевдоаллергических реакций, у больного симптомы непереносимости не развивались. Следовательно, правильность

вывода о не иммунологическом характере непереносимости АЦСК подтверждена, чем и доказана достове-рность предлагаемого способа.

Пример 3. Больная 3.,56 лет,

находилась в клинике по поводу болезни оперированного желудка, получала одновременно анальгин и пеницип- лин в инъекциях. На фоне проводимой терапии развился анафилактический

ствия индуктора - 7,1 pmol/lO кле-

составило 240 кЕ/л. Количество в исходном образце БТП 10,6 pmol/10 тромбоцитов, после индукции агрегации АДФ в БТП, проинкубированной с физиологическим раствором, - 8,2 pmol, в опытном образце (БТП, проинкубированная с анальгином) после дей35

реакция на анальгин. Наличие аллергии к пенициллину проведено радиоал- лергосорбентным тестом (RAST) с пе- нициллоилами G и V. Результаты RAST отрицательны. Таким образом, диагностика предлагаемым способом позволила дифференцировать непереносимость ИСПП от лекарственной аллергии к пе- дО нициллину у больной с высоким уров- нем неспецифического IgE пр одновременном приеме нескольких лекарств.

45

50

55

Пример 4. Больная А.,33 лет, находилась по поводу инфекционно-аллергической бронхиальной астмы 1 степени, поливалентной лекарственной непереносимости. Б анамнезе развитие приступов удушья после приема анальгина, цитрамона, пиркофена. В июне 1984 года были получены положительные кожные пробы с аллергеном березы. Определено содержание IgE 68 кЕ/л. Уровень IgE находится в так называемой промежуточной зоне, которая является недиагностической,и не позволяет четко дифференцировать атопии от неатопических феноменов. Больной для уточнения данных анамнеза npqBe

дено исследование предлагаемым способом. Исходный уровень ЦД-МФ в БТП 3,75 рпю1/10 тромбоцитов. После действия индуктора содержание ЦАМФ в контрольном образце (БТП, инкубированная с физиологическим раствором) повысилось до 28,5 рпю, в опытных образцах (БТП, инкубирюванная с ин- дометацином и анальгином) после действия индуктора содержание ЦАМФ составило 15,1 и 15,8 pmol/10 клеток, т.е. было повышение по сравнению с исходным в несколько раз. Диагностирована аспириновая астма с неиммунологическими механизмами непереносимости НСПП. Достоверность диагноза подтверждена провокационным тестом с НСПП.

Пример 5. Больная Р.,59 лет наблюдается в аллергическом центре по поводу инфекционно-аллергической бронхиальной астмы 2 степени. В анамнезе отмечался приступ удушья после приема метиндола. Содержание IgE

120 кЕ/л, что позволяет предполагать наличие атопии. Для уточнения данных анамнеза проведено обследование предлагаемым способом. Исходное содержание ЦА1 1Ф в БТП 4,45 praol/lO тромбоцитов. После действия индуктора в контрольном и опытном образцах (БТП, инкубированная с физиологическим раствором и индометацином) содержание

Т1«« А .,11 J1 / I П

иДМФ увеличилось до 9,4 и 1 1,7 рто 1 / Ю клеток соответственно.Диагностирован непереносимость:НСШ1,обусловленная не иммунологическими феноменами. Кожные пробы со всеми группами неинфекцион- ных аллергенов отрицательны. Последний пример свидетельствует о том, чт само по себе увеличение уровня IgE до 120 кЕ/л не может быть критерием атопии. При высоком уровне IgE, обусловленном индивидуальными особеннос

тями, у больной наблюдаются псевдо- аплергические не:1ммунологические реакции на НСПП, которые диагностируются предлагаемым способом.

Как видно из приведенных примеров использование предлагаемого способа обеспечивает более полное выявление

Составитель А Техред М.Дидык

Редактор И.Горная

0

5

Q 5

0

5

5

0

псевдоаллергических реакций, как за i счет уточнения типов непереносимости В диапазоне недиагностических, промежуточных значений IgE, так и за счет выявления неиммунологических реакций на НСПП у больных с высоким индивидуальным уровнем IgE.

Точность предлагаемого способа достигает 90-96%, точность известнЬ- го 63-70%. Важным достоинством способа является полная безопасность больных, возможность одновременного исследования препаратов, относящихся к разным химическим группам.

Предлагаемый способ позволяет распознавать а-топичес кую или пенммуноло- гическую (псевдоаллергическую) реакцию на ИСПП, а известные способы позволяют распознавать или только непереносимость к группе лекарств без уточнения характера, или только разграничивать атопии от псевдоаллергии без определения конкретного лекарственного препарата. Следовательно, для дифференциации атопических и псевдоаллергических реакций на ПСПП они должны применяться в совокупности. Формула изобретения

Способ определения аллергических реакщш на лекарственный препарат путем исследования крови, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения аллергических реакций на нестеровдные противовоспалительные препараты и ненаркотические аналгетики за счет ди 5хЬеренциального определения атопических и псевдоаллергических реакций, из крови выделяют обогащенную тромбоцитами плазму, вносят в нее лекар- ственньш препарат и инкубируют, затем вносят индуктор агрегации тромбоцитов и определяют содержание циклического аденозинмонофосфата и при уменьшении содержания его по сравнению с контро лем, не содержащим индуктор, определяют атопическую реакцию, а при увеличении содержания - псевдоаллергическую реакцию на лекарственный препарат.

Корректор А.Обручар

Изобретение относится к медицине и может быть применено для диагностики побочных иммунологических и неиммунологических реакций на нестероидные противовоспалительные препараты и ненаркотические аналгетики. Цель изобретения - повышение точности определения аллергических реакций на нестероидные противовоспалительные препараты и ненаркотические аналгетики за счет дифференциального определения атонических и псевдоаллергических реакций. Цель достигается тем, что у больных в плазме, обогащенной тромбоцитами, определяют содержание цАМФ без действия индуктора агрегации, через 60 - 80 с после воздействия АДФ и через 60 - 80 с после воздействия АДФ на предварительно инкубированную в течение 15 - 20 мин плазму, обогащенную тромбоцитами, с отдельными нестероидными противовоспалительными препаратами или ненаркотическими аналгетиками, и при уменьшении содержания цАМФ более чем на 10% после действия индуктора на преинкубированную с препаратами плазму, богатую тромбоцитами по сравнению с контрольным образцом, диагностируют IGE- зависимые реакции на нестероидные противовоспалительные препараты (НСПП), а при увеличении содержания цАМФ более чем на 10% в плазме, богатой тромбоцитами, в образцах без инкубации с НСПП и инкубированных с НСПП диагностируют псевдоаллергические реакции.