Способ диагностики сахарного диабета Советский патент 1991 года по МПК G01N33/68 

Изобретение относится к медицине, в частности к эндокринологии и радиологии, и может быть использовано для диагностики сахарного диабета.

Целью изобретения является повышение точности способа за счет дополнительного определения иммунореактивного инсулина в плазме, содержания С-пептида раздельно в плазме и эритроцитах и расчета комплексного показателя по пяти параметрам.

Способ осуществляется следующим образом.

У обследуемого проводят пробу на толерантность к глюкозе, которую выполняют на фоне обычной диеты. У здоровых лиц натощак берут кровь на сахар, после чего дают

нагрузку глюкозой в количестве 75 г, растворенной в 200,0-250,0 мл воды. Раствор выпивают в течение 2 мин. У больных применяют пищевую нагрузку. После этого кровь на сахар забирают через 60 и 120 мин.

Одновременно в крови обследуемого проводят количественное определение иммунореактивного инсулина (ИРИ) в плазме и эритроцитах, С-пептида в плазме и эритроцитах в те же моменты времени

Для определения иммунореактивного инсулина используют радиоиммуноанали- тические наборы Института изотопов Венгерской Академии наук. Для определения ИРИ плазмы в пробирки заливают 0,1 буфера, затем 0,1 мл раствора

Os

а

VJ

2

трейсера, пробирки встряхивают 0,5 мин, заливают«в них по 0,1 антисыворотки и 1 мин тщательно встряхивают рукой. Затем пробирки инкубируют в течение 20 ч при 4-8°С. После инкубации во все пробирки заливают по 0,2 мл суспензии декстраниро- ванного угля. Пробирки встряхивают в течение 1 мин, центрифугируют при ускорении 2500-ЗОООд, сливают раствор и измеряют реактивность каждого осадка.

Иммунореактивный инсулин в эритроцитах определяют с помощью этих же наборов, следующим образом. Из гепаринизированной венозной крови центрифугированием (10 мин - 1000 об/мин) получают эритроцитарную массу, к ней добавляют физиологический раствор в соотношении 2:1 и тщательно перемешивают. Затем эту смесь вновь центрифугируют и удаляют супернатант. Эту операцию повторяют 3 раза. Для получения гемоли- зированных эритроцитов препарат разбавляют бидистиллированной водой и центрифугируют при 8000 об/мин.

Иммунореактивный С-пептид в плазме и эритроцитах определяют с помощью стандартных наборов фирмы Byk-Mallincrodt (ФРГ).

Для определения С-пептида в плазме к 0,1 мл плазмы добавляют 0,1 мл раствора С-пептида меченого и 0,1 мл С-пептида - антисерума, пробирки инкубируют при комнатной температуре 24 ч, к содержимому пробирок добавляют 1 мл козь- его-антираббического гамма-глобулина (полиэтиленгликоль), инкубируют при комнатной температуре 40 мин,| центрифугируют 30 мин при 2000д, удаляют супернатант, подсчитывают радиоактивность осадка.

С-пептид в эритроцитах определяют в помощью этих же наборов. Эритроциты готовят аналогичным образом как и при определении иммунореактивного инсулина.

Радиометрия и калькуляция результатов осуществлялась на установке Минм- гамма, оснащенной компьютером Дейта- Бокс 1222 (фирма ZKB).

Градиент относительной скорости изменения С-пептида в эритроцитах определяют как разность относительной скорости изменения содержания С-пептида за второй час V2 минус относительная скорость за первый час Vi

V2 - Vi

СП2 -СП1 СП1 -С П0 .

СПС

С По

СПг -2 С Hi + С По

С По

0

СП0. СПч, СПа - соответственно значения концентрации С-пептида в эритроцитах натощак, через 1 и 2 ч после нагрузки. При расчете коэффициента As (отношение градиентов) не учитывают знак, а берут только абсолютное значение.

Содержание (среднее) и разброс УСК, иммунореактивного инсулина (ИРИ) в плазме и зритроцитах, С-пептида в плазме и эритроцитах натощак, через 1 и 2 ч после нагрузки в норме - приведены в таблице.

Для определения весовых коэффициентов использовали относительные различия средних значрний, вычисленные по формуле

ti - - В|- + mfe

где В|3д и Bis - среднее значение i-ro ингредиента у здоровых и больных;

гтизд и mi6 - средняя ошибка i-ro ингредиента у здоровых и больных.

Наиболее информативными параметрами являются те, для которых t 10, а те

параметры, для которых t 10, отбрасывгам как недостаточно информативные. Существенные рзсличия относительной величины ингредиента для здоровых лиц и больных сахарным диабетом имеют пять парзметров. Это Иммунореактивный инсулин в плазме до нагрузки - AI, С-пептид в плазме через 1 ц после нагрузки - А2, С-пептид в эритроцитах через 1 ч после нагрузки - Аз, глюкоза в крови до нагрузки - А4 и градиент

скорости изменения С-пептида в эритроцитах - As.ч

Остальные параметры либо имеют малое различие межу больными и здоровыми, либо имеют большой разброс (большое относительное значение среднеквадратиче- ского отклонения и большую ошибку определения среднего). Весовые коэффициенты определены с помощью выражения

а

ti

i

k 1

Для получения граничного значения комплексного показателя использованы собственные наблюдения (73 условно здоровых лица и 52 больных сахарным диабетом 1 типа) и данные, опубликованные в

литературе.

В опубликованных данных наблюдаются некоторые различия в определении абсолютных значений нормы и граничных значений, но относительные данные и динамика изменений концентрации хорошо совпадают. В тех случаях, когда комплексный показатель, определяемый по 5 параметрам, меньше 0,63, диагностируют сахарный диабет.

П ри мер 1. Пациент0., 27 л. Результаты исследований: ИРИ в плазме натощак 144 пмопь/л, С-лептид в плазме через 2 ч 942 пмоль/л, С-пептид в эритроцитах через 1 ч 2231 пмопь/п; УСК натощак 8,4 ммоль/л, градиент скорости С-пептида в эритроцитах 2,3, комплексной показатель 0,63.

Несмотря на то, чтс при обследовании отмечался нормальный уровень С-пептида в эритроцитах чере 1 ч после пищевой нагрузки, однако комплексный показатель, вычисленный но предлагаемой формуле, меньше 0,67, чтс позволяет диагностировать сахарный диабет,

Пример 2. Пациент Ш., 25 л. Результаты исследований; ИРИ в плазме натощак 68 пмоль/л, С-пептид в плазме через 2 ч 942 пмоль/л, С-пептид в эритроцитах через 1 ч 1992 пмоль/л, УСК натощак 4,1 ммоль/л, градиент скорости С-пептида в эритроцитах 1,1, комплексный показатель 0,5. При обследовании уровень сахара натощак соответствует норме, но, несмотря на это, определив уровни концентрации гормонов и вычислив комплексный показатель, делаем вывод о наличии сахарного диабета, что подтверждают данные клинического обследования.

П р и м е р 3. Обследуемый Р., 21 г. Результаты исследований: ИРИ э плазме натощах 279 пмоль/л: С-пептид в плазме через 2 ч 1072 пмоль/л, С-пептид в эритроцитах через 1 ч 2607 пмоль/л, УСК натощак 4,7 ммоль/л, градиент скорости С-пептида в эритроцитах 2, комплексный показатель 0,85.

Несмотря на то, что обследуемый принадлежит к группе здоровых лиц, некоторые показатели выходят за пределы нормы: высокое содержание С-пептида в эритроцитах через 1 ч и градиент скорости С-пептида в эритроцитах соответствуют норме больных. Однако остальные данные и комплексный показатель, вычисленный по пяти параметрам, позволяют отнести обследуемого к здоровым лицам.

У 52 больных 1 типом сахарного диабета, из которых 25 человек были в возрасте до 25 лет, и у 75 практически здоровых людей в возрасте до 30 лет проведено 1875 исследований иммунореактивного инсулина и С-пептида Б ходе глюкозотолерантного теста. Несмотря нг, то, что некоторые параметры крови у Сольных имели величину такую же, как и у здоровых, но по величине комплексного показателя у них диагностирован сахарный диабет. Аналогичная карти- иа наблюдалась в группе здоровых лиц.

Отдельные параметры крови соответствовали заболеванию сахарным диабетом, однако применение комплексного показателя позволило сдепать вывод об отсутствии заболевания. Способ относительно недорогой, прост технически

Точность способа 95%. Предлагаемый способ позволяет уменьшить область сомнительных результатов в 10 раз по с равне- нию с известными способами Диагностики

сахарного диабета.

Формула изобретения Способ диагностики сахарного диабета путем биохимического исследования крови

больного в процессе глюкозотслерантного теста, отличающийся тем, что, с целью повышения точное и способа, дополнительно определяют иммунореэктмвный инсулин в плазме, содержание С-пептида раздельно

в плазме и эритроцитах, вычисляют комплексный показатель по пяти параметрам с

5

помощью выражения А - Г а А| , i -1

весовые коэффициенты, соответственно

равные ал 0,18: «2 «з 0,19 № 0,24; 05 0,20; А), А2, АЗ - отношение содержания соответственно иммунореактивного инсулина в плазме до нагрузки, С-пептида в

плазме через 2 ч после нагрузки, С-пептида в эритроцитах через 1 ч после нагрузки у обследуемого к соответствующим значениям, принятым за норму; Аз - отношение содержания глюкозы в крови до нагрузки,

принятое за норму, к значению содержание глюкозы в крови до нагрузки у обследуемого; As - отношение абсолютных значений градиентов относительной скорости изменения С-пептида в эритроцитах уобследуемого к принятому за норму, и при значениях Д меньших или равных 0,63, диагностируют сахарный диабет.

Изобретение относится к медицине, а частности к эндокринологии, и woxf т бить использовано для диагностики сахарного диабета. Целью является повы иенио точности способа. Это достигается за счет дополнительного определения иммунореакгмвного инсулина в плазме, содержания С-пзптада раздельно в плазме и эритроцитах. По полученным данным рассчитывают комплексный показатель А - Г а AI . где «i - весоi 1 вые коэффициенты, соответственно равные ,18; 02 аз 0,19; щ 0,24;О5 0,20; Ат.Аа.Аз - отношение содержания соответственно иммунореактивного инсулина в плазме до нагрузки, С-пептида в плазме через 2 ч после нагрузки, С-пептида в эритроцитах через 1 ч после нагрузки у обследуемого к соответствующим значениям, принятым за норму: Аз - отношение содержания глюкозы в крови до нагрузки, принятое за норму, к значению содержания глюкозы в крови до нагрузки у обследуемого; А - отношение абсолютных значений градиентов относительной скорости изменения С-пептида в эритроцитах у обследо- ванных к принятому за норму. При значениях А, меньших или равных 0,63, диагностируют сахарный диабет. 1 табл.