Способ оценки индивидуальной чувствительности к энергостабилизирующим препаратам при сахарном диабете Советский патент 1990 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к области медицины, в частности к эндокринологии, клинической биохимии.

Цель изобретения - ускорение и снижение травматичности при оценке индивидуальной чувствительности больных сахарным диабетом к энергоста- билизирующим препаратам.

Способ осуществляется следующим образом.

У больного натощак, после 10-часового периода голодания, из локтевой вены берется 3,0-4,0 мл крови

в пробирку, содержащую гепарин, из расчета 12 ME гепарина на 1 мл крови. Эритроциты отделяют от плазмы центрифугированием при 1500g в течение 15 мин, трехкратно отмывают в Кребс- Рингер-фосфатном буфере (рН 7,4), разводят тем же буфером до показателя гематокрита 40% и инкубируют при Т +37°С и постоянном перемешивании в течение 120 мин. Число используемых кювет определяется числом изучаемых лекарственных препаратов плюс одна контрольнаяс Лекарственные добавки

СП

Јь СП

О1

00

вносят в кюветы из расчета их средне терапевтических доз. .

Расчет количества кокарбоксилазы, вносимой в пробу: средняя масса тела 72 кг, средняя терапевтическая доза кокарбоксилазы - 50 мг:

50 мг72 кг

1 кг (1000 мл) 1 мл

0,694 мг

0,694-1 (Г мг

После второго исследования кон- , центрации эритроцитарной АТФ в процессе инкубации клеток в полиионной среде, содержащей добавки различных лекарственных препаратов, вычисляется показатель К:

лАТФ0 - А А. к Д АТФк

Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии и клинической биохимии, и может быть использовано для оценки индивидульной чувствительности к энергостабилизирующим лекарственным препаратам. Целью изобретения является ускорение и снижение травматичности способа. Для этого в эритроцитах, выделенных из крови больного сахарным диабетом, определяют разность концентрации аденозинтрифосфорной кислоты (АТФ) до и после инкубации в полиионной среде, содержащей лекарственное вещество, а также разность концентрации эритроцитарной АТФ до и после инкубации в полиионной среде без лекарственной добавки и при показателе K = (ΔАТФ_о - ΔАТФ_к)/ΔАТФ_к где ΔАТФ_о - разность между концентрацией эритроцитарной АТФ до и после инкубации в присутствии исследуемого лекарственного препарата

ΔАТФ_к - разность между концентрацией эритроцитарной АТФ до и после инкубации в полиионной среде, не содержащей лекарственной добавки. При K*981 констатируют индивидуальную чувствительность к препарату. Точность способа 95%. Простота выполнения позволяет использовать его в практической медицине.

10

Таким образом, на 1 мл взвеол эрит- где ДАТФ0 роцитов нужно добавить 0,694МО 3 мг кокарбоксилазы. В контрольную кювету добавляют буферный раствор, равный по объему лекарственным добавкам. До и после инкубации исследуют концентрацию -АТФ в эритроцитах. Для этого 0,5 - 1 мл эритроцитарной массы в центробежной пробирке смешивают с равным объемом 0,8 н.хлорной кислоты. 20 Через 10-15 мин смесь центрифугируют при 1500g в течение 10 мин и для дальнейших исследований отбирают 0,5- 1 мл супернатанта. Последний нейтрализуют 2 М раствором . Через 25 3-4 мин nocrte выпадения в осадок перхлората калия прозрачный надосадочный раствор наносят в количестве 0,05-0,1 мл в виде узкой полосы длиной 1-1,5 см на пластинку для хромато-,,, графии. На пластинах Силуфол хромате тографию проводят в течение 25-30 мин. Затем хроматограммы высушивают и отмечают пятна, видимые в ультрафиолетовом свете. Отмеченное пятно элюируют 3 мл 0,1 н.раствора НС1 и измеряют оп- тическую плотность элюата при длине волны 260 нм против контрольного элюата пятна без нуклеотидов на хроматог- рамме

35

40

ДАТФ - При значе индивидуальн ента к испыт препарату.

Приме Диагноз: сах желая форма, обменных про бетическая а бетом страда левание нача жажду, полиу проводилась госпитализац 36 ед, перед ужином. Забо стабильно, п яния кетоцид мии.

Глюкоза к хар мочи -1 , положительны

При расчете содержания адеииловых уклеотидов используют следующую форулу:

« -

де АТФ - колдоество/микромолей нукле- отида в экстракте ткани или эритроцитов; объем элюата пятна на хро- матограмме; объем всей пробы; объем всей пробы, нанесенной на хроматограмму; коэффициент молярной экскг тинкции, равный для АТФ 14,700 мкмоль - длина оптического пути.

v

ve

Е

где ДАТФ0 0 5 ,,

5

0

5

0

5

разность между концентрацией эритроцитарной АТФ до и после инкубации в присутствии исследуемого лекарственного препарата;

ДАТФ - разность между концентрацией эритроцитарной АТФ до и после инкубации в полиионной среде без лекарственной добавки, При значениях ,0 констатируют индивидуальную чувствительность паци-, ента к испытуемому лекарственному препарату.

Пример 1. Больная Ш, 37 лет. Диагноз: сахарный диабет, I тип, тяжелая форма, стадия декомпенсации обменных процессов. Осложнения: диабетическая ангиопатия сетчатки. Диабетом страдает в течение 14 лет, заболевание началось остро с жалоб на жажду, полиурию, похудание; все годы проводилась инсулинотерапия, перед госпитализацией получала инсулин 36 ед, перед завтраком и 12, ед, перед ужином. Заболевание протекает не стабильно, повторно развиваются состояния кетоцидоза, передки гипогликемии.

Глюкоза крови 14,76 ммоль/л; сахар мочи -1 ,2%; ацетон в моче - слабо положительный$ С-пептид крови - О пд.

Имеются клинические проявляения В -гиповитаминоза: быстрая утомляемость, головные боли, парастезии в конечностях, боли в ногах в покое и по ночам, запоры. В,-гиповитаминоз подтверждается снижением активности транскетолазы до 14,06 мкмоль С-7-ф 1 в млн эритро в час и повышением ТДФ-эффекта до 18,64%.

Использован метод прогнозирования. Показатель К при внесении в инкубационную среду инсулина равен 0,06; инсулина и тиамина К 0,25; инсулина и кокарбоксилазы К 1,5; инсулина с тиамином и аденином К 0,88, Следовательно, в данном случае наибо5154

лее целесообразно назначение кокарбок- силазы, на фоне лечения которой 50 мг/сут) через 2 недели клинические проявления В(-витаминной недостаточности уменьшилось, нормализовались биохимические показатели ТК крови: 19,3 мкмоль С-7-ф в 1 млм зритр,, в час, ТДФ-эффект - 7,4%.

П р и м е р 2. Больная У. 29 лет. Диагноз: сахарный диабет, Т тип, тяжелая форма, декомпенсация обменных ; процессов. Осложнения {жировая инфильтрация печени, ангиопатия нижних конечностей сетчатки. Диабетом больна с 16 лет, начало заболевания острое, течение со склонностью и гипогликеми- ям, проводится инсулинотерапия - пе- ред завтраком вводится 24 ед. ИЦС-А и 64 ед. ИЦС.

Глюкоза крови 30,5 ммоль/л; сахар мочи 2,2%.

Из клинических проявлений В.-витаминной недостаточности имелась быстрая утомляемость, головная боль, бессоница, парестазии в конечностях, судороги в ногах по ночам. Диагноз подтверждается снижением активности транскетолазы - 17,26 мкмоль С-7-ф в 1 млм эритр. в час и увеличением ТДФ-эффекта до 24%.

Применен метод прогнозирования. При внесении в инкубационную среду инсулина показатель инсулина с тиамином ,0; инсулина и кокарбокси лазы ,П; инсулина с тиамином и аденином ,4,

Следовательно, в данном случае наиболее целесообразно применение кокар боксилазы или тиамина совместно с аденином. Было проведено двухнедельное лечение кокарбоксилазой (50 мг в день в/м), после чего отмечено уменьшение клинических проявлений В -гиповитаминоза и нормализация биохимических показателей. По точности способ не уступает известному (80-100%). Граничное значение показателя К обос-п новано статистическими расчетами, В

6,

интервал К 1 попадают более 95% пациентов с индивидуальной чувствительностью к препарату,

,Относительная простота осуществления, возможность выполнения на доступном оборудовании, применяя общепринятые методики, позволяет использовать предлагаемый способ во всех крупных

учреждениях здравоохранения, имеющих биохимические лаборатории.

Применение предлагаемого способа прогнозирования лечебного эффекта энергостабилизирующих лекарственных

препаратов по изменению концентрации эритр оцитарной АТФ в ходе инкубации клеток возможно не только при сахарном диабете, но и при других патологических процессах,

Формула изобретения

Способ оценки индивидуальной чувствительности к энергостабилизирующим

лекарственным препаратам при сахарном диабете путем обследования больного, отличающийся тем, что, с целью ускорения способа и снижения его травматичности, опреде-,

ляют в эритроцитах концентрацию адено- зинтрифосфорной кислоты (АТФ) до и после инкубации их в полиионной среде в присутствии лекарственного препарата и без него, рассчитывают по- казатель индивидуальной чувствительности К по формуле

К ДАТФ0 - Д АТФ,, /ДАТФ к ,

где ДАТФ - разность концентраций АТФ до и после инкубации в присутствии лекарственного препарата; &АТФ к- разность концентраций

АТФ до и после инкубации в среде, не содержащей лекарственного препарата, и при их значении К 1 констатируют индивидуальную чувствительность к пре- парату.