Способ определения антигенов или антител Советский патент 1990 года по МПК G01N33/53 

Изобретение-относится к способам определения антигенов или антител в биологической жидкости.

Цель изобретения - повышение точности способа.

Способ осуществляют следующем образом.

Полианионы, которые можно использовать в предлагаемом способе, представляют собой соединения, включающие в себя природные или синтетические полимеры, такие как полисахариды или полистирол, содержащий многочисленные анионные группы, такие как суль- фонильные анионы или карбоксильные анионы, причем указанные соединения должны быть растворимы в реакционной среде, используемой для реакции антиген-антитело .

Такими полианионами являются дек- странсульфат, гепарин, полистиролсуль- фокислота, ацетат целлюлозфталата, гиалуроновая кислота, хондроитин- сульфат и т.п.

В соответствии со способом но изобретению образец, содгржащий определяемый антиген или антитепо, обрабатывают полианионом, после чего вводят в реакцию антиген-антитело с соответствующим антителом или антигеном в реакционной среде.

Обработку полианионом можно проводить следующим образом: проводя реакцию антиген-антитело в среде, которая включает в себя полианион, ипн обрабатывая образец твердой ичи жидкой фазой, содержащей полианнон, до проведения реакции антиген-антитело (в последнем случае обработанный таким образом образец, содержащий антиген или антитело, может быт нпеден в реакцию антиген-антитело после того, как из него будет удален полианион, но обычно его вводят в реакцию вместе с полианионом).

Реакционные среды, подходящие для использования в реакции антиген-ан- тело, представляют собой водные г ре(Л

СП Сл

4

оо ю

см

ды, вклк.чающне к себя, например, солевой раствор, и буферные растворы, которые могут содержать одну (или более) добавку, выбранную из стабилизаторов, консервантов, хелатных агентов, поверхностно-активных соединений и т.д.

Буферный раствор включает в себя глициновые буферы, буферы на основе фосфорной кислоты, цитратные буферы, барбиталовые буферы, боратные буферы, буферы на основе системы трис(трис) гидроксиметил(аминометан) - соляная кислота, трис-малатные буферы, аммонийные буферы и т.д.

Стабилизаторы включают в себя, например, аминокислоты, полипептиды, белки и т.п., которые не осаждаются в данной иммунологической реакции и которые обычно присутствуют в концентрации 0,001 - 1%, предпочтительно от 0,05 - 0,6%.

Предпочтительными консервантами являются мертиолат и азид натрия.

Предпочтительные хелатные агенты включают в себя этилендиаминтетраук- сусную кислоту, нитрилтриуксусную кислоту, циклогександнаминтетрауксус- ную киспоту и т.п.

В качестве поверхностно-активных соединений, как правило, предпочтительно использовать неионогенные поверхностно-активные соединения.

рН реакционной среды должен находиться в обычном интервале рН, применяющемся дЛя реакций антиген-антитело, обчно используют рН в интервале приблизительно 5-10.

Концентрация полианиона в реакционной среде обычно не превышает 5 мас.% и предпочтительно равна 0,001 - 0,5 мас.%.

Более высокая концентрация может приводить к нестабильности реакции в некоторых системах анализа. В то же время б&лее низкая концентрация снижает ингибирование так называемых не специфических реакций, которые мешают анализу и делают невозможным получение точных данных анализа из-за повышенного ингибирующего эффекта.

Антигены, которые служат в качестве определяемого соединения и реагента, включают в себя различные антигены, такие как белки, полипептиды, сте роиды, полисахариды, липиды, пыльца, пыль и гаптены. Антитела включают в себя, например, такие белки, кото

рь -э являются антителами против указанных антигенов.

Анализ реакции антиген-антитело по- .изобретению применим для любых систем анализа. Таким образом, предлагаемый способ применим как для систем растворов, в которых и опредепяемое соединение, и реагент растворимы в реакциQ онной среде, так и для систем с носителем, в которых реагент закреплен на особом носителе, который практически не растворим в реакционной среде, при этом говорят, что особый но5 ситель сенсибилизирован реагентом. Конкретные примеры реакций антиген- антитело, которые могут быть проанализированы в соответствии со способом по изобретению, включают в себя рергQ ции, протекающие при радиоиммунном анализе, при анализе агглютинации латекса с турбидиметрией в ближней ИК- области, иммуноферментном анализе, иммунофлуоресцентном анализе, при №

5 мунонефелометрии с использованием светорассеяния, при агглютинации эритроцитов, агглютинации латекса и т.п. Способ особенно предпочтительно применять для такой системы анализа, как агглютинация латекса с турбидиметрией в ближней ПК-области, в которой может использоваться, например, обратимая пассивная агглютинация. В соответствии со способом по изобретению неспецифические реакции, которые могут протекать при реакциях антиген-антитело, могут быть предотвращены, в результате получают , более точные данные анализа.

П р и м е р 1. Агглютинация латекса с турбидиметрией в дальней ИК-об- ласти.

К 50 мкл сыворотки нормального человека, содержащей не более чем 2 нг/мл об-фетопротеина (АФП), прибавляют 50 мкл раствора, содержащего 1 мкг/мм АФП и затем 100 мкл солевого раствора бычьего сывороточного альбумина, содержащего декстрансульфат, и получают испытуемый- раствор. К 50 мкл испытуемого раствора прибавляют 50 мкл латекстного реагента, сенсибилизированного антителом анти-АФП, и 200 мкл буферного раствора, после чего при перемешивании измеряют изме- 55 некие мутности в области ближнего ИК при 940 нм. Данные анализа образца считывают со стандартной кривой и рассчитывают выход. Результаты сравнивз0

35

40

45

50

515547826

ют с контролем, который представляетТаким обраэом, способ почволягт

реакционную систему без полианиона.повысить точность анализа в 4-5 рл-э

При добавлении декстрансульфатапо сравнению с известным способом.

(при результирующей концентрации,Форму-ла изобретения равной 0,001 мас.%) достигается эна-Способ определения антигенов или

чительное улучшение точности (Р антител путем добавления в исследуе 0 ,0t) и коэффициента вариации (KB),мый образец соответствующего спецнНормальное отклонение равно 2,83фического антитела или антигена с по(по известному способу 10,32).JQследующей регистрацией реакции пассивной гемагглютинации, отличаюП р и м е р 2. Процедуру по приме-щ и и с я тем, что, с целью повышеру t повторяют, за исключением того,ния точности способа, исследуемый обчто окончательная концентрация дек-разец обрабатывают декстрансульфатом,

странсульфата составляет 5 мас.%.f5содержащимся в реакционной среде в

Получены аналогичные результаты.концентрации 0,001-5,0 мас.%;

Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано для определения антигенов или антител в биологических жидкостях. Цель - повышение точности анализа. Для этого в исследуемый образец добавляют специфический антиген или антитело, причем исследуемый образец обрабатывают декстрансульфатом, содержащимся в реакционной среде в концентрации 0,001 - 5,0 мас.%.